Werkingsmechanisme (n) van actie onderliggende gastrobeschermende effect ethylacetaat wordt verkregen door het ruwe methanol bladeren extract van Muntingia calabura

werkingsmechanisme (n) van actie onderliggende gastrobeschermende effect ethylacetaat wordt verkregen door het ruwe methanol bladeren extract van Muntingia calabura

Abstracte achtergrond
Muntingia calabura
L. (familie muntingiaceae), beter bekend als Jamaicaanse kersen of kerukup siam
in Maleisië, wordt traditioneel gebruikt om verschillende kwalen te behandelen. Het doel van deze studie is om de mogelijke onderliggende mechanismen gastrobeschermende ethylacetaat fractie (EAF) van Muntingia verhelderen calabura
methanol verlaat extract (MEMC).
Methods
MEMC en fracties werden onderworpen aan HPLC-analyse aan identificeren en kwantificeren van de aanwezigheid van de fyto-kiezers. Het mechanisme van gastroptotection van EAF werd verder onderzocht met behulp pylorus-ligatie geïnduceerde gastrische letsel rattenmodel (100, 250 en 500 mg /kg). Macroscopische analyse van de maag, evaluatie van maaginhoud parameters zoals volume, pH, vrij en totaal zuurgehalte, eiwit inschatting en kwantificering van slijm uitgevoerd. De deelname van stikstofoxide (NO) en sulfhydryl (SH) verbindingen werd geëvalueerd en de superoxide dismutase (SOD), gluthathione (GSH), catalase (CAT), malondialdehyde (MDA), prostaglandine E 2 (PGE 2) en NO niveau in de ethanol-geïnduceerde maag weefsel homogenaat werd bepaald.
Resultaten
HPLC-analyse bevestigde de aanwezigheid van quercetine en galluszuur in EAF. In pylorus-ligatie model, EAF significant (p Restaurant < 0,001) te voorkomen dat de maag laesie vorming. Hoeveelheid maaginhoud en totaal eiwitgehalte significant af (p
< 0,01 en p
< 0,05, respectievelijk), terwijl vrij en totaal zuurgehalte verlaagd de doses van 250 en 500 mg /kg (p
< 0,001 en p Restaurant < 0,05, respectievelijk). EAF ook versterkt het slijm inhoud significant (p Restaurant < 0,001). Voorbehandeling met N-nitro-L-arginine-methylester (L-NAME) of N-ethylmaleimide (NEM) keerde de maagbeschermende activiteit van EAF. EAF behandeling aanzienlijk verbeterd SOD, GSH en CAT-activiteit en PGE 2 en NO niveau, terwijl verzachtende MDA niveau ten opzichte van de groep die met hulpstof.

Conclusie Concluderend, de onderliggende mechanismen van maagbeschermende EAF hierbij te betrekken met antisecretoire, deelname van slijm, antiperoxidative, verbetering van antioxidantstatus, modulatie van NO en SH verbindingen, stimulering van PGE 2 en aanwezigheid van quercetine en galluszuur.
Sleutelwoorden
Muntingia calabura
Fraction maagzweer afscheidingsremmend Antioxidant Stikstofmonoxide sulfhydrylverbinding prostaglandine Quercetine Gallische zuur Achtergrond
maagzweer is een van de belangrijkste gastro-intestinale aandoeningen die aanzienlijk aantal mensen over de hele wereld beïnvloeden, terwijl het groeien in vóórkomen en de prevalentie wereldwijd [1]. Sommige auteurs verwijzen naar maagzweren als de nieuwe "plaag" van de 21e eeuw [2]. Het is voorspeld dat 14,5 miljoen van de wereldwijde bevolking worden beïnvloed door maagzweren met een sterftecijfer van 4.080.000 [3]. De pathofysiologie van maagzweer gekoppeld aan de onbalans tussen agressieve factoren en beschermende in de maag. Maagslijmvlies schade ontstaat wanneer schadelijke factoren "overweldigen" een intacte mucosale verdediging, of verzwakking van de mucosale afweermechanismen [4]. De schadelijke factoren omvatten in deze samenhang alcoholgebruik, zuur en pepsine secretie, slechte voeding, stress, reactieve zuurstof species (ROS), het gebruik van niet-steroïdale anti-inflammatoire geneesmiddelen (NSAIDs) en Helicobacter pylori infectie
[5, 6]. Anderzijds, de belangrijkste verdediging en mechanismen die mucosale verdediging te verschaffen toereikende slijmafscheiding en mucosale doorbloeding, bicarbonaatsecretie, intact slijmbarrière, prostaglandinen, oppervlakteactieve fosfolipiden, verhoogde antioxidanten, activiteit van anti-inflammatoire verbindingen en adequate niveaus van stikstofmonoxide (NO) [6-8].
