Mechanizmus (ok) a cselekvés alapjául szolgáló gasztroprotektív hatását etil-acetátos frakciót nyert nyers metanolos elhagyja kivonatot Muntingia calabura

mechanizmus (ok) a cselekvés alapjául szolgáló gasztroprotektív hatását etil-acetátos frakciót nyert nyers metanolos elhagyja kivonatot Muntingia calabura
katalógusa Abstract Background katalógusa katalógusa Muntingia calabura katalógusa L. (család Muntingiaceae), közismert nevén a jamaikai cseresznye vagy kerukup sziám katalógusa Malajziában, a hagyományosan használt kezelésére különböző betegségek. A jelen vizsgálat célja az, hogy feltárja az esetleges mögöttes gyomorvédő mechanizmusok etilacetát frakció (EAF) A Muntingia calabura katalógusa metanolos levelek kivonata (MEMC). Katalógusa Módszerek katalógusa MEMC és frakciói vetettük alá HPLC elemzés meghatározza és számszerűsíti a jelenléte a fito-összetevőket. A mechanizmus a gastroptotection EAF tovább vizsgáltuk pylorus ligációs indukált gyomorkárosodás patkány modellben (100, 250, és 500 mg /kg). Makroszkopikus vizsgálata a gyomor, az értékelés a gyomortartalom paraméterek, például a hangerő, pH, szabad és összes savtartalma, fehérje becslés, és mennyiségi nyálka végeztünk. A részvétel a nitrogén-oxid (NO) és a szulfhidril (SH) vegyületeket értékeltük, és a szuperoxid-diszmutáz (SOD), gluthathione (GSH), kataláz (CAT), malondialdehid (MDA), prosztaglandin-E 2 (PGE 2) és a NO szintjét az etanol által kiváltott gyomor szövethomogenizátumhoz meghatároztuk. katalógusa Eredmények katalógusa HPLC analízis megerősítette jelenlétét a kvercetin és a galluszsav az EAF. In pylorus-elkötés modelljét, EAF szignifikánsan (p katalógusa < 0,001) megakadályozza a gyomor elváltozás kialakulása. Mennyisége a gyomor tartalom és összfehérje-tartalom jelentős mértékben csökkent (p
< 0,01 és p
< 0,05), míg a szabad és a teljes savasság csökken a dózisok 250 és 500 mg /kg (p
< 0,001 és p
< 0,05). EAF is fokozta a nyálka-tartalom szignifikánsan (p katalógusa < 0,001). Előkezelés N-nitro-L-arginin-metil-észter (L-NAME) vagy N-etil-maleimidet (NEM) megfordította a gasztroprotektív aktivitását EAF. EAF kezelés jelentősen enyhíthető a SOD, a GSH és a CAT aktivitás és a PGE 2 és NO szinten, miközben enyhítő MDA szint, viszonyítva a jármű csoport.
Következtetések
Összefoglalva, a mögöttes gasztroprotektív mechanizmusait EAF lehet kapcsolatos a szekréciót gátló, részvétel nyálkát, antiperoxidative, javítása antioxidáns státusz, moduláció, NO és SH-vegyületek, stimulálása PGE 2, valamint jelenlétét a kvercetin és galluszsav.
kulcsszavak
Muntingia calabura
frakció gyomorfekély antiszekréciós Antioxidáns a nitrogén-monoxid szulfhidril vegyület prosztaglandin quercetin Galluszsav Háttér katalógusa gyomorfekély egyik legfontosabb gasztrointesztinális rendellenességek, amelyek befolyásolják jelentős számú ember szerte a világon, miközben növekszik az előfordulási és fertőzöttségi világszerte [1]. Egyes szerzők utalnak gyomorfekély, mint az új "pestis" a 21. század [2]. Azt előrejelzések szerint 14,5 millió, a világ népessége által érintett gyomorfekély és a halálozási arány pedig 4.080.000 [3]. Patofiziológiájának gyomorfekély társított közötti egyensúlyhiány agresszív és védő tényezők a gyomorban. A gyomor nyálkahártya károsodás történik, ha a káros tényezők "elborít" ép nyálkahártya védelem, illetve gyengíthetik a nyálkahártya védekező mechanizmusok [4]. A káros tényezők ebben az összefüggésben az alkohol lenyelés, sav és pepszin szekréció, a rossz táplálkozás, a stressz, a reaktív oxigén (ROS), a nem-szteroid gyulladáscsökkentő gyógyszerek (NSAID-ok), és a Helicobacter pylori
fertőzés [5, 6]. Másrészt, a kulcsfontosságú védelmi tényezők és mechanizmusokat, amelyek így kapjuk a nyálkahártya védelemhez elegendő, nyálka szekréció és a nyálkahártya véráramlását, bikarbonát szekréció, ép nyálka gát, prosztaglandinok, felületaktív foszfolipidek, megnövekedett szintű antioxidánsok, aktivitásának gyulladásgátló vegyületek és a megfelelő szint nitrogén-monoxid (NO) [6-8].
