Mehanizam (i) djelovanja počiva Gastroprotektivni učinak etil acetata frakcije dobivene iz sirove metanolu ostavlja ekstrakt Muntingia calabura

mehanizmom (ima) djelovanja počiva Gastroprotektivni učinak etilacetat frakcije dobivene iz sirove metanolu ostavlja ekstrakt Muntingia calabura
pregled apstraktne pregled pozadine pregled Muntingia calabura pregled L. (obitelj Muntingiaceae), poznatiji kao Jamajke trešnja ili kerukup Siam pregled u Maleziji, koristi se tradicionalno za liječenje raznih bolesti. Cilj ovog istraživanja je da se objasne moguće temeljne Gastroprotektivni mehanizme etil acetata frakcije (EAF) od Muntingia calabura pregled u metanolu, ostavlja ekstrakt (MEMC).
Metode pregled MEMC i njegove frakcije su podvrgnuti HPLC analize na identificirati i kvantificirati prisutnost njezinih fito-sastavnica. Mehanizam za gastroptotection EAF dodatno istražena je primjenom modela pylorus podvezivanja inducirane želučane lezije kod štakora (100, 250 i 500 mg /kg). Makroskopska analiza želuca, evaluacija želučanih parametara sadržaja kao što su volumen, pH, slobodne i ukupne kiselosti, procjena proteina i kvantifikaciju sluzi provedeno. Sudjelovanje dušikovog oksida (NO) i sulfhidrilnim (SH) spojeva ocijenjena je i superoksid dismutaza (SOD), gluthathione (GSH), katalaze (MAČKA), malondialdehida (MDA), prostaglandina E 2 (PGE 2) te je određena razina NO u etanol izazvana homogenata želudac tkiva. pregled Rezultati
HPLC analiza potvrdila prisutnost kvercetina i galne kiseline u EAF. U pilorus-podvezivanja modela, EAF značajno (p izvoznici < 0,001) spriječiti želučane Formiranje lezija. Volumen želučanog sadržaja i ukupnog sadržaja proteina značajno smanjen (p pregled < 0,01 i p pregled < 0,05), dok je slobodna i ukupna kiselost smanjene u dozama od 250 i 500 mg /kg (p
< 0.001 i p pregled i 0.05, respektivno). EAF također povećan sadržaj sluzi značajno (p pregled < 0,001). Prethodna obrada s N-nitro-L-arginin, metil ester (L-NAME) ili N-etilmaleimidom (NEM) reverzne Gastroprotektivni aktivnost EAF. EAF tretman značajno suzbija SOD, GSH i MAČKA aktivnost i PGE 2 i NO razini uz smanjenje MDA razini, u odnosu na skupinu vozila pregled. Zaključci pregled Zaključno, temeljni Gastroprotektivni mehanizmi EAF mogao biti povezan s protusekretornih, sudjelovanje sluzi, antiperoxidative, unapređenje antioksidativni status, modulacija NO i SH spojeva, stimulacija PGE 2, kao i prisustvo kvercetina i galne kiseline. pregled Ključne riječi pregled Muntingia calabura
Frakcija želuca antisekretornih antioksidansima Dušikov oksid sulfhidril spoj prostaglandin Kvercetin galne kiseline Pozadina pregled, želučani ulkus je jedan od glavnih gastrointestinalnih poremećaja koji utječu na veliki broj ljudi širom svijeta, a raste u pojavi i učestalosti u svijetu [1]. Neki autori želučanog ulkusa kao nova "kuga" iz 21. stoljeća [2]. On je predviđa da 14,5 milijuna od svjetske populacije su pogođeni želučanog ulkusa sa stopom smrtnosti od 4,08 milijuna [3]. Patofiziologija čira na želucu povezana s neravnotežom između agresivnog i zaštitnih faktora u želucu. Želučane sluznice oštećenja nastaje kada štetni faktori "preplaviti" netaknuti za sluznicu obranu ili slabljenje mukozne obrambenih mehanizama. [4] U štetnih čimbenika u ovom kontekstu uključuju alkohol gutanje, kiselina i pepsin lučenje, lošu prehranu, stres, reaktivnih vrsta kisika (ROS), upotreba nesteroidnih protuupalnih lijekova (NSAR) i Helicobacter pylori pregled infekcije [5, 6]. S druge strane, ključni čimbenici obrane i mehanizme koji pružaju sluznice obranu uključiti dovoljno lučenje sluzi i sluznice protok krvi, bikarbonat izlučivanje, netaknutu sluzi barijera, prostaglandini, površinski aktivne fosfolipide, povećana razina antioksidansa, aktivnost anti-upalnih spojeva i odgovarajuća razine dušikovog oksida (NO) [6-8].
