veiksmų, kuriais grindžiamas gastritas poveikį etilacetatinio frakcija, gaunama žalios metanolyje mechanizmas (-ai) lapų ekstraktas iš veiksmų, kuriais grindžiamas gastritas poveikį etilacetatinio frakcija, gaunama žalios metanolyje Muntingia calabura

mechanizmo (-ų) lapų ekstraktas iš Muntingia calabura

Anotacija
faktai
Muntingia calabura
L. (šeimos Muntingiaceae), visuotinai žinomas kaip Jamaikos vyšnių ar kerukup Siam
Malaizija, naudojamas tradiciškai gydyti įvairius negalavimus. Šio tyrimo tikslas yra išsiaiškinti galimus pagrindinius gastritas mechanizmus etilacetatinio frakcija (ELK) iš Muntingia calabura
metanolyje lapų ekstraktas (MEMC).
Metodai
MEMC ir jo frakcijos buvo atliktas HPLC analizės identifikuoti ir kiekybiškai įvertinti savo fitosanitarijos sudedamųjų dalių buvimas. Iš gastroptotection iš ELK mechanizmas buvo toliau tiriama naudojant fazė prievartyje perrišimas sukeltos Skrandžio gleivinės pažaidos žiurkių modelį (100, 250, ir 500 mg /kg). Makroskopinis tyrimas skrandyje, vertinimas skrandžio turinio parametrus, tokius kaip tūrio, pH, laisvo ir bendro rūgštingumo, baltymų įvertinti ir kiekybiškai gleivių buvo atliktas. Azoto oksido (NO) ir sulfhidrilo (SH) junginių dalyvavimas buvo įvertintas ir superoksido dismutazė (SOD), gluthathione (GSH), katalazės (CAT), malondialdehido (MDA), prostaglandino E 2 (PGE 2) ir NO lygis etanolio sukeliamo skrandžio audinių homogenatas nustatyta.
rezultatai
HPLC analizės patvirtino, kad kvercetinas ir galo rūgšties buvimą ELK. Be fazė prievartyje-ligavimo modelio ELK žymiai (p
< 0,001) užkirsti kelią skrandžio pažeidimas formavimas. Kiekis skrandžio turiniu ir bendro baltymų kiekio gerokai sumažintas (psl
< 0,01 ir p
< 0,05, atitinkamai), o laisvas ir bendras rūgštingumas sumažintas iš 250 dozių ir 500 mg /kg (p
< 0,001 ir p
< 0,05, atitinkamai). ELK pat papildyta gleivių kiekis ženkliai (p
< 0,001). Išankstinis gydymas N-nitro-L-argininas metilo esteris (L pavardė) arba N-ethylmaleimide (NEM) pasikeitė gastritas aktyvumą ELK. ELK gydymas ženkliai pagerės SOD, GSH ir kačių aktyvumas ir PGE 2 ir NO lygį, o lengvinančių MDA lygį, atsižvelgiant į transporto priemonės grupei.
Išvados
Apibendrinant, pagrindinės gastritas mechanizmai ELK gali būti susijęs su antisekrecinio, dalyvavimas gleivių, antiperoxidative, gerinti antioksidantas statusą, moduliavimo NO ir SH junginių, stimuliacija PGE 2 taip pat buvimas kvercetino ir galo rūgštimi.
Raktiniai žodžiai
Muntingia calabura
frakcija Skrandžio opa antisekrecinio Antioksidantas Azoto oksidas sulfhidrilines junginys Prostaglandinas kvercetinas Galo rūgštis faktai
skrandžio opa yra viena iš pagrindinių skrandžio ir žarnyno sutrikimų, kurie turi įtakos nemažai žmonių visame pasaulyje, o auga atsiradimo ir paplitimo visame pasaulyje [1]. Kai kurie autoriai nurodo, kad skrandžio opos kaip naujas "maras" 21-ojo amžiaus [2]. Jis buvo prognozuojama, kad 14,5 mln pasaulio gyventojų kenčia nuo skrandžio opos su mirtingumo 4,08 mln. [3] Skrandžio opa mechanizmui, susijusios su tarp agresyvių ir apsauginiai veiksniai, skrandžio disbalanso. Skrandžio gleivinės pažeidimas įvyksta, kai nuodingos veiksniai "puolate" sveika gleivinės gynyba, arba silpnėjimas gleivinės gynybinių mechanizmų [4]. Į nuodingos veiksniai šiame kontekste apima alkoholio nenuryti, rūgšties ir pepsino sekreciją, prasta mityba, stresas, aktyvių deguonies formų (ROS), iš nesteroidiniais vaistais nuo uždegimo (NVNU) ir Helicobacter pylori
infekcijos [5 naudojimo, 6]. Kita vertus, pagrindiniai gynybos veiksniai ir mechanizmai, kurie sau gleivinės gynybai yra pakankamai gleivių sekreciją ir gleivinės kraujotaką, bikarbonatų sekrecija, nepažeistos gleivių barjerą, prostaglandinai, paviršinio aktyvumo fosfolipidus, kiekio padidėjimas kraujyje antioksidantų, aktyvumą priešuždegiminių junginių ir tinkamas lygiai azoto oksido (NO) [6-8].