Jelenleg a megelőzés és a kezelés gyomorfekély szerzett nagy érdeklődést vált és jelentős kihívás szembesül orvostudomány manapság. A mai napig, van néhány megközelítések használják, hogy megakadályozzák gyomorfekély, amelyek magukban foglalják potencírozza a nyálkahártya védelem együtt csökkentése savszekréció és semlegesítés stimulálása gyomor mucin szintézis fokozása antioxidáns szintjét a gyomorban, és gátolja a Helicobacter pylori
növekedést [9]. Gyomorsav kiválasztását úgy vélik, hogy a központi eleme a gyomorfekélyek jelenléte ellenére számos okozó tényezők [7], és ezért gátolja a gyomorsav-szekréció általában a kulcsfontosságú terápiás célpont fekély betegségek [10]. Másrészről, egy másik kulcsfontosságú tényező a patogenezisében gyomorfekélyek a termelés a reaktív oxigéngyökök (ROS). A ROS-termelés és egy egyidejű csökkentésével antioxidáns kapacitás kárt okoz az alapvető sejt alkotórészek, amelyek a fehérjék, lipidek és nukleinsavak, így a képződését toxikus vegyületek és sejthalált okoz miatt extrém reaktivitása [8, 11]. Ezért, controlling a ROS képződést, és a gyomorsav-szekréciót elengedhetetlen a kezelés ezen patológiák [12].
A jelenlegi gyógyszeres kezelés a gyomorsav fekélyek közé tartoznak a savas-blokkolók, amelyek csökkentik a savkiválasztást, protonpumpa-inhibitorok, az antibiotikumok a Helicobacter pylori
és a szöveti bélés védő szerek, például a szukralfát és a bizmut-cholinergics [13, 14]. Eventhough ezek a gyógyszerek csökkentették a megbetegedési aránya, de ezek gyakran társulnak nemkívánatos káros hatásokat, mint például túlérzékenység, impotencia, aritmia, a hematopoietikus rendellenességek, gynecomastia és antibiotikum-rezisztencia a hosszú távon [15, 16]. Továbbá, ezek a rendelkezésre álló gyógyszerek is magas a visszaesés aránya, az alacsony hatásossága gyomorfekélyek kezelésére és gyakran költséges [5, 9, 10]. Ezért van sürgős szükség, hogy felfedezzék a hatékonyabb és biztonságosabb alternatív terápiák kezelésére gyomorfekély. Ebben az összefüggésben, a használata gyógynövények szerzett érdeklődés és elfoglalták a figyelmet a sok kutató. Növényi kivonatok értékes lehet, és szolgálják, mint egy új forrás of Therapeutics kezelésére gyomorfekély, amellyel gátló, citoprotektív és antioxidáns aktivitása, izolált vagy egymással kombinálva, a három fő funkcióit egy gasztroprotektív szert, amely kulcsszerepet játszanak a gyomor nyálkahártya védelme [17].
a növény Muntingia calabura katalógusa L. (család Muntingiaceae), közismert nevén a jamaikai cseresznye vagy kerukup sziám katalógusa Malajziában, széles körben eloszlik a meleg területeken az ázsiai régióban [18]. Számos gyógyászati ​​célra is dokumentálták a különböző részein a fa Kelet és Délkelet-Ázsiában, valamint a trópusi Amerikában. Muntingia calabura azon katalógusa levelek, virágok, csónak- és gyökerek már használják a népi orvosság fejfájás kezelésére, a láz és a kezdődő hideg. Szerint a perui folklór, a leveleit használják, hogy a mentességet a gyomorfekély és a duzzanat csökkentésére, a prosztata [19]. Azonkívül, ők is alkalmazhatók antiszeptikus, görcsoldó, és antidyspeptic ügynök [20, 21].
