Mechanizmus (y) účinku ležiace pod gastroprotektívnymi účinky etylacetát frakcie získané zo surového methanolického Extrakt z listov z Muntingia calabura

Mechanizmus (y) účinku ležiace pred žalúdočným účinok zmesi etylacetátu a frakcie získané zo surového methanolického Extrakt z listov z Muntingia calabura
spoločností abstraktné
pozadia
Muntingia calabura
L. (rodina kalaburovité), obyčajne známy ako jamajský čerešňa alebo kerukup siam
v Malajzii, sa tradične používajú na liečbu rôznych ochorení. Cieľom tejto štúdie je objasnenie možných základných gastroprotektívnymi mechanizmy etylacetát frakcie (EAF) z Muntingia calabura
methanolický Extrakt z listov (MEMC).
Metódy
MEMC a jeho frakcie boli podrobené analýze HPLC na identifikovať a kvantifikovať prítomnosť svojich fytoestrogénov voličov. Mechanizmus gastroptotection z EOP bola ďalej skúmaná pomocou pyloru žalúdočnej lézie modelu ligační indukované u potkanov (100, 250, a 500 mg /kg). Makro- analýza žalúdka, vyhodnotenie parametrov žalúdočného obsahu, ako je objem, pH, voľného a celkového kyselín, proteínov, odhad a kvantifikácia boli vykonané hlienu. Účasť oxidu dusnatého (NO) a sulfhydrylové (SH) zlúčenín bola vyhodnotená a superoxiddismutáza (SOD), gluthathione (GSH), kataláza (CAT), malondialdehydu (MDA), prostaglandín E 2 (PGE 2) a bola stanovená hladina NO v etanole vyvolaných žalúdočné tkaniva homogenátu.
Výsledky
HPLC potvrdila prítomnosť quercetin a kyseliny gallová v EOP. V pyloru-ligační modelu, EAF významne (p Hotel &0,001) sa zabránilo tvoreniu žalúdočné lézie. Objem žalúdka obsahu a celkového obsahu bielkovín podstatne znížila (p
< 0,01 a p
menšie ako 0,05, v uvedenom poradí), pričom voľný a celkový obsah kyselín znížená v dávkach 250 a 500 mg /kg (p
< 0,001 a p
menšie ako 0,05, v tomto poradí). EOP tiež rozšírený obsah hlienu významne (p Hotel <0,001). Predbežné spracovanie s N-nitro-L-arginín metyl ester (L-NAME), alebo N-ethylmaleimide (NEM), obrátil gastroprotektívnymi aktivitu EOP. Liečba EOP výrazne zlepšil SOD, GSH a CAT aktivita a PGE 2 a NO úroveň, zatiaľ čo tlmiace úroveň MDA, vzhľadom k skupine vozidiel.
Závery
Na záver by mohlo byť spojené podkladové gastroprotektívnymi mechanizmy EOP s antisekrečného, ​​účasť hlienu, antiperoxidative, zlepšenie antioxidačné stavu, modulácia zlúčenín nO a SH, stimuláciu PGE 2, ako aj prítomnosť quercetin a kyseliny gallová.
Kľúčové
Muntingia calabura
Podiel žalúdočný vred antisekrečnými Antioxidačné oxid dusnatý merkaptoderivátů prostaglandínu Quercetin galský kyselinu pozadí
žalúdočného vredu je jedným z hlavných gastrointestinálnych porúch, ktoré ovplyvňujú veľký počet ľudí na celom svete, zatiaľ čo rastie výskytu a rozšírenie po celom svete [1]. Niektorí autori odkazujú na žalúdočné vredy ako nový "mor" z 21. storočia [2]. Bolo predpokladá, že 14,5 milióna na svetovej populácii sú ovplyvnené žalúdočných vredov s úmrtnosťou 4,08 milióna [3]. Patofyziológia žalúdočných vredov je spojená s nerovnováhou medzi agresívnymi a ochranných faktorov v žalúdku. dôjde k poškodeniu žalúdočnej sliznice, keď škodlivé faktory "premôcť" intaktné slizničnej obrana, alebo oslabovanie slizničných obranných mechanizmov [4]. Jedovaté faktory v tomto kontexte zahrňujú požitie alkoholu, sekréciu kyseliny a pepsínu, zlé stravovacie návyky, stres, reaktívne formy kyslíka (ROS), použitie nesteroidných protizápalových liečiv (NSAID) a infekcie Helicobacter pylori
[5, 6]. Na druhej strane, kľúčové obranné faktory a mechanizmy, ktoré poskytujú mukóznej obrany obsahovať dostatočné hlienu sekréciu a slizničnej prietok krvi, sekréciu bikarbonátu, intaktné hlienu bariéra, prostaglandíny, povrchovo aktívne fosfolipidy, zvýšenú hladinu antioxidantov, aktivity protizápalových zlúčenín a adekvátnu hladiny oxidu dusnatého (NO) [6-8].