Momenteel is de preventie en behandeling van maagzweren heeft opgedaan veel belangstelling en werd en belangrijke uitdaging waar de geneeskunde tegenwoordig. Tot op heden zijn er een aantal benaderingen gebruikt om maagzweren te voorkomen die versterking van de mucosale afweer met reductie van zuursecretie en de neutralisatie stimulering van gastrische mucine synthese verhoging van antioxidanten in de maag, en remming van Helicobacter pylori omvatten
groei [9]. Maagzuursecretie wordt beschouwd als de centrale component van maagzweren, ondanks de aanwezigheid van vele oorzakelijke factoren [7] en derhalve remming van maagzuursecretie vaak de belangrijkste therapeutische doel voor ulcer ziekte [10] zijn. Anderzijds, een belangrijke factor in de pathogenese van maagzweren is de productie van reactieve zuurstofsoorten (ROS). De productie van ROS en een overeenkomstige vermindering van antioxidant capaciteit veroorzaakt schade aan de essentiële celbestanddelen, welke eiwitten, lipiden en nucleïnezuren, waardoor de vorming van toxische verbindingen en veroorzaakt celdood door hun extreme reactiviteit [8, 11]. Daarom regelen van de ROS vorming en maagzuursecretie essentieel zijn voor het behandelen van deze pathologieën [12]. Ondernemingen De huidige medische behandeling van maagzweren omvatten zuurremmers dat zuursecretie verminderen, protonpompremmers, antibiotica om Helicobacter pylori en weefsel voering beschermingsmiddelen zoals sucralfaat en bismuth cholinergica [13, 14]. Hoewel deze medicijnen de ziektecijfers zijn gedaald, maar ze worden vaak geassocieerd met ongewenste bijwerkingen, zoals overgevoeligheid, impotentie, hartritmestoornissen, hematopoietische aandoeningen, gynaecomastie en antibioticaresistentie op de lange termijn [15, 16]. Bovendien hebben deze beschikbare geneesmiddelen ook terugkeren van lage werkzaamheid bij maagzweren behandeling en zijn vaak kostbaar [5, 9, 10]. Daarom is er dringend behoefte aan een meer effectieve en veilige alternatieve therapieën te ontdekken om de behandeling van maagzweren. In dit verband is het gebruik van medicinale planten belang gewonnen en veroverde de aandacht van veel onderzoekers. Plantenextracten kunnen waardevol zijn en dienen als een nieuwe bron van geneesmiddelen bij de behandeling van maagzweren waarbij antisecretoire, cytoprotectieve en antioxidant activiteiten, geïsoleerd of in combinatie, zijn de drie belangrijkste functies van een gastrobeschermende middel, dat de sleutelrol speelt in maagslijmvlies bescherming [17]. Ondernemingen de fabriek Muntingia calabura
L. (familie muntingiaceae), beter bekend als Jamaicaanse kersen of kerukup siam
in Maleisië, wordt op grote schaal verspreid over de warme gebieden van de Aziatische regio [18]. Verschillende medicinale toepassingen zijn gedocumenteerd op verschillende delen van deze boom in Oost- en Zuidoost-Azië en tropisch Amerika. Muntingia calabura's
bladeren, bloemen, schors en wortels zijn gebruikt als een folk remedie tegen hoofdpijn, koorts en beginnende verkoudheid te behandelen. Volgens Peruaanse folklore, de bladeren gebruikt om verlichting van maagzweren en zwelling van de prostaat [19] te verminderen. Daarnaast worden ze ook gebruikt als antiseptisch, krampstillend, en antidyspeptic agent [20, 21].