Másrészt, Muntingia calabura
tűnik, hogy rendelkeznek egy széles körű farmakológiai aktivitással, amelyek bizonyítottan tudományosan. Ez magában tumorellenes [20, 22], antibakteriális [23], antinociceptív [19, 24, 25], gyulladásgátló, lázcsillapító [25], antioxidáns és antiproliferatív [26] tevékenységek által mutatott a levelek a Muntingia calabura katalógusa, míg többféle vegyületek izoláltak és azonosítottak a levelek, gyökerek és szárak ugat a Muntingia calabura katalógusa [20-22, 27, 28]. Különböző phytochemicals mutattak ki a levelek Muntingia calabura katalógusa mint a flavonoidok, szaponinok, tanninok és triterpének [29].
Korábbi vizsgálatunkban, már számolt a gyomorvédő aktivitása több frakcióra kapott nyers metanolos kivonat Muntingia calabura katalógusa (MEMC) levelek ellen etanollal kiváltott gyomor-elváltozás patkányoknál [30]. A mi tanulmány azt találtuk, hogy az etil-acetátos frakciót jelentősen javítani gyomorfekély és gyakorolta a leghatékonyabb védelmet, mint a többi frakciót. Ezért a jelen tanulmány célja az volt, hogy meghatározzuk a hatásmechanizmus alapját képező profilaktikus hatását az etil-acetátos frakciót származó MEMC ellen gyomorsérülés patkányban.
Pylorus-ligációs modell ebben a vizsgálatban alkalmazott egyike a legszélesebb körben használt modellek hogy tanulmányozzák a hatását a kábítószer a gyomorsav és a nyálka szekréció. Fekély által kifejlesztett ligálásával a pylorus-végét a gyomor által okozott növekedése gyomor sósav (HCI) elválasztás és /vagy a pangás sav, ami auto emésztés a gyomornyálkahártya és bontása gyomor nyálkahártya barrier [31]. Ezért szerek, amelyek képesek növelni nyálkakiválasztást (sejtvédő) és /vagy csökkenti a gyomorsav agresszív tényezők, mint a pepszin és a sav hatékony gasztroprotektív szerek [32]. Másrészt, az etanol-indukált fekély modell hasznos tanulmányozására hatékonyságát potenciális kábítószerek vagy tesztelése szerek, amelyek citoprotektív és /vagy antioxidáns aktivitása [33].
Módszerek
Vegyszerek
használt vegyi anyagok ebben a tanulmányban az analitikai minőségben és állítottunk elő közvetlenül a felhasználás előtt. A következő hatóanyagokat alkalmaztuk: ranitidin (Sigma Aldrich, USA), abszolút etanol (Fischer Scientific, USA), az N-etil-maleimidet (NEM) (Sigma-Aldrich, USA), N G-nitro-L-arginin-metil-észterek (L-NAME) (Sigma-Aldrich, USA), karbenoxolon (CBX) (Sigma-Aldrich, USA) és dietil-éterrel (Fischer Scientific, USA).
Növényi anyag
Muntingia calabura
leveleket gyűjtöttünk a saját természetes élőhelyükön Shah Alam, Selangor, Malajzia, május és augusztus között 2010. az üzem által azonosított botanikus az Institute of Bioscience (IBS), Universiti Putra Malajzia (UPM), Serdang, Selangor. A voucher mintának, SK 2466/14, már letétbe helyezték az UPM IBS Laboratory of Natural Products herbárium.
Kitermelése és frakcionálá- Muntingia calabura katalógusa elhagyja katalógusa leírt módszer szerint Zakaria et al. [26] és a Sufian et al. [28] alkalmaztuk, hogy előkészítse a nyers kivonatot Muntingia calabura katalógusa levelek és frakciói, ill. Öt száz gramm érett levelek levegőn szárítjuk szobahőmérsékleten (27 ±
2 ° C) 1-2 hétig és őrlik finom por. Metanol (MeOH) használtunk az oldószer extrakcióval. A port-ben áztatjuk MeOH arányban 1:20 (tömeg /térfogat) 72 órán át. Az elegyet szűrtük, a szűrő tölcsér, a gyapot és Whatman No. 1 szűrőpapíron. Az áztatás és szűrés megismételtük a maradékot kétszer. A szűrletet gyűjtöttünk minden egyes extrakciós összegyűjtöttük és vákuumban forgó bepárlóban 40 ° C hőmérsékleten, csökkentett nyomáson, így a metanol kivonatot Muntingia calabura katalógusa (MEMC). A szárított nyers extraktumot MeOH-ban szuszpendáljuk, és desztillált vízzel (DH 2o) víz aránya 1: 2, így egy vizes MeOH oldatban. Az elegyet egymás után megosztjuk a különböző oldószerek, melyek petroléter és etil-acetát eleggyel, eredményül petroléter frakció (PEF), etil-acetátos frakciót (EAF). A frakciókat leszűrjük, és szárazra pároljuk vákuum alkalmazásával rotációs bepárlón. MEMC, PEF és EAF vetettük alá HPLC számszerűsíteni a vegyület az érdeklődés, amely összefüggésbe hozható az extraktumot a gasztroprotektív hatás.