Trenutno, prevencija i liječenje želučanih čireva je stekao puno interesa i postao i važan izazov koji stoji pred medicine danas. Do sada, postoji nekoliko pristupa koji se koriste kako bi se spriječilo želučane čireve, koji uključuju potencijaciju sluznice dodavanje uz smanjivanje izlučivanja kiseline i njegove neutralizacije, stimulacije želučane sintezu mucina, poboljšanje antioksidacijskog razina u želucu, i inhibiciju Helicobacter pylori pregled rast [9]. Izlučivanje želučane kiseline Smatra se da je središnji dio želučanog ulkusa usprkos prisutnosti mnogih uzročnih čimbenika [7] te je stoga inhibicija lučenja želučane kiseline imaju tendenciju da se ključni terapeutski cilj za bolesti ulkusa [10]. S druge strane, drugi ključni čimbenik u patogenezi želučanog ulkusa je proizvodnja reaktivnih kisikovih (ROS). Proizvodnja ROS i popratno smanjenje antioksidacijskog kapaciteta uzrokuje oštećenja sastojaka osnovnim stanicama, koje su proteini, lipidi i nukleinske kiseline, što je rezultiralo u formiranju toksične tvari i uzrokuje smrt stanica zbog ekstremne reaktivnosti [8, 11]. Stoga, suzbijanje stvaranja ROS i lučenje želučane kiseline su neophodni za liječenje ovih patologija [12].
Sadašnji ljekovita liječenje želučanih čireva uključuju kiselinske blokatori koji smanjuju izlučivanje kiseline, inhibitori protonske pumpe, antibiotici da se uklone Helicobacter pylori i tkiva obloge zaštitu, kao što su sukralfat i bizmuta cholinergics [13, 14]. Eventhough su ti lijekovi smanjio morbiditet stope, ali oni su često povezane s neželjenim štetnim učincima kao što su preosjetljivost, impotencija, aritmije, poremećaja hematopoeze, ginekomastija i otpornosti na antibiotike u dugoj vožnji [15, 16]. Nadalje, ti dostupni lijekovi imaju visoku stopu relapsa, nisku učinkovitost u liječenju želučanih čireva i često su skupi [5, 9, 10]. Dakle, postoji potreba da se otkriju učinkovitiji i sigurno alternativne terapije za liječenje želučanog ulkusa. U tom kontekstu, korištenje ljekovitog bilja dobila je interes i zarobljen pozornost mnogih istraživača. Biljni ekstrakti mogu biti korisni i služe kao novi izvor lijekova u liječenju želučanih čireva, pri čemu antisekretornih, citozaštitna i antioksidativno djelovanje, samostalno ili u kombinaciji, su tri glavne funkcije jedne Gastroprotektivni agenta, koji igraju ključnu ulogu u želučane sluznice zaštita [17].
biljka Muntingia calabura
L. (obitelj Muntingiaceae), poznatiji kao Jamajke trešnja ili kerukup Siam pregled u Maleziji, široko je rasprostranjena u cijeloj toplim područjima Azije [18]. Nekoliko ljekovitog koristi su dokumentirani na različitim dijelovima ovog stabla u istočnoj i jugoistočnoj Aziji, kao i tropske Amerike. Muntingia calabura je
lišće, cvijeće, laje i korijeni su korišteni kao narodni lijek za liječenje glavobolja, groznica i početni hladno. Prema peruanskom folkloru, listovi se koriste za pružanje reljef iz želučanog ulkusa i smanjiti oticanje žlijezda prostate [19]. Osim toga, oni također se koriste kao antiseptik, protiv grčeva i antidyspeptic agenta [20, 21].