Aan de andere kant, Muntingia calabura
wordt gerapporteerd aan een breed scala aan farmacologische activiteiten, waarvan wetenschappelijk is bewezen hebben. Dit antitumor omvatten [20, 22], antibacterieel [23], antinociceptie [19, 24, 25], anti-inflammatoire, antipyretische [25], antioxidant en antiproliferatieve [26] activiteiten vertoond door de bladeren van Muntingia calabura
, terwijl verschillende soorten verbindingen zijn geïsoleerd en geïdentificeerd uit de bladeren, wortels en stam bast van Muntingia calabura
[20-22, 27, 28]. Verschillende fytochemicaliën werden waargenomen in de bladeren van Muntingia calabura
zoals flavonoïden, saponinen, tannines en triterpenen [29].
In onze vorige studie hebben we de maagbeschermende activiteit van verschillende fracties verkregen uit ruwe methanolextract gerapporteerde Muntingia calabura
(MEMC) laat tegen-ethanol geïnduceerde maag letsel bij ratten [30]. Uit ons onderzoek hebben wij gevonden dat ethylacetaatfractie aanzienlijk verbeteren maagzweren en het gaf de meest effectieve bescherming in vergelijking met de andere fracties. Daarom werd deze studie gericht op het werkingsmechanisme achter de profylactische werking van de ethylacetaatfractie ontleend MEMC tegen gastrische lesies bij ratten te bepalen.
Pylorus-ligatie model gebruikt in deze studie is een van de meest gebruikte modellen het effect van geneesmiddelen op maagzuur en slijmsecretie bestuderen. Zweren ontwikkeld door ligatie van het einde pylorus van de maag worden veroorzaakt door toename van de maag zoutzuur (HCl) secretie en /of stasis zuur, waardoor automatische digestie van het maagslijmvlies en afbraak van het maagslijmvlies barrière [31]. Derhalve middelen die kunnen slijmsecretie (cytoprotectieve) verhogen en /of uitscheiding van de maag agressieve factoren zoals pepsine en zuur verminderen effectief maagbeschermende middelen [32]. Anderzijds, de ethanol-geïnduceerde ulcer model is bruikbaar voor het bestuderen van de werkzaamheid van potentiële geneesmiddelen of testen van middelen die celbeschermende en /of antioxidant activiteiten [33].
Werkwijzen
Chemicaliën
chemicaliën gebruikt hebben deze studie zijn van de analytische kwaliteiten en was onmiddellijk bereid voor gebruik. De volgende geneesmiddelen werden gebruikt: ranitidine (Sigma-Aldrich, USA), absolute ethanol (Fischer Scientific, USA), N-ethylmaleimide (NEM) (Sigma-Aldrich, USA), N G-nitro-L-arginine methylesters (L-NAME) (Sigma-Aldrich, USA), carbenoxolon (CBX) (Sigma-Aldrich, USA) en diethylether (Fischer Scientific, USA).
Plantmateriaal
Muntingia calabura
bladeren werden verzameld uit hun natuurlijke habitat in Shah Alam, Selangor, Maleisië, tussen mei en augustus 2010. de fabriek werd geïdentificeerd door een botanicus van het Institute of Bioscience (IBS), Universiti Putra Malaysia (UPM), Serdang, Selangor. Een voucher exemplaar, SK 2466/14, is gedeponeerd bij de UPM IBS Laboratory of Natural Products Herbarium.
Winning en fractionering van Muntingia calabura
verlaat
methode beschreven door Zakaria et al. [26] en Sufian et al. [28] werd gebruikt om het ruwe extract van Muntingia calabura
bladeren en fracties te bereiden, respectievelijk. Vijfhonderd gram gerijpte bladeren werden lucht gedroogd bij kamertemperatuur (27 ± Pagina 2 ° C) gedurende 1-2 weken en vermalen tot fijn poeder. Methanol (MeOH) werd gebruikt als oplosmiddel voor extractie. Het poeder werd gedrenkt in MeOH in een verhouding van 1:20 (w /v) gedurende 72 uur. Het mengsel werd gefilterd met filter trechter, katoen en Whatman No. 1 filterpapier. Het weken en filtratie werden herhaald op het residu twee keer. De Van elk extractie filtraat werd samengevoegd en afgedampt in een rotatieverdamper bij 40 ° C onder verlaagde druk methanol extract van Muntingia calabura
(MEMC) te verkrijgen. Het gedroogde ruwe extract werd gesuspendeerd in MeOH en gedestilleerd water (dH 2O) water in de verhouding van 1: 2 tot een waterige MeOH oplossing verkregen. Het mengsel werd achtereenvolgens verdeeld met verschillende oplosmiddelen, die petroleumether en ethylacetaat, waarbij petroleumether fractie (PEF), ethylacetaatfractie (EAF). De fracties werden gefiltreerd en drooggedampt onder vacuum met behulp rotatieverdamper. MEMC, PEF en EAF werden onderworpen aan HPLC om de verbinding van belang, die kunnen worden geassocieerd met gastroprotectieve effect het extract te meten.