Azonosítása és mennyiségi meghatározása phytoconstituents jelen EAF HPLC
által leírt módszerrel Zakaria et al. [34], kisebb módosításokkal adaptálták elvégzésére HPLC analízisének EAF. Röviden, 10 mg mintát szuszpendáltunk 1 ml metanolban. Az oldatokat átszűrjük egy szűrőbetét (pórusméret 0,45 nm) a használat előtt. A mintát analizáltuk HPLC-rendszer (Waters Delta 600 600 Controller) fotodiódával array detektor (PDA) (Waters 996). A C 18 oszlopon (4,6 mm belső átmérő x 250 mm) töltött 5 jim átmérőjű részecskéket használunk. A mobil fázis víz, amely 0,1% hangyasav (A) és acetonitril (B). Kezdeti feltételek voltak a 85% A és 15% B lineáris gradienssel elérve 25% B T
= 12 min. Ez a feltétel tartottuk fenn 10 percen át. B csökkent vissza 15%, az eredeti állapot, és megmaradt egészen t katalógusa = 35 perc. A t
= 25 perc, a program visszatér a kezdeti oldószer-összetétel. Az áramlási sebesség 1,0 ml /perc, injektált térfogat 10 ul és a hullámhossz voltak 280 nm a galluszsav és 330 nm-en a kvercetin. Az oszlopot kemence állítottuk be 27 ° C-on. Törzsoldatait szabványok referenciák állítjuk elő metanolban koncentráció 1 mg /ml. A kromatográfiás csúcsokat összehasonlításával igazoltuk a megőrzési időt azokkal a referencia szabványok és a megfelelő UV spektrumok. Kalibrációs görbe galluszsavként volt Y = 29562x + 102.777 (R 2 = 0,9969) és a kvercetin volt Y = 43236x - 81458 (R 2 = 0,999). Minden kromatográfiás műveleteket környezeti hőmérsékleten, és három párhuzamosban. A HPLC elemzést végeztünk a Laboratórium Phytomedicine, Gyógynövény Division, Erdészeti Tudományos Intézet Malajzia (FRIM) Kepong, Malajzia. Katalógusa UHPLC-ESI elemzés katalógusa A UHPLC rendszer végeztünk egy Dionex 3000 UHPLC rendszer szerzett Thermo Fisher Scientific (USA), amely abból állt, automata mintavevő ellátott oszlop sütő, tálca rekesz hűvösebb, és egy bináris pumpa, beépített oldószerrel gáztaianítóba. A kromatográfiás elválasztás végeztük a BEH C18 UHPLC oszlop, 100 mm x 2,5 um, 1,7 um (Waters), áramlási sebesség 0,3 ml /perc. A mobil fázisok a következők voltak (A) 0,1% hangyasav vízben, és (B) 0,1% hangyasav acetonitrilben. A gradiens kezdődött 10% mobil B fázis, elérve a 20% mobil B fázis, 5 perc, 60% B-mozgófázis 17,0 perc, izokratikus eluálás 90% B 3 percen át. A gradiens elérte a kezdeti feltételek tartottak 2 percig, mint egy újra egyensúlyba hoztuk lépést. Az injekció térfogata 10 ul, és az oszlop hőmérsékletét tartottuk 40 ° C-on. A UHPLC rendszer, amelyhez egy lineáris ion-trap-Orbitrap tömegspektrométer Q Exactive a Thermo Fisher Scientific (U. S.) ellátott elektrospray ionizációs (ESI) forrással. A tömeg detektálás végeztük egy sor 150-1500 m /z. Az ESI forrás működött negatív ion módban az alábbi különleges feltételek: forrás feszültséget, 3,2 kV; köpeny gáz, 35 önkényes egységek; kisegítő gáz, 15 önkényes egység; söpörni gáz, 10 önkényes egység; és a kapilláris hőmérsékletét 320 ° C-on. Nitrogén (> 99,98%) alkalmazták, mint köpeny gáz, kisegítő és hajtógáz. Műszervezérlő és adatgyűjtő végeztük Chameleon 6.8 szoftvert és Xcalibur 2.2 szoftver (Thermo Fisher Scientific).