Šiuo metu prevencija ir gydymas skrandžio opos įgijo daug interesų ir tapo ir svarbiu iššūkiu susiduria vaistą šiandien. Iki šiol, yra keletas naudojamų metodų, kad išvengti skrandžio opų, tarp jų Gali padidėti gleivinės vargo kartu su sumažinti rūgšties sekrecijos ir jos neutralizavimo, stimuliacijos skrandžio muciną sintezės, stiprinimo antioksidacinių lygių skrandžio, ir slopina Helicobacter pylori
augimas [9]. Sekrecijos skrandžio rūgšties yra manoma, kad būti centrinio komponento skrandžio opos, nepaisant to, daugelio priežastinių veiksnių buvimą [7], todėl, slopinimas skrandžio rūgšties sekrecijos linkę būti raktas terapinis tikslas opos ligų [10]. Kita vertus, dar vienas svarbus veiksnys skrandžio opos patogenezės yra aktyvių deguonies formų (ROS) gamyba. Iš ROS gamyba ir atitinkamai mažesnės antioksidantų talpos padaroma žala esminiams ląstelių sudedamųjų dalių, kurios yra baltymai, lipidai ir nukleino rūgščių, todėl toksiškų junginių susidarymo ir sukelia ląstelių žūtį dėl jų ypatingos reaktyvumo [8, 11]. Todėl ROS susidarymą ir skrandžio rūgšties sekreciją kontroliuoti yra būtini šių patologijų [12] gydymui.
Dabartinė vaistinis gydymas skrandžio opos apima rūgščių blokatoriai, kurie mažina rūgšties sekreciją, protonų siurblio inhibitoriai, antibiotikai išnaikinti Helicobacter pylori
ir audinių pamušalas apsaugo agentai, pvz sukralfatų ir bismuto cholinergics [13, 14]. Eventhough šie vaistai sumažino sergamumą, tačiau jie dažnai susijęs su nepageidaujamų neigiamų pasekmių, kaip antai padidėjęs jautrumas, impotencija, aritmija, kraujodaros sutrikimai, ginekomastija ir atsparumo antibiotikams ilgainiui [15, 16]. Be to, šie laisvų vaistai taip pat turi didelės recidyvų, mažas veiksmingumas skrandžio opoms gydyti ir dažnai brangus [5, 9, 10]. Taigi, yra neatidėliotinas poreikis atrasti daugiau veiksmingas ir saugus alternatyvių gydymo būdų gydyti skrandžio opas. Atsižvelgiant į tai, kad vaistinių augalų naudojimo įgijo susidomėjimą ir perimta daugelio mokslininkų dėmesį. Augalų ekstraktai gali būti vertingi ir tarnauti kaip naujas šaltinis terapijos metu skrandžio opoms gydyti, kuriuo priešsekrecinis, apsaugančių ir antioksidantų veiklą, izoliuotas arba kartu, yra trys pagrindinės funkcijos yra gastritas agentas, kuris atlieka pagrindinį vaidmenį skrandžio gleivinės apsauga [17].
augalų Muntingia calabura
L. (šeimos Muntingiaceae), visuotinai žinomas kaip Jamaikos vyšnių ar kerukup Siam
Malaizija, yra plačiai paplitę visoje šiltų sričių Azijos regione [18]. Keletas vaistų naudojimo dokumentais įvairių dalių šio medžio Rytų ir Pietryčių Azijoje, taip pat atogrąžų Amerikoje. Muntingia calabura anketa
lapai, gėlės, loja ir šaknys buvo naudojamos kaip liaudies gynimo gydyti galvos skausmas, karščiavimas ir prasidedantį šalta. Pasak Peru folkloro, lapai naudojami siekiant suteikti atleidimą nuo skrandžio opos ir sumažinti patinimą priešinės liaukos [19]. Be to, jie taip pat naudojami kaip antiseptiko, priešspazminio, ir antidyspeptic agento [20, 21].
Kita vertus, Muntingia calabura
pranešė turėti platų farmakologinių veiklą, kuri, kaip įrodyta moksliškai. Tai apima priešvėžiniai [20, 22], antibakterinį [23], antinociception [19, 24, 25], priešuždegiminių, karščiavimą [25], antioksidantas ir antiproliferaciniai [26] veikla eksponuojami iki Muntingia calabura
lapų, o buvo išskirtas ir nustatytas keletas tipų junginių iš lapų, šaknų ir stiebo žievės apie Muntingia calabura
[20-22, 27, 28]. Įvairūs fitocheminių buvo aptikta apie Muntingia calabura
lapų, pavyzdžiui, flavonoidų, saponinų, taninų ir triterpenų [29].
