PLoS ONE: katepsino E yra skrandžio diferenciacijos ir Signet-Ring ląstelių karcinoma skrandžio žymeklis: romanas pasiūlymas skrandžio Tumorigenesis

Anotacija

Skrandžio vėžys (GC) pristato įvairius histologinius funkcijas, nors mechanizmo, lemiančio jos įvairovė retai išaiškintas. Tai daugiausia skirstomi į gerai diferencijuoto kanalėlių adenokarcinoma (tub1), vidutiniškai diferencijuoti kanalėlių adenokarcinoma (tub2), blogai diferencijuota adenokarcinoma (por), antspaudo žiedas ląstelių karcinoma (sig), mucinous adenokarcinoma (MUC) ir kapiliarų adenokarcinoma (PAP). Iki atrankos, mes nustatėme, katepsino LT (CTSE)
išreiškia visuotinai ir sig-tipo, kartais į por-tipo, ir retai tub1 /tub2 tipo GC ląstelių linijų. Be chirurgiškai rezekcijos egzempliorių, CTSE buvo immunostained į 50/51 sig-tipo (98,0%), 3/10 tub1 tipo (30,0%), 7/18 tub2 tipo (38,9%), 15/26 POR-tipo ( 57,7%), 4/10 PAP-tipas (40,0%), o 0/3 MUC-tipo (0,0%) DC. Be endoskopijos-rezekcijos egzempliorių, 6/7 SIG tipo (85,7%), 7/52 tub1 tipo (13,7%), 5/12 tub2 tipo (41,7%), 2/7 PAP-tipas (28,6%) DC ir 0/6 adenomos (0,0%), išreiškiamas CTSE. Nepiktybinių audinių, CTSE visuotinai išreikštas įprastais fundic, prievarčio ir širdies liaukos, skrandžio, bet vargu ar kitais virškinimo organus. Į ikivėžinių žarnyno metaplazijos skrandžio, CTSE dažniausiai stebimas mišrus skrandžio-ir-žarnyno tipą ir trūksta tik trakto tipo. CTSE išraiška teigiamai koreliuoja su skrandžio žymeklio MUC5AC ( P
< 0,0001) ir neigiamai koreliuoja su žarnyno žymeklio MUC2 ( P
= 0,0019). SIG tipo GC, abiem navikų ir fono gleivinės, išraiškos MUC5AC ir CTSE yra daug, o kad MUC2 yra žemas, rodo, kad SIG tipo GC atspindi fono gleivinės funkcijas. Dėl skrandžio adenoma ir tub1 /tub2 tipo GC, daugiau neišrūšiuotos navikai linkę parodyti didesnę raišką CTSE su MUC5AC ir mažesnės raiškos MUC2 į navikų, tačiau jie linkę pateikti mažesnę raišką CTSE, MUC5AC ir MUC2 foniniu gleivinę. Tai rodo, kad daugiau piktybinio skrandžio adenokarcinoma su stipresnio skrandžio ir silpnesnių žarnyno savybių linkę kilti iš fono gleivinės su sumažėjusiu tiek skrandžio ir žarnyno funkcijas. Taigi, CTSE yra tiek skrandžio diferenciacijos ir antspaudu žiedų ląstelių karcinoma žymeklis, kuris turėtų nušviesti skrandžio Tumorigenesis mechanizmo

nurodomoji dalis:. ŽIRGAI-Shimizu, M, Yamamichi N Inada Ki Kageyama- Yahara N, Shiogama K, Takahaši Y, ir kt. (2013) katepsino E yra skrandžio diferenciacijos ir Signet-Ring ląstelių karcinoma skrandžio žymeklis: romano Siūloma skrandžio Tumorigenesis. PLoS ONE 8 (2): e56766. Doi: 10,1371 /journal.pone.0056766

Redaktorius: Antanas W.I. Štai Kinijos universiteto Honkonge, Honkongas

Įstojo lapkričio 20 d, 2012 m Priėmė: Sausis 14, 2013 m Paskelbta: Vasario 22, 2013

Visos teisės saugomos: © 2013 ŽIRGAI-Shimizu et al. Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Finansavimas:. Šis darbas buvo iš dalies remiamą dotacijos iš Sato memorialinis fondas vėžio tyrimų, iš dalies mokslinių tyrimų dotaciją iš Nakayama vėžio tyrimų instituto, iš dalies mokslinių tyrimų dotaciją iš fondo skatinimo vėžio tyrimų, taip pat iš dalies pagal dotacijos-in- pagalba jaunųjų mokslininkų (B) iš švietimo, kultūros, sporto, mokslo ir technologijų ministerija (MEXT). Bet visi rėmėjai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį

konkuruojančių interesų.. Autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