Állatok
A kísérleteket hím Sprague-Dawley patkányokat (180-200 g; 8-10 hetes). Ők nyerték az Animal Unit, Általános Orvostudományi Kar és Egészségtudományi Kar, UPM, Malajziában. Az állatokat a polipropilén ketrecekben fa borotválkozás, táplált szabvány pellet, és szabad hozzáféréssel a vízhez. Úgy tartották, szobahőmérsékleten (27 ± 2 0C; 70-80% -os páratartalom mellett, 12 órás világos /sötét ciklus) az Állat-Holding Unit (UPM). Előtt minden vizsgálatban a patkányokat éheztettük. Szokásos gyógyszerek és MEMC orálisan (p.o.) gyomorszondán keresztül 8% Tween 80-at (10 ml /kg), mint a jármű. Az állatok felhasználását a jelen tanulmány által jóváhagyott Animal Care és használt Bizottság (ACUC) UPM (Jóváhagyás száma: UPM /FPSK /PAD /BR-uuh /00474). Katalógusa meghatározása mechanizmusának gyomorvédő aktivitását EAF katalógusa Pylorus elkötés katalógusa módszer Shay et al. [35] kisebb módosításokkal alkalmaztuk elvégzésére pylorus lekötés. A patkányokat véletlenszerűen 5 csoportba osztottuk, és hat patkány minden csoportban. Csoport-én a kontroll csoportot, mely 8% Tween 80-at (hordozó) szájon át (po), csoport-II volt a pozitív kontroll adják ranitidin 100 mg /kg (po), míg a csoport-III, -IV és- V, patkányoknak adjuk be EAF (100, 250 és 500 mg /kg-kal). Pylorus ligálást végeztünk 48 órán át éheztetett patkányokat 1 órán beadása után a vizsgálandó vegyületeket. Enyhe érzéstelenítés alatt indukált használatával ketamin HCl-t (100 mg /kg, intramuszkuláris) és xylazin HCI-t (16 mg /kg, intramuszkuláris), egy 2 cm hosszú középvonali hasi metszésen végeztük, csak a szegycsont alatt. Pylorus része a gyomor volt óvatosan mozgósítottak, és óvatosan ligáltuk egy, selyem ligatúra körül pylorus záróizom egy szűk csomót. Figyelmet fordítottak, míg árukapcsolás a csomót, hogy elkerüljük a gyomor vérellátása. A hasi bemetszést összevarrjuk, a bőrt megtisztították bármely vér foltok vagy vérzés, és az állatokat hagyjuk magukhoz térni az altatásból.
Értékelése gyomornyálkahártya elváltozás
Az állatokat leöltük 6 óra után ligációs való kitettség által dietil-éterrel és csigolyatörés. A gyomrukat eltávolítottuk, és a lombik tartalmát kiszívják, összegyűjtjük, és centrifugáljuk. A gyomrot megnyílt a nagyobb görbület mentén, hogy meghatározzák a lézió károsodás által leírt Balan et al. [36]. A százalékos védelem számoltuk az alábbi képlet segítségével: $$ \\ mathrm {Védelem} \\ \\ left (\\% \\ right) = \\ frac {\\ left (\\ mathrm {U} \\ mathrm {A} \\ \\ mathrm {ellenőrzés} \\ \\ hbox {-} \\ \\ mathrm {U} \\ mathrm {A} \\ \\ mathrm {p} \\ mathrm {r} \\ mathrm {e} \\ hbox {-} \\ mathrm {kezelt} \\ \\ mathrm {csoport} \\ jobbra)} {\\ left (\\ mathrm {U} \\ mathrm {a} \\ \\ mathrm {ellenőrzés} \\ right)} \\ alkalommal 100 \\% $$ meghatározása mennyiség, pH, szabad és összes savtartalma gyomortartalom katalógusa A lecsapolt gyomor tartalmát 10 percig centrifugáljuk 2500 rpm, hogy eltávolítsa a szilárd törmeléket. A kötet és pH a gyomornedv mértük. A gyomornedv vetettük alá a szabad és a teljes savasság becslési módszer szerint által leírt Srivastava és mtsai. [37]. Titrálás 0,01 N NaOH-dal metil-narancssárga reagenssel addig végeztük, amíg az oldat színe vált sárgás annak érdekében, hogy meghatározzák a szabad savasság. A kötet a lúg hozzáadott volt megfigyelhető. Ezután 2-3 csepp fenolftalein-t adunk az oldathoz. Az oldatot titráljuk, amíg határozott vörös árnyalattól jelennek meg. A teljes mennyiséget NaOH hozzáadott volt megfigyelhető. Ez a mennyiség megfelel az összes savtartalom. Savasság számoltuk az alábbi képlet segítségével: $$ \\ mathrm {savasság} = \\ frac {\\ mathrm {kötet} \\ \\ mathrm {A} \\ \\ mathrm {NaOH} \\ times \\ mathrm {normalitás} \\ \\ mathrm {A} \\ \\ mathrm {NaOH} \\ alkalommal 100} {0,1} \\ mathrm {m} \\ mathrm {e} \\ mathrm {q} /\\ mathrm {l} $$ becslése fehérje katalógusa A teljes fehérjetartalom gyomornedv becsülték Lowry módszere, átvéve Lowry et al. [38] alkalmazásával lúgos réz-reagens és Folin-reagens. A szín kifejlesztett olvastuk 660 nm-en. A fehérjetartalom számítottuk a standard görbéből készített szarvasmarha szérum albumin és a fehérje koncentrációt fejeztük mg /ml gyomornedv.