Identificatie en kwantificatie van phytoconstituents aanwezig EAF
met HPLC werkwijze beschreven door Zakaria et al. [34] licht gewijzigde aangepast de HPLC-analyse van EAF uitvoeren. Kort samengevat, 10 mg monster werd gesuspendeerd in 1 ml methanol. De oplossingen werden gefiltreerd door een filterpatroon (poriëngrootte van 0,45 pm) vóór gebruik. Het monster werd geanalyseerd met een HPLC systeem (Waters Delta 600 600 Controller) met fotodiodearraydetector (PDA) (Waters 996). A C 18 kolom (4,6 mm i.d. x 250 mm) gepakt met 5 urn diameter deeltjes werd gebruikt. De mobiele fase was water met 0,1% mierenzuur (A) en acetonitril (B). Initiële omstandigheden waren 85% A en 15% B met een lineaire gradiënt bereikt 25% B
t = 12 min. Deze toestand werd gedurende 10 min. B werd teruggebracht naar 15%, de oorspronkelijke staat teruggebracht, en werd gehandhaafd tot t
= 35 min. Op t = 25 min
het programma terug naar de oorspronkelijke oplosmiddelsamenstelling. De stroomsnelheid was 1,0 ml /min, injectievolume was 10 ui en de golflengte was 280 nm voor galluszuur en 330 nm voor quercetine. De oven kolom werd ingesteld op 27 ° C. Voorraadoplossingen van standaarden gevonden werden bereid in methanol bij concentratie 1 mg /ml. Chromatografische pieken werden bevestigd door zijn retentietijd vergelijken met de eigenschappen van referentiestandaarden en de respectievelijke UV-spectra. IJkcurve voor galluszuur was Y = 29562x + 102.777 (R 2 = 0,9969) en quercetine was Y = 43236x - 81.458 (R 2 = 0,999). Alle chromatografie bewerkingen werden uitgevoerd bij omgevingstemperatuur en in drievoud uitgevoerd. De HPLC-analyse werd uitgevoerd in het Laboratorium voor Phytomedicine uitgevoerd, geneeskrachtige planten Division, Forest Research Institute of Malaysia (FRIM), Kepong, Maleisië.
UHPLC-ESI analyse
UHPLC systeem werd uitgevoerd op een Dionex 3000 UHPLC systeem verworven van Thermo Fisher Scientific (USA), die bestond uit een autosampler uitgerust met een kolom oven, een lade compartiment koeler, en een binaire pomp met ingebouwde oplosmiddel ontgasser. De chromatografische scheiding werd uitgevoerd op een BEH C18 UHPLC kolom, 100 mm x 2,5 urn, 1,7 urn (WATERS) bij een stroomsnelheid van 0,3 ml /min. De gebruikte mobiele fasen waren (A) 0,1% mierenzuur in water en (B) 0,1% mierenzuur in acetonitril. De gradiënt begon met 10% mobiele fase B, het bereiken van 20% mobiele fase B op 5 min, 60% mobiele fase B bij 17,0 min, op isocratische elutie van 90% B gedurende 3 minuten. De helling bereikte de oorspronkelijke voorwaarden werden gehouden gedurende 2 minuten als een re-equilibratie stap. Het injectievolume was 10 pi en de kolomtemperatuur werd op 40 ° C gehouden. Het UHPLC systeem is gekoppeld aan een lineaire ion-trap-Orbitrap massaspectrometer Q Exactive van Thermo Fisher Scientific (U.S.A.), uitgerust met een electrospray ionisatie (ESI) bron. De massa detectie werd uitgevoerd in een traject van 150-1500 m /z. De ESI bron werd gebruikt in negatieve ionen mode onder de volgende specifieke voorwaarden: source spanning, 3,2 kV; schede gas, 35 arbitraire eenheden; extra gas, 15 willekeurige eenheid; sweep gas, 10 willekeurige eenheid; en capillaire temperatuur, 320 ° C. Stikstof (> 99,98%) werd gebruikt als omhulsel gas, hulp- en vegen gas. Instrument controle en data-acquisitie werden uitgevoerd met Chameleon 6.8-software en Xcalibur 2.2 software (Thermo Fisher Scientific)
