PLOS NËMMEN: Cathepsin E Ass eng context vun Gastric dat an Signet-Ring Zell Carcinoma vun Mo: e Roman mat Beispiller op Gastric Tumorigenesis

Wat VerfÜgung

Gastric Kriibs (GC) verschidde histological Fonctiounen Klengegkeeten, obwuel de Mechanismus Basisdaten seng Diversitéit ass erfreet opgekläert. Et ass haaptsächlech un gutt ënnerscheet Bléien adenocarcinoma (tub1) séiert, mëttelméisseg ënnerscheet Bléien adenocarcinoma (tub2), schlecht ënnerscheet adenocarcinoma (por), signet-Ring Zell carcinoma (SIG), mucinous adenocarcinoma (bess), an papillary adenocarcinoma (PAP). Vum Schädel, fonnt mir cathepsin E (CTSE) VerfÜgung Ekzeptioun zu SIG-Typ, heiansdo an por-Typ, a selten zu tub1 /tub2-Typ GC Zell Linnen äussert. An surgically-resected uplanzen, CTSE war an 50/51 SIG-Typ (98.0%), 3/10 tub1-Typ (30.0%), 7/18 tub2-Typ (38.9%), 15/26 por-Typ (immunostained 57,7%), 4/10 PAP-Typ (40.0%), an 0/3 bess-Typ (0.0%) GC. An endoscopically-resected uplanzen, 6/7 SIG-Typ (85.7%), 7/52 tub1-Typ (13.7%), 5/12 tub2-Typ (41.7%), 2/7 PAP-Typ (28.6%) GC an 0/6 adenoma (0.0%) ausgedréckt CTSE. Fir Net-malignant Stoffer, ass CTSE Ekzeptioun zu normal fundic, pyloric, a Fra Glands vun Mo. ausgedréckt, mä kaum an anere digestive Organer. An der precancerous intestinal metaplasia vun Mo, ass CTSE meeschtens zu gemëscht gastric-a-intestinal Typ an erhéijen an zougestanen-intestinal Typ observéiert. CTSE Ausdrock ass positiv mat gastric Bewaacher MUC5AC ( p VerfÜgung &Si besteet; 0.0001) soll an negativ soll mat intestinal Bewaacher MUC2 ( p VerfÜgung = 0.0019). Fir SIG-Typ GC, souwuel an erhéijen an Hannergrond mucosa, Ausdrock vun MUC5AC an CTSE ass héich hierkommen, datt vun MUC2 niddereg ass, wat beweist, datt SIG-Typ GC d'Fonctioune vun Hannergrond mucosa reflektéiert. Fir gastric adenoma an tub1 /tub2-Typ GC, méi Strenz erhéijen éischter méi Ausdrock vun CTSE mat MUC5AC a manner Ausdrock vun MUC2 zu erhéijen ze weisen, mee se éischter manner Ausdrock vun CTSE, MUC5AC an MUC2 am Hannergrond mucosa ze presentéieren. Dës hindeit datt méi malignant gastric adenocarcinoma mat staark gastric an schwaachen intestinal Eegeschafte éischter aus Hannergrond mucosa ze féiere mat béiden gastric an intestinal Fonctiounen ofgeholl. Zu der Konklusioun, ass CTSE engem Bewaacher souwuel gastric dat a Zell carcinoma signet-Réng, déi op de Mechanismus vun gastric tumorigenesis datts Liicht soll VerfÜgung

Fro:. Konno-Shimizu M, Yamamichi N, Inada Ki, Kageyama- Yahara N, Shiogama K, Takahashi Y, et al. (2013) Cathepsin E Ass eng context vun Gastric dat an Signet-Ring Zell Carcinoma vun Mo: e Roman mat Beispiller op Gastric Tumorigenesis. PLoS NËMMEN 8 (2): e56766. Doi: 10.1371 /journal.pone.0056766 VerfÜgung

Redakter: Anthony W.I. Lo, D'Chinese Universitéit vun Hong Kong, Hong Kong VerfÜgung

Arnaque: 20. November 2012; Akzeptéiert: 14. Januar 2013; Publizéiert: 22. Februar 2013 zu

Copyright: © 2013 Konno-Shimizu et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung

Funding:. Dës Aarbecht ënnerstëtzt gouf duerch Subventiounen aus Sato Memorial Foundation fir Cancer Research, am Kader vun enger Recherche Zouschoss aus Nakayama Cancer Research Institut, am Kader vun enger Recherche Zouschoss aus Foundation fir Promotioun vu Cancer Research, an och am Kader vun Grant-Akommes am Kader Hëllef fir Young Wëssenschaftler (B) aus dem Educatiounsministère, Kultur, Sport, Science and Technology (MEXT). Mä all déi funders keng Roll am Etude Design huet, Daten Kollektioun an Analyse, Décisiounen ze publizéieren, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft VerfÜgung

Wettsträit Interessen:.. D'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung

