Mehanizem (i) delovanja, na katerem temelji gastroprotektivnih učinek etilacetatnega frakcije, dobljene iz surovega metanolne pušča ekstrakt mehanizma calabura

Muntingia (ov) delovanja, na katerem temelji gastroprotektivnih učinek etilacetatnega frakcije, dobljene iz surovega metanolne listov ekstrakt Muntingia calabura

Abstract
Ozadje
Muntingia calabura
L. (družina Muntingiaceae), splošno znan kot jamajški češnje ali kerukup siam
v Maleziji, se uporablja tradicionalno za zdravljenje različnih bolezni. Cilj te raziskave je osvetliti možne osnovne gastroprotektivnih mehanizme etil acetat frakcije (Qes) za Muntingia calabura
metanolen zapusti ekstrakt (MEMC).
Metode
so MEMC in njegove frakcije podvrženi HPLC analize, identificirati in količinsko prisotnost svojih fito-sestavin. Mehanizem gastroptotection od Qes je dodatno pregledajo s pomočjo pilorus-ligacijskega povzroča želodca lezij modelu podgane (100, 250 in 500 mg /kg). Makroskopska analiza želodca, je bilo ocenjevanje želodca parametrov vsebin, kot so obseg, pH, prostih in skupnih kislin, ocene beljakovin in kvantifikacijo sluzi izvaja. Sodelovanje dušikovega oksida (NO) in sulfhidrilne (SH) spojin smo ovrednotili in superoksid dismutaza (SOD), gluthathione (GSH), katalaza (CAT), malondialdehid (MDA), prostaglandin E 2 (PGE 2) in je bila določena NO raven v etanolu povzroča želodčne homogenata tkiva EU.
Rezultati
HPLC analizo smo potrdili prisotnost kvercetin in žolčne kisline v EOP. V pilorus-ligacijske modelu Qes značilno (p
< 0,001) preprečevanje želodca lezij. Obseg želodčne vsebine in skupne vsebnosti beljakovin bistveno nižji (p
< 0,01 in p
< 0,05), medtem ko brezplačno in skupna kislost zmanjša pri odmerkih med 250 in 500 mg /kg (p
< 0,001 in p
in 0.05, v tem zaporedju). ERG močno povečan tudi vsebino sluzi (p
< 0,001). Predobdelava z N-nitro-L-arginin metilester (L-NAME) ali N-etilmaleimida (NEM) obrnilo gastroprotektivnih aktivnost EOP. Zdravljenje ERG znatno ublažili na SOD, GSH in CAT aktivnost in PGE 2 in NO ravni, medtem ko olajševalno raven MDA, relativno glede na skupino vozil.
Sklepi
Skratka, lahko povezana z osnovne gastroprotektivna mehanizmi Qes z antisekretornimi, udeležbi sluzi, antiperoxidative, izboljšanje antioksidant statusa, modulacije NO in SH spojin, stimulacijo PGE 2, kot tudi prisotnost kvercetin in žolčne kisline.
Ključne besede
Muntingia calabura
frakcija Želodčna razjeda antisekretornimi Antioksidant dušikov oksid sulfhidrilne spojine prostaglandinov Quercetin galna kislina Ozadje
želodca je eden od glavnih prebavne motnje, ki vplivajo na veliko število ljudi po vsem svetu, medtem ko raste v pojavljanju in razširjenosti po vsem svetu [1]. Nekateri avtorji sklicujejo na želodčnih razjed kot nov "kuga" iz 21. stoletja [2]. Ugotovljeno je bilo predvideno, da se 14,5 milijona v svetovnem prebivalstvu vpliva želodčnih razjed s stopnjo smrtnosti 4,08 milijona [3]. Patofiziologija želodca je povezana z neravnovesjem med agresivnimi in varovalnih dejavnikov v želodcu. Poškodbe želodčne sluznice se pojavi, ko škodljivi dejavniki "preobremenjenost" nepoškodovano sluznice obrambo, ali slabitev obrambnih mehanizmov sluznice [4]. Med škodljive dejavnike v tem kontekstu vključujejo alkohol zaužitje, kisline in pepsina izločanje, slaba prehrana, stres, reaktivne kisikove vrste (ROS), uporaba nesteroidnih protivnetnih zdravil (NSAID) in Helicobacter pylori
okužbe [5, 6]. Po drugi strani pa ključni obrambni dejavniki in mehanizmi, ki dobimo sluznice obramba vsebovati dovolj izločanje sluzi in sluznice prekrvavitev, bikarbonata izločanja, nepoškodovano sluzi pregrado, prostaglandini, površinsko aktivne fosfolipidi, povišane ravni antioksidantov, aktivnost protivnetnih spojin in ustrezna ravni dušikovega oksida (NO) [6-8].