S druge strane, Muntingia calabura pregled je izvijestio da posjeduje široki spektar farmakoloških aktivnosti, koje su znanstveno dokazane. To su antitumorski [20, 22], antibakterijsko [23], blokiranje boli [19, 24, 25], protuupalno, antipiretik [25], antioksidansa i antiproliferativnih [26] aktivnosti je pokazao lišća Muntingia calabura pregled, dok je nekoliko vrsta spojeva su izolirani i identificirani iz lišća, korijenja i matičnih kore Muntingia calabura pregled [20-22, 27, 28]. Razne fitokemikalije su otkrivena u lišću Muntingia calabura pregled, kao što su flavonoidi, saponini, tanini i triterpeni [29].
U našem prethodnom istraživanju, koje smo izvijestili Gastroprotektivni aktivnost nekoliko frakcija dobivenih iz metanola ekstrakta sirove od Muntingia calabura pregled (MEMC) ostavlja protiv etanolom inducirana želučane lezija kod štakora [30]. Iz našeg istraživanja, ustanovili smo da etil acetat frakcija znatno ublažiti želučane čireve i uložili najviše učinkovitu zaštitu u odnosu na ostale frakcije. Stoga ova studija imala je za cilj da se odredi mehanizam djelovanja počiva profilaktički učinak etilacetat frakcije izvedene iz MEMC protiv želučanih lezija u štakora.
Pilorus-podvezivanja model upotrijebljen u ovoj studiji je jedan od najčešće korištenih modela proučavati učinak lijekova na želučane kiseline i lučenja sluzi. Čir razvijene povezivanjem pilorusa kraj želuca uzrokovana povećanjem želučane solne kiseline (HCl) lučenja i /ili zastoj kiseline, što dovodi do automatskog probavu želučane sluznice i sloma želučane sluznice barijera [31]. Stoga, sredstva koja su u stanju povećati sekrecije (citozaštitna) i /ili smanjiti sekreciju želučane agresivnih faktora, kao što su pepsin i kiselina su učinkovita sredstva Gastroprotektivni [32]. S druge strane, etanol-induciranom modelu čir je korisno za proučavanje učinkovitosti potencijalnih lijekova ili ispitivanja sredstva koja imaju zaštite stanice i /ili antioksidansa aktivnosti [33].
Metode pregled Chemicals pregled Kemikalije korištene u ovo istraživanje su analitičkih ocjenama te je odmah pripremiti prije upotrebe. Korišteni su sljedeći lijekovi: ranitidin (Sigma Aldrich, SAD), apsolutnim etanolom (Fischer Scientific, USA), N-etilmaleinimida (NEM) (Sigma-Aldrich, USA), N G-nitro-L-arginin metil estere (L-NAME) (Sigma-Aldrich, SAD), karbenoksolona (CBX) (Sigma-Aldrich, USA) i dietil etera (Fischer Scientific, USA). pregled Biljni materijal pregled Muntingia calabura
listovi su prikupljeni iz njihovog prirodnog staništa u Shah Alam, Selangor, Malezija, između svibnja i kolovoza 2010. biljka je identificiran od strane botaničara iz Instituta biomedicine (IBS), Universiti Putra Malaysia (UPM), Serdangu, Selangor. Bon primjerak, SK 2466/14, je pohranjena u UPM IBS Laboratory of Natural Products herbarij.