Aféierung VerfÜgung

Gastric Kriibs (GC) ass de véiert stäerkste gemeinsam Kriibs an der zweeter Doudesursaach Kriibs-Zesummenhang weltwäit, trotz der moderate Verloscht vun hirer Heefegkeet a veruerteelt [1], [2]. Et ass bekannt, datt gastric malignancy verschidde histological Fonctiounen [3] presentéiert. De stäerkste oft benotzt Klassifikatioun vun gastric Kriibs ass Lauren Klassifikatioun déi intestinal (ënnerscheet) Typ GC an diffusen (Strenz) Typ GC [4] ënnerscheet. Lauren ennerluecht ass carrément an einfach ze verstoen, wa seng oversimplification oft féiert zu incapability vun bidden preziser Charakteristike vun gastric malignancy [3]. An der méi detailléiert Japanesch Klassifikatioun vun gastric Kriibs [5], déi zu der DÉI Klassifikatioun ähnlech ass [6], ass gastric adenocarcinoma an sechs Kategorien séiert: gutt ënnerscheet Bléien adenocarcinoma (tub1), mëttelméisseg ënnerscheet Bléien adenocarcinoma (tub2), schlecht ënnerscheet adenocarcinoma (por), signet-Ring Zell carcinoma (SIG), mucinouse adenocarcinoma (bess), an papillary adenocarcinoma (PAP). Groussen geschwat, Lauren d'diffusen (Strenz) Typ ëmfaasst por-, sig-, an bess-Typ GC hierkommen Lauren d'intestinal (ënnerscheet) Typ tub1- regruppéiert, tub2-, an PAP-Typ GC [3]. VerfÜgung

vun de verschiddenen histological GC Zorten, do hu mer op signet-Ring Zell carcinoma (SRCC) vun Mo. (SIG-Typ GC). SRCC ass eng mucin-secreting adenocarcinoma, an déi intracytoplasmic mucin, d hir Käre d'Zellen charakteristesche "signet-Rank" gefuer ginn [7]. Iwwerdeems SRCC gemellt gouf aus verschiddene Stoffer entstanen ze ginn, ass Mo. déi gemeinsam Uergel vun Urspronk [7], [8]. Trotz der heefeg prevalence vun SRCC ënnert gastric malignancies, sinn clinicopathological Charakteristike vun SIG-Typ GC nach ëmstridden; e puer Joer virdrun Studie confirméiert, datt signet-Ring Zell Histologie e besser hätt Kaddoen [9], [10], [11] hierkommen aner Studien gemellt dass Histologie vun SRCC en Zeechen vun éischter verschlechtert hätt ass [8], [12], [ ,,,0],13], [14]. Ënnert esou Hannergrond, probéiert mir nei spezifesch Bewaacher Genen fir SIG-Typ GC ze fannen. Am meeschte virdrun Studien [15], [16], [17], SIG-Typ GC hu mat por-Typ an bess-Typ analyséiert zesumme ginn, well dës dräi Zorte vun GC an Lauren d'diffusen Typ klasséiert ginn. vill Rapporten ugeholl awer, datt SIG-Typ GC ass ganz anescht aus por- oder bess-Typ GC, aus der Embryone vun molekulare Fonctiounen oder malignant Potenzialer [3], [13], [18]. Dofir, mir analyséieren d'SIG-Typ GC onofhängeg vun der por- an bess-Typ GC. VerfÜgung

Vun der grousser Zuel vu Genen, mir e puer Ausnamen wéi cadherin VerfÜgung Famill Genen opgefouert [19 ], [20], Mënsch mucin VerfÜgung Genen [21], vimentin VerfÜgung [22], cathepsin VerfÜgung Famill Genen [23], [24], [25] , etc., hunn hir Ausdrock Rapport gouf tëscht Lauren d'intestinal an diffusen Typ GC anescht gin. Den Haaptprojet vun eiser Etude ass no engem Hiweis op ongeléiste carcinogenesis vun SIG-Typ GC duerch hir spezifesch Bewaacher Genen z'identifizéieren. Mir erwaarden datt eis Prozess zu onbekannt Offloss reglementaresche Genen (wéi spezifesch Transkriptiouns Faktoren) Bestëmmung vun den Eegeschafte vun SIG-Typ GC Féierung géif. Verschidde Transkriptiouns Faktore ze gastrointestinal Eegeschafte Liewewiesen hunn Souzesoen ass wéi cdx VerfÜgung Famill Genen [26], [27], gli VerfÜgung Famill Genen [28], a sox2 VerfÜgung [29], mee mir gleewen net e puer wichteg Genen fir gastrointestinal dat an gastric oncogenesis bleiwen nach undiscovered. Aneren Zweck vun eiser Etude ass de jéngste Etapp vun gastric tumorigenesis baséiert op den Ausdrock vun identifizéiert nei Bewaacher Genen ze analyséieren. Net nëmmen op SIG-Typ GC leeën, mir weider all Zorte vun fréi GC Fäll vun analyséiert identifizéiert Bewaacher Gentherapie Ausdrock vun zwou der entholl lesion an bascht mucosa diskutéieren erausgefuerdert. Mir sinn iwwerzeegt, eis Aarbecht e Schlëssel elauter der kontroverséierter Charakteristike vun SIG-Typ GC gin sollen, a soll och eng Féierung ginn zu de verschiddenen histological Eegeschafte vun gastric malignancy elucidating. VerfÜgung

spontan a Methode VerfÜgung

Zell Kultur VerfÜgung

Twenty gastric, zéng colorectal, an zwee Net-gastrointestinal Kriibs Zell Linnen an DMEM mat 10% an et Kallef serum (Gibco /Invitrogen, Karlsbad CA) bei 37 ° C [30] haten sech, [31]. All d'Zell Strecken aus der American Type Kultur Collection, RIKEN Zell Bank kaaft, oder Zell Ressourcen-Center fir Biomedical Research Institut vun Development, Aging an Cancer, Tōhoku Universitéit. Nimm an histological Zorte vu Kriibs Zell Linnen agesat goufen an ënnerstëtzen Document S1 minutely beschriwwen. Fir DNA demethylation reagent an histone deacetylase (HDAC) inhibitor, 5-December-2'-deoxycytidine (5-December-DC, Fläch-Aldrich) op 2 μg /ml oder trichostatin A (TSA, Fläch-Aldrich) um 100 Dummeldéng /ml sech un der Kultur mëttelfristeg agefouert. VerfÜgung