v súčasnej dobe je prevencia a liečenie žalúdočných vredov získala veľa záujmov a stal sa aj dôležitou úlohou konfrontovať liek v dnešnej dobe. K dnešnému dňu, existuje niekoľko prístupov použitých na prevenciu žalúdočných vredov, ktoré zahŕňajú zosilnenie obrany sliznice a znižovanie sekrécie kyseliny a jej neutralizáciu, stimulácii žalúdočného hlienu syntézy, zvýšenie hladiny antioxidantov v žalúdku, a inhibícia Helicobacter pylori
rastu [9]. Sekrécie žalúdočnej kyseliny sa predpokladá, že centrálna komponenta žalúdočných vredov bez ohľadu na prítomnosť mnohých príčinných faktorov [7], a preto, inhibícia sekrécie žalúdočnej kyseliny majú tendenciu byť kľúčom terapeutickým cieľom pre vredových ochorení [10]. Na druhej strane, je ďalším kľúčovým faktorom v patogenéze žalúdočných vredov je produkcia reaktívnych foriem kyslíka (ROS). Produkcia ROS a súčasné zníženie antioxidačné kapacity spôsobuje poškodenie základných zložiek buniek, ktoré sú proteíny, lipidy a nukleové kyseliny, čo vedie k tvorbe toxických látok a spôsobuje bunkovú smrť v dôsledku ich mimoriadnej reaktivity [8, 11]. Z tohto dôvodu, reguláciu tvorby ROS a sekrécie žalúdočnej kyseliny sú nevyhnutné pre liečenie týchto patologických stavov [12].
Current Medicinal liečenie žalúdočných vredov, patria kyselina blokátory, ktoré znižujú sekréciu kyseliny, inhibítory protónovej pumpy, antibiotiká na eradikáciu Helicobacter pylori
a tkanivo chrániť obkladové činidla, ako je sukralfát a bizmutu anticholínergického [13, 14]. Hoci tieto lieky majú znížila morbiditu, ale sú často spojené s nežiaducimi nežiaduce účinky, ako je precitlivenosť, impotencia, arytmia, poruchy krvotvorby, gynekomastia a antibiotickej rezistencie v dlhodobom horizonte [15, 16]. Okrem toho tieto dostupné lieky majú tiež vysokú mieru relapsu, nízka účinnosť pri liečbe žalúdočných vredov a sú často nákladné [5, 9, 10]. Preto existuje naliehavá potreba zistiť viac efektívne a bezpečné alternatívne terapie na liečbu žalúdočných vredov. V tomto kontexte je použitie liečivých rastlín získala záujem a upútala pozornosť mnohých výskumníkov. Rastlinné extrakty môžu byť cenné a slúži ako nový zdroj liečiv pri liečbe žalúdočných vredov, pričom antisekrečnej, cytoprotektívny a antioxidačné aktivity, samostatný alebo v kombinácii, sú tri hlavné funkcie v žalúdočnom činidla, ktoré hrajú kľúčovú úlohu v žalúdočnej sliznice ochrana [17].
rastlina Muntingia calabura
L. (rodina kalaburovité), bežne známy ako jamajský čerešňa alebo kerukup Siam
v Malajzii, je široko distribuovaný po celom teplých oblastiach ázijskom regióne [18]. Niekoľko liečivá použitie boli zdokumentované na rôznych častiach tejto vetve vo východnej a juhovýchodnej Ázii, rovnako ako tropické Ameriky. Muntingia calabura je
listy, kvety, kôra a korene boli použité ako ľudový liek na liečbu bolesti hlavy, horúčkou a začínajúce prechladnutie. Podľa peruánskej folklóru, listy sú používané poskytnúť úľavu od žalúdočných vredov a znížiť opuch prostaty [19]. Okrem toho sú tiež použité ako antiseptikum, proti kŕčom, a antidyspeptic činidlá [20, 21].