Mūsų ankstesniame tyrime, mes pranešė gastritas veiklą keliose frakcijos, gauti iš žalios metanolio ekstraktu Muntingia calabura
(MEMC) palieka nuo etanolio sukeliamo skrandžio pažeidimo žiurkių [30]. Iš mūsų tyrimo, mes nustatėme, kad etilo acetatas frakcija žymiai pagerinti skrandžio opų ir kuria labiausiai veiksmingą apsaugą, palyginti su kitomis frakcijomis. Todėl šis tyrimas buvo siekiama nustatyti veiksmų grindžiamas profilaktinio efekto etilo acetato frakcijos, gautos iš MEMC prieš skrandžio žaizdų žiurkių mechanizmą.
Fazė prievartyje-ligavimo modelį naudojami šiame tyrime yra vienas iš plačiausiai naudojamų modelių mokytis narkotikų poveikį skrandžio rūgšties ir gleivių sekrecija. sukurtos liguojant į prievarčio galą skrandžio opos sukelia padidėjusi skrandžio vandenilio chlorido rūgšties (HCl) sekrecijos ir /arba sąstingyje rūgšties, todėl auto virškinimo skrandžio gleivinės ir jo išskaidymą skrandžio gleivinės barjerą [31]. Todėl, agentai, kurie gali padidinti gleivių sekreciją (citoprotekciniu) ir /arba sumažinti sekreciją skrandžio agresyvių veiksnių, tokių kaip pepsino ir rūgšties yra veiksmingos gastroprotektinio agentai [32]. Kita vertus, etanolio sukeliamo opa modelis yra naudingas studijuojant potencialių vaistų veiksmingumą arba išbandyti vaistais, kurie apsaugančių ir /arba antioksidacinėmis veiklą [33].
Metodai
Chemija Bendrovės naudojamų cheminių medžiagų šis tyrimas yra analizės klasių ir buvo paruoštas prieš pat vartojimą. buvo naudojami šie vaistai: ranitidinas (Sigma-Aldrich, JAV), absoliutus etanolis (Fischer mokslo, JAV), N-ethylmaleimide (NEM) (Sigma-Aldrich, JAV), N G-nitro-L-arginino Metilesteriai (L pavardė) (Sigma-Aldrich, JAV), karbenoksolonas (CBX) (Sigma-Aldrich, JAV) ir dietilo eteris (Fišerio Mokslinė, JAV).
Augalinė medžiaga
Muntingia calabura
lapai buvo surinkti iš jų natūralių buveinių Shah Alam, Selangor, Malaizija, nuo gegužės 2010 rugpjūčio gamykla buvo žymimas botanikas nuo biologijos instituto (IBS), Universiti Putra Malaizija (UPM), Serdang, Selangor. Kuponą pavyzdys, SK 2466/14, buvo deponuotas tuo UPM TVM laboratorijos Natural Products Herbariumas.
Gavyba ir frakcionuojant Muntingia calabura
palieka
aprašytą Zakaria et al metodas. [26] ir Sufian ir kt. [28] dirbo parengti žalios ekstraktas Muntingia calabura
lapų ir jo frakcijos, atitinkamai. Penkis šimtus gramų subrendusių lapų buvo oro-kambario temperatūroje išdžiovintas (27 ±
2 ° C) 1-2 savaičių ir žemės į smulkių miltelių. Metanolis (MeOH) buvo naudojamas kaip ekstrahavimo tirpiklį. Milteliai buvo mirkomi MeOH ne 1:20 santykis (m /v) 72 h. Mišinys filtruojamas naudojant filtrą piltuvą, medvilnės ir vatmanas Nr 1 filtravimo popierių. Mirkymo ir filtravimas buvo pakartotas su liekana už du kartus. Surinkta iš kiekvienos ekstrakcijos filtratas buvo sujungiami ir išgarinamas rotaciniame garintuve, esant 40 ° C temperatūroje, esant sumažintam slėgiui gauti metanolio ekstrakto Muntingia calabura
(MEMC). Džiovinti žalios ekstraktas buvo sustabdytas MeOH ir distiliuotas vanduo (dH 2O) vandens santykiu nuo 1: 2 iki sau vandeninio tirpalas MeOH. Mišinys buvo iš eilės padalintas su skirtingų tirpiklių, kurie buvo petrolio eteriu ir etilo acetato, taip gaunant petrolio eteriu frakcija (PEF), etilo acetatas frakcija (ELK). Frakcijos, kuriose buvo filtruojamas ir išgarinamas iki sausumo vakuume, naudojant sukamąjį garintuvą. MEMC, PEF ir ELK buvo atliktas HPLC kiekybiškai interesų junginys, kuris gali būti susijęs su ekstraktą gastritas poveikį.