RT-Hinnen alleguer VerfÜgung

Total bewosst RNAs sech d'ISOGEN RNS Isolatioun reaent bereet benotzt (Wako, Rekorder, Japan) wéi virdru beschriwwen [30]. Semi-grouss RT-Hinnen alleguer war via de Superscript One-Step Reaktioun mat der Platin Taq (Gibco /Invitrogen) gesuergt. D'primer opzefëllen an RT-Hinnen alleguer Prozeduren Employé de Ausdrock Niveau vun der E-cadherin (CDH-1) VerfÜgung, LI-cadherin (CDH-17) VerfÜgung, MUC5AC z'entdecken VerfÜgung, MUC6 VerfÜgung, MUC2 VerfÜgung, CTSE (Cathepsin E) VerfÜgung, CTSD (Cathepsin D) VerfÜgung, CTSB (Cathepsin B) VerfÜgung, CTSL (Cathepsin L) VerfÜgung, an GAPDH VerfÜgung an der Table S1 gewise ginn. VerfÜgung

Western Blotting VerfÜgung

Lait Zell dovu (20 μg all) lysed a gekachten mat 1x Sample gefiermt [30] huet sech déi electrophoresis op 12,5% SDS polyacrylamide gels getrennt, transferéiert ze nitrocellulose Membran (Hybond-N, Amersham, Freiburg, Däitschland), an immunostained mat anti-Mënsch Cathepsin E antibody (# AF1294, R & D Systemer, är ganz Famill, Punktzuel) oder anti-Mënsch β-Actin (C4) antibody (# sc-47778, Santa Cruz Déi, Santa Cruz, CA). Fir zweet antibodies, horseradish peroxidase (HRP) -conjugated anti-Geess IgG (H + L) Esel antibody (ˁ-035-003, Jackson, Baltimore, PA) an horseradish peroxidase (HRP) -conjugated anti-Maus IgG (H + L) Geess antibody (# A90-216P, BETHYL, Montgomery Suerge) goufen respektiv benotzt. Spezifësch Bands sech mat Immunostar LD (Wako, Rekorder, Japan) an zu Las-4000 (Fuji Film, Tokyo, Japan) fonnt. VerfÜgung

Immunohistochemistry VerfÜgung

Deparaffinization an endogenous peroxidase inactivation vu Krankheete Stoffer goufen gesuergt wéi virdru beschriwwen [3]. Fir CTSE, de Primär- immunostaining mat anti-Mënsch CTSE Geess polyclonal antibody (# AF1294, R & D Quelltext) op engem 1:100 dilution war fir 16 HR bei Raumtemperatur gesuergt. Nom Wäschen vun PBS (Phosphate-gefiermt-Salzer) dräimol, de Secondaire immunostaining mat Histofine Simple Stain MAX-PO (G) (Nichirei, Tokyo, Japan) hat fir 30 min bei Raumtemperatur gesuergt. No wäschen an dräi Mol PBS, goufen d'Reaktioun Produiten an 20 mg /dl 3,3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride Léisung mat enger Lëscht vun 30% H _{2O 2 vun wäschen mat PBS duerno visualized,. Nuclear counterstaining war mat Mayer d'hematoxilin vollbruecht. fir 10 min fir antigen retrieval; fir MUC5AC an MUC2, denken Heizung an 1 mm héich ass (pH 8.0) op 120 ° C war éischt an engem Loftdrock Buschtawenzopp (T-FAL, Rumily, Frankräich Delicio 6L) gesuergt. Der Primärschoul immunostaining mat anti-MUC5AC antibody (NCL-wirkl-5AC, Novocastra, Newcastle-upon-Tyne, UK) bei engem 1:200 dilution oder anti-MUC2 antibody (NCL-NUC-2, Novocastra) op engem 1:500 dilution war fir 16 HR bei Raumtemperatur gesuergt. Nom Wäschen vun PBS dräimol, war d'Première immunostaining mat Histofine Simple Stain MAX-PO (G) (Nichirei) fir 30 min bei Raumtemperatur gesuergt. Déi folgend Schrëtt war d'selwecht wéi CTSE immunological staining. All d'immunostained Rubriken sech onofhängeg vun zwee pathologists évaluéiert, zesumme mat HIEN-Kierchefënster an Pas-Kierchefënster Sektiounen aus der selwechter lesions. VerfÜgung}

entholl Echantillon VerfÜgung

Vun der gastric Kriibs Stoffer op der Fujita Gesondheet u Bord University School of Medezin, ausgewielt mir 51 gastric signet-Ring Zell carcinoma (SIG) Echantillon surgically resected. Ausserdeem, 67 gastric Kriibs chirurgesch uplanzen vun anere fënnef Zorte vu gastric adenocarcinoma (tub1, tub2, por, PAP, an bess) goufen aus der selwechter Bank ausgewielt. Fir d'endoscopically resected Echantillonen, ausgewielt mir 84 Beem uplanzen (78 gastric Kriibs Fäll a 6 gastric adenoma Fäll) déi vun 2005 bis 2011 fir all d'Medeziner Echantillonen, schrëftlech informéiert Autorisatioune goufen aus de jeeweilegen Patienten an der Universitéit vun Tokyo Klinik behandelt goufen no der Deklaratioun vun Helsinki. Dës Etude gouf um Fujita Gesondheet Universitéit fir Mënscherechter Enquête vun der institutioneller ethesch review Verwaltungsrot guttgeheescht, a war och vun der ethnesch Comitée vun der University of Tokyo guttgeheescht. VerfÜgung