Na druhej strane, Muntingia calabura
Uvádza sa, že majú široké spektrum farmakologických účinkov, ktoré boli vedecky dokázaná. To zahŕňa protinádorové [20, 22], antibakteriálne [23], antinociception [19, 24, 25], protizápalové, antipyretické [25], antioxidačné a antiproliferatívne aktivity [26], ktorý vykazuje listy Muntingia calabura
zatiaľ čo niekoľko typov zlúčenín, ktoré boli izolované a identifikované z listov, koreňov a kmeňových šteká z Muntingia calabura
[20-22, 27, 28]. Rôzne fytochemikálie boli detekované v listoch Muntingia calabura
, ako sú flavonoidy, saponíny, triesloviny a triterpény [29].
V našej predchádzajúcej štúdii sme uviedli pred žalúdočným aktivitu niekoľkými frakcií získaných zo surového metanolu extraktu Muntingia calabura
(MEMC) listy proti etanolom indukovanej žalúdočnej lézie u potkanov [30]. Z našej štúdii sme zistili, že etylacetát frakcia výrazne zlepšiť žalúdočné vredy a pôsobiaci najúčinnejšiu ochranu v porovnaní s ostatnými frakcie. Preto sa táto štúdia bola zameraná na stanovenie mechanizmu účinku ležiace pod profylaktický účinok etylacetát frakcií, vznikajúce MEMC proti žalúdočných lézií u potkanov.
Pylori-ligačního model použitý v tejto štúdii, je jedným z najviac používaných modelov štúdium vplyvu liekov na žalúdočnej kyseliny a sekréciu hlienu. Vredy vyvinuté ligácia pyloru koniec žalúdka je spôsobené zvýšením žalúdočnej kyseliny chlorovodíkovej (HCl), sekrécia a /alebo stasis kyseliny, čo vedie k auto trávenie žalúdočnej sliznice a zrútenie žalúdočné slizničnej bariéry [31]. Preto látky, ktoré sú schopné zvýšiť sekréciu hlienu (cytoprotektívny) a /alebo znížiť sekréciu žalúdočných agresívnych faktorov, ako je pepsín a kyselina sú účinnými gastroprotektívnymi činidlá [32]. Na druhej strane, vred modelu etanol vyvolané je užitočná pre štúdium účinnosti potenciálnych liečiv alebo testovanie činidiel, ktoré majú cytoprotektívny a /alebo antioxidačné aktivity [33]. Metódy
Chemicals
Chemické látky použité v táto štúdia sú analytických tried a bolo ho pripraviť bezprostredne pred použitím. Boli použité nasledujúce látky: Ranitidín (Sigma Aldrich, USA), absolútna etanol (Fischer Scientific, USA), N-ethylmaleimide (NEM) (Sigma-Aldrich, USA), N G-nitro-L-arginín metylestery (L-NAME) (Sigma-Aldrich, USA), karbenoxolón (CBX) (Sigma-Aldrich, USA) a dietyléter (Fischer Scientific, USA).
Rastlinný materiál
Muntingia calabura
listy boli odobraté z ich prirodzeného prostredia v Shah Alam, Selangor, Malajzia, v období od mája do augusta 2010. závod bol identifikovaný botanikom z inštitútu biologických vied (IBS) University Putra Malajzia (UPM), Serdang, Selangor. Čo zodpovedá zľave exemplár SK 2466/14, bola uložená v UPM IBS laboratórium prírodných produktov herbára.
Extrakcia a frakcionácie Muntingia calabura
opustí
metódou opísanou Zakaria et al. [26] a Sufian et al. [28] sa použije na prípravu surového extraktu z Muntingia calabura
listy a jeho frakcie, resp. Päťsto gramov vyzretých listov sa sušia na vzduchu pri izbovej teplote (27 ±
2 ° C) po dobu 1-2 týždňov a zem na jemný prášok. Metanol (MeOH) bol použitý ako rozpúšťadlo pre extrakciu. Prášok sa namočí v metanole v pomere 1:20 (hmotnosť /objem) po dobu 72 hodín. Výsledná zmes sa filtruje za použitia filtračné lieviky, bavlna a Whatman No. 1 filtračný papier. Namáčanie a filtrácia sa opakujú na zvyšku na dvakrát. Filtrát z každej extrakcie sa spoja a odparí sa na rotačnej odparke pri teplote 40 ° C za zníženého tlaku a získa sa metanolový extrakt z Muntingia calabura
(MEMC). Vysušený surový extrakt bol suspendovaný v metanole a destilovanej vody (dH 2O) vody v pomere 1: 2, čím sa získa vodný roztok MeOH. Zmes sa postupne rozdelí s rôznymi rozpúšťadlami, ktoré boli petroléteru a etylacetátu, čím sa získa zmes petroléteru frakcia (PEF), etylacetát frakcie (EAF). Tieto frakcie sa prefiltruje a odparí do sucha za zníženého tlaku za použitia rotačného odparovača. MEMC, PEF a EAF boli podrobené HPLC pre kvantifikáciu zlúčeniny všeobecného záujmu, ktorý by mohol byť spojený s žalúdočným efektu extraktu.