Becslése gyomor fal nyálka tartalom
által leírt módszerrel Corne és mtsai. [39], kisebb módosításokkal alkalmaztunk, hogy meghatározzák a gyomor fal nyálka tartalmat. A gyomrot megnyílt a nagyobb görbület mentén, lemértük, és elmerül 10 ml 0,1% Alcian kék (0,16 M szacharóz, 0,05 M nátrium-acetát, pH = 5,8) 2 órán át. A gyomrot ezután kétszer öblítjük 0,25 M szacharóz-oldatban (15 perc), hogy eltávolítsuk a túlzott festék. A fennmaradó festék, amely komplexet képez a gyomor nyálka extraháljuk 0,5 M MgCI 2. A mirigyes szegmens maradt ebben az oldatban 2 órán szakaszos keverés közben 1 percig 30 percenként intervallumban. A kapott kék extraktumot ezután erőteljesen összeráztuk azonos térfogatú dietil-éterrel, amíg a kialakulását egy emulzió. A kapott emulziót centrifugáljuk, 10 percen át 3600 rpm-en. Abszorbanciája a vizes fázist leolvastuk 580 nm-en spektrofotométerrel. A koncentráció a alcián kék számítottuk át egy standard görbe és az eredményeket mg-ban kifejezve a alcián kék /g nedves szövet.
Etanollal indukált gyomornyálkahártya-elváltozás, L-NAME vagy NEM előkezelt patkányok
szerepe az endogén NO és bevonása szulfhidril (SH) vegyületek gasztroprotektív hatását EAF értékeltünk a által leírt módszer Takayama et al. [40]. Hím patkányokat osztottunk 9 csoportok és előkezelt (IP) sóoldattal, az L-NAME (N-nitro-L-arginin-metil-észter, 70 mg /kg) gátolja a NO szintézisét, vagy NEM (N-etil-maleimidet, 10 mg /kg) a SH vegyület blokkoló. Harminc perc után a kezelés előtti, az állatoknak adagoltuk (po) a jármű (8% Tween 80), karbenoxolon (100 mg /kg) vagy EAF (500 mg /kg). Hatvan perccel később az összes csoport kapott abszolút etanolt (5 ml /kg, szájon át) indukál gyomorfekély. Minden a patkányokat leöltük 1H beadása után az etanol által kitettség dietil-éter és nyaki diszlokáció. A gyomrot eltávolítjuk és a gyomor károsodás fentiek szerint határoztuk meg. Mivel EAF mutatott dózisfüggő hatás és kifejtett jelentős védőhatást ellen gyomornyálkahártya az etanol-indukált gyomorfekély modellt, a legmagasabb hatásos dózis (500 mg /kg) alkalmaztunk ebben a vizsgálatban.