Skrandžio vėžys (GC) yra ketvirtoji dažniausia vėžio, o antrasis priežastis, dėl vėžio susijusių mirčių visame pasaulyje, nepaisant laipsniško mažėjimo jos dažnumą ir mirtingumą [1], [2]. Jis yra gerai žinoma, kad skrandžio piktybinių navikų pristato įvairius histologinius savybes [3]. Plačiausiai naudojamas skrandžio vėžio klasifikacija Lauren klasifikacija, kuri išskiria žarnyno (diferencijuotą) tipo GC ir difuzinis (nediferencijuotą) tipo GC [4]. Laura rašyti yra paprastas ir lengvai suprantamas, nors jos supaprastinimas dažnai sukelia nesugebėjimas atspindėtų tikslius bruožus skrandžio piktybinių navikų [3]. Be skrandžio vėžio [5], detalesnės Japonijos klasifikavimo kuris yra panašus į PSO klasifikaciją [6], skrandžio adenokarcinoma yra skirstomi į šešias kategorijas: gerai diferencijuotas kanalėlių adenokarcinoma (tub1), vidutiniškai diferencijuoti kanalėlių adenokarcinoma (tub2), menkai diferencijuotas adenokarcinoma (už), antspaudo žiedas ląstelių karcinoma (SIG), mucinouse adenokarcinoma (MUC) ir spenelių adenokarcinoma (PAP). Apskritai kalbant, Lauren anketa difuzinis (nediferencijuotą) tipas apima por-, sig- ir MUC tipo GC, o Lauren anketa žarnyno (diferencijuoti) tipas apima tub1-, tub2- ir PAP tipo GC [3].

Tarp įvairių histologinių GC tipų, mes sutelktas į antspaudo žiedas ląstelių karcinoma (SRCC) skrandžio (SIG tipo GC). SRCC yra mucino išskiriančių adenokarcinoma, kuriame Intracitoplazminė mucino suspaudžia savo branduolius duoti ląstelės charakteristika "Signet-žiedas" išvaizdą [7]. Nors SRCC buvo pranešta, kad kilęs iš įvairių audinių, skrandis yra labiausiai paplitusi organas kilmės [7], [8]. Nepaisant dažno paplitimo SRCC tarp skrandžio piktybinių navikų, klinikos ypatumai SIG tipo GC vis dar prieštaringa; kai ankstesni tyrimai pranešė, kad antspaudo žiedas ląstelių histologija pristato geresnę prognozę [9], [10], [11], o kiti tyrimai pranešė, kad histologija SRCC yra gana blogiau prognozės [8] ženklas, [12], [ ,,,0],13], [14]. Esant tokiam fone, bandėme rasti naujų konkrečių paženklintų genų SIG tipo GC. Daugelyje ankstesnių tyrimų [15], [16], [17], SIG tipo GC buvo analizuojamas kartu su por-tipo ir Muc-tipo, nes šie trys tipai GC yra suskirstyti į Lauren anketa difuzinio tipo. Tačiau daugelis ataskaitos rodo, kad SIG tipo GC yra gana skiriasi nuo pornografijos arba MUC-tipo GC, iš molekulinių savybių ar piktybinių potencialo [3] požiūriu, [13], [18]. Todėl mes išanalizavo SIG tipo GC nepriklausomai nuo por- ir MUC-tipo GC.

Tarp daugybė genų, mes tikrinami kelis tuos, pavyzdžiui, cad
šeimos genai [19 ], [20], žmogaus mucino
genai [21] vimentin
[22] katepsino
šeimos genai [23], [24], [25] ir tt, kurios išraiška buvo pranešta, kad skiriasi Lauren anketa žarnyno ir difuzinio tipo GC. Pagrindinis tikslas mūsų tyrime yra rasti a clue neišspręsto kancerogenezėje iš SIG tipo GC pirma nustatyti savo konkrečius paženklintų genų. Mes tikėjomės, kad mūsų bandymus lemtų nežinomų tiekėjų reguliavimo genų (pavyzdžiui, konkrečių transkripcijos veiksnių) nustatant SIG tipo GC savybių. Kai transkripcijos veiksniai, susiję su virškinimo trakto savybės buvo paaiškinta, kaip antai CDX
šeimos genai [26], [27], Gli
šeimos genai [28] ir sox2
[29], tačiau mes manome, kad ne keli esminiai genai virškinimo diferenciacijos ir skrandžio onkogenezėje vis dar neatrastas. Kitas mūsų tyrimo tikslas yra išanalizuoti labai anksti skrandžio Tumorigenesis remiantis identifikuotų naujų žymeklis genų ekspresiją. dėmesį ne tik SIG tipo GC, mes ir toliau ginčijo įvertinti visus ankstyvųjų GC atvejais tipų analizuojant identifikuoti geno raišką tiek naviko pažeidimo ir gretimos gleivinę. Esame įsitikinę, kad mūsų darbas turėtų būti raktas į artėja prie prieštaringų bruožų SIG tipo GC, taip pat turėtų būti sukelti nušviečiantis įvairius histologinius savybes skrandžio piktybinių navikų.