Identifikácia a kvantifikácia phytoconstituents prítomných v EAF pomocou HPLC
metódy opísanej Zakaria et al. [34] s menšie úpravy bol prispôsobený na vykonanie HPLC analýzy EOP. Stručne, 10 mg vzorky sa suspenduje v 1 ml metanolu. Roztoky sa filtrujú cez filtračné vložky (veľkosť pórov 0,45 um), pred použitím. Vzorka bola analyzovaný za použitia systému HPLC (Waters Delta 600 600 Controller) s detektorom fotodióda poľom (PDA) (Waters 996). Bol použitý C 18 (4,6 mm vnútorný priemer x 250 mm), naplnené časticami s priemerom 5 um. Mobilné fázou bola voda s obsahom 0,1% kyseliny mravčej (A) a acetonitril (B). Počiatočné podmienky boli 85% A a 15% B s lineárnym gradientom dosiahne 25% B v čase t = 12 min
. Tento stav sa udržiava počas 10 minút. B bola znížená späť na 15%, pôvodného stavu, a bol udržiavaný až do t = 35 min
. V čase t = 25 min
, program sa vráti na predvolené zloženie rozpúšťadlá. Rýchlosť prietoku bola 1,0 ml /min, injekčný objem bol 10 ul a vlnová dĺžka bola 280 nm pre kyseliny gallová a 330 nm na quercetin. Stĺpec Pec bola nastavená na 27 ° C. Zásobné roztoky štandardov odkazy boli pripravené v metanole v koncentrácii 1 mg /ml. Chromatografické piky boli potvrdené porovnaním retenčný čas s tými z referenčných štandardov a zodpovedajúcimi UV spektra. Kalibračná krivka kyseliny gallová bola Y = 29562x + 102777 (R 2 = 0,9969) a quercetin bola Y = 43236x - 81458 (R 2 = 0,999). Všetky operácie chromatografie boli vykonávané pri teplote miestnosti a v troch opakovaniach. HPLC analýza bola vykonaná v Laboratóriu Phytomedicine, Liečivé rastliny Division, Forest Research Institute Malajzia (FRIMA), Kepong, Malajzia.
UHPLC-ESI analýzu
Systém UHPLC bola vykonaná na systéme Dionex 3000 UHPLC získala od Thermo Fisher Scientific (USA), ktorý sa skladal z autosamplery vybavené kolóne rúrou, chladičom zásobník priestoru a binárnym čerpadlom s postavená v roku odplyňovač rozpúšťadlá. Chromatografická separácia bola vykonaná na kolóne BEH C18 UHPLC, 100 mm x 2,5 um, 1,7 um (Waters) pri prietokovej rýchlosti 0,3 ml /min. Mobilná fáza boli použité (A) 0,1% kyselina mravčia vo vode a (B) 0,1% kyselina mravčia v acetonitrile. Gradient začal s 10% mobilnej fázy B, dosahujúci 20% mobilnej fázy B po 5 min, 60% mobilnej fázy B po 17,0 min, na izokratické eluovanie 90% B po dobu 3 min. Gradient dosiahnuté počiatočné podmienky boli držané po dobu 2 minút ako re-vyrovnajte kroku. Injekčné objem bol 10 ul, teplota kolóny bola udržiavaná na 40 ° C. Systém UHPLC bol spojený s lineárnou ion-trap-Orbitrap hmotnostným spektrometrom Q Exactive od Thermo Fisher Scientific (U.S.A.), vybaveného zdrojom ionizácie elektrosprejová (ESI). Hmotnostné detekcia sa vykonáva v rozmedzí 150-1500 m /z. Zdroj ESI bol prevádzkovaný v režime záporných iónov za týchto špecifických podmienok: zdroj napätia, 3,2 kV; plášť plyn, 35 arbitrárne jednotky; pomocný plyn, 15 ľubovoľná jednotka; zamiesť plyn, 10 ľubovoľný jednotka; a kapilárnej teplota 320 ° C. Dusík (> 99,98%) bol zamestnaný ako plášť plynu, pomocné a zametať plyn. kontrolné prístroje a zber dát bolo vykonané pomocou software Chameleon 6,8 a softvér Xcalibur 2.2 (Thermo Fisher Scientific)