Dieren
De experimenten werden uitgevoerd op mannelijke Sprague Dawley ratten. (180-200 g; 8-10 weken oud). Zij werden verkregen van de Animal Unit, Faculteit Geneeskunde en Gezondheidswetenschappen, UPM, Maleisië. De dieren werden in polypropyleen kooien met houtkrullen, gevoed met standaard pellet en vrije toegang tot water gehouden. Ze werden in de kamer temperatuur gehouden (27 ± 2 0C; 70-80% luchtvochtigheid, 12 uur licht /donker-cyclus) in de Holding Unit Animal (UPM). Voorafgaand aan alle assays werden de ratten gevast. Standaard drugs en MEMC werden oraal (p.o.) toegediend via een maagsonde met 8% Tween 80 (10 ml /kg) in het voertuig. Het gebruik van dieren in deze studie werd goedgekeurd door de Animal Care en gebruikte Comité (ACUC) van UPM (Goedkeuring nr: UPM /FPSK /PADS /BR-UUH /00.474)
Vaststelling van het mechanisme achter de gastrobeschermende activiteit van. EAF
Pyloric ligatie
Method door Shay et al. [35] met lichte wijzigingen werd gebruikt om pyloric ligatie te voeren. Ratten werden willekeurig verdeeld in 5 groepen, met zes ratten per groep. Groep-I was de controlegroep toegediend met 8% Tween 80 (voertuig) oraal (po), groep II was de positieve controle toegediend ranitidine 100 mg /kg (po), terwijl voor groep-III, -IV en- V, ratten toegediend EAF (100, 250 en 500 mg /kg, respectievelijk). Pylorus ligatie werd uitgevoerd op 48 uur gevaste ratten 1 uur na de toediening van de testverbindingen. Onder lichte anesthesie geïnduceerd middels ketamine HCl (100 mg /kg, intramusculair) en xylazine HCl (16 mg /kg, intramusculair), werd een 2 cm lange middellijn abdominale incisie uitgevoerd, net onder het borstbeen. De pyloric deel van de maag werd voorzichtig gemobiliseerd en voorzichtig afgebonden met een zijden ligatuur rond de pylorus sluitspier in een strakke knot. Er werd genomen terwijl het binden van de knoop om interferentie met de maag bloedtoevoer te voorkomen. De abdominale incisie werd gehecht, de huid werd ontdaan van eventuele bloedvlekken of bloeden en de dieren liet men herstellen van de anesthesie.
Beoordeling van gastrische mucosale laesie
de dieren opgeofferd 6 uur na ligatie door blootstelling aan diethylether en cervicale dislocatie. De magen werden verwijderd, en de inhoud werd afgevoerd, verzameld en gecentrifugeerd. De maag werd geopend langs de grotere kromming aan de laesie schade te bepalen zoals beschreven door Balan et al. [36]. De bescherming percentage werd berekend aan de hand van de volgende formule: $$ \\ mathrm {Protection} \\ \\ links (\\% \\ right) = \\ frac {\\ links (\\ mathrm {U} \\ mathrm {A} \\ \\ mathrm {controle} \\ \\ hbox {-} \\ \\ mathrm {U} \\ mathrm {A} \\ \\ mathrm {p} \\ mathrm {r} \\ mathrm {e} \\ hbox {-} \\ mathrm {behandeld} \\ \\ mathrm {groep} \\ rechts)} {\\ links (\\ mathrm {U} \\ mathrm {A} \\ \\ mathrm {controle} \\ right)} \\ tijden 100 \\% $$ Bepaling van het volume, pH, vrij en totaal zuurgraad van de maag inhoud