Aen do Vectors VerfÜgung

Realitéit vectors Fir produzéiert ausdrécken Cdx2 VerfÜgung, Gli1 VerfÜgung, Gli3 VerfÜgung, CTSE VerfÜgung, an Sox2 VerfÜgung, goufen respektiven cDNAs an pMXs-IRES hin -puro (Zell Biolabs Galaxy San Diego, CA) wéi follegt. Fir Cdx2 VerfÜgung, war pMXs-Cdx2-IRES-Puro virdrun als gemellt entsteet [26]. Gli1 VerfÜgung cDNA war vun Hinnen alleguer-XL-anerer Sprooch-Gli1 (Open Biosystems, Huntsville, AL) via Hinnen alleguer amplification kritt primers benotzt 5'-agccagatctatgagcccatctctgggattc-3 'an 5'-agtagcggccgcccctactctttaggcactagagt-3 ". No duebel unzereegen mat BGL II an net ech, war d'kritt ofgesprengt an der BamH ech /Net ech Site vun pMXs-IRES-Puro (Zell Biolabs Galaxy San Diego, CA) hin zu pMXs-Gli1-IRES-Puro generéieren. Gli3 VerfÜgung cDNA vun Hinnen alleguer-XL-anerer Sprooch-Gli3 (Open Biosystems) via Hinnen alleguer amplification kritt huet primers benotzt 5'-aatgcggccgctgatttccgttggt-3 'an 5'-tgcggatcctacgtgggcatttttg-3 ". No duebel unzereegen mat BamH sin an net ech, war d'kritt ofgesprengt an der BamH ech hin /Net sin Siten vun pMXs-IRES-Puro pMXs-Gli3-IRES-Puro ze generéieren. CTSE VerfÜgung cDNA aus pCMV-SPORT6-CTSE (Thermo Fisher Wëssenschaftlech, Madison, allem) via Hinnen alleguer amplification kritt huet primers benotzt 5'-ccgagatctatgaaacgctccttcttttg-3 'an 5'-gggctcgagtaaaactgtcgaatgaaga-3 ". No duebel unzereegen mat BGL II an Xho ech, war d'kritt ofgesprengt an der /Xho ech BamH ech hin Siten vun pMXs-IRES-Puro pMXs-CTSE-IRES-Puro ze generéieren. Sox2 VerfÜgung cDNA aus MKN-7 Frankräich DNA via Hinnen alleguer amplification kritt huet mat primers 5'-atgtacaacatgatggagacggagct-3 'an 5'-tcacatgtgtgagaggggcagtgtg-3 ". Implikatioune ofgesprengt gouf an der EcoR V Siten vun Vecteure pT7Blue-T gesaat (Novagen, Darmstadt, Däitschland) pT7Blue-Sox2 ze generéieren. No duebel unzereegen mat BamH ech an Sal ech, war d'kritt ofgesprengt an der /Xho ech BamH ech hin Siten vun pMXs-IRES-Puro pMXs-Sox2-IRES-Puro ze generéieren. Vun cotransfection vun dësen plasmids mat vesicular stomatitis Virus Enveloppe G FAQ (VSV-G) Ausdrock plasmid an wehrpflichteg-GP prepackaging Zell Linn (Zell Biolabs Galaxy) bzw., VSV-G-pseudotyped MuLV-baséiert Aen do vectors ausdrécken Cdx2
, Gli1 VerfÜgung, Gli3 VerfÜgung, CTSE VerfÜgung, an Sox2 VerfÜgung virbereet goufen. VerfÜgung

Resultater VerfÜgung

Expression vun cathepsin E (CTSE) VerfÜgung ass signifikativ soll mat Diskussioun Histological Type vu Gastric Cancer Zell zesummeféieren VerfÜgung

der Bewaacher Genen fir SIG-Typ GC ze sichen, mir den Ausdrock vu verschiddene Genen opgefouert ze weisen ënnerscheed Ausdrock tëscht Lauren d'intestinal an diffusen Typ GC gemellt. Ausdrock vun E-cadherin VerfÜgung ( CDH-1 VerfÜgung) [19], LI-cadherin VerfÜgung ( CDH-17 VerfÜgung) [20], MUC5AC VerfÜgung [21], MUC6 VerfÜgung [21], MUC2 VerfÜgung [21], vimentin VerfÜgung [22], CTSD
( cathepsin D VerfÜgung) [23], [24], CTSE VerfÜgung ( cathepsin E VerfÜgung) [23], [24], CTSB
( cathepsin B VerfÜgung) [25], CTSL VerfÜgung ( cathepsin L VerfÜgung) [25], a GAPDH VerfÜgung (intern Kontroll) Genen huet vun RT-Hinnen alleguer zu 20 GC Linnen zesumme mat der aus aner Organer (Dorënner 1A) ofgeleet 12 Kriibs Zell Linnen bewäert. Mir ausernee dann eis Opmierksamkeet op d' CTSE VerfÜgung, wéi et op béide Kato-III an NUGC-4 äussert sech vun SIG-Typ GC, an och well se dréckt ni zu MKN-7 an H-111-TC (tub1-Typ GC, ënnerstëtzen Document S1). VerfÜgung