Trenutno preprečevanje in zdravljenje želodčnih razjed je pridobila veliko interesa in je postal in pomemben izziv soočanje zdravila danes. Do sedaj, obstaja nekaj pristopov, ki se uporabljajo za preprečevanje razjede želodca, ki vključujejo potenciranje na sluznico prestregli skupaj z zmanjšanjem izločanja želodčne kisline in njeno nevtralizacijo, stimulacijo želodčne mucin sintezo, krepitev antioksidativnih ravni v želodcu in inhibicijo Helicobacter pylori
rast [9]. Izločanje želodčne kisline naj bi bila osrednja komponento želodčnih razjed kljub prisotnosti številnih vzročne dejavnike [7], zato inhibicija izločanja želodčne kisline so ponavadi ključni terapevtski cilj ulkusa bolezni [10]. Po drugi strani pa je še en ključni faktor pri patogenezi želodčnih razjed je proizvodnja reaktivnih kisikovih vrst (ROS). Proizvodnja ROS in sočasno zmanjšanje antioksidanta zmogljivosti povzroča škodo osnovnih celic sestavin, ki so proteini, lipidi in nukleinskih kislin, kar ima za posledico nastanek strupenih snovi in ​​povzroča celično smrt zaradi svojega skrajnega reaktivnostjo [8, 11]. Zato je nadzor nastanek ROS in izločanje želodčne kisline so bistvenega pomena za zdravljenje teh bolezni, [12].
Sedanja zdravilo zdravljenje želodčnih razjed vključujejo kisline blokatorji, ki zmanjšujejo izločanje kisline, zaviralci protonske črpalke, antibiotiki za izkoreninjenje Helicobacter pylori
in tkiva oblog zaščito sredstva, kot sukralfata in bizmut holinergikov [13, 14]. Ceprav so ta zdravila znižala stopnje obolevnosti, vendar so pogosto povezana z neželenimi škodljivimi učinki, kot so preobčutljivosti, impotenca, aritmija, obtočil motenj, ginekomastija in odpornosti na antibiotike na dolgi rok [15, 16]. Poleg tega ti razpolago zdravila imajo tudi visoko stopnjo ponovitev, nizko učinkovitost pri zdravljenju razjede želodca in so pogosto zelo dragi [5, 9, 10]. Zato je nujno potrebno, da odkrijete bolj učinkovite in varne alternativne terapije za zdravljenje želodčnih razjed. V zvezi s tem je uporaba zdravilnih rastlin pridobil zanimanje in ujeli pozornost številnih raziskovalcev. Rastlinski izvlečki lahko dragocen in služi kot nov vir terapij pri zdravljenju želodčnih razjed, pri čemer protiizločevalni, zaščito celice in antioksidantov dejavnosti, osamljen ali v kombinaciji, so tri glavne funkcije za gastroprotektivni sredstvo, ki igrajo ključno vlogo pri želodčnem sluznice zaščite [17].
rastlin Muntingia calabura
L. (družina Muntingiaceae), splošno znan kot jamajški češnje ali kerukup siam
v Maleziji, se široko porazdeli po toplih območjih Azije [18]. Več zdravilnih uporaba pa sta bili dokumentirani na različnih delih tega drevesa na vzhodu in jugovzhodni Aziji, pa tudi tropski Ameriki. Muntingia calabura je
listi, cvetovi, lubje in korenine se uporabljajo kot ljudsko zdravilo za zdravljenje glavobolov, povišana telesna temperatura in začeto hladno. Po perujski folklore, se listi uporabljajo za lajšanje od želodčnih razjed in zmanjša otekanje prostate [19]. Poleg tega so zaposlene tudi antiseptično, antispazmolično in antidyspeptic sredstvo [20, 21].