Medžiagos ir metodai

Mobilusis kultūra

dvidešimt skrandžio, dešimt žarnos ir du ne virškinimo trakto vėžio ląstelių linijos išliko DMEM su 10% serumas iš veršiuko embriono (Gibco /Invitrogen, Carlsbad, CA), esant 37 ° C [30], [31]. Visi mobilieji linijos buvo įsigytas iš Amerikos tipas Kultūros kolekcijos, RIKEN ląstelių banką arba Cell Resource Center Biomedicininių tyrimų instituto plėtros, senėjimas ir vėžys, Tohoku universitete. Vardai ir histologiniai tipai naudojami vėžio ląstelių linijas, buvo aprašyta detaliai į patvirtinamąjį dokumentą S1. DNR demetilinimu reagento ir histono deacetilazės (HDAC) inhibitorius, 5-aza-2'-deoksicitidino (5-aza-DC, Sigma-Aldrich) esant 2 mikrogramai /ml arba trichostatin A (TSA, Sigma-Aldrich) 100 ng /ml, buvo įtraukta į kultūros terpę.

AT-PGR

iš viso mobilieji RNR buvo parengtos remiantis ISOGEN RNR išskyrimo reaent (Wako, Osaka, Japonija), kaip aprašyta anksčiau [30]. Pusiau kiekybinis AT-PGR buvo atliekama naudojantis viršuje Vieno žingsnio reakcijos naudojant platinos Taq (GIBCO /Invitrogen). Grunto poromis ir AT-PGR procedūromis dirba aptikti raiškos lygį El cad
(CDH-1), , Li-cad (CDH-17)
MUC5AC
MUC6
MUC2
CTSE (katepsino R)
CTSD (katepsino D)
CTSB (katepsino B)
CTSL (katepsino L),
ir GAPDH
yra parodyta lentelėje S1.

Imunoblotingo

Visa ląstelių ekstraktai (20 mikrogramų kiekvienas) lizuojamos ir virti su 1x pavyzdžių buferio [30] buvo atskirti elektroforezės 12,5% SDS poliakrilamido geliai, perkelti į nitroceliuliozės membranos (Hybond-N, Amersham, Freiburg, Vokietija), ir immunostained su anti-žmogaus katepsino E antikūnų (# AF1294, R & D sistemos, Mineapolis, MN) arba anti-žmogaus β-Actin (C4) antikūnas (# SC-47778, Santa Cruz biotechnologijos, Santa Krusas, Kalifornija). Antrajam antikūnų, krienų peroksidazės (HRP) konjuguoto anti-Goat IgG (H + L) asilas antikūnas (ˁ-035-003 Jackson, Baltimorė, MA) ir krienų peroksidazės (HRP) konjuguoto anti-pelės IgG (O + L) ožkos antikūnai (# A90-216P, BETHYL Montgomeris, Teksasas) buvo atitinkamai naudojami. Konkretūs juostos buvo aptikta Immunostar LD (WAKO, Osaka, Japonija) ir LAS-4000 ( "Fuji Film", Tokijas, Japonija).

imunohistocheminis

buvo atliekama Deparaffinization ir endogeninė peroksidazės inaktyvacijai klinikinių audinių kaip aprašyta anksčiau [3]. Dėl CTSE, pirminės imunodažymu su anti-human CTSE ožkos polikloniniu antikūnų (# AF1294, R & D Systems), esant 1:100 praskiedimas buvo atliekamas 16 val kambario temperatūroje. Po plovimo PBS (tirpalo fosfato buferio-druskos) tris kartus, taip pat antrinį imunodažymu su Histofine paprasta Stain MAX-PO (G) (Nichirei, Tokijas, Japonija) buvo atliktas 30 min kambario temperatūroje. Po plovimo PBS tris kartus, reakcijos produktai buvo vizualizuojami 20 mg /dl 3,3'-diaminobenzidinas tetrahidrochlorido tirpalo, kuriame yra 30% H _{2O 2 lašas, po to plaunant su PBS. Branduolinė counterstaining buvo atlikta su Mayer hematoxilin. Dėl MUC5AC ir MUC2, gesintų šildymo 1 mM EDTA buferio (pH 8,0) esant 120 ° C pirmą kartą buvo atliktas greitpuodyje (delicio 6L; T-FAL, Rumily, Prancūzija) 10 min antigenų išimti. Pagrindinis imunodažymu su anti-MUC5AC antikūnų (NCL-MUC-5AC, Novocastra, Newcastle-upon-Tyne, UK) ne 1:200 skiedimo ar anti-MUC2 antikūnų (NCL-NUC-2, Novocastra) ne 1:500 praskiedimo buvo atlikta 16 valandų kambario temperatūroje. Po plovimo PBS tris kartus, antrinė imunodažymu su Histofine paprasta Stain MAX-PO (G) (Nichirei) buvo atliktas 30 min kambario temperatūroje. Taip žingsnis buvo toks pat kaip CTSE imunologinio dažymo. Visi immunostained skyriai buvo vertinami nepriklausomai du patologai, kartu su JE tamsintas ir Pas-tamsintas skyriai iš tų pačių pažeidimų.}