Zvieratá
Tieto experimenty boli vykonávané na samcoch potkanov Sprague Dawley. (180-200 g, 8-10 týždňov). Boli získané z oddelenia zvierat, Lekárska fakulta a vedy zdravie, UPM, Malajzia. Zvieratá boli držané v polypropylénových klietkach s dreveným holenie, kŕmených štandardné pelety a ponechaný voľný prístup k vode. Boli držaní v izbovej teplote (27 ± 2 0C; 70-80% vlhkosť, 12 h svetlo /tma cyklus) v Animal blokovacej jednotkou (UPM). Pred začatím všetkých testoch boli potkany lačno. Štandardné liečivá a MEMC boli podávané orálne (P.O.) žalúdočnou sondou 8% Tween 80 (10 ml /kg) ako vozidlo. Používanie zvierat v tejto štúdii bola schválená starostlivosť o zvieratá a použitý výborom (ACUC) z UPM (schválenia No: UPM /FPSky /PADS /BR-Uuh /00474)
Stanovenie mechanizmus stojaci pred žalúdočným aktivitu. EOP
pylorických podviazanie
Metóda Shay et al. [35] s miernymi úpravami bola použitá na vykonanie pyloru ligácia. Krysy boli náhodne rozdelené do 5 skupín, so šiestimi potkanoch v každej skupine. Skupina-I bol kontrolnej skupine podávaný s 8% Tween 80 (vozidlá), perorálne (P.O.), skupina II bola pozitívna kontrola podáva s ranitidínom v dávke 100 mg /kg (po), pričom pre skupinu-III, -IV a- v potkany boli podávané spolu s EOP (100, 250 a 500 mg /kg, v danom poradí). Pyloru ligácia bola vykonaná na 48 hodín na lačno potkanov 1 hodiny po podaní testovaných zlúčenín. Pri ľahkej anestézii vyvolanej pomocou ketamín HCl (100 mg /kg intramuskulárne) a xylazínu HCl (16 mg /kg, intramuskulárne), 2 cm dlhé strednej línie brušnej rez A bol vykonaný, tesne pod hrudnou kosťou. Pylorická časť žalúdka bola jemne mobilizáciu a opatrne ligován hodvábnym ligaturou pyloru okolo zvierača v tesnom uzlom. Pozornosť bola venovaná zatiaľ čo viazanie uzla, aby nedochádzalo k rušeniu žalúdočnej krvného zásobenia. Brušný rez bola prišitá, koža bola zbavená krvi škvŕn alebo krvácanie a zvieratá bola ponechaná zotaviť z anestézie.
Posúdenie žalúdočnej sliznice lézie
boli zvieratá usmrtené 6 hodín po podviazanie vystavením dietyléter a zlomenie väzu. Žalúdky boli odstránené, a obsah sa vypustí, zhromaždené a centrifugovány. Žalúdok bol otvorený pozdĺž veľkého zakrivenia pre stanovenie poškodenia lézie, ako je popísané Balan et al. [36]. Ochrana percentách bola vypočítaná podľa tohto vzorca: $$ \\ mathrm {Protection} \\ \\ left (\\% \\ right) = \\ frac {\\ left (\\ mathrm {U} \\ mathrm {A} \\ \\ mathrm {kontrolný} \\ \\ hbox {-} \\ \\ mathrm {U} \\ mathrm {A} \\ \\ mathrm {p} \\ mathrm {r} \\ mathrm {e} \\ hbox {-} \\ mathrm {zaobchádzané} \\ \\ mathrm {skupina} \\ right)} {\\ left (\\ mathrm {U} \\ mathrm {a} \\ \\ mathrm {kontrolné} \\ right)} \\ times 100 \\% $$ Stanovenie objemu, pH, voľného a celkového kyslosť žalúdočnej obsah