de afgetapte maaginhoud werd gedurende 10 minuten bij 2500 rpm om eventuele vaste verontreinigingen te verwijderen. Het volume en de pH van het maagsap werd gemeten. Het maagsap werd ook onderworpen aan vrij en totaal zuur schatting volgens de werk- wijze beschreven door Srivastava et al. [37]. Titratie met 0,01 N NaOH met methyloranje reagens uitgevoerd totdat de kleur van de oplossing geelachtige om de vrije zuurgraad te bepalen werd. Het volume van alkali toegevoegd waargenomen. Daarna werd 2-3 druppels fenolftaleïne aan de oplossing toegevoegd. De oplossing werd getitreerd tot definitieve rode tinten verschijnen. Het totale volume van NaOH werd genoteerd. Dit volume komt overeen met de totale zuurgraad. Zuurgraad werd berekend aan de hand van de volgende formule: $$ \\ mathrm {zuurgraad} = \\ frac {\\ mathrm {Volume} \\ \\ mathrm {van} \\ \\ mathrm {NaOH} \\ tijden \\ mathrm {normaliteit} \\ \\ mathrm {van} \\ \\ mathrm {NaOH} \\ tijden 100} {0,1} \\ mathrm {m} \\ mathrm {e} \\ mathrm {q} /\\ mathrm {l} $$ schatting van eiwit
Het totale eiwitgehalte in maagsap werd geschat door Lowry's methode, aangepast van Lowry et al. [38] met behulp van alkalische koper reagens en Folin's reagens. De ontwikkelde kleur werd afgelezen bij 660 nm. Het eiwitgehalte werd berekend uit de standaardcurve bereid met runderserumalbumine en eiwitconcentratie werd uitgedrukt als mg /ml maagsap.
Schatting van maagwand slijm inhoud
beschreven door Corne et al. [39] met lichte wijzigingen werd gebruikt om de maagwand slijm te bepalen. De maag werd geopend langs de grotere kromming, gewogen en ondergedompeld in 10 ml 0,1% Alcian blue (0,16 M sucrose in 0,05 M natriumacetaat, pH 5,8) gedurende 2 uur. De maag werd vervolgens tweemaal gewassen in 0,25 M sucrose-oplossing (15 min elk) aan de overmatige kleurstof te verwijderen. De resterende kleurstof die gecomplexeerd met het maagslijmvlies werd geëxtraheerd met 0,5 M MgCl 2. Het glandulaire segment bleef in deze oplossing gedurende 2 uur met onderbroken schudden gedurende 1 min op elke 30 minuten interval. De resulterende blauwe extract werd vervolgens krachtig geschud met een gelijk volume diëthylether tot emulsievorming. De verkregen emulsie werd gedurende 10 minuten bij 3600 rpm. De absorptie van de waterige laag werd afgelezen bij 580 nm met een spectrofotometer. De concentratie van Alcian-blauw werd berekend door een standaardcurve en de resultaten werden uitgedrukt in mg Alcian blauw /g nat weefsel.
-Ethanol geïnduceerde gastrische mucosale laesie in L-NAME of NEM voorbehandelde ratten
rol van endogeen NO en de betrokkenheid van de sulfhydryl (SH) verbindingen gastrobeschermende het effect van EAF werden geëvalueerd volgens de methode beschreven door Takayama et al. [40]. Mannelijke ratten werden verdeeld in 9 groepen en voorbehandelde (ip) met een zoutoplossing, L-NAME (N-nitro-L-arginine methylester, 70 mg /kg) een remmer van NO synthese of NEM (N-ethylmaleimide, 10 mg /kg) een SH verbinding blocker. Dertig minuten na de voorbehandeling werden de dieren toegediend (p.o.) voertuig (8% Tween 80), carbenoxolon (100 mg /kg) of EAF (500 mg /kg). Zestig minuten later, alle groepen kregen absolute ethanol (5 ml /kg, p.o.) om maagzweren te induceren. Alle ratten werden opgeofferd 1 uur na toediening van ethanol door blootstelling aan diethylether en cervicale dislocatie. De maag werd verwijderd en maagschade werd bepaald zoals hierboven beschreven. Aangezien EAF een dosisafhankelijk effect vertoonden en uitgeoefend aanzienlijke beschermende werking tegen gastrische mucosa in de ethanol-geïnduceerde maagzweer model, werd de hoogste effectieve dosis (500 mg /kg) gebruikt voor deze studie.