Po drugi strani, Muntingia calabura
je poročalo, da imajo širok spekter farmakoloških aktivnosti, ki so se izkazali znanstveno. To vključuje antitumorsko [20, 22], antibakterijsko [23] protinocicepcijo [19, 24, 25], protivnetno, protivročinske [25], antioksidantov in antiproliferativna [26] dejavnosti, ki jih listov Muntingia calabura
razstavljeni, medtem ko je bilo več vrst spojin izolirati in identificirati iz listov, korenin in stebla laja za Muntingia calabura
[20-22, 27, 28]. Različne fitokemikalije so v listih Muntingia calabura
, kot so flavonoidi, saponini, tanini in triterpeni [29] zaznal.
V naši prejšnji študiji smo poročali gastroprotektivnih aktivnost več frakcij, pridobljenih iz surovega metanola ekstrakta Muntingia calabura
(MEMC) pušča proti-etanola povzroča želodčne poškodbe pri podganah [30]. Iz naši raziskavi smo ugotovili, da je etil acetat frakcija opazno izboljša razjede želodca in deluje najbolj učinkovito zaščito v primerjavi z drugimi frakcijami. Zato je bila ta študija namenjena za določitev mehanizem delovanja je osnova za profilaktično učinek etilacetatnega frakcije, pridobljene iz MEMC proti želodčnih lezij pri podganah.
Modela pilorus-ligacijskega uporabili v tej raziskavi, je eden izmed najpogosteje uporabljenih modelov za študij vpliva zdravil na želodčne kisline in izločanje sluzi. Razjede z ligiranjem na pilorusa konec želodcu razvili so ga povečanjem želodčni klorovodikova kislina (HCI) izločanje in /ali zastoj kisline povzročil, kar vodi do samodejnega presnovo želodčne sluznice in okvare želodčne sluznice pregrade [31]. Zato sredstva, ki so sposobna povečati izločanje sluzi (citoprotektivno) in /ali zmanjšanje izločanja želodčne agresivnih dejavnikov, kot so pepsin in kisline so učinkoviti gastroprotektivna sredstva [32]. Po drugi strani pa, etanol povzročen ulkus model koristen za preučevanje učinkovitosti potencialnih zdravil ali preizkušanja sredstva, ki imajo citoprotektivno in /ali antioksidativne aktivnosti [33].
Metode
Kemija
kemikalij, uporabljenih v ta študija so analitičnih ocen in je bila pripravljena tik pred uporabo. so bili uporabljeni naslednji droge: Ranitidin (Sigma-Aldrich, ZDA), absolutni etanol (Fischer Scientific, ZDA), N-etilmaleimida (NEM) (Sigma-Aldrich, ZDA), N G-nitro-L-arginin metilester (L-NAME) (Sigma-Aldrich, ZDA), karbenoksolon (CBX) (Sigma-Aldrich, ZDA) in dietil eter (Fischer Scientific, ZDA).
Rastlinski material
Muntingia calabura
listi so bili zbrani iz njihovega naravnega habitata v Shah Alam, Selangor, Malezija, od maja do avgusta 2010 je bil obrat, opredeljeno s botanik iz inštituta za Bioscience (IBS) Universiti Putra Malezije (UPM), Serdang, Selangor. Dokazni vzorec, SK 2466/14, je bila deponirana pri IBS laboratoriju UPM naravnih proizvodov herbarija.
Ekstrakcija in frakcioniranja Muntingia calabura
zapusti
metode, ki jih Zakaria et al. [26] in Sufian sod. [28] je bila uporabljena za pripravo surovega ekstrakta Muntingia calabura
listov in njegove frakcije, oz. Pet sto gramov zrelega listov so bili zračno sušili pri sobni temperaturi (27 ±
2 ° C) za 1-2 tedne in zemljo v fin prah. Metanol (MeOH) smo uporabili kot topilo za ekstrakcijo. Prašek smo namakali v MeOH pri razmerju 1:20 (w /v) 72 ur. Zmes filtriramo uporabi filtrski lijak, bombaža in Whatman No 1 filtrirni papir. Namakanje in filtriranje smo ponovili na ostanku za dvakrat. Filtrat zbrali iz vsake ekstrakciji smo združili in uparili na rotavaporju pri 40 ° C pod zmanjšanim tlakom, da dobimo metanola izvleček Muntingia calabura
(MEMC). Posušen Surov ekstrakt smo suspendirali v MeOH in destilirano vodo (dH 2O) vodo v razmerju 1: 2, da smo dobili vodno raztopino MeOH. Zmes zaporedoma porazdelili z različnimi topili, ki so petrol etra in etil acetat, kar je dalo petroleter frakcijo (st), etil acetat frakcij (EOP). Frakcije smo filtrirali in uparili do suhega pod vakuumom z uporabo rotacijskega uparjalnika. MEMC, PEF in Qes bili podvrženi HPLC količinsko spojine obresti, ki bi jih lahko povezano z gastroprotektivni učinek ekstrakta.