navikų mėginiuose

Tarp skrandžio vėžio audiniuose pasviręs į Fujita sveikatos universiteto medicinos mokykla, mes išrinkome 51 skrandžio antspaudo žiedas ląstelių karcinoma (sig) mėginius chirurginiu rezekcijos. Be to, 67 skrandžio vėžiu chirurginiai egzemplioriai kitų penkių tipų skrandžio adenokarcinoma (tub1, tub2, por, Pap, ir MUC) buvo atsitiktinai atrinkti iš to paties banko. Dėl endoskopijos rezekcijos mėginių, mes išrinkome 84 mėginiai (78 skrandžio vėžiu atvejų ir 6 skrandžio adenoma atvejų), kurie buvo traktuojami Tokijo ligoninės universitete nuo 2005 iki 2011 Dėl visų klinikinių mėginių rašytiniai informuoti sutikimai gauti iš atitinkamų pacientų pagal Helsinkio deklaraciją. Šis tyrimas patvirtino institucinę etinės peržiūros valdybos žmogaus tyrimo metu Fujita sveikatos universiteto, taip pat buvo patvirtinti etikos komitetų Tokijas universitete.

retrovirusų Vektoriai

Jei generuoti retrovirusinėms vektoriai raišką, Cdx2
Gli1
Gli3
CTSE
, ir Sox2
, atitinkami kDNR buvo įtraukta į pMXs-IRES -puro (Mobilusis Biolabs Inc, San Diego, CA) taip. Dėl Cdx2
, pMXs-Cdx2-IRES-Puro buvo sukurtas kaip buvo pranešta anksčiau [26]. Gli1
kDNR buvo gauta iš PCR-XL-TOPO-Gli1 (Open Biosystems, Huntsville, AL) per PGR naudojant pradmenis 5'-agccagatctatgagcccatctctgggattc-3 "ir 5'-agtagcggccgcccctactctttaggcactagagt-3". Po dvigubo virškinimui su Bgl II, o ne aš, gauta fragmentas buvo įtraukta į BamH I /ne aš svetainėje pMXs-IRES-Puro (Cell BioLabs Inc., San Diego, CA) generuoti pMXs-Gli1-IRES-puro. Gli3
kDNR buvo gauta iš PCR-XL-TOPO-Gli3 (Atvira Biosystems) per PGR naudojant pradmenis 5'-aatgcggccgctgatttccgttggt-3 "ir 5'-tgcggatcctacgtgggcatttttg-3". Po dvigubo virškinimui su BamH I ir ne aš, gauta fragmentas buvo įtraukta į BamH I /ne aš svetainėse pMXs-IRES-Puro generuoti pMXs-Gli3-IRES-puro. CTSE
kDNR buvo gauta iš pCMV-SPORT6-CTSE (Thermo Fisher Scientific, Madison, WI) per PGR naudojant pradmenis 5'-ccgagatctatgaaacgctccttcttttg-3 "ir 5'-gggctcgagtaaaactgtcgaatgaaga-3". Po dvigubo virškinimui su Bgl II ir Xho I, gaunamas fragmentas buvo įtraukta į BamH Aš /Xho I svetainėse pMXs-IRES-Puro generuoti pMXs-CTSE-IRES-puro. Sox2
kDNR buvo gauta iš MKN-7 genominės DNR per PGR amplifikacijos naudojant pradmenis 5'-atgtacaacatgatggagacggagct-3 'ir 5'-tcacatgtgtgagaggggcagtgtg-3'. Papildyta fragmentas buvo įtraukta į EcoR V svetainėse pT7Blue-T vektoriaus (Novagen, Darmstadt, Vokietija) generuoti pT7Blue-Sox2. Po dvigubo virškinimui su BamH I ir Sal I, gaunamas fragmentas buvo įtraukta į BamH Aš /Xho I svetainėse pMXs-IRES-Puro generuoti pMXs-Sox2-IRES-puro. Iki kontransfekcijai šių plazmidės su vezikulinio stomatito virusas voko G baltymo (VSV-G) išraiška plazmidės į Plat-GP pakuotės ląstelių linijos (Cell Biolabs Inc) atitinkamai VSV-G-pseudotyped MuLV pagrindu retrovirusų vektoriai išreiškė Cdx2
Gli1
Gli3
CTSE
, ir Sox2
buvo parengta.

rezultatai

išraiška katepsino LT (CTSE)
yra reikšmingai koreliavo su Kilęs histologinis tipas skrandžio vėžio ląstelių linijų

Jei norite ieškoti MARKER genus SIG tipo GC, mes tikrinami kelių genų ekspresiją pranešama, kad parodyti savitą išraišką tarp Lauren anketa žarnyno ir difuzinio tipo GC. Išraiška, El cad
( CDH-1
) [19] LI-cad
( CDH-17
) [20], MUC5AC
[21] MUC6
[21] MUC2
[21] vimentin
[22] CTSD
( katepsino D
) [23], [24], CTSE
( katepsino El
) [23], [24], CTSB
( katepsino B
) [25] CTSL
( katepsino L
) [25], ir GAPDH
(vidinė kontrolė) genai buvo įvertino RT-PGR 20 GC eilutes kartu su 12 vėžio ląstelių linijų iš kitų organų (1a pav.) Mes tada nukreipti mūsų dėmesį į CTSE
, nes ji išreiškia tiek Kato-III ir NUGC-4 kilęs iš SIG tipo GC, o taip pat, nes ji niekada išreiškia MKN-7 ir H-111-TC žinoma, kad yra kilęs iš gerai diferencijuoto kanalėlių adenokarcinoma skrandžio (tub1 tipo GC, patvirtinamasis dokumentas S1).