Ekstrakcija i frakcioniranje Muntingia calabura pregled ostavlja pregled metodi opisanoj od Zakaria et al. [26] i Sufian et al. [28] je korišten za pripremu sirovog ekstrakta Muntingia calabura
lišća i njegovih frakcija, respektivno. Petsto grama sazrelih listova su osušene na zraku, na sobnoj temperaturi (27 ± 2 pregled ° C) tijekom 1-2 tjedna i mase u fini prah. Metanol (MeOH) se koristi kao otapalo za ekstrakciju. Prašak je natopljena u MeOH u omjeru 1:20 (w /v) tijekom 72 sata. Smjesa je filtrirana pomoću filtera lijevka, pamuk i Whatman br 1 filter papir. Namakanja i filtracija su ponovljeni na ostatak za dva puta. Filtrat iz svake ekstrakcije se spoje i ispare na rotacijskom isparivaču na 40 ° C pod sniženim tlakom da se dobije ekstrakt metanola Muntingia calabura pregled (MEMC). Osušeni sirovi ekstrakt je suspendiran u MeOH i destilirana voda (dH 2O) vode u omjeru 1: 2, kako bi se dobilo vodenu otopinu MeOH. Smjesa se uzastopno razdijeli s različitim otapalima, koja su petrol etera i etil acetata, čime se dobije eter dio petrol (PEF), etil-acetat frakcija (EAF). Frakcije su filtrirani i upareni do suhog u vakuumu pomoću rotacionog isparivača. MEMC, PEF i EAF bili podvrgnuti HPLC kvantificirati spoj interesa, koji bi mogao biti povezan s Gastroprotektivni učinak ekstrakta a. Pregled Identifikacija i kvantifikacija phytoconstituents prisutnih u EAF putem HPLC pregled metoda opisanih Zakaria et al. [34] uz male modifikacije prilagođena provesti HPLC analizu EAF. Ukratko, 10 mg uzorka je suspendirano u 1 ml metanola. Otopine su filtrirane kroz filter cartridge (veličina pora 0,45 um) prije uporabe. Uzorak je analiziran u HPLC sistem (Waters Delta 600 s 600 Controller) sa fotodiodni detektor rasporeda (PDA) (Waters 996). Korištena je C 18 kolona (4,6 mm u promjeru x 250 mm), pakiran sa 5 um čestica promjera. Mobilna faza je voda koja sadrži 0,1% mravlje kiseline (A) i acetonitril (B). Početni uvjeti su bili 85% A i 15% B s linearnim gradijentom od 25% B dostiže u t pregled = 12 min. Ovo stanje je održavano 10 min. B je reduciran nazad do 15%, u početno stanje, te je zadržana sve do t = 35 min
. U t = 25 min
, program se vratio na početni sastav otapala. Brzina protoka je bila 1.0 ml /min, injekcioni volumen je bio 10 ul, a valna duljina bile su 280 nm za galne kiseline i 330 nm za kvercetin. Kolona pećnice bila je postavljena na 27 ° C. Matične otopine standarda referenci su pripremljene u metanolu pri koncentraciji 1 mg /ml. U kromatografija vrhovi su potvrđene usporedbom vrijeme zadržavanja s onima referentnih standarda i odgovarajuće UV spektara. kalibracijska krivulja za galne kiseline je Y = 29562x + 102.777 (R 2 = 0,9969), a kvercetin je Y = 43236x - 81.458 (R 2 = 0,999). Sve operacije kromatografija se izvodi na sobnoj temperaturi i u triplikatu. Za HPLC analiza provedena je u laboratoriju phytomedicine, Ljekovito bilje Division, Šumarski institut Malezije (FRIM), Kepong, Malezija.