Biochemische analyse Meet- van superoxide dismutase (SOD), glutathion (GSH) niveau en katalase (CAT) activiteit
Maag weefsels van de ratten voorbehandeld met drager (8% Tween 80), ranitidine (100 mg /kg) of EAF (100, 250 en 500 mg /kg), gevolgd door inductie zweer door absolute ethanol gedurende 1 uur werden gebruikt voor de bepaling van SOD, GSH niveau en CAT-activiteit. Maagweefsel werd in stukken gesneden en het exacte gewicht werd geregistreerd. De weefsels werden gehomogeniseerd met een homogeniseerinrichting onder toepassing van geschikte koude buffer en vervolgens werden gecentrifugeerd bij 10.000 g gedurende 15 min bij 4 ° C. De supernatanten werden gebruikt om de activiteiten van CAT en niveaus van SOD en GSH bepalen. De concentratie van eiwit in de supernatanten werd gemeten door de Bradford-werkwijze [41] met runderserumalbumine (BSA) als standaard. Niveaus van SOD, GSH en CAT werd bepaald met de commerciële assay kits volgens de instructies van de fabrikant, respectievelijk (Superoxide Dismutase Assay Kit, Glutathione Assay Kit en catalase Assay Kit, Cayman Chemical, Ann Arbor, MI, VS).
meting van malondialdehyde (MDA) niveau
MDA niveaus werden gemeten in de maag weefsel van de ethanol-geïnduceerde maagzweer. De maag weefsel werd gehomogeniseerd en gecentrifugeerd zoals hiervoor beschreven en het supernatant werd gebruikt voor de bepaling van MDA met behulp van een enzymgekoppelde immunosorbent assay kit (USCN Life Science Inc., Atlanta, GA, USA). De optische dichtheden werden gemeten bij 450 nm en de resultaten werden uitgedrukt als ng /mg eiwit.
Bepaling van prostaglandine E2 (PGE2)
PGE 2 werden bepaald in de maag weefsel van een ethanol-geïnduceerde gastrische zweer. Het supernatant van gehomogeniseerd en gecentrifugeerd maagweefsel werd gebruikt voor de bepaling van PGE 2 met prostaglandine Ei 2 Express EIA kit (Cayman Chemical, Ann Arbor, MI, VS). De optische dichtheden werden gemeten bij 412 nm. De PGE 2 concentraties werden genormaliseerd door eiwitgehalte en de resultaten werden uitgedrukt als pg /mg eiwit.
Bepaling van NO level verhuur No niveau in het maagslijmvlies werd beoordeeld als totale nitraat /nitriet middels Griess reagens [42]. In het kort werden de maag homogenaten bereid in 50 mM kaliumfosfaatbuffer (pH 7,8). De homogenaten werden gecentrifugeerd bij 4000 rpm gedurende 10 min bij 4 ° C. Vijftig microliter Griess reagens (0,1% N- (1-naftyl) ethyleendiamide dihydrochloride, 1% sulfanilamide in 5% fosforzuur) werd aan 50 pl supernatant toegevoegd en de absorptie werd gemeten bij 540 nm na 10 min. Natriumnitriet werd als standaard gebruikt in deze test de standaardcurve.

Statistische analyse De resultaten werden uitgedrukt als gemiddelde ± standaardfout gemiddelde (SEM) en geanalyseerd met een variantieanalyse (ANOVA), gevolgd door Dunnett's post hoc Electronics Test of de Newman-Keuls-test. De resultaten werden significant beschouwd als p <
0.
05.