Identifikavimas ir kiekybinis phytoconstituents esančių ELK HPLC
metodas, kurį aprašė Zakaria et al. [34] su nežymių pakeitimų buvo adaptuotas atlikti HPLC analizė ELK. Trumpai, 10 mg mėginio buvo sustabdytas 1 ml metanolio. Sprendimai buvo filtruojamas per filtravimo kasetės (porų dydis 0,45 mkm) išankstinio naudoti. Mėginys buvo analizuojami naudojant HPLC sistemą (Vandenys Delta 600 600 Controller) su photodiode matricos detektoriumi (PDA) (vandenys 996). Panaudotas, C 18 stulpelyje (4,6 mm vidinio skersmens × 250 mm) supakuota su 5 mkm skersmens dalelių. Judančiosios fazės buvo vandens, kuriame yra 0,1% skruzdžių rūgšties (A) ir acetonitrilas (B). Pradinės sąlygos buvo 85% A ir 15% B produktą su gradiento pasiekė B 25%, esant temperatūrai t
= 12 min. Ši sąlyga buvo palaikomas 10 min. B buvo sumažintas atgal iki 15%, pradinio būklės, ir buvo tol, kol t pervežimas = 35 min. Esant t
= 25 min, programa grąžintas į pradinę tirpalo sudėtį. Srautas buvo 1,0 ml /min injekcijos tūris buvo 10 mikrol, o bangos ilgis buvo 280 nm galo rūgštimi ir 330 nm kvercetino. Stulpelis krosnis buvo nustatytas 27 ° C temperatūroje. Pradiniai tirpalai standartų nuorodas buvo parengtos metanolio koncentracija 1 mg /ml. Chromatografijos viršūnės buvo patvirtinta palyginus sulaikymo laiką su etaloninių standartų ir atitinkamos UV spektrų. Kalibravimo kreivė galo rūgštimi buvo Y = 29562x + 102.777 (r 2 = 0,9969) ir kvercetino buvo Y = 43236x - 81.458 (r 2 = 0,999). Visi chromatografijos operacijos buvo vykdomos esant aplinkos temperatūrai ir tris kartus. HPLC analizė buvo atlikta atsižvelgiant į Phytomedicine laboratorijos, Vaistiniai augalai skyrius, miško tyrimų institutas Malaizija (FRIM), Kepong, Malaizija.
UHPLC-ESI analizės Viesbutis The UHPLC sistemos buvo atliktas ant DIONEX 3000 UHPLC sistemos įsigijo iš "Thermo Fisher Scientific" (JAV), kurią sudarė kurio automatiniam mėginių įvedimo įrengta stulpelio krosnelė, dėklas skyriaus aušintuvo ir dvejetainis siurblys su įmontuotu tirpiklio degasser. Chromatografinis skaidymas buvo atliekamas su BEH C18 UHPLC skiltyje, 100 mm x 2,5 m, 1,7 mkm (vandenys) kuris tiekiamas į kolonėlę su 0,3 ml /min. Panaudotos judančiosios fazės buvo (A) 0,1% skruzdžių rūgšties vandenyje ir (B) 0,1% skruzdžių rūgšties acetonitrilo. Gradientas pradėjo su 10% judančiosios fazės B, pasiekė 20% judančiosios fazės B bent 5 min, 60% judančiosios fazės B bent 17,0 min, bent izokratinis eliuavimo B 90% 3 min. Gradientas pasiekė vyko 2 min kaip naujo-nusistovėjimo žingsnio pradinių sąlygų. Injekcijos tūris buvo 10 pL ir kolonėlės temperatūra buvo palaikoma 40 ° C temperatūroje. UHPLC sistema buvo sujungta su linijiniu jonų gaudyklė-Orbitrap masės spektrometru Klausimas Exactive iš Thermo Fisher Scientific (U.S.A) įrengta elektropurkštuviniu jonizacija (EVR) šaltinis. Masė aptikimo buvo atliktas nuo 150-1500 m /z diapazone. EVR šaltinis buvo valdomas neigiamas jonų režimu šiomis konkrečiomis sąlygomis: šaltinis įtampos, 3,2 kV įtampos; apvalkalas dujos, 35 savavališkai vienetai; pagalbinis dujos, 15 savavališkai vienetas; nurašymas dujos, 10 savavališkai vienetą; ir kapiliarinis temperatūra, 320 ° C. Azotas (> 99,98%) buvo naudojamas kaip apvalkalo dujomis, pagalbiniai ir nurašymas dujas. Priemonė, kontrolės ir duomenų rinkimo buvo atliekami su chameleonas 6,8 programinės įrangos ir Xcalibur 2.2 programinės įrangos ( "Thermo Fisher Scientific")