UHPLC-ESI analize
UHPLC sustava provedeno je na UHPLC sustavu Dionex 3000 dobivenih od Thermo Fisher Scientific (SAD) koja se sastojala od autosamplerom opremljen s koloni pećnicom, hladnjak ladica odjeljka i binarnog pumpe s ugrađenim u degazer otapala. Kromatografska separacija se izvodi na BEH C18 UHPLC kolona, ​​100 mm x 2.5 um, 1.7 um (Waters), uz brzinu protoka od 0,3 mL /min. Mobilne faze koji se koriste su: (A) 0,1% mravlje kiseline u vodi i (B) 0.1% mravlje kiseline u acetonitrilu. Gradijent počela je s 10% mobilne faze B, dostižući 20% mobilne faze B u 5 min, 60% mobilna faza B na 17,0 min, izokratska eluacija od 90% B kroz 3 min. Gradijent postignut održani su početni uvjeti za 2 min kao korak ponovnog kondicioniranja. Injekcijski volumen bio je 10 ul, a temperatura kolone je održavana na 40 ° C. UHPLC sustav spojen na linearni ion-trap-Orbitrap spektrometra masa Q Exactive iz Thermo Fisher Scientific (USA) koji je opremljen s elektrosprej ionizacije (ESI). Masa detekcija je provedena u rasponu od 150-1500 m /z. Izvor ESI je radio na bazi negativnog iona u sljedećim specifičnim uvjetima: napon izvora, 3,2 kV; plašt plin, 35 arbitrarnim jedinicama; pomoćni plin, 15 proizvoljna jedinica; pomesti plin, 10 proizvoljna jedinica; i kapilarna temperatura, 320 ° C. Dušik (> 99,98%) je bio zaposlen kao omatanje plin, pomoćni i pomesti plin. Kontrola instrumenta i prikupljanje podataka su izvedeni sa Kameleon 6.8 softvera i Xcalibur 2.2 softvera (Thermo Fisher Scientific) pregled Životinje pregled Eksperimenti su provedeni na muškim Sprague Dawley. (180-200 g; 8-10 tjedana). Oni su dobiveni iz Jedinice životinja, Medicinskog fakulteta i zdravstva, UPM, Malezija. Životinje su držane u polipropilenskim kaveze s drveta brijanja, hranjene sa standardnom pelete i slobodan pristup vodi. Oni su držani u sobnoj temperaturi (27 ± 2 0C; 70-80% vlage, 12 h svjetlo /tama ciklus) na gospodarstvu jedinici životinja (UPM). Prije sve testove, štakori su postili. Standardni lijekovi i MEMC davani su oralno (p.o.), sondom s 8% -tnom Tween 80 (10 ml /kg), kao vozila. Korištenje životinja u ovoj studiji je odobren od strane njegu životinja i korišten odbora (ACUC) od UPM (odobrenje br: UPM /FPSK /jastučići /BR-UUH /00.474) pregled Određivanje mehanizama kojima se temelji Gastroprotektivni aktivnost. EAF pregled pilorusa podvezivanje pregled Metoda Shay et al. [35] uz male modifikacije se koristi za obavljanje pilorusa podvezivanja. Štakori su nasumično podijeljeni u 5 skupina, sa šest štakora u svakoj grupi. Grupa-ja je kontrolna skupina primjenjuje se s 8% Tween 80 (vozila) oralno (PO), Grupa II bila je pozitivna kontrola primjenjuje s ranitidin od 100 mg /kg (PO), dok je za grupe III -IV i- V, štakori su davani s EAF (100, 250 i 500 mg /kg, redom). Pilorus ligaciju je izvedena na 48 sati, natašte, štakora 1 sat nakon primjene ispitivanih spojeva. Pod svjetlosnim anestezijom induciranih pomoću Ketamin HCl (100 mg /kg, intramuskularno) i ksilazina HCl (16 mg /kg, intramuskularno), 2 cm središnje linije abdominalni rez izvedena je, ispod sternuma. Pilorisa dio trbuha je blago mobilizirane i pažljivo veže sa svilenim povezom oko pyloric sfinktera u uskoj čvor. Njega je snimljena dok je vezanje čvor kako bi se izbjegle smetnje želuca prokrvljenost. Trbušni rez je zašivena koža je očišćena bilo krvi mrlja ili krvarenje i životinje su ostavljene da se oporave od anestezije. Pregled Procjena lezija želučane sluznice