Identifikacija in količinska phytoconstituents prisotnih v Qes s HPLC
metode tako Zakaria et al. [34] s bilo manjše spremembe prilagojen za izvedbo analize HPLC za revizije. Na kratko, je 10 mg vzorca suspendiramo v 1 ml metanola. Raztopine smo filtrirali skozi filtrirni vložek (velikost por 0,45 um), pred uporabo. Vzorec je bil analiziran s pomočjo HPLC sistema (Waters Delta 600 s 600 Controller) z fotodioda diod (PDA) (Waters 996). Uporabljena je bila C 18 kolona (4,6 mm notr x 250 mm), napolnjena s 5 um delci premera. Mobilna faza je bila voda, ki vsebuje 0,1% mravljinčno kislino (A) in acetonitrila (B). Začetni pogoji so bili 85% A in 15% B z linearnim gradientom doseže 25% B pri t
= 12 min. Ta pogoj smo vzdrževali 10 min. B smo reducirali nazaj na 15% prvotnega stanja in vzdržujemo, dokler ne
= 35 minut. Pri t
= 25 min, program vrne v začetno sestavo topila. Pretok je bil 1,0 ml /min, volumen injiciranja je bil 10 ml in valovna dolžina je bila 280 nm za žolčne kisline in 330 nm za kvercetin. Kolona peč je bila določena na 27 ° C. Osnovne raztopine referenc standardizacijo smo pripravili v metanolu pri koncentraciji 1 mg /ml. Kromatografije vrhovi so potrdili, da primerja njegovo retencijski čas s tistimi referenčnih standardov ter ustrezne UV spektrov. Umeritvena krivulja za žolčne kisline je Y = 29562x + 102.777 (R 2 = 0,9969) in kvercetin je Y = 43236x - 81.458 (R 2 = 0,999). Vse operacije kromatografijo smo izvedli pri sobni temperaturi in v treh izvodih. Analiza HPLC je bila izvedena v Laboratoriju za fitomedicino, Zdravilne rastline Division, Forest Research Institute Malezije (Frimovem), Kepong, Malezija.
UHPLC-ESI analizo
Sistem UHPLC je bila izvedena na Dionex 3000 UHPLC sistema pridobljenih iz Thermo Fisher Scientific (ZDA), ki je sestavljena iz za avtomatski vzorčevalnik opremljeno s kolone pečico, hladilnik z pladenj predelku, in binarno črpalko z vgrajenim razplinjevalnikom topil. Kromatografsko ločevanje smo izvedli na BEH C18 UHPLC kolono, 100 mm x 2,5 um, 1.7 mikrometrov (VODE) pri pretoku 0,3 ml /min. Mobilne faze, uporabljene sta (A) 0,1% mravljinčno kislino v vodi in (B) 0,1% mravljinčno kislino v acetonitrilu. Gradient začeli z 10% mobilne faze B dosegla 20% mobilne faze B v 5 min, 60% mobilne faze B v 17,0 min, pri izokratičnem elucijo 90% B za 3 min. Naklon dosegli so potekali začetni pogoji za 2 min, kot korak za ponovno vzpostavitev ravnotežja. volumen injiciranja je bil 10 ml in temperatura kolone je bila vzdrževana pri 40 ° C. Sistem UHPLC je povezan z linearnim