vypustený žalúdočného obsahu sa odstreďuje počas 10 minút pri 2500 otáčkach za minútu na odstránenie pevnej nečistoty. Objem a pH žalúdočnej šťavy bola meraná. Žalúdočnej šťavy bola tiež podrobená voľného a celkového odhadu kyslosti v súlade s metódou opísanou v Srivastava et al. [37]. Titrácia s 0,01 N hydroxidom sodným metyl oranžovej činidlom sa vykonáva tak dlho, kým sa farba roztoku sa stal nažltlé účelom stanovenia voľných mastných kyselín. Objem pridanej alkálie bola zaznamenaná. Potom sa dve až tri kvapky fenolftaleínu sa pridá k roztoku. Roztok bol titrovaný, kým sa neobjaví definitívny červeného tónu. Celkový objem roztoku hydroxidu sodného bolo uvedené. Tento objem zodpovedá celkovej kyslosti. Kyslosť bola vypočítaná podľa tohto vzorca: $$ \\ mathrm {kyslosť} = \\ frac {\\ mathrm {Volume} \\ \\ mathrm {z} \\ \\ mathrm {NaOH} \\ times \\ mathrm {normalita} \\ \\ mathrm {z} \\ \\ mathrm {NaOH} \\ times 100} {0.1} \\ mathrm {m} \\ mathrm {e} \\ mathrm {q} /\\ mathrm {l} $$ Odhad bielkovín
celkový obsah bielkovín v žalúdočnej šťavy bola odhadnutá podľa Lowryho metódou je upravený od Lowry et al. [38] pomocou alkalickej činidlo meď a činidlo Folin je. Farba vyvolaná bola odpočítaná pri 660 nm. Obsah bielkovín sa vypočíta zo štandardnej krivky pripravenej s bovinného sérového albumínu a bielkovín koncentrácia bola vyjadrená ako mg /ml žalúdočnej šťavy.
Odhad žalúdočnej steny hlienu obsah
spôsobu opísaného v Corne et al. [39] s miernymi úpravami bola použitá na stanovenie obsahu žalúdočnej steny hlienu. Žalúdok bol otvorený pozdĺž veľkého zakrivenia, zvážené a ponorené do 10 ml 0,1% Alcian modrí (0,16 M sacharózy v 0,05 M octan sodný, pH 5,8) počas 2 hodín. Žalúdok bol potom dvakrát premyté v 0,25 M roztoku sacharózy (15 min) pre odstránenie nadmerného farbivo. Zostávajúce farbivo, ktoré v komplexe s žalúdočnej sliznice sa extrahuje 0,5 M MgCl 2. Glandulárna časť zostala v tomto roztoku po dobu 2 hodín s prerušovaným miešania po dobu 1 min v každom intervale 30 minút. Výsledný modrý extrakt sa intenzívne pretrepáva s rovnakým objemom dietyléteru až do vytvorenia emulzie. Výsledná emulzia sa odstreďuje 10 minút pri 3600 otáčkach za minútu. Absorbancia vodnej vrstvy bola odpočítaná pri 580 nm za použitia spektrofotometra. Koncentrácia Alcian modrej bola vypočítaná pomocou štandardnej krivky a výsledky boli vyjadrené v mg Alcian modrá /g vlhkej tkaniva.
Etanol indukovanej žalúdočnej sliznice lézie v L-NAME alebo NEM liečeným potkanom
úloha endogénneho NO a zapojenie sulfhydrylové (SH) zlúčenín v žalúdočnom účinku EAF boli hodnotené za použitia metódy opísanej Takayama et al. [40]. Krysí samci boli rozdelení do 9 skupín a vopred (ip) s fyziologickým roztokom, L-NAME (N-nitro-L-arginín metylesteru, 70 mg /kg), inhibítor NO syntézy alebo NEM (N-ethylmaleimide, 10 mg /kg) SH zlúčenina blokátor. Tridsať minút po predbežnom spracovaní, boli podávané zvieratám (P.O.) vozidla (8% Tween 80), karbenoxolón (100 mg /kg) alebo EAF (500 mg /kg). Šesťdesiat minút neskôr, sú všetky skupiny dostali absolútneho etanolu (5 ml /kg, P.O.), pre vyvolanie žalúdočných vredov. Všetci potkany boli usmrtení 1 hodinu po podaní etanolu vystavením dietyléterom a cervikálny dislokáciou. Žalúdok bol odstránený a žalúdka poškodenie bola stanovená ako je popísané vyššie. Vzhľadom k tomu, EAF vykazovali účinok závislý od dávky a pôsobí značný ochranný účinok proti žalúdočnej sliznici v žalúdočných vredov modeli etanol-indukovanej, najvyššia účinná dávka (500 mg /kg) bol použitý v tejto štúdii.