životinje su žrtvovane 6 sati nakon ligacije izlaganjem dietil etera i cervikalna dislokacija. A želuci su uklonjeni, a sadržaj se iscijedi, prikupi i centrifugira. Želudac se otvoreni uzduž veće zakrivljenosti da se odredi oštećenja lezija kao što je opisano u Balan et al. [36]. Postotak zaštite izračunat je pomoću sljedeće formule: $$ \\ mathrm {Zaštita} \\ \\ lijevo (\\% \\ D) = \\ frac {\\ lijevo (\\ mathrm {U} \\ mathrm {A} \\ \\ mathrm {naredbe} \\ \\ hbox {-} \\ \\ mathrm {U} \\ mathrm {A} \\ \\ mathrm {p} \\ mathrm {r} \\ mathrm {e} \\ hbox {-} \\ mathrm {tretiraju} \\ \\ mathrm {skupinu} \\ desno)} {\\ lijevo (\\ mathrm {u} \\ mathrm {a} \\ \\ mathrm {naredbe} \\ D)} \\ puta 100 \\% $$ Određivanje obujma, pH, slobodna i ukupne kiselosti želučanog sadržaja Netlogu isušen želučani sadržaj se centrifugira 10 minuta na 2500 okretaja u minuti kako bi uklonili čvrstog otpada. Volumen i pH želučanog soka je mjerena. Želučanog soka je također podvrgnuta slobodnog i ukupnog procjeni kiselosti prema metodi opisanoj od Srivastava i sur. [37]. Titracijom s 0.01 N NaOH u metil narančasto reagensa se izvodi sve dok boja otopine postala žućkaste bi se odredila slobodne kiseline. Volumen lužine dodao je zabilježeno. Zatim, dvije do tri kapi fenolftaleinom se doda u otopinu. Otopina se titrira dok se ne pojave odredjene crvene tinges. Ukupni volumen NaOH zabilježen. Ovaj volumen odgovara ukupnoj kiselosti. Kiselost je izračunata pomoću sljedeće formule: $$ \\ mathrm {kiselosti} = \\ frac {\\ mathrm {Volume} \\ \\ mathrm {od} \\ \\ mathrm {NaOH} \\ puta \\ mathrm {normalnost} \\ \\ mathrm {od} \\ \\ mathrm {NaOH} \\ puta 100} {0,1} \\ mathrm {m} \\ mathrm {e} \\ mathrm {q} /\\ mathrm {l} $$ Procjena proteina pregled ukupni sadržaj proteina u želučanom soku procijenjena po Lowry-u metodi, prilagođenim Lowry et al. [38] pomoću alkalne bakrenog reagensa i Folin reagensa. Boja razvijen je očitana na 660 nm. Sadržaj proteina se izračuna iz standardne krivulje s serum albumina i proteina koncentracije goveđeg je izražena u mg /ml želučanog soka.
Procjena želučane stijenke sluzi sadržaj
metodi opisanoj od Corne et al. [39] uz male modifikacije je upotrijebljen za određivanje želučanog sadržaja zid sluzi. Želudac se otvoreni uzduž veće zakrivljenosti, izvagane i uroni se u 10 ml 0,1% Alcian blue (0,16 M saharoze u 0.05 M natrijevog acetata, pH 5.8) tijekom 2 sata. Želudac se zatim ispere dva puta u 0,25 M otopine saharoze (15 min svaki put), da bi se uklonio prekomjerne boju. Preostali boje koja kompleksira s želučanu sluznicu se ekstrahira s 0,5 M MgCl 2. Žljezdana segment je na tom, 2 h uz povremeno miješanje tijekom 1 min na svakih 30 min intervalima. Dobivena plava ekstrakt zatim se snažno protrese s jednakim volumenom dietil etera do stvaranja emulzije. Nastala emulzija se centrifugira 10 minuta na 3600 okretaja u minuti. Apsorbancija vodenog sloja je očitana na 580 nm korištenjem spektrofotometra. Koncentracija Alcian blue je izračunata pomoću standardne krivulje, a rezultati su izraženi u mg Alcian blue /g vlažnog tkiva.