Gyvūnai
Eksperimentai buvo atliekami vyrų Sprague Dawley žiurkėms. (180-200 g; 8-10 savaičių amžiaus). Jie buvo gauti iš gyvūnų skyriaus, Medicinos fakulteto ir sveikatos mokslų, UPM, Malaizija. Gyvūnai buvo laikomi polipropileno narvuose su medžiu skutimosi, šeria su standartine rutuliuku ir leido laisvai patekti į vandenį. Jie buvo laikomi kambario temperatūroje (27 ± 2 0C; 70-80% drėgmė; 12 val šviesa /tamsa ciklas) į gyvūnų Holding skyrius (UPM). Prieš visiems tyrimams, žiurkės buvo nevalgius. Standartiniai narkotikų ir MEMC buvo skiriama vartoti per burną (P.O.) per zondą su 8% Tween 80 (10 ml /kg), kai transporto priemonė. Gyvūnų naudojimas šiame tyrime buvo patvirtintas gyvūnų globos ir naudojami komiteto (ACUC) UPM (patvirtinimo numeris: UPM /FPSK /pads /BR-UUH /00474)
nustatymas mechanizmo, lemiančio gastritas aktyvumą. ELK
prievarčio perrišimas
metodas Shay et al. [35] su nedideliais pakeitimais buvo įdarbintas atlikti prievarčio perrišimas. Žiurkės buvo atsitiktinai suskirstyti į 5 grupes, su šešių žiurkių kiekvienoje grupėje. Grupė-man buvo kontrolinė grupė vartojama kartu su 8% Tween 80 (transporto priemonė) žodžiu (PO), grupė II buvo teigiama kontrolė vartojamas kartu su ranitidinu 100 mg /kg (PO), o už grupės III-iv ir- V, žiurkės buvo vartojama kartu su EAF (100, 250 ir 500 mg /kg kūno svorio, atitinkamai). Fazė prievartyje ligavimo buvo atliktas 48 h nevalgiusius žiurkėmis 1H po to, kai bandymų junginių administravimo. Pagal šviesos anestezijos sukeltas naudojant ketamino HCl (100 mg /kg kūno svorio, į raumenis) ir Ksilazinas HCl (16 mg /kg kūno svorio, į raumenis), A 2 cm ilgio vidurio-linija pilvo pjūvis buvo atliktas, šiek tiek žemiau krūtinkaulio. Prievarčio dalis skrandyje buvo švelniai sutelkti ir kruopščiai susiūta su šilko ligatūra aplink prievarčio sfinkterio į įtemptą mazgas. Pasirūpinta, o susiejimas mazgas, siekiant išvengti trukdžių skrandžio kraujo tiekimas. Pilvo pjūvį buvo susiūtas, oda buvo nuvalytas nuo bet kokio kraujo dėmės ar kraujavimas ir gyvūnai buvo leista atsigauti po anestezijos.
Vertinimas skrandžio gleivinės pažeidimo pervežimas gyvūnai buvo paaukota 6 h po perrišimas pagal poveikio dietilo eterio ir gimdos kaklelio išnirimas. Į skrandžiai buvo pašalintas, o turinys buvo išsikrovęs, surinkti ir centrifuguojama. Skrandžio buvo atidarytas išilgai didesnio kreivumo, siekiant nustatyti pažeidimo žalą, kaip aprašyta Balan et al. [36]. Procentinis apsauga buvo apskaičiuojamas pagal šią formulę: $$ \\ textrm {apsauga} \\ \\ kairę (\\% \\ dešinėje) = \\ frac {\\ kairę (\\ textrm {U} \\ textrm {a} \\ \\ textrm {kontrolė} \\ \\ hbox {-} \\ \\ textrm {U} \\ textrm {a} \\ \\ textrm {p} \\ textrm {R} \\ textrm {e} \\ hbox {-} \\ textrm {elgiamasi} \\ \\ textrm {grupė} \\ dešinėje)} {\\ kairę (\\ textrm {U} \\ textrm {a} \\ \\ textrm {kontrolė} \\ right)} \\ kartų 100 \\% $$ nustatymas tūrio, pH, laisvojo ir suminio rūgštingumo skrandžio turinio