Resultaten
Identificatie en kwantificering van galluszuur en quercetine
HPLC fingerprinting van MEMC, PEF en EAF onthulde de aanwezigheid van de Gallische zuur bij λ max 216,6-272,0 nm en quercetine bij λ max 255,5-370,6 nm (fig. 1a en b). Stekelige deze verbindingen in MEMC, PEF of EAF verhoogde de piekoppervlakken bij dezelfde λ maximumwaarde van de verbindingen. De kwantificering resultaten in tabel 1 blijkt dat EAF bevat de grootste hoeveelheid galluszuur (39,89 ± 0,96 mg /g extract) en quercetine (9,36 ± 0,29 mg /g extract) gevolgd door MEMC en PEF. Fig. 1 a en b: HPLC analyse van MEMC, PEF en EAF uitgevoerd bij de golflengte 330 nm de aanwezigheid van quercetine bij Amax 255,5-370,6 nm bleek bij RT 3,696 min. Stekelige quercetine met de extracten verhoogde de piekoppervlakken bij dezelfde waarde Xmax van de verbindingen. c en d: HPLC fingerprinting van MEMC, PEF en EAF bij de golflengte 280 nm toonde de aanwezigheid van de gallicacid bij Amax 216,6-272,0 nm bij kamertemperatuur 4,204 min. Stekelige galluszuur de uittreksels verhoogde de piekoppervlakken bij dezelfde waarde Xmax van de verbindingen
Tabel 1 Galluszuur en samenstelling quercetine in MEMC en de actieve fracties (PEF en EAF) in mg /1 g extract. De resultaten worden uitgedrukt als gemiddelde ± standaarddeviaties (SDS) van drie bepalingen
Verbindingen
MEMC
PEF
EAF
Gallische zuur (mg /g)
11.97 ± 0.27
3.40 ± 0.01
39.89 ± 0.96
Quercetine (mg /g)
4.83 ± 0.16
8.81 ± 0.44
9.36 ± 0.29
identificatie van fenolverbindingen in EAF
EAF werd geanalyseerd op basis van de accurate massa gegevens van de moleculaire ionen, waarin ionen gedetecteerd werden voorlopig geïdentificeerd door hun gegenereerd moleculaire formule, door middel van de software data-analyse (Xcalibur), die lijst van mogelijke elementaire voorwaarde formules, samen met het gebruik van de standaard indien beschikbaar en na grondig onderzoek van de literatuur. Ondernemingen de algemeen aanvaarde nauwkeurigheid drempel voor de bevestiging van de elementaire samenstellingen werd vastgesteld op 5 ppm. De UHPLC ESI-analyse van EAF toonde de aanwezigheid van 22 fenolverbindingen (Tabel 2) dat het piekaantal, retentietijd lijst, waargenomen m /z
de aangemaakte molecuulformule en de voorgestelde verbinding gedetecteerd. Figuur 2 komt overeen met de basis piek chromatogram in negatieve ionen, met het molecuul structuur van ermanin, kaempferide, pinobaksin en pinostrobin in Fig. 3.Table 2 fenolverbindingen die in EAF door UHPLC-MS
Peak Geen
tR (min)
[MH] -
Error (ppm)

Formula
Identificatie
1.
0.45
169,01376
3,433
C7H5O5
Gallische zuur
2.
2,34
163,03978
4,964
C9H7O3
protocatechuïnezuur zuur
3.
3.10
193,05020
3,443
C10H9O4
ferulazuur
4.
4,53
599,10547
3,879
C28H23O15
quercitrin-2 "-O-gallaat
5.
4,93
939,11377
4.220
C41H31O26
Pentagalloyl -hexoside II
6.
5.05
447,09421
4,523
C21H19O11
Kaempferol-3-O
-galactoside
7.
5.31
317,0308
5.130
C15H9O8
myricetine
8.
6.20
193,08661
3,569
C10H9O4
isoferulic zuur
9.
6,91
583,11053
3,941
C28H23O14
Afzelin-O-gallaat
10.
7.35
301,03586
4,023
C15H9O7
Quercetine
11.
7.42
603,07928
3,894
C30H19O14
Quercetine dimeer
12.
7.67
255,06636
4,605 ​​
C15H11O4
Pinocembrin
13.
8.14
593,13116
3,697
C30H25O13
Kaempferol-3-O
-glucoside
14.
8,18
315,05196
6,478
C16H11O7
Rhamnetin
15.
8.55
271,06094
3,099
C15H12O5
Pinobaksin
16.
8,94
285,04037
3,528
C15H9O6
Kaempferol
17.
10.80
253,05063
4,326
C15H9O4
Chyrsin I
18.
11.67
253,05099
5,749
C15H9O4
Chyrsin II
19.
11.91
299,05597
3,195
C16H11O6
Kaempferide
20.
12.56
313,07245
5,703
C17H13O6
Ermanin I
21
12.78
313,07230
5,224
C17H13O6
Ermanin II
22.
13.32
269,08194
4.105
Fig. Fig. Alle auteurs gelezen en goedgekeurd het definitieve manuscript.

• Effecten van nicotine op gastrische myoelectrical activiteit bij ICR-muizen
• Klinisch-pathologische betekenis van claudin-4 in maagcarcinoom