ionsko-past-Orbitrap masni spektrometer Q Exactive Thermo Fisher Scientific (U.S.A.) opremljen z virom elektrosprej ionizacijo (ESI). Masa detekcija smo izvedli v območju 150-1500 m /z. Vir ESI je deloval v negativnem načinu ionov pod naslednjimi posebnimi pogoji: vir napetosti 3,2 kV; plašč plin, 35 arbitrarnih enot; pomožni plin, 15 arbitrarno enota; dimnikar plin, 10 samovoljno enoto; in temperature kapilarni, 320 ° C. Dušik (> 99,98%) je bila zaposlena kot plašča plin, pomožni in pomesti plin. Nadzor instrument in pridobivanje podatkov smo izvedli s Chameleon 6.8 programsko opremo in Xcalibur 2,2 programske opreme (Thermo Fisher Scientific)
Živali
so Poskusi izvedli na samcih Sprague Dawley. (180-200 g, stari 8-10 tednov). So bili pridobljeni iz enote živali, Medicinska fakulteta in zdravstvene vede, UPM, Malezija. Živali so bile v polipropilenskih kletkah z lesom britje, hranjene s standardno pelete in dovoljuje prost dostop do vode. So bili shranjeni v sobni temperaturi (27 ± 2 0 C, 70-80% vlažnost; 12 h svetloba /tema cikla) ​​v Holding Enote za živali (UPM). Pred vseh testih postimo podgane. Standardni drog in MEMC smo dajali oralno (p.o.) gavažo z 8% Tween 80 (10 ml /kg) z vozilom. Uporaba živali v tej študiji je odobrila varstvu živali in rabljenih odbora (ACUC) za UPM (odobritve št: UPM /FPSK /PADS /BR-UUH /00474)
Določitev mehanizma, iz katerega izhaja gastroprotektivnih dejavnost. ERG
pilorično ligacija
Metoda z Shay et al. [35] z manjšimi spremembami je bila uporabljena za izvedbo pilorično vezavo. Podgane smo naključno razdelili v 5 skupin, s šestimi podganah v vsaki skupini. Skupina-I je bila kontrolna skupina dajemo z 8% Tween 80 (vozil) peroralno (PO), je bila skupina II pozitivne kontrole dajemo z ranitidinom 100 mg /kg (PO), medtem ko je za skupino-III -IV in- v so podgane dajemo z EOP (100, 250 in 500 mg /kg, v tem zaporedju). Pilorus ligacije smo izvedli na 48 ur tešče podganam 1 h po dajanju testnih spojin. Pod svetlobnim anestezijo inducirane z uporabo ketamin HCl (100 mg /kg, intramuskularno) in ksilazina HCl (16 mg /kg, intramuskularno), je bil 2 cm dolge sredine linijo trebušne rez izvede tik pod prsnico. The piloricne del želodca je nežno mobilizirajo in previdno ligiramo s svileno ligaturo okoli pilorično mišice zapiralke v tesen vozel. Paziti je treba, medtem ko vezanje vozel, da bi se izognili motnjam v želodcu preskrbe s krvjo. Rez v trebuhu je zašite, koža je bila očiščena morebitnih krvnih madežev ali krvavitve in živali pustimo, da si opomorejo od anestezije.