be skystos terpės skrandžio turinys buvo centrifuguojamas 10 min 2500 apsisukimų per minutę, kad pašalinti bet kokios kietos šiukšlių. Apimtis ir pH skrandžio sulčių buvo matuojamas. Skrandžio sulčių taip pat buvo atliktas laisvo ir bendro rūgštingumo vertinimo pagal aprašytą Srivastava et al metodu. [37]. Titravimo su 0,01 N NaOH su metiloranžinio reagentu buvo atlikti tol, kol tirpalo spalva tapo gelsvai tam, kad nustatyti laisvųjų riebalų rūgščių kiekis. Šarmo įpilta buvo pažymėta. Tada, nuo dviejų iki trijų lašų fenolftaleino buvo įtraukta į tirpalą. Sprendimas buvo titruojama iki neabejotinas raudonos dryželiais atrodo. Bendras tūris NaOH pridėtinės buvo pažymėta. Šis kiekis atitinka bendro rūgštingumo. Rūgštingumas buvo apskaičiuojamas pagal šią formulę: $$ \\ textrm {rūgštingumo} = \\ frac {\\ textrm {tomas} \\ \\ textrm {iš} \\ \\ textrm {NaOH} \\ times \\ textrm {normalumas} \\ \\ textrm {iš} \\ \\ textrm {NaOH} \\ kartų 100} {0,1} \\ textrm {m} \\ textrm {e} \\ textrm {Q} /\\ textrm {L} $$ įvertinimas baltymų Viesbutis The bendras baltymų kiekis skrandžio sulčių buvo įvertintas iki Lowry metodu, pritaikytas iš Lowry et al. [38] naudojant šarminį vario reagentu ir Folin reagentą. Sukurta spalva buvo perskaitytas 660 nm. Baltymų kiekis buvo apskaičiuotas pagal standartine kreive parengtą galvijų serumo albumino ir baltymų koncentracija buvo išreikštas mg /ml skrandžio sulčių.
Įvertinimas aprašyta Corne et al skrandžio sienos gleivių turinys pervežimas metodas. [39] su nedideliais pakeitimais buvo įdarbintas siekiant nustatyti skrandžio sienos gleivių turinį. Skrandžio buvo atidarytas išilgai didesnio kreivumo, pasverti, ir panardintas į 10 ml 0,1% Alcian mėlyna (0,16 M sacharozė 0,05 M natrio acetato, pH 5,8) 2 val. tada skrandžio buvo skalaujamas du kartus per 0,25 M sacharozės tirpale (15 min kiekvienas), kad būtų pašalinti pernelyg dažų. Likusi dažų, kad kompleksinis junginys su skrandžio gleivių buvo ekstrahuojamas 0,5 M MgCl 2. Liaukiniame segmentas išliko šiame tirpale 2 val su pertrūkiais maišant, 1 min kiekvienoje 30 min intervalu. Gautas mėlyna ekstraktas buvo stipriai kratoma su tokio paties tūrio dietilo eterio iki emulsijos susidarymo. Gautas emulsija buvo centrifuguojamas 10 min esant 3600 apsisukimų per minutę. Vandeninio sluoksnio optinis tankis buvo skaityti 580 nm, naudojant spektrofotometrą. Iš Alcian mėlyna koncentracija buvo apskaičiuojamas per standartinę kreivę ir rezultatai buvo išreikštas mg Alcian mėlyna /g drėgno audinio.
Etanolis sukeltas skrandžio gleivinės pažeidimas L-pavadinimas arba Nem anksto gavusių žiurkių
vaidmuo endogeninio NO ir sulfhidrilo (SH) junginių gastritas poveikio ELK dalyvavimas buvo įvertintas naudojant metodą, aprašytą Takayama et al. [40]. Vyrai žiurkės buvo padalintas į 9 grupes ir iš anksto apdorotas (IP) su fiziologinio tirpalo, L-PAVADINIMAS (N-nitro-L-arginino metilo esterio, 70 mg /kg) yra NO sintezės arba NEM (N-ethylmaleimide inhibitoriaus, 10 mg /kg), SH junginys blokatorius. Trisdešimt minučių po to, kai paruošiamojo apdorojimo, gyvlnams (P.O.) transporto priemonė (8% Tween 80), karbenoksolonas (100 mg /kg kūno svorio) arba EAF (500 mg /kg). Šešiasdešimt minučių vėliau, visi grupės gavo absoliutaus etanolio (5 ml /kg kūno svorio, p.o) sukelti skrandžio opas. Visų žiurkių buvo paaukotos 1 h po to, etanolio administravimo pagal pozicijų į dietilo eterio ir gimdos kaklelio sutrikdymo. Skrandžio buvo pašalintas ir skrandžio žala buvo nustatyta, kaip aprašyta aukščiau. Nuo EAF eksponuojama nuo dozės priklausomas poveikis ir darė didelę apsauginę veiksmų prieš skrandžio gleivinės etilo alkoholyje, sukeltas skrandžio opa modelį, didžiausias veiksminga dozė (500 mg /kg kūno svorio) buvo naudojamas šiame tyrime.