dėl kitų tirtų genų, išraiška, CDH-1
( E cad
), pranešė, kad dažnai trūksta Lauren anketa difuzinis tipo GC [19], [32], [33], buvo netikėtai aptikta dviejų SIG tipo GC kilmės ląstelių (1a pav.) Ji taip pat buvo netikėtas, kad CDH-17
(, Li-cad
), manoma, kad žarnyno markeris genas [20], [26], [27], išreiškia beveik visose skrandžio vėžio ląstelių linijas, įskaitant sig-tipo (1a pav.) Kitų katepsino šeimos genų, CTSD
buvo pranešė, kad turi būti labai išreikštas difuzinio tipo GC ir taip pat yra prognostinę parametrą skrandžio karcinomai gydyti [23], [34], tačiau RT-PGR rezultatai parodė, kad visi nagrinėtos vėžio ląstelių linijos vienodai išreikšti, CTSD
(1A pav.) CTSB parsisiųsti ir CTSL
buvo pranešta, kad padidėjusi skrandžio karcinoma [35] ir koreliuoja su jo piktybinio nuosavybės [36], tačiau konkreti išraiška nei CTSB
arba CTSL
SIG tipo GC gautas ląstelių linijas galima aptikti (1A pav.) Kaip visuma, sąvoka profilis CTSE
atrodo gana skiriasi nuo kitų katepsino šeimos genuose.

Kitas įvertino tarp CTSE saviraiškos ir histologinio tipo 20 GC ląstelių linijų santykį. Remiantis detaliojo priežiūros aprašytų "histologinis tipas skrandžio vėžio ląstelių linijų" patvirtinamųjų dokumentų S1 literatūras, 19 GC ląstelių linijos gali būti rūšiuojami pagal Lauren ir japonų klasifikacija [3], [4], [5] (1 lentelė) , Pagal Lauren klasifikaciją, 7 iš 11 difuzinis tipo GC kilmės ląstelės ir 1 iš 5 žarnyno tipo GC kilmės ląstelės išreiškia CTSE (1 lentelė): CTSE
genas yra linkęs būti išreikštas difuzinio tipo ir netobuli žarnyno tipas GC. Asociacija tarp CTSE saviraiškos ir histologinio funkcija skrandžio piktybinių navikų gauna aiškiau, kai taikomas tikslesnis japonų klasifikacija. Tarp ląstelių linijų iš pasklidųjų tipo GC, pažymėtina, kad NUGC-4 ir Kata III kilęs iš SIG tipo GC stipriai išreikšti CTSE, o SH-10-TC ir EB-97 yra kilęs iš MUC-tipo GC yra netobuli CTSE išraiška. Dėl ląstelių, gautų iš POR tipo GC, dažniausias histologinis tipas, skrandžio piktybinių navikų [3], CTSE išraiška yra įvairios: MKN-45, EB-39, HuG1-PI HuG1-N ir AGS stipriai išreikšti CTSE, o GCIY ir HGC-27 yra netobuli CTSE išraiška. Priešingai, tarp ląstelių linijų iš Lauren anketa žarnyno tipo GC, ty tub1 ir tub2 Japonijos klasifikavimo, MKN-7, H-111-TC, MKN-74 ir AZ521 trūksta CTSE išraišką, tik su viena išimtimi NVI-N87 rodo akivaizdų CTSE išraiška.

iš šių rezultatų, mes spėliojo, kad išraiška CTSE yra reikšmingai koreliavo su histologinio tipo skrandžio vėžio. Dėl kitų retų rūšių GC ląstelių linijų, MKN-1, ECC-10 ir ECC-12 yra visiškai netobuli CTSE išraiškos (pav 1A, 1 lentelė).

išraiška katepsino LT (CTSE )
Genų reglamentuoja majorly ne perrašymą lygio

Naudojant 13 skrandžio, storosios ir tiesiosios žarnos 5 ir 2 kitų vėžio ląstelių linijas, CTSE baltymų gamyba buvo analizuojama Vakarų sugeriamojo (1b paveikslėlis). 7 iš 20 ląstelių linijų taip pat buvo įvertinta imunohistocheminiu (S1 pav). Be abiejų analizių, CTSE
iRNR raiška ir CTSE baltymų gamyba daugiausia buvo kartu, ir tai rodo, CTSE
išraiška daugiausia reglamentuojama transkripcijos lygyje. Be to, viskas arba nieko išraiška CTSE parodyta RT-PGR, Imunoblotingo ir imunohistocheminiu pasiūlė, kad skrandžio vėžio ląstelės būtų aiškiai suskirstyti į dvi kategorijas:. CTSE ekspresija tipo ir CTSE trūkumas tipo