fir aner iwwerpréift Genen bekannt aus gutt ënnerscheet Bléien adenocarcinoma vun Mo. entstanen gin, Ausdrock vun CDH-1 VerfÜgung ( er zu Lauren d'dacks erhéijen diffusen Typ GC gin [19], [32], cadherin VerfÜgung), gemellt [33], war an der zwee SIG-Typ GC-ofgeleet Zellen (Dorënner 1A) onerwaarte fonnt. Et ass och exzellent, dass CDH-17 VerfÜgung ( LI-cadherin VerfÜgung), geduecht eng intestinal Bewaacher Gentherapie ginn [20], [26], [27], dréckt op bal all déi gastric Kriibs Zell Linnen dorënner SIG-Typ (dorënner 1A). Fir aner cathepsin Famill Genen, CTSD VerfÜgung war Rapport diffusen Typ GC an och eng prognostic Parameter fir gastric carcinoma Patienten héich ausgedréckt ginn [23], [34], mä d'Resultat vun RT-Hinnen alleguer verroden, datt all de Kriibs iwwerpréift Zell Linnen selwecht auszedrécken CTSD VerfÜgung (Dorënner 1A). CTSB VerfÜgung a CTSL VerfÜgung sech gemellt an gastric carcinoma nik ginn [35] a mat sengen malignant Propriétéit soll [36], mee spezifesch Ausdrock vun weder CTSB VerfÜgung oder CTSL VerfÜgung zu SIG-Typ GC-ofgeleet Zell Linnen nogewise ginn hätt (Dorënner 1A). Als e Ganzt, schéngt den Ausdrock Profil vun CTSE VerfÜgung aus anere cathepsin Famill Genen ganz anescht gin. VerfÜgung

Mir nächst der Relatioun tëscht CTSE Ausdrock an histological Typ vun 20 GC Zell Linnen bewäert. Baséiert op den detailléierte Iwwerwaachung vun natierlech an "Histological Type vu Gastric Cancer Zell Linnen" vun Ennerstëtzung Document S1 beschriwwen, kéint 19 GC Zell Verse Lauren a Japanesch Klassifikatioun [3] zortéiert ginn, [4], [5] (Table 1) . Laut dem Lauren Klassifikatioun, 7 vun 11 diffusen Typ GC-ofgeleet Zellen an 1 vu 5 intestinal Typ GC-ofgeleet Zellen auszedrécken CTSE (Table 1): CTSE VerfÜgung Gentherapie vun diffusen Typ gin ausgedréckt hautdësdaags an erhéijen an intestinal Typ GC. Association tëscht CTSE Ausdrock an histological Fonktioun vun gastric malignancy kritt kloer, wann méi preziser Japanesch Klassifikatioun applizéiert gëtt. Ënnert der Zell Linnen vun diffusen Typ GC, ass et wichteg, datt NUGC-4 a Kato-III vu SIG-Typ GC entstanen CTSE staark auszedrécken, hierkommen néirens-10-TC an KE-97 aus bess-Typ GC entstanen sinn erhéijen an CTSE Ausdrock. Fir aus por-Typ GC ofgeleet Zellen, am heefegsten histological Typ vun gastric malignancy [3], CTSE Ausdrock ass verschiddenste: MKN-45, KE-39, HuG1-PI, HuG1-N, an AGS auszedrécken staark CTSE hierkommen GCIY an HGC-27 sinn erhéijen an CTSE Ausdrock. Am Géigendeel, ënnert der Zell Zeilen aus Lauren d'intestinal Typ GC, nämlech tub1 an tub2 vun Japanesch Klassifikatioun, MKN-7, H-111-TC, MKN-74, an AZ521 Manktem CTSE Ausdrock, mat nëmmen eng Ausnam vun NCI-N87 kloer CTSE Ausdrock weist. VerfÜgung

vun dësen Resultat, spekuléieren mir dass Ausdrock vun CTSE vill mat histological Typ vun gastric Kriibs soll ass. Fir aner rar Zorte vun GC Zell Linnen, MKN-1, ECC-10, an ECC-12 sinn absolut erhéijen an CTSE Ausdrock (Dorënner 1A, Table 1). VerfÜgung