Ocenjevanje želodčne sluznice lezije
živali usmrtimo 6 ur po ligacijo z izpostavljenostjo dietiletrom in materničnega vratu motenj. V želodci smo odstranili in vsebina so odteče, zbrani in centrifugira. Želodec je bil odprt ob večji krivine za določitev škode lezij kot ga Balan et al opisal. [36]. Zaščita odstotek je bil izračunan po naslednji formuli: $$ \\ mathrm {Zaščita} \\ \\ left (\\% \\ desno) = \\ frac {\\ left (\\ mathrm {U} \\ mathrm {a} \\ \\ mathrm {nadzor} \\ \\ hbox {-} \\ \\ mathrm {U} \\ mathrm {a} \\ \\ mathrm {p} \\ mathrm {r} \\ mathrm {e} \\ H okvirju {-} \\ mathrm {zdraviti} \\ \\ mathrm {skupina} \\ desno)} {\\ left (\\ mathrm {U} \\ mathrm {a} \\ \\ mathrm {nadzor} \\ right)} \\ krat 100 \\% $$ Določanje obsega, pH, brezplačno in skupno kislost želodčne vsebine
odcejena vsebina želodca smo centrifugirali 10 minut pri 2500 obratih na minuto, da se odstranijo kakršne koli trdne naplavin. Obseg in pH želodčnega soka smo izmerili. Sok želodca izpostavimo tudi proste in skupne oceni kislin po metodi, ki jo Srivastava et al opisan. [37]. Titracija z 0,01 N NaOH z metiloranža reagentom bila izvedena, dokler se barva raztopine postala rumenkaste, da bi določili prosta kislost. Obseg luga dodamo opazili. Nato smo dve do tri kapljice fenolftaleina dodamo k raztopini. Raztopino titriramo dokler se ne pojavijo dokončnih rdečih odtenkov. Skupni obseg NaOH opazili. Ta količina ustreza skupne kisline. Kislost je bila izračunana po naslednji formuli: $$ \\ mathrm {kislost} = \\ FRAC {\\ mathrm {zvezek} \\ \\ mathrm {o} \\ \\ mathrm {NaOH} \\ krat \\ mathrm {normalnost} \\ \\ mathrm {o} \\ \\ mathrm {NaOH} \\ krat 100} {0,1} \\ mathrm {m} \\ mathrm {e} \\ mathrm {q} /\\ mathrm {l} $$ Ocena beljakovin
skupna vsebnost beljakovin v želodčnega soka je bila ocenjena z Lowry je metoda, prirejeno po Lowry et al. [38] s pomočjo alkalne bakra reagenta in Folin reagentom. Barva razvili smo prebrali pri 660 nm. Vsebnost beljakovin smo izračunali iz standardne krivulje, pripravljen z govejo serumskega albumina in proteinske koncentracije bila izražena kot mg /ml želodčnega soka.
Oceno želodca stena sluzi vsebnost
Metoda z Corné et al opisan. [39] z manjšimi spremembami je bila uporabljena za določitev želodčne vsebine steno sluzi. Želodec je bil odprt ob večji ukrivljenosti, stehtali in potopimo v 10 ml 0,1% Alcian modro (0,16 M saharoze v 0.05 M natrijevem acetatu, pH 5,8) 2 h. Želodec smo nato dvakrat speremo v 0,25 M raztopini saharoze (vsaka 15 min) za odpravo čezmernega barvilo. Preostalo barvilo, ki kompleksiran z želodčno sluznico smo ekstrahirali z 0,5 M MgCl 2. Žleznega segmentu ostal v tej raztopini za 2 uri s prekinitvami agitacije za 1 minuto na vsakih 30 min interval. Dobljeno modro Ekstrakt smo nato močno stresamo z enakim volumnom dietiletrom do tvorbo emulzije. Dobljeno emulzijo smo centrifugirali 10 minut pri 3600 obratih na minuto. Absorbanco vodne plasti smo prebrali pri 580 nm s pomočjo spektrofotometra. Koncentracija Alcian modro je bila izračunana s standardno krivuljo in rezultati so bili izraženi v mg Alcian modra /g vlažno krpo.
-Etanol povzroča želodčne sluznice v L-NAME ali NEM predhodno zdravljenih podgan
vloga endogenega NO in sodelovanje sulfhidrilne (SH) spojin v gastroprotektivni učinek Qes so ocenili z uporabo metode, ki jih Takayama et al. [40]. Samci podgan so bili razdeljeni v 9 skupinah in obdelamo (ip) s fiziološko raztopino, L-IME (N-nitro-L-arginin metilester, 70 mg /kg) inhibitorja NO sintezo ali NEM (N-etilmaleimid, 10 mg /kg) SH spojina blokator. Trideset minut po predobdelavi, smo dajali živalim (p.o.) vozilo (8% Tween 80), karbenoksolon (100 mg /kg) ali Qes (500 mg /kg). Šestdeset minut kasneje, vse skupine prejela absolutnega etanola (5 ml /kg P.O) za povzročitev želodčnih razjed. Vse podgane so bile žrtvovane 1 h po dajanju etanola z izpostavljenostjo dietiletrom in cervikalno dislokacijo. Želodec smo odstranili in želodca škoda je bila določena, kot je opisano zgoraj. Ker ERG razstavljena učinek odvisen od odmerka in deluje bistveno zaščitne ukrepe proti želodčne sluznice v etanol-inducirane modelu želodca, je bila uporabljena najvišja efektivna doza (500 mg /kg) za te študije.