ištirti reglamento CTSE
genas, du pagrindiniai Epigenetiniai narkotikų, demetilinimą agentas 5-aza-2'-dezoksicitidino ir histono deacetilazės inhibitorius trichostatin A [37], buvo taikomos penkerius GC ląstelių linijas (1c pav) , Trys CTSE ekspresija ir du CTSE trūkumas GC ląstelių linijos buvo gydomi, bet mes negalėjome aptikti bet kokį pakeitimą, CTSE
transkripcija (1c pav). Dėl metilinimo, mes taip pat ieškojo CpG salų įtaigios promotoriaus regione žmogaus CTSE
geno naudojant dvi svetaines: "http://www.uscnorris.com/cpgislands2/cpg.aspx~~HEAD=pobj" įrodoma CpG salos ieškotojo ir " http://www.ncbi.nlm.nih.gov "parėmė Nacionalinės centro biotechnologijos informacija (NCBI). Abiejų paieškų rezultatai rodo, kad žmogaus CTSE
genas būdingas mažesnis skaičius CpG dinucleotides (55%) ir be CpG salos, kurios atitinka mūsų rezultatus (1c pav.) Rengėjas

Be to, mes įvertino keturių transkripcijos veiksnių, kurie buvo pranešta reguliuoti daug virškinimo genus efektas: cdx2
[26], [27], Gli
šeimos genų ( gli1 parsisiųsti ir gli3
) [28], ir sox2
[29]. Pagal stabilios perdavime iš cdx2
gli1
gli3
, ir sox2
, tačiau mes negalėjome nustatyti akivaizdų iš CTSE
išraiška (1D pav.) Šiuo metu mes negalėjo išsiaiškinti reguliavimo mechanizmą, CTSE
genas, kuris turėtų būti sprendžiamas ateityje.

katepsino LT (CTSE) yra tikrai Išreikšta Signet žiedas ląstelių karcinoma skrandžio

Jei patvirtinti spekuliacijas nuo GC ląstelių linijas (1 lentelė, 1a paveikslas), kitą kartą analizavo CTSE išraišką klinikinių mėginių. Pradžioje buvo įvertintas 51 SIG tipo GC mėginiai chirurginiu rezekcijos. Stebėtinai, akivaizdu, dažymo CTSE buvo pastebėtas visose 51 bandinių tirtų, ir 50 iš 51 atvejais, CTSE-teigiamos ląstelės užima daugiau nei 90% vėžinių ląstelių naviko (2 lentelė).

Be to, 67 chirurginiai mėginiai gaunami iš kitų nei sig tipo GC atvejais buvo analizuojami, kurį pristatė įvairių modelių iš CTSE išraiškos (2 lentelė). CTSE išraiška POR-tipo GC akivaizdžiai didesnis buvo lyginamas su kitais keturių tipų GC, nors tai buvo žymiai mažesnis, negu iš sig-tipo GC (2 lentelė). Sergamumas CTSE teigiamų ląstelių tub1-, tub2-, pap- ir MUC tipo GC tikrai mažesnis, tačiau tai nėra taip mažai, kaip ir kiti normalus virškinimo organų (2 lentelė). Tipinės imunodažymu vaizdai CTSE į šešių tipų GC yra parodyta 2 paveiksle (sig ir tub1) ir S2 figūrą (tub2, Pap, por, ir MUC).

Remiantis chirurginių egzempliorių Todėl mes toliau analizuojami CTSE išraiška 84 endoskopijos rezekcijos skrandžio navikų mėginiuose. Palyginti su chirurginiu egzempliorių, endoskopijos būdu rezekcijos audinių histologinis yra daug labiau vienarūšiai; jis buvo iš ten tikėtis, kad ryšys tarp CTSE saviraiškos ir histologiją skrandžio vėžio gali būti tiksliau analizuojami. Jie sudarė 78 atvejus ankstyvoje stadijoje adenokarcinoma (7 sig-tipo, 52 tub1 tipo, 12 tub2 tipo ir 7 PAP tipo GC) ir 6 atvejai ikivėžinių adenoma (3 lentelė). CTSE išraiška sig-, tub1-, tub2- ir PAP tipo GC ir endoskopijos rezekcijos audinių primena, kad chirurgiškai rezekcijos tie su atitinkamu histologiją (2 ir 3 lenteles). Apskaičiuoti CTSE išraiška balų (3 lentelė) aiškiai rodo tendenciją, kad CTSE tikrai išreiškia SIG tipo GC kadangi linkęs būti netobuli tub1- ir tub2 tipo GC. Taip pat reikėtų pažymėti, kad skrandžio adenomos, kuris gali būti laikomas labiau diferencijuotas histologinio funkcija, palyginti su tub1 tipo GC parodė stipriausią trūkumas CTSE (3 lentelė).