Expression vun cathepsin E (CTSE regulariséiert Majorly um Transkriptioun Level VerfÜgung) VerfÜgung Gene ass

deenen 13 gastric, 5 colorectal, an 2 aner Kriibs Zell Linnen, CTSE FAQ Produktioun vun Western blotting (Dorënner 1B analyséiert gouf). 7 vun den 20 Zell Linnen waren och déi immunohistochemistry (Dorënner S1) bewäert. An der béid Analysë CTSE VerfÜgung mRNA Ausdrock an CTSE FAQ Produktioun huet seng Koppel, proposéiert CTSE VerfÜgung Ausdrock meeschtens op der transcriptional Niveau reglementéiert ass. Nieft, all-oder-keent Ausdrock vun CTSE dës Distanz an RT-Hinnen alleguer, westlech blotting, an immunohistochemistry ugeholl datt gastric Kriibs Zellen wier kloer an zwou Kategorien séiert ginn:. CTSE-ausdrécken Typ an CTSE-erhéijen Typ VerfÜgung

ze ermëttelen d'Regulatioun vun CTSE VerfÜgung Gentherapie, zwou grouss epigenetic Drogen, demethylating Agent 5-December-2'-deoxycytidine an histone deacetylase inhibitor trichostatin a [37], huet applizéiert bis fënnef GC Zell Linnen (Dorënner 1c) . Dräi CTSE-ausdrécken an zwee CTSE-erhéijen GC Zell Linnen goufen behandelt, mä mir kéinten net erkennen all Ännerung vun CTSE VerfÜgung Transkriptiouns (Dorënner 1c). Fir methylation, mir gesichte och CpG Inselen an der suggestiv Promoteur Regioun vum Mënsch CTSE VerfÜgung Gentherapie mat zwee Websäite: "http://www.uscnorris.com/cpgislands2/cpg.aspx" Musiktherapie- CpG Insel searcher a " http://www.ncbi.nlm.nih.gov "vun der National Center fir déi Information (NCBI) ënnerstëtzt. D'Resultater vun zwee Recherchen ugeholl, datt de Promoteur vum Mënsch CTSE VerfÜgung Gentherapie vun engem nidderegen Prozentsaz vun CpG dinucleotides (55%) a kee CpG Insel charakteriséiert ass, déi mat eise Resultater konsequent sinn (Dorënner 1c).

Zousätzlech, évaluéiert mir den Effet vu véier Transkriptiouns Faktore vill gastrointestinal Genen ze regléieren gemellt goufen: cdx2 VerfÜgung [26], [27], gli VerfÜgung Famill Genen ( gli1 VerfÜgung a gli3 VerfÜgung) [28], a sox2 VerfÜgung [29]. Ënner der stabil transduction vun cdx2 VerfÜgung, gli1 VerfÜgung, gli3 VerfÜgung, an sox2 VerfÜgung Ee, konnt mer net eng kloer Ännerung vun CTSE VerfÜgung Ausdrock (Dorënner 1D). Am Moment, kéint mir de reglementaresche Mechanismus vun net entschlësselen CTSE VerfÜgung Gentherapie, déi an der Zukunft geléist ginn. VerfÜgung

Cathepsin E (CTSE) ass Sëcher deelgeholl an Signet-Ring Zell Carcinoma vun Mo. VerfÜgung

fir d'Spekulatioun aus der GC Zell Linnen (Table 1, Dorënner 1A) validéieren, mir analyséieren nächst CTSE Ausdrock vun de Medeziner uplanzen. Um éischten, 51 SIG-Typ GC Echantillon surgically sech resected bewäert. Contreras, iwwersinn staining vun CTSE war an all déi 51 Beem uplanzen iwwerpréift observéiert, an an 50 vun 51 Fäll, CTSE-positiv Zellen besat méi wéi 90% vun Kriibs Zellen am entholl (Table 2). VerfÜgung

Next, 67 chirurgesch uplanzen ofgeleet vum GC Fäll anere wéi SIG-Typ sech analyséieren, wat verschidde Musteren vun CTSE Ausdrock (Table 2) virgestallt. CTSE Ausdrock am GC por-Typ war selbstverständlech méi héich am Verglach mat anere véier Zorte vu GC, wann et déi vill méi niddreg ass wéi déi vun SIG-Typ GC (Table 2). Prevalence vun CTSE positive Zellen zu tub1-, tub2-, pap-, an bess-Typ GC ass sécherlech manner, mee et ass net esou héich wéi aner normal digestive Organer (Table 2). Typesch immunostaining Biller vun CTSE zu sechs Zorte vun GC sinn zu Dorënner 2 (SIG an tub1) gewisen an Dorënner S2 (tub2, PAP, por, an bess). VerfÜgung

Baséierend op d'Resultat vun chirurgesch uplanzen, mir weider CTSE analyséiert Ausdrock vun 84 endoscopically resected gastric entholl Echantillon. Verglach mat surgically uplanzen, ass de Histologie vun endoscopically resected Otemschwieregkeeten vill méi Goss; et war Entreprise erwaart dass association tëscht CTSE Ausdrock an Histologie vun gastric Kriibs méi genee analyséiert ginn. Si huet sech aus 78 Fäll vun fréi Etapp adenocarcinoma (7 vun SIG-Typ, 52 vun tub1-Typ, 12 vun tub2-Typ, a 7 vum PAP-Typ GC) a 6 Fäll vun precancerous adenoma (Table 3). CTSE Ausdrock vun sig-, tub1-, tub2-, an PAP-Typ GC zu endoscopically resected Stoffer gläicht ze surgically resected mannste mat entspriechende Histologie (Bedeitung 2 an 3). CTSE berechent Ausdrock Fändelen (Table 3) weisen kloer Tendenz, datt CTSE definitiv zu GC SIG-Typ äussert Well et zu tub1- an tub2-Typ GC gin erhéijen trëtt. Et soll och ze bemierken, datt gastric adenoma, déi als méi ënnerscheet histological Fonktioun als ka mat tub1-Typ GC Verglach, déi stäerkst hunn vun CTSE (Table 3) gewisen. VerfÜgung