Biochemical analiza
Merjenje za superoksidno dismutazo (SOD), raven glutation (GSH) in katalaze (CAT) aktivnosti
želodcem tkiva podgane predhodno obdelane z nosilcem (8% Tween 80), ranitidina (100 mg /kg) ali EOP (100, 250 in 500 mg /kg), čemur sledi indukcija razjed uporabi absolutnega etanola 1 h smo uporabili za določanje SOD, raven GSH in CAT aktivnosti. Želodca Tkivo narežemo na koščke in je bil posnet natančno težo. Tkiva smo homogenizirali z homogenizatorjem uporabo ustreznih hladnega pufra, nato pa smo centrifugirali pri 10000 g 15 minut pri 4 ° C. Supernatante smo uporabili za določitev dejavnosti CAT in ravni SOD in GSH. Koncentracija proteina v supernatantih smo merili z metodo Bradfordu [41] z uporabo govejega serumskega albumina (BSA) kot standard. Ravni SOD, GSH in CAT smo določili s pomočjo komercialnih kompletov preizkus po navodilih proizvajalca, oziroma (superoksid dismutaza Vsebnost Kit, glutation Vsebnost Kit in katalaze Vsebnost Kit, Cayman Chemical Company, Ann Arbor, MI, ZDA).
merjenje malondialdehida ravni (MDA)
ravni MDA so bile izmerjene v želodcu tkivu, pridobljenem iz želodca-etanola povzroča. Želodec Tkivo smo homogenizirali in centrifugirali, kot je opisano prej in supernatant je bil uporabljen za določitev MDA z uporabo encimskoimunske analiznega kompleta (USCN Life Science Inc., Atlanta, GA, ZDA). Optične gostote smo izmerili pri 450 nm in rezultati so bili, izražene kot ng /mg beljakovin.
Določanje prostaglandina E2 (PGE2)
PGE 2 so bile določene v želodcu tkivu, pridobljenem iz želodca-etanola povzroča razjeda. Supernatant iz homogeniziranega in centrifugirali želodcu tkiva smo uporabili za določitev PGE 2 s pomočjo prostaglandin E 2 Express EIA Kit (Cayman Chemical Company, Ann Arbor, MI, ZDA). Optične gostote smo izmerili pri 412 nm. Strani 2 concentrations PGE smo normalizirali z vsebnostjo beljakovin, in rezultati so bili izraženi v pg /mg proteina.
Določitev NO ravni
je NO raven v želodčni sluznici ocenilo kot skupne vsebnosti nitratov /nitritov uporabo Griess reagenta [42]. Na kratko, smo pripravili želodčne homogenate v 50 mM kalijevega fosfatnega pufra (pH 7,8). Homogenizate smo centrifugirali pri 4000 obratih na minuto za 10 minut pri 4 ° C. Petdeset mikrolitrov Griess reagenta (0,1% N- (1-naftil) ethylenediamide dihidroklorid, 1% sulfonamida v 5% fosforne kisline) dodamo 50! Li supernatanta in absorbanco smo izmerili pri 540 nm po 10 min. Natrijev nitrit smo uporabili kot standard v tem poskusu za ustvarjanje standardno krivuljo.
Statistična analiza
so rezultati izražene kot povprečne ± standardna napaka povprečja (SEM) in analizirali z enosmerno analizo variance (ANOVA), sledijo s Dunnettov post hoc
preskus ali preskus Newman-Keuls. Rezultati so ocenili kot pomembne pri p <
0.
05.