Izazvana etanolom lezija želučane sluznice u L-NAME ili NEM prethodno obrađen štakora
ulogu endogenog NO i uključivanje sulfhidrilnom (SH) spojeva u Gastroprotektivni učinak EAF procijenjeni su primjenom postupka koji je opisao Takayama et al. [40]. Muški štakori su podijeljeni u 9 skupina i obrađene (ip) sa otopinom soli, L-NAME (N-nitro-L-arginina metilnog estera, 70 mg /kg) inhibitora NO sinteze ili NEM (N-etilmaleimidom, 10 mg /kg) sh spoj bloker. Trideset minuta nakon prethodne obrade, životinje su (p.o.) vozila (8% Tween 80), Karbenoksolona (100 mg /kg) ili EAF (500 mg /kg). Šezdeset minuta kasnije, sve skupine dobio apsolutni etanol (5 ml /kg, p.o.) da se pokrene želučanog ulkusa. Svi štakori su žrtvovani 1 sat nakon primjene etanola izlaganjem dietil etera i cervikalnom dislokacijom. Želudac je uklonjen i gastrointestinalnih oštećenja određena je kao što je gore opisano. Budući EAF izložena učinak ovisan o dozi, a vrši značajan zaštitno djelovanje protiv želučane sluznice u modelu čir na želucu etanolom inducirana, najviša djelotvorna doza (500 mg /kg), je bio korišten za ovu studiju. Pregled Biokemijska analiza pregled Mjerenje superoksid dismutaza (SOD), razine glutation (GSH) i katalaze (CAT) pregled želuca tkiva štakorima predtretiranim s prijenosnikom (8% Tween 80), ranitidin (100 mg /kg) ili EAF (100, 250 i 500 mg /kg), a zatim indukcijom čira pomoću apsolutnog etanola tijekom 1 sata su korišteni za određivanje SOD, GSH razine i CAT aktivnosti. Želučani tkivo je raskomadano a zabilježen je točan težinu. Tkiva su homogenizirana u homogenizatoru pomoću odgovarajućeg hladnim puferom, a zatim su centrifugirani na 10000 g tijekom 15 minuta na 4 ° C. Supernatanti su korištene za određivanje aktivnosti CAT i razina SOD i GSH. Koncentracija proteina u supernatantu je izmjeren pomoću Bradford postupka [41] pomoću goveđeg seruma albumina (BSA) kao standard. Razine SOD, GSH i mačka određene su pomoću komercijalnih pribore za analizu u skladu s uputama proizvođača, odnosno (superoksid dismutaza Test Kit, pokus Glutation Kit i katalaze Test Kit, Cayman Chemical Company, Ann Arbor, MI, SAD). Pregled mjerenje razine malondialdehida (MDA)
razine MDA mjereni su u želucu tkiva dobivenog od čira na želucu etanolom inducirana. Želudac tkivo homogenizira i centrifugira kao što je opisano prije i supernatant je korišten za određivanje MDA pomoću imunoenzimnim assay kit (USCN Life Science Inc., Atlanta, GA, USA). Optičke gustoće su mjerene na 450 nm, a rezultati su izraženi kao ng /mg proteina.
Određivanje prostaglandina E2 (PGE2) pregled PGE 2 su određeni u želucu tkiva dobivenog od želučane etanolom inducirana čir. Supernatant od homogeniziranog i centrifugira tkivu želuca je korišten za određivanje PGE 2 korištenjem prostaglandina E 2 Express EIA Kit (Cayman Chemical Company, Ann Arbor, MI, SAD). Optička gustoća se mjeri na 412 nm. U PGE 2 koncentracije su normalizirani po sadržaju bjelančevina, a rezultati su izraženi kao pg /mg proteina.
Određivanje količine NO pregled razina NO u sluznici želuca je ocijenjena ukupne razine nitrata /nitrita pomoću Griess reagensa [42]. Ukratko, želuca homogenati pripravljeni u 50 mM kalij-fosfatnog pufera (pH 7,8). Homogenati su centrifugirani na 4000 rpm tijekom 10 minuta na 4 ° C. Pedeset mikrolitara od Griess reagensom (0,1% N- (1-naftil) ethylenediamide dihidroklorid, 1% sulfanilamida u 5% fosfornom kiselinom) doda se 50 jal supernatanta i apsorbancija mjerena na 540 nm nakon 10 minuta. Natrijev nitrit se koristi kao standard u ovom testu generirati standardne krivulje.