Biochemická analýza
Meranie superoxiddismutázy (SOD), glutatión (GSH) úrovne a katalázy (CAT) aktivitu
žalúdočné tkaniva krýs vopred liečených nosičom (8% Tween 80), ranitidínu (100 mg /kg) alebo EOP (100, 250 a 500 mg /kg) a následne vredov indukcie pomocou absolútneho etanolu po dobu 1 hodiny boli použité pre stanovenie hladiny SOD, GSH a aktivitu CAT. Žalúdočné tkanivo sa nareže na kúsky a presná hmotnosť bola zaznamenaná. Tkanivá boli homogenizované v homogenizátora s použitím vhodného studeného pufra a potom boli centrifugovány pri 10000 g počas 15 minút pri teplote 4 ° C. Supernatanty boli použité pre stanovenie aktivity CAT a úrovňou SOD a GSH. Koncentrácia proteínu v supernatante bola meraná metódou Bradford [41] za použitia hovädzieho sérového albumínu (BSA) ako štandardu. Hladiny SOD, GSH a mačky boli stanovené pomocou komerčných testovacích súprav v súlade s pokynmi výrobcu, respektíve (superoxiddismutázy Testovacia súprava, Glutatión Testovacia súprava a katalázy Testovacia súprava, Cayman Chemical Company, Ann Arbor, MI, USA).
meranie malondialdehydu (MDA) MDA úrovni
hladiny boli merané v žalúdočnej tkanive získané z žalúdočného vredu vyvolaného etanolom. Žalúdok tkanivo bolo homogenizované a centrifugována ako bolo popísané vyššie a supernatant sa určovali MDA pomocou ImmunoSorbent assay kit (enzyme-linked USCN Life Science Inc., Atlanta, GA, USA). Optická hustota bola meraná pri 450 nm a výsledky boli vyjadrené ako ng /mg proteínu.
Stanovenie prostaglandínu E2 (PGE2)
PGE 2 úrovne boli stanovené v žalúdočnej tkanive získané z etanolu žalúdočné vyvolanej vred. Supernatant homogenizované a odstredí sa žalúdočné tkaniva bola použitá pre určenie PGE 2 pomocou prostaglandínu e 2 Express EIA kit (Cayman Chemical Company, Ann Arbor, MI, USA). Optická hustota bola meraná pri 412 nm. Tieto 2 koncentrácia PGE bola normalizovať vzhľadom obsahu bielkovín a výsledky boli vyjadrené ako pg /mg proteínu.
Stanovenie koncentrácie NO
NO hladina v žalúdočnej sliznici bola vyhodnotená ako koncentrácia celkového dusičnanu /dusitanu pomocou Griessova činidla [42]. Stručne povedané, žalúdočná Homogenát boli pripravené v 50 mM pufri fosforečnanu draselného (pH 7,8). Homogenát boli odstredené pri 4000 otáčkach za minútu počas 10 minút pri teplote 4 ° C. Päťdesiat mikrolitrov Griessova reakčného činidla (0,1% N- (1-naftyl) ethylenediamide dihydrochloridu, 1% sulfát v 5% kyseliny fosforečnej), bol pridaný do 50 ul supernatantu a bola meraná absorbancia pri 540 nm po 10 minútach. dusitan sodný bol použitý ako štandard v tomto teste pre vytvorenie štandardnej krivky.
Štatistická analýza
Výsledky boli vyjadrené ako priemer ± štandardná chyba strednej hodnoty (SEM) a analyzované s použitím Jedna analýza rozptylu (ANOVA), nasledované Dunnettovým hoc
testu poštou alebo skúškou Newman-Keuls. Výsledky boli považované za významné pri p <
0.
05.