Biocheminių analizė
matavimas nuo superoksido dismutazės (SOD), glutationo (GSH) lygmeniu ir katalazės (CAT) veiklos
Skrandžio audinių žiurkių anksto paveiktų transporto priemonės (8% Tween 80), ranitidinas (100 mg /kg) ar ELK (100, 250 ir 500 mg /kg kūno svorio), po to opa indukcijos naudojant absoliučiame etanolyje 1 valandą, o buvo naudojami SOD, GSH lygiu ir CAT aktyvumui nustatyti,. Skrandžio audinių buvo supjaustyti į gabalus ir buvo įrašytas tiksli svoris. Audiniai buvo homogenizavo homogenizatoriumi, naudojant tinkamą šalto buferio ir tada buvo centrifuguojamas 10000 g 15 min, esant 4 ° C temperatūroje. Supernatantq buvo naudojamos siekiant nustatyti jos kačių ir lygių SOD ir GSH veiklą. Baltymų nuopile koncentracija buvo matuojamas pagal Bradfordo metodas [41], naudojant jaučio serumo albumino (BSA) kaip standartą. Lygiai SOD, GSH ir kačių buvo nustatoma naudojant komercinius testą rinkiniai pagal gamintojo nurodymus, atitinkamai (Superoksido dismutazės prabavimo Kit glutationas prabavimo Kit ir Katalazė prabavimo Kit, Kaimanų Chemical Company, Ann Arbor, MI, JAV).
matavimas malondialdehido (MDA) lygiu pervežimas MDA lygiais buvo matuojamas skrandžio audinių gautų iš etanolio sukeliamo skrandžio opa. Skrandžio audinio buvo homogenizuoti ir centrifuguojamas kaip aprašyta anksčiau, ir viršutinis sluoksnis buvo naudojama siekiant nustatyti MDA naudojant imunofermentinės reagentq rinkini (USCN Life Science Inc., Atlanta, GA, JAV). Pažymimas optinis tankis buvo matuojamas esant 450 nm bangos ilgiui, ir rezultatai buvo išreikštas ng /mg baltymo.
Nustatymas prostaglandinų E2 (PGE2)
PGE 2 lygiai buvo nustatytas skrandžio kūno audinyje, gautą iš etanolio-sukeltas skrandžio opa. Iš homogenizuoto ir centrifuguojamas skrandžio audinio paviršinis buvo naudojamas nustatant PGE 2 naudojant prostaglandinų E 2 Express "PAV Kit (Cayman chemijos kompanija, Ann Arbor, MI, JAV). Pažymimas optinis tankis buvo matuojamas 412 nm bangos ilgiui. Į PGE 2 koncentracija normalizavosi baltymų kiekio ir rezultatai buvo išreikštas pg /mg baltymo.
Nustatymas NO lygį
NE lygis skrandžio gleivinės buvo įvertintas kaip visų nitratų /nitritų lygius naudojant Griess reagentas [42]. Trumpai tariant, skrandžio homogenatai buvo parengta 50 mm kalio fosfato buferiniu tirpalu (pH 7,8). Homogenatai centrifuguojamas esant 4000 apsisukimų per minutę 10 min, esant 4 ° C temperatūroje. Penkiasdešimt mikrolitrų Griess reagento (0,1% N- (1-naftil) ethylenediamide dihidrochlorido, 1% sulfanilamide 5% fosforo rūgšties) buvo įtraukta į 50 mikrol, supernatanto ir absorbcija buvo matuojamas 540 nm po 10 min. Natrio nitritas buvo naudojamas kaip standartas šiame tyrime generuoti standartinę kreivę.
Statistinė analizė Bendrovės rezultatai buvo išreikštas vidurkis ± standartinis klaidos vidurkis (SEM) ir analizuojami naudojant vieną pusę dispersinė analizė (ANOVA), po iki Dunnett anketa post hoc pervežimas bandymo arba Newmanas-Keuls testą. Rezultatai buvo laikomi reikšmingais, kai p <
0.
05.