CTSE ass net nëmmen eng Luucht vun Signet -ring Zell Carcinoma vun Mo, mee och eng Gastric dat context VerfÜgung

der Verdeelung vun CTSE zu normal GUT an precancerous Mo immunostaining vun CTSE weider ze net-kriibserreegend Mo an aner digestive TRACT Organer applizéiert gouf ënnersicht. An de Mo. ouni atrophy an intestinal metaplasia, Ausdrock vun CTSE ass an der fundic an pyloric Glands vun Mo. (Dorënner S3D /S3A an S3E /S3B) kloer observéiert. Härzwierksam Glands vun Mo. ausdrécklech och CTSE, obwuel et ass éischter schwaachen wéi Ausdrock vun fundic oder pyloric Glands (Dorënner S3F /S3C). Contrastively, ass CTSE seelen zu esophagus, Ausléiser, kleng Daarm, a grousse Daarm (Dorënner S4) ausgedréckt. VerfÜgung

Mir weider CTSE Ausdrock vun gastric mucosa mat intestinal metaplasia bewäert, eng gutt-bekannt precancerous Zoustand vun Mo [26 ], [29], [38]. Als zu Dorënner 3A gewisen, Collectioun gastric fundic Glands an intestinal metaplastic Glands contrastive staining vun CTSE. Typesch, ass intestinal metaplasia an zwou Kategorien séiert: gemëscht gastric-a-intestinal Typ (onkomplett Zort) an eleng intestinal Typ (komplett Typ) [29], [38]. Et ass gutt etabléiert, datt de fréiere ee souwuel MUC5AC (gastric Bewaacher mucin) an MUC2 (intestinal Bewaacher mucin) dréckt, wobäi de Fonds een net MUC5AC mä MUC2 [29] dréckt. An zwou Zorte vun intestinal metaplasia am Mo, confirméiert mir dat Ausdrock vun CTSE zu MUC5AC ähnlech ass an Géigendeel zu MUC2 (Dorënner 3B an 3C). VerfÜgung

Fir d'Associatioun vun CTSE Ausdrock mat MUC5AC an MUC2 Ausdrock evaluéieren, hir immunostaining war statistesch bewäert endoscopically resected 84 gastric entholl Stoffer benotzt (Table S2). D'Korrelatioun Analysë weisen, datt CTSE Ausdrock positiv mat gastric Bewaacher MUC5AC ( p VerfÜgung &Si besteet; 0.0001) verbonnen ass an negativ verbonne mat intestinal Bewaacher MUC2 ( p VerfÜgung = 0.0019). Synthetically, ofgeschloss mir dass CTSE, wéi MUC5AC, eent vun de gastric dat lues ass. VerfÜgung

Méi Strenz Bléien Adenocarcinoma vun der Background Mucosa zu Arise éischter mat Ofgeholl Béid "gastric" an "intestinal" BIG VerfÜgung

fir d'Initiatioun Schrëtt vun gastric tumorigenesis ermëttelen, huet den Hannergrond mucosa vun fréi Kriibs an adenoma weiderhin, 84 endoscopically resected uplanzen benotzt. CTSE Ausdrock vun Net-kriibserreegend gastric mucosa bascht ze entholl lesion war évaluéiert, zesumme mat MUC5AC an MUC2 (Table 4). Fir SIG-Typ GC, souwuel de entholl lesion an Hannergrond mucosa zougedréckt meeschtens staark Ausdrock vun CTSE an MUC5AC hierkommen Ausdrock vun MUC2 ganz schwaach war an zwee vun hinnen (Table 4). Ähnlech Ausdrock Musteren vun den dräi lues an der entholl an bascht mucosa hindeit datt Initiatioun vun SIG-Typ GC d'Fonctioune vun Hannergrond mucosa iwwerleet, aus der Siicht vun "gastric" an "intestinal" dat. Dat ass ze soen, SIG-Typ GC mat Net-intestinal gastric Eegeschafte existeiert Ufank vun den Hannergrond mucosa mat Net-intestinal an gastric Fonctiounen. VerfÜgung

Fir gastric adenoma an Bléien adenocarcinoma (tub1 /tub2-Typ GC), contrastively, Ausdrock Profiler vun den dräi lues sinn ganz interessant (Table 4). Méi Strenz éischter gastric erhéijen Ausdrock vun CTSE an MUC5AC zu entholl lesions gestiermt (tub2 > tub1 > adenoma) mee am Hannergrond mucosa Ausdrock vun dësen gastric lues ofhuelen (tub2 &Si besteet; tub1 &Si besteet; adenoma). Dës hindeit datt méi Strenz (dohier méi malignant) gastric erhéijen och d'staark gastric Propriétéit ze weisen, hierkommen se éischter aus dem Hannergrond mucosa ze féiere mat gastric Fonctiounen ofgeholl. Wéinst dem méi ënnerscheet éischter gastric erhéijen MUC2 zu souwuel entholl lesions an Hannergrond mucosa auszedrécken (adenoma > tub1 > tub2). Dëst deit drophin, datt intestinal dat Hannergrond gastric mucosa féiert zu der intestinally ënnerscheet (dohier manner malignant) gastric erhéijen. VerfÜgung