Výsledky
identifikácie a kvantifikácie kyseliny gallová a quercetin
HPLC snímanie odtlačkov prstov MEMC, PEF a EOP odhalila prítomnosť galského kyseliny v lambda max 216.6-272.0 nm a quercetin pri l max 255,5 až 370,6 nm (obr. 1a a b). Stúpli z týchto látok v MEMC, PEF alebo EAF zvýšila plochy vrcholu, ktorý zodpovedá rovnakej lambda maximálne hodnoty zlúčenín. Výsledok kvantifikácie uvedené v tabuľke 1 ukazujú, že EAF obsahuje najvyššie množstvo kyseliny gallová (39,89 ± 0,96 mg /g extraktu) a quercetin (9,36 ± 0,29 mg /g extraktu) a následne MEMC a PEF. Obr. 1 A a B: HPLC analýza MEMC, PEF a EAF vykonáva pri vlnovej dĺžke 330 nm odhalila prítomnosť quercetin pri X max 255,5 až 370,6 nm pri RT 3,696 min. Stúpli z quercetin s extraktov zvýšila plochy vrcholu, ktorý zodpovedá rovnakému X max hodnota zlúčenín. c a d: HPLC odtlačky MEMC, PEF a EOP pri vlnovej dĺžke 280 nm odhalila prítomnosť gallicacid pri X max 216,6 až 272,0 nm pri RT 4,204 min. Stúpli kyseliny gallová s extraktov zvýšila plochy vrcholu, ktorý zodpovedá rovnakej hodnoty X max zlúčenín
Tabuľka 1 gálová kyselina a zloženie quercetin v MEMC a jeho aktívnych frakcií (PEF a EAF) v mg /1 g extraktu. Výsledky sú vyjadrené ako priemer ± štandardnej odchýlky (SDS) z troch stanovení
zlúčenín
MEMC
PEF
EOP
kyselina galskej (mg /g)
11,97 ± 0,27
3,40 ± 0,01
39,89 ± 0,96
quercetin (mg /g)
4,83 ± 0,16
8,81 ± 0,44
9,36 ± 0,29
identifikácia fenolických látok v EAF
EAF bola analyzovaná na základe presných objemov dát z molekulárnych iónov, v ktorých boli detekované ióny predbežne identifikované podľa ich generovaného molekulárnym vzorcom, na základe analýzy dát softvér (Xcalibur), ktorá poskytla zoznam možné elementárne vzorce, spolu s využitím štandardu ak je k dispozícii, a po dôkladnom prieskume literatúry.
široko prijímaný prah presnosť pre potvrdenie elementárnych kompozícií bola stanovená na 5 ppm. UHPLC-ESI analýza EOP odhalila prítomnosť 22 fenolových zlúčenín (tabuľka 2), ktorý uvádza najvyšší počet, retenčný čas, pozorovať m /z China vygenerovaného molekulárnej vzorec a navrhovanej zlúčeninu detegovanou. Obrázok 2 zodpovedá základné vrchol chromatogramu v záporných iónov, s molekulou štruktúrou ermanin, kaempferide, pinobaksin a pinostrobin na obr. 3.Table 2 Fenolické látky zistené v EOP podľa UHPLC-MS
Peak č
tR (min)
[MH] -
Error (ppm)

Formula
Identifikácia
1.
0,45
169,01376
3,433
C7H5O5
galský kyselinu
2.
2,34
163,03978
4,964
C9H7O3
Protocatechuic kyselina
3.
3,10
193,05020
3,443
C10H9O4
ferulová kyseliny
4.
4,53
599,10547
3,879
C28H23O15
kvercitrín-2 "-O-gallát
5.
4,93
939,11377
4,220
C41H31O26
Pentagalloyl -hexoside II
6.
5,05
447,09421
4,523
C21H19O11
kamferolem-3-O
-galactoside
7.
5,31
317,0308
5,130
C15H9O8
myricetínu
8.
6,20
193,08661
3,569
C10H9O4
Isoferulic kyselina
9.
6,91
583,11053
3,941
C28H23O14
Afzelin-O-gallát
10.
7,35
301,03586
4,023
C15H9O7
Quercetin
11.
7,42
603,07928
3,894
C30H19O14
Quercetin dimér
12.
7,67
255,06636
4,605 ​​
C15H11O4
Pinocembrin
13.
8,14
593,13116
3,697
C30H25O13
kamferolem-3-O
-glucoside
14.
8,18
315,05196
6,478
C16H11O7
Rhamnetin
15.
8,55
271,06094
3.099
C15H12O5
Pinobaksin
16.
8,94
285,04037
3,528
C15H9O6
kamferolem
17.
10,80
253,05063
4,326
C15H9O4
Chyrsin Aj
18.
11,67
253.05099
5,749
C15H9O4
Chyrsin II
19.
11,91
299,05597
3,195
C16H11O6
Kaempferide
20.
12,56
313,07245
5,703
C17H13O6
Ermanin Aj
21
12,78
313.07230
5.224
C17H13O6
Ermanin II
22.
13,32
269,08194
4,105
C16H13O4
Pinostrobin
obr. Obr. Obr. Všetci autori čítať a schválená konečná rukopis.

• Účinky nikotínu na žalúdočné myoelectrical aktivity v ICR mice
• Klinicko význam Claudin-4 v žalúdočnej carcinoma