Rezultati
identifikacijo in kvantifikacijo žolčne kisline in kvercetin
HPLC prstnih odtisov MEMC, PEF in Qes je pokazala prisotnost galskih kisline pri λ max 216.6-272.0 nm in kvercetin pri λ max 255,5-370,6 nm (sl. 1a in b). Vozlanje teh spojin v MEMC, PEF ali Qes povečala površina vrha, ki ustreza isti λ max vrednosti spojin. Rezultat količinsko predstavljeni v tabeli 1 je razvidno, da Qes vsebuje največjo količino žolčne kisline (39,89 ± 0,96 mg /g ekstrakta) in kvercetin (9,36 ± 0,29 mg /g ekstrakta), nato pa MEMC in PEF. Fig. 1 a in b: HPLC analiza MEMC, PEF in EOP izvedemo pri valovni dolžini 330 nm pokazala prisotnost kvercetin na X maks 255,5-370,6 nm pri RT 3,696 min. Vozlanje kvercetin s ekstraktov povečala površina vrha, ki ustreza isti X maks vrednosti spojin. c in d: HPLC odvzem MEMC, PEF in Qes pri 280 nm valovne dolžine pokazala prisotnost gallicacid na X maks 216,6-272,0 nm na RT 4,204 min. Vozlanje žolčne kisline s ekstraktov povečala površina vrha, ki ustreza isti X maks vrednosti spojin
Tabela 1 Galna kisline in zmes kvercetin v MEMC in njegovih aktivnih frakcij (PEF in Qes) v mg /1 g ekstrakta. Rezultati so izraženi kot povprečje ± standardni odkloni (SDS) v treh določanj
spojin
MEMC
PEF
Qes
galne kisline (mg /g)
11,97 ± 0,27
3,40 ± 0,01
39,89 ± 0,96
kvercetin (mg /g)
4,83 ± 0,16
8,81 ± 0,44
9,36 ± 0,29
Identifikacija fenolnih spojin v Qes
Qes smo analizirali na podlagi točnih podatkov o masnih molekulskih ionov, v katerem ionov Odkrili so okvirno opredeljeni z njihovo ustvarjeni molekulsko formulo, s pomočjo analize programske opreme Data (Xcalibur), ki določa seznam mogoče elementarno formule, skupaj z uporabo standarda, če je na voljo, in po temeljiti raziskavi literature.
splošno sprejet prag natančnost za potrditev elementov skladb je bila določena na 5 ppm. Analiza je UHPLC-ESI od Qes pokazala prisotnost 22 fenolnih spojin (tabela 2), ki navajajo največje število, retencijski čas, opazili m /z
, ustvarjeni molekulsko formulo in predlagano spojino odkriti. Slika 2 ustreza lokaciji vrha kromatogramu v negativni ion, z molekulo strukturo ermanin, kaempferide, pinobaksin in pinostrobin na sl. 3.Table 2 Fenolne spojine, opredeljene v Qes s UHPLC-MS
Peak št
tR (min)
[MH] -
Error (ppm)

Formula
Identifikacija
1.
0,45
169,01376
3,433
C7H5O5
galna kislina
2.
2.34
163,03978
4,964
C9H7O3
protokatehulna kislina
3.
3.10
193,05020
3,443
C10H9O4
Ferulic kislina
4.
4.53
599,10547
3,879
C28H23O15
Quercitrin-2 "-O-galat
5.
4,93
939,11377
4,220
C41H31O26
Pentagalloyl -hexoside II
6.
5,05
447,09421
4,523
C21H19O11
kaempferol-3-O
-galactoside
7.
5.31
317,0308
5.130
C15H9O8
Myricetin
8.
6.20
193,08661
3,569
C10H9O4
Isoferulic kislina
9.
6.91
583,11053
3,941
C28H23O14
Afzelin-O-galat
10.
7,35
301,03586
4,023
C15H9O7
Quercetin
11.
7.42
603,07928
3,894
C30H19O14
Quercetin dimer
12.
7.67
255,06636
4,605 ​​
C15H11O4
Pinocembrin
13.
8.14
593,13116
3,697
C30H25O13
kaempferol-3-O
glukozidnega
14.
8.18
315,05196
6,478
C16H11O7
Rhamnetin
15.
8.55
271,06094
3.099
C15H12O5
Pinobaksin
16.
8,94
285,04037
3,528
C15H9O6
kaempferol
17.
10.80
253,05063
4,326
C15H9O4
Chyrsin sem
18.
11.67
253.05099
5.749
C15H9O4
Chyrsin II
19.
11.91
299,05597
3,195
C16H11O6
Kaempferide
20.
12,56
313,07245
5,703
C17H13O6
Ermanin sem
21
12,78
313.07230
5.224
C17H13O6
Ermanin II
22.
13.32
269,08194
4.105
Vsi avtorji prebrali in potrdil končni rokopis.

• Učinki nikotina na želodcu mioelektričnih aktivnosti v ICR miših
• Clinicopathological pomen claudin-4, karcinom želodca