Fir PAP-Typ GC, Ausdrock vun CTSE, MUC5AC, an MUC2 souwuel d'entholl lesion zu gefierwt staark waren a ronderëm mucosa, déi ganz verschidde sinn aus den Ausdrock Musteren vun tub1 /tub2-Typ GC (Table 4). Pap-Typ GC ass nees Lauren d'intestinal Typ klassifizéiert zesumme mat tub1 /tub2-Typ GC, mee eis heiteg Analysë ugeholl datt PAP-Typ an tub1 /tub2-Typ GC net zu der selwechter Kategorie behandelt sollen, aus der Perspektiv vun gastric an intestinal Eegeschaften. An eiser leschter Rapporten analyséiert Brm VerfÜgung [3], eng méiglech Schlëssel Bewaacher Gentherapie vun GUT dat, Ausdrock vun Brm zu gastric papillary adenocarcinoma (PAP) ass ganz ënnerschiddlech aus Bléien adenocarcinoma vun Mo. (tub1 an tub2). Am Moment, si mir iwwerzeegt, datt histological Ënnerscheed tëscht PAP-Typ GC an tub1 /tub2-Typ GC soll strikt unerkannt ginn. VerfÜgung

Diskussioun VerfÜgung

Rollen a reglementéieren vun Cathepsin E (CTSE) an der Mënsch Mo. VerfÜgung

Cathepsin e (CTSE), engem net-Dëst intracellular aspartic protease, ass eent vun de cathepsin Famill proteases [39], [40]. Aner aspartic protease cathespin D (CTSD), engem homologue vun CTSE, stellt e grousse proteolytic Aktivitéit an der Dëst Volet, mee fonctionnell Rollen vun CTSE hunn net opgekläert ginn, [24], [39]. Verdeelung vun béiden proteinases ass ganz verschidden: CTSD ass Ekzeptioun vierdrun zu lysosomes vun verschidden Stoffer (konsequent mat der Konsequenz vun Dorënner 1A), wobäi CTSE haaptsächlech vun Zellen vun der immun Systemer wéi macropahges, lymphocytes, dendritic Zellen ausgedréckt ass, etc [39 ]. Ausdrock vun CTSE am Mo huet och gemellt ginn [23], [24], obwuel gestallt an agebousst Funktioun vun gastric CTSE ass momentan onbekannt [39], [40]. Am Moment studéieren esou vill wéi 202 Medeziner gastric Echantillon Evaluéieren, mir kloer gewisen CTSE ass souwuel d'gastric dat Bewaacher geflitzt an der gastric signet-Ring Zell carcinoma Bissau, mä d'Bedeitung vun gastric CTSE Ausdrock bleift ongewëss. VerfÜgung

Fir analyséieren d'Relatioun vun CTSE Ausdrock an oncogenic Potential, produzéiert mir de MuLV-baséiert Aen do Vecteure [26] Droen CTSE VerfÜgung Gentherapie an transduced et an der CTSE-erhéijen gastric Kriibs Zell Linnen: MKN-74, néirens-10 -TC, an MKN-1. Mir bewäert d'Méiglechkeet vun gastric mucin Produktioun (Dorënner S5) oder hir morphological Ännerungen Wou muss ech, mä kee Verfall war observéiert. Benotzt dëse etabléierten Zell Linnen, mir standing weider souwuel d'Kolonie Équipe an mëll Agar [30] an apoptosis Aféierungs- vun der Behandlung vun actinomycin D, camptothecin, an staurosporine [41]. . Allerdéngs kéint mir den Effet vun CTSE Ausdrock op weder Hafen onofhängeg Wuesstem nach Resistenz zu Medellin-entschlof apoptosis (Donnéeën net gewisen) VerfÜgung

An der rezent Etude entdecken, CTSE gemellt huet e puer Anti-oncogenic Potential ze hunn: Kawakubo et al. VerfÜgung bewisen, dass CTSE Wuesstem verhaft an apoptosis zu mënschlech Aarbecht Kriibs Zell Linnen vun der proteolytic release vun soluble entholl necrosis Faktor-Zesummenhang apoptosis-Pinguin ligand catalyzing (Trail) aus der Zell Uewerfläch speziell [induces 42 ]. Allerdéngs huet CTSE-erhéijen Mais weder Collectioun Kriibs-ufälleg phenotype nach dobäi kloer gastric Entwécklungsstéierungen [43], [44], [45]. Am Moment huet, ass et eng Saach vu watfir ob gemellt antitumor Aktivitéit vun CTSE gastric Kriibs dorënner signet-Ring Zell carcinoma ëmsetze konnt. Zesumme mat sengem unelucidated Regulatioun a Fro gestallt Funktioun, Auswierkunge vun CTSE op gastric dat an tumorigenesis si fundamental Problemer, déi an der Zukunft geléist ginn. VerfÜgung

Gastric Canceration vun de Grenzen vun "gastric" an "intestinal" Property Background

• PLOS NËMMEN: Retinoic Saier-ageschalt Ndrg1a Represses Wnt /β-catenin zu Erlaabt sécher Xenopus Lëtzebuergesch, Oesophagus, Mo, an Ausléiser Antrach
• PLOS NËMMEN: Wat haalt Dir dovun Chemoradiotherapy kombinéiert mat Epirubicin-Opgrond Triplett Chimiotherapie fir Lokal Détailléiert Adenocarcinoma vun de Mo. oder Gastroesophageal Kräizung