Biokémiai elemzés
mérése a szuperoxid-dizmutáz (SOD), a glutation (GSH) szintje és kataláz (CAT) aktivitása
Gyomor szövetekben a patkányok előkezelt jármű (8% Tween 80), ranitidin (100 mg /kg) vagy EAF (100, 250 és 500 mg /kg), majd fekély indukció segítségével abszolút etanolban 1 órán voltak meghatározásához használt a SOD, GSH szint és a CAT aktivitás. Gyomor szöveti darabokra vágjuk, és a pontos tömegét feljegyeztük. A szöveteket homogenizáljuk egy homogenizátor alkalmazásával megfelelő hideg pufferrel, majd centrifugáltuk 10000 g-vel 15 percig 4 ° C-on. A felülúszókat meghatározására használt tevékenységének CAT és szintű SOD, és a GSH. A fehérje koncentrációját a felülúszóban mértük a Bradford módszerrel [41] alkalmazásával a szarvasmarha-szérumalbumin (BSA), mint a standard. Szintek a SOD, a GSH és a CAT határoztuk meg kereskedelmi assay kitek szerint a gyártó utasításai, illetve (szuperoxid dizmutáz Assay Kit, a glutation Assay Kit és kataláz Assay Kit, Cayman Chemical Company, Ann Arbor, MI, US).
mérése malondialdehid (MDA) szintjét
MDA szintet mértek gyomor szövetekben nyert etanol-indukált gyomorfekély. A gyomrot szövetet homogenizáltuk és centrifugáltuk leírtak előtt, és a felülúszót használtuk az meghatározására MDA segítségével egy enzimmel kapcsolt immunoszorbens assay kit (USCN Life Science Inc., Atlanta, GA, USA). Az optikai sűrűséget 450 nm hullámhosszon mérjük, és az eredményeket fejeztük ng /mg fehérje.
Meghatározása a prosztaglandin E2 (PGE2) katalógusa PGE 2 szinteket határoztuk meg gyomor szövetekben nyert etanollal kiváltott gyomor fekély. A felülúszót a homogenizáltuk és centrifugáltuk gyomor szövetet alkalmaztunk meghatározására PGE 2 használatával prosztaglandin-E 2 Express EIA kit (Cayman Chemical Company, Ann Arbor, MI, US). Az optikai sűrűséget mértük 412 nm-en. A PGE 2 koncentráció normalizáltuk fehérjetartalmat és az eredményeket fejeztük pg /mg fehérje.
Meghatározása NO szint katalógusa NO szint a gyomornyálkahártya értékeltük teljes nitrát /nitrit szintek segítségével Griess-reagens [42]. Röviden, a gyomor homogenizátumot készítettünk 50 mM kálium-foszfát-pufferben (pH = 7,8). A homogenizátumokat centrifugáljuk 4000 rpm, 10 perc, 4 ° C-on. Ötven mikroliter Griess-reagens (0,1% N- (1-naftil) ethylenediamide dihidroklorid, 1% szulfanilamid 5% foszforsav) adtunk 50 | il felülúszót, és mértük az abszorbanciát 540 nm-nél 10 perc után. Nátrium-nitrit használtunk standardként ebben a vizsgálati eljárásban, hogy létrehoz a standard görbe.
Statisztikai analízis
Az eredményeket átlag ± standard hiba átlag (SEM) és analizáltuk egy variancia analízis (ANOVA), ezt követte Dunnett post hoc teszt katalógusa vagy a Newman-Keuls teszt. Eredmények tekintettük szignifikánsnak, ha p < katalógusa 0. katalógusa 05. katalógusa Eredmények katalógusa azonosítása és mennyiségi galluszsav és kvercetin katalógusa HPLC ujjlenyomat MEMC, PEF és EAF jelenlétét mutatta ki a gall sav λ max 216,6-272,0 nm, és a kvercetin a λ max 255,5-370,6 nm (1A. és b). Spiking Ezen vegyületek MEMC, PEF vagy EAF növelte a csúcs alatti terület, amely megfelel az ugyanazon λ max érték a vegyületek. A mennyiségi meghatározás eredményeként bemutatott 1. táblázat azt mutatja, hogy az EAF tartalmazza a legnagyobb mennyiségű galluszsav (39.89 ± 0.96 mg /g kivonat) és a kvercetin (9,36 ± 0,29 mg /g kivonat), majd MEMC és PEF. Ábra. 1 a és b: HPLC elemzése MEMC, PEF és EAF végzett hullámhossz 330 nm jelenlétét mutatta ki a kvercetin a Xmax 255,5-370,6 nm szobahőmérsékleten 3,696 min. Spiking kvercetin a kivonatokat növelte a csúcs alatti terület, amely megfelel az azonos Xmax értéke a vegyületek. C és D: HPLC ujjlenyomatvétele MEMC, PEF és EAF a 280 nm-es hullámhosszon jelenlétét mutatta ki a gallicacid a Xmax 216,6-272,0 nm szobahőmérsékleten 4,204 min. Spiking galluszsav a kivonatokat növelte a csúcs alatti terület, amely megfelel az azonos Xmax értéke a vegyületek katalógusa 1. táblázat Galluszsav és kvercetin összetételét a MEMC és aktív frakciókat (PEF és EAF) a mg /1 g kivonat. Az eredményeket átlag ± standard deviáció (SDS) három meghatározás katalógusa vegyületek Matton MEMC Matton PEF Matton EAF Matton Galluszsav (mg /g) hotelben 11,97 ± 0,27 katalógusa 3,40 ± 0,01 katalógusa 39,89 ± 0,96 katalógusa kvercetin (mg /g) hotelben 4,83 ± 0,16 8,81 ± 0,44 katalógusa katalógusa 9,36 ± 0,29 katalógusa azonosítása fenolos vegyületek EAF katalógusa EAF elemezték alapján pontos adattömeg a molekuláris ionokat, mely ionok kimutatható volt próbaképpen azonosították által generált molekuláris képlet, a szoftver adatok elemzése (Xcalibur) amely előírta a lehetséges elemi képletek, valamint a szabványos ha rendelkezésre állnak és után alapos felmérést a szakirodalom.