CTSE yra ne tik iš Signet indikatorius -žiedas ląstelių karcinoma, skrandžio, bet ir skrandžio diferencijavimas žymeklis

Jei išnagrinėti CTSE pasiskirstymą normaliai žarnų ir ikivėžinių skrandžio, buvo toliau taikomas imunodažymu iš CTSE ne vėžiniai skrandžio ir kitų virškinimo trakto organus. Skrandyje be atrofijos ir žarninės metaplazijos, išraiška CTSE aiškiai pastebėta fundic ir prievarčio liaukos, skrandžio (pav S3D /S3A ir S3E /S3B). Širdies liaukos, skrandžio, taip pat išreikšti CTSE, nors jis yra gana silpnesni nei žodžio fundic ar prievarčio liaukų (pav S3F /S3C). Contrastively, CTSE retai išreiškiama stemplės, dvylikapirštės žarnos, plonosios žarnos ir storosios žarnos (S4 pav.)

Mes taip pat įvertino CTSE išraišką skrandžio gleivinės su žarnyno metaplazijos, gerai žinomas ikivėžinių skrandžio [26 ], [29], [38]. Kaip parodyta 3A pav, skrandžio fundic liaukos ir žarnyno metaplastic liaukos eksponuoti kontrastingą dažymas CTSE. Paprastai, žarnyno metaplazija yra skirstomi į dvi kategorijas: mišri skrandžio-ir-žarnyno tipo (neišsamūs tipo) ir tik žarnyno tipą (Visas tipas) [29], [38]. Jis yra gerai nustatyta, kad buvęs vienas išreiškia tiek MUC5AC (skrandžio žymeklis mucino) ir MUC2 (žarnyno žymeklis mucino), kadangi pastarasis išreiškia ne MUC5AC bet MUC2 [29]. Abiem žarnyno metaplazijos skrandžio tipų, mes patvirtino, kad išraiška CTSE yra panašus į MUC5AC ir priešais MUC2 (3b pav ir 3C).

Jei įvertinti CTSE raiškos asociacijos MUC5AC ir MUC2 išraiškos, jų imunodažymu buvo statistiškai įvertinti naudojant endoskopijos rezekcijos 84 skrandžio naviko audiniuose (lentelė s2). Koreliacijos analizė parodė, kad CTSE išraiška yra teigiamai susijęs su skrandžio žymeklio MUC5AC ( P
< 0,0001) ir neigiamai susijęs su žarnyno žymeklio MUC2 ( P
= 0,0019). Sintetiniu mes padarė išvadą, kad CTSE, kaip MUC5AC, yra vienas iš skrandžio diferenciacijos žymekliais.

Daugiau Nediferencijuota Cilindrinės adenokarcinoma yra linkęs kilti iš fono gleivinės su Sumažėjęs Ir "skrandžio" ir "žarnyno" Įranga

ištirti inicijavimo žingsnį skrandžio tumorigenesis, buvo toliau vertinami fonas gleivinė ankstyvo vėžio ir adenoma, naudojant 84 endoskopijos rezekcijos pavyzdžius. buvo įvertintas CTSE išraiška nevėžinės skrandžio gleivinės greta naviko pažeidimo, kartu su MUC5AC ir MUC2 (4 lentelė). SIG tipo GC, tiek navikas pažeidimas ir fono gleivinė dažniausiai smarkiai išraišką CTSE ir MUC5AC, o išraiška MUC2 buvo labai silpnas abu (4 lentelė). Panašūs ekspresijos modeliai trijų žymenų naviko ir gretimos gleivinės, rodo, kad SIG tipo GC inicijavimas atspindi fono gleivinės funkcijos, nuo "skrandžio" ir "žarnyno" diferenciacijos vaizdas. Tai yra, SIG tipo GC su ne žarnyno skrandžio savybių pradžių atsiranda nuo fono gleivinės su ne žarnyno ir skrandžio funkcijos.

skrandžio adenoma ir kanalėlių adenokarcinoma (tub1 /tub2 tipo GC), contrastively, ekspresijos profiliai iš trijų žymenų yra labai įdomus (4 lentelė). Daugiau neišrūšiuotos skrandžio navikai linkę padidinti išraišką CTSE ir MUC5AC naviko pažeidimų (tub2 > tub1 > adenoma), bet mažinti raišką šių skrandžio žymekliai fone gleivinės (tub2 < tub1 < adenoma). Tai rodo, kad daugiau neišrūšiuotos (taigi daugiau piktybiniai) skrandžio navikai linkę parodyti didesnį skrandžio turtą, o jie linkę kilti iš fono gleivinės su sumažėjusiu skrandžio funkcijos. Kita vertus, labiau diferencijuotų skrandžio navikų linkę išreikšti MUC2 abiem naviko pažeidimo ir fono gleivinės (adenoma > tub1 > tub2). Tai rodo, kad žarnyno diferenciacija fono skrandžio gleivinės veda į intestinally diferencijuotų (taigi mažiau piktybinių) skrandžio navikų.