rezultatai
identifikavimas ir kiekybinis galo rūgštimi ir kvercetino pervežimas HPLC pirštų atspaudai MEMC, PEF ir ELK atskleidė galo buvimas rūgštimi λ max 216.6-272.0 nm ir kvercetino ne λ Max 255,5-370,6 nm, (1a pav. ir b). Pakilo iš šių junginių MEMC, PEF ar ELK padidino smailės plotas, atitinkantis tą patį λ max vertės junginių. Kiekybinio rezultatas pateiktas 1 lentelėje rodo, kad ELK yra aukščiausią sumą galo rūgštimi (39,89 ± 0,96 mg /g ekstraktas) ir kvercetino (9,36 ± 0,29 mg /g ekstraktas), po to MEMC ir PEF. Pav. 1 a ir b: HPLC analizė MEMC, PEF ir ELK atliekami bangos 330 nm, atskleidė kvercetino dalyvavimą λmax 255,5-370,6 nm RT 3,696 minutės. Padėtį adatos iš kvercetino su ekstraktų padidėjo smailės plotas, atitinkantis tos pačios λmax vertės junginių. c ir d: HPLC paimti MEMC, PEF ir ELK tuo 280 nm bangos ilgio atskleidė gallicacid buvimą ne λmax 216,6-272,0 nm RT 4,204 minutės. Padėtį adatos iš galo rūgštimi su ekstraktų padidėjo smailės plotas, atitinkantis tos pačios λmax vertės junginių
1 lentelė Galo rūgštis ir kvercetino sudėtis į MEMC ir jame esančių veikliųjų frakcijų (PEF ir elektros lanko krosnyse) ne mg /1 g ekstrakto. Rezultatai išreiškiami kaip vidurkis ± standartiniai nuokrypiai (TVS) trijų nustatymų pervežimas junginių pervežimas pervežimas MEMC pervežimas pervežimas PEF pervežimas pervežimas ELK pervežimas pervežimas Galo rūgštis (mg /g)
11,97 ± 0,27
3,40 ± 0,01
39,89 ± 0,96
kvercetino (mg /g) pervežimas 4,83 ± 0,16
8,81 ± 0,44
9,36 ± 0,29
identifikavimas fenolinių junginių ELK
ELK buvo analizuojami remiantis tiksliais masinių duomenų molekulinių jonų, kuriame jonų aptikta buvo preliminariai nustatytos pagal jų sukurtas molekulinė formulė, per programinė įranga duomenų analizė (Xcalibur), kurios teikiamos sąrašą galima elementinė formules, kartu su standarto naudojimui galima ir po kruopštaus tyrimo literatūroje.
visuotinai pripažintą tikslumo ribą patvirtinimas elementinio kompozicijų buvo įsteigta 5 ppm. UHPLC-ESI analizė ELK atskleidė 22 fenolinių junginių (2 lentelė), sąrašą, kurios piko numerį, sulaikymo trukmė buvimas, pastebėjo, m /z
, sukurtą molekulinę formulę ir siūlomą junginį aptikta. 2 pav atitinka bazinės smailės chromatogramos neigiamų jonų, su molekulės struktūrą ermanin, kaempferide, pinobaksin ir pinostrobin pav. 3.Table 2 Fenolio junginių nustatytos ELK iki UHPLC-MS
Peak Nr
tR (min),
[MH] - CR.LT klaida (ppm)

Formulės
identifikavimo

1.
0,45
169,01376
3,433
C7H5O5
Galo rūgštis
2.
2.34
163,03978
4,964
C9H7O3
Protocatechuic rūgštis
3.
3.10
193,05020
3,443
C10H9O4
ferulo rūgštis
4.
4.53
599,10547
3,879
C28H23O15
Quercitrin-2 "-O-galatas
5. 4.93 939,11377 4.220
C41H31O26
Pentagalloyl -hexoside II
6.
5.05
447,09421
4,523
C21H19O11
kaempferol--P 3
-galactoside
7.
5.31
317,0308
5.130
C15H9O8
Myricetin
8.
6.20
193,08661
3,569
C10H9O4
Isoferulic rūgštis
9.
6.91
583,11053
3,941
C28H23O14
Afzelin-O-galatas
10.
C15H9O7
kvercetinas
11.
7.35
301,03586
4,023 7.42
603,07928
3,894
C30H19O14
kvercetinas dimeras
12.
7.67
255,06636
4,605 ​​
C15H11O4
Pinocembrin
13.
8.14
593,13116
3,697
C30H25O13
kaempferol-3-O
-glucoside
14.
8.18
315,05196
6,478
C16H11O7
Rhamnetin
15.
8.55
271,06094
3.099
C15H12O5
Pinobaksin
16.
8.94
285,04037
3,528
C15H9O6
kaempferol
17.
10.80
253,05063
4,326
C15H9O4
Chyrsin Aš
18.
11.67
253.05099
5.749
C15H9O4
Chyrsin II
19.
11.91
299,05597
3,195
C16H11O6
Kaempferide
20.
12,56
313,07245
5,703
C17H13O6
Ermanin Aš
21
12.78
313.07230
5.224
C17H13O6
Ermanin II
22.
13.32
269,08194
4,105
Pav. Pav. Visi autoriai skaityti ir patvirtino galutinį rankraštį.

• Poveikis nikotino skrandžio myoelectrical aktyvumo ICR pelėmis
• Klinikos reikšmė claudin-4 skrandžio karcinoma