a széles körben elfogadott pontossági határérték megerősítését elemi összetétel állapították meg 5 ppm. A UHPLC-ESI elemzése EAF jelenlétét mutatta ki a 22 fenolos vegyületek (2. táblázat), amely felsorolja a csúcs szám, retenciós idő, talált m /z katalógusa, a generált molekuláris képlet és a javasolt vegyület kimutatható. A 2. ábra megfelel az alap-csúcs kromatogram negatív ion, a molekula szerkezetének ermanin, kaempferide, pinobaksin és pinostrobin ábrán. 3.Table 2 fenolos vegyületeket azonosítottak EAF által UHPLC-MS katalógusa Peak Nem Matton R (perc) Matton [MH] - Matton Error (ppm)
katalógusa Formula Matton azonosítása
1. katalógusa 0.45 katalógusa 169,01376 katalógusa 3,433 katalógusa C7H5O5 katalógusa Galluszsav katalógusa 2. katalógusa 2,34
163,03978
4.964 katalógusa C9H7O3 katalógusa protokatechualdehid sav katalógusa 3. katalógusa 3.10 katalógusa 193,05020 katalógusa 3,443 katalógusa C10H9O4 katalógusa ferulasav katalógusa 4.
4,53 katalógusa 599,10547 katalógusa 3,879 katalógusa C28H23O15 katalógusa kvercitrin-2 "-O-gallát katalógusa 5. katalógusa 4,93 katalógusa 939,11377 katalógusa 4,220 katalógusa C41H31O26 katalógusa pentagalloil -hexoside II katalógusa 6. katalógusa 5.05 katalógusa 447,09421 katalógusa 4,523 katalógusa C21H19O11 katalógusa kempferol-3-O katalógusa -galactoside katalógusa 7. katalógusa 5,31 katalógusa 317,0308
5.130
C15H9O8 katalógusa Myricetin katalógusa 8. katalógusa 6.20 katalógusa 193,08661 katalógusa 3,569 katalógusa C10H9O4 katalógusa Isoferulic sav katalógusa 9. katalógusa 6,91 katalógusa 583,11053 katalógusa 3,941 katalógusa C28H23O14 katalógusa Afzelin-O-gallát katalógusa 10.
7,35 katalógusa 301,03586 katalógusa 4,023 katalógusa C15H9O7 katalógusa quercetin katalógusa 11. katalógusa 7,42 katalógusa 603,07928 katalógusa 3,894 katalógusa C30H19O14 katalógusa quercetin dimer katalógusa 12.
7,67 katalógusa 255,06636 katalógusa 4,605 ​​katalógusa C15H11O4 katalógusa Pinocembrin katalógusa 13.
8,14 katalógusa 593,13116 katalógusa 3,697 katalógusa C30H25O13 katalógusa kempferol-3-O katalógusa -glucoside katalógusa 14.
8,18 katalógusa 315,05196 katalógusa 6,478 katalógusa C16H11O7
Rhamnetin
15. katalógusa 8,55 katalógusa 271,06094 katalógusa 3,099 katalógusa C15H12O5 katalógusa Pinobaksin katalógusa 16.
8,94 katalógusa 285,04037 katalógusa 3.528 katalógusa C15H9O6
kempferol- katalógusa 17. katalógusa 10.80 katalógusa 253,0

• Hatását a nikotin a gyomor mioeiektromos tevékenységet ICR egereket
• Klinikopatológiai jelentősége claudin-4 gyomorrák