PAP tipo GC, išraiškos CTSE, MUC5AC ir MUC2 buvo gerokai stiprus tiek naviko pažeidimo ir aplinkinių gleivinę, kuri yra gana skiriasi nuo ekspresijos modelių tub1 /tub2 tipo GC (4 lentelė). PAP-tipo GC suskirstyti į Lauren anketa žarnyno tipo kartu su tub1 /tub2 tipo GC, bet mūsų dabartiniai tyrimai rodo, kad PAP tipo ir tub1 /tub2 tipo GC neturėtų elgiamasi tos pačios kategorijos, nuo skrandžio ir žarnyno požiūriu funkcijos. Mūsų ankstesnes ataskaitas analizuoja BRM
[3], galimas raktas markeris genas iš žarnų diferenciacijos, išraiškos BRM skrandžio spenelių adenokarcinoma (PAP) yra gana skiriasi nuo kanalėlių adenokarcinoma skrandžio (tub1 ir tub2). Šiuo metu, mes esame įsitikinę, kad histologinis skirtumas tarp PAP tipo GC ir tub1 /tub2 tipo GC turėtų būti griežtai pripažįstami.

Diskusijų

Vaidmenys ir reguliavimas katepsino E (CTSE) labui,
žmogaus Skrandžio

katepsino LT (CTSE), ne lizosominio ląstelėje asparto proteazės, yra vienas iš katepsino šeimos proteazės [39], [40]. Kitas asparto proteazės cathespin D (CTSD), iš CTSE homologas, sudaro didžiąją proteolitinę veiklą lizosominio komponento, bet nebuvo išaiškintas funkciniai vaidmenys CTSE [24], [39]. Pasiskirstymas abiejose proteinazės yra gana skirtingos: CTSD visuotinai egzistavo lizosomas įvairių audinių (derančių su 1A pav rezultatas), o CTSE daugiausia išreikštas ląstelių imuninės sistemų, tokių kaip macropahges, limfocitai, dendritų ląstelių, ir tt [39 ]. Išraiška CTSE skrandyje taip pat buvo pranešta [23], [24], nors fiziologinių ir patologinių funkcija skrandžio CTSE Šiuo metu nežinoma, [39], [40]. Šiame tyrime vertinant daugiau kaip 202 klinikinių skrandžio mėginius, mes aiškiai parodė CTSE yra tiek skrandžio diferenciacija žymeklį ir skrandžio antspaudo žiedas ląstelių karcinoma persekiotoją, bet skrandžio CTSE išraiškos reikšmė lieka neaiški.

Jei analizuoti CTSE saviraiškos ir onkogeninių potencialo santykį, mes pagamino MuLV-paremtą retrovirusų vektorių [26], vežančių CTSE
genų ir transdukuojamos jį į CTSE-stokojančių skrandžio vėžio ląstelių linijų: MKN-74, sh 10 -tC ir MKN-1. Mes įvertino keičia skrandžio mucino gamybą (S5 paveikslas) arba jų morfologiniai pokyčiai galimybę, tačiau nepastebėta pakeitimas. Naudojant šiuos žinomų ląstelių linijų, mes dar atliekami tiek kolonijų susidarymą minkštu agaro [30] ir apoptozė indukcijos iki aktinomicinas D, kamptotecino ir staurosporino [41] gydymą. Tačiau, mes galime aptikti CTSE raiškos poveikį nei tvirtinimo nepriklausomos augimo, nei atsparumu narkotikų sukeltos apoptozės (nerodomas duomenys)

Neseniai atlikto tyrimo duomenimis, CTSE buvo pranešta, kad kai kurie kovos su onkogeninio potencialą.: Kawakubo ir kt.
parodė, kad CTSE konkrečiai skatina augimo suimti ir apoptozę žmogaus prostatos vėžio ląstelių linijų katalizuodamas proteolitinis atpalaidavimą tirpaus auglio nekrozės faktoriaus susijusių apoptozės skatinančius ligando (takas) nuo ląstelės paviršiaus [42 ]. Tačiau CTSE trūkumas pelėmis nei parodų vėžio tikimybė fenotipą, nei dabarties akivaizdžių skrandžio sutrikimų [43], [44], [45]. Šiuo metu ji yra hipotezė, ar pranešė priešnavikinis aktyvumas CTSE gali taikyti skrandžio vėžiu, įskaitant Sygnet ląstelių karcinoma reikalas. Kartu su savo unelucidated reguliavimo ir fiziologinės funkcijos, poveikis CTSE skrandžio diferenciacijos ir Tumorigenesis yra esminių problemų, kurios turėtų būti sprendžiamos ateityje.

Skrandžio Canceration iš "skrandžio" ir "žarnyno" nuosavybė Background POŽIŪRIU

• PLoS ONE: retino rūgštimi aktyvuotas Ndrg1a malšina WNT /ß-kateninai signalo Leiskite Xenopus kasos, stemplės, skrandžio, dvylikapirštės žarnos ir specifikacija
• PLoS ONE: Pooperacinis chemoradioterapija Kartu su epirubicino-Based trynukų chemoterapija lokaliai progresavusiam adenokarcinoma skrandžio ar gastroezofaginio Junction