Statistička analiza pregled Rezultati su izraženi kao srednja vrijednost ± standardna pogreška srednje vrijednosti (SEM) i analizirani pomoću jednostruke analize varijance (ANOVA), nakon čega slijedi uz Dunnettov post hoc testom
ili Newman-Keuls test. Rezultati su smatrana značajnom ako je p < pregled 0. pregled 05. | Rezultati
Identifikacija i kvantificiranje galne kiseline i kvercetin
HPLC otisaka prstiju od MEMC, PEF i EAF otkrila prisutnost galskoga kiseline na X max 216.6-272.0 nm i kvercetina na X max 255,5 do 370,6 nm (sl. 1a ib). Režim pulsacije ovih spojeva u MEMC, PEF ili EAF povećao pika, koja odgovara istom X maksimalne vrijednosti spojeva. Kvantifikacija rezultata prikazana je u tablici 1 pokazuju da EAF sadrži najveću količinu galne kiseline (39,89 ± 0,96 mg /g ekstrakta) i kvercetina (9,36 ± 0,29 mg g ekstrakta /), nakon čega MEMC i PEF. Sl. 1 A i B: HPLC analiza MEMC, PEF i EAF provodi na valnoj duljini 330 nm otkrila prisutnost kvercetina na λmax 255,5 do 370,6 nm pri sobnoj temperaturi 3,696 min. Režim pulsacije kvercetina s ekstraktima povećao pika, koja odgovara istom λmax vrijednosti spojeva. cid: HPLC otisaka prstiju od MEMC, PEF i EAF na 280 nm valne duljine otkrila prisutnost gallicacid na λmax 216,6 do 272,0 nm pri sobnoj temperaturi 4,204 min. Režim pulsacije galne kiseline s ekstraktima povećao pika, koja odgovara istom λmax vrijednosti spojeva pregled Tablica 1 galne kiseline i sastav kvercetin a u MEMC i njegovih aktivnih frakcija (PEF i EAF) u mg /1 g ekstrakta. Rezultati su izraženi kao srednja vrijednost ± standardna devijacija (SDS) od tri određivanja
spojeva
MEMC
PEF
EAF
galne kiseline (mg /g) pregled, 11.97 ± 0.27 pregled 3,40 ± 0,01 pregled 39.89 ± 0.96 pregled kvercetin (mg /g)
4,83- ± 0,16 pregled 8,81 ± 0,44 pregled 9,36 ± 0,29 pregled Identifikacija fenolnih spojeva u EAF pregled EAF je analizirana na temelju točnih masovnih podataka molekularnih iona, u kojoj iona otkrivena su uvjetno identificirati po njihovom generirana molekulske formule, kroz analizu podataka softver (Xcalibur) koja je dala popis mogućih elementarni formule, zajedno s upotrebom standarda kada su dostupni i nakon temeljitog istraživanja literature.
široko prihvaćen prag točnost za potvrdu elementarnih sastava osnovana na 5 ppm. UHPLC-ESI analiza EAF pokazala prisutnost 22 fenolnih spojeva (tablica 2) koji su navedeni vršni broj, vrijeme zadržavanja, zapažen m /z
, generirani molekulsku formulu i predloženi spoj otkriven. Slika 2 odgovara osnovni maksimum kromatogramu negativnog iona, sa strukturom molekule ermanin, kaempferide, pinobaksin i pinostrobin na slici. 3.Table 2 Fenolni spojevi identificirani u EAF by UHPLC-MS pregled Peak br
tR (min)
[M] -
pogreška (ppm)
pregled Formula
Identifikacija
1. pregled 0,45 pregled 169,01376 pregled 3,433 pregled C7H5O5 pregled, galne kiseline pregled 2. pregled 2.34 pregled 163,03978 pregled 4,964 pregled C9H7O3 pregled protokatehu kiselina pregled 3. pregled 3,10 pregled 193,05020 pregled 3,443 pregled C10H9O4 pregled ferulna kiselina pregled 4.
4,53 pregled 599,10547 pregled 3,879 pregled C28H23O15 pregled Quercitrin-2 "O-galat pregled 5. pregled 4,93 pregled 939,11377 pregled 4,220 pregled C41H31O26 pregled Pentagalloyl -hexoside II pregled, 6. pregled 5.05 pregled 447,09421 pregled 4,523 pregled C21H19O11 pregled kempferol-3-O pregled -galactoside pregled 7. pregled 5,31 pregled 317,0308 pregled 5,130 pregled C15H9O8 pregled miricetina pregled, 8. pregled 6,20 pregled 193,08661 pregled 3,569 pregled C10H9O4 pregled Isoferulic kiselina pregled 9. pregled 6.91 pregled 583,11053 pregled 3,941 pregled C28H23O14 pregled Afzelin-O-galat pregled 10. pregled 7,35 pregled 301,03586 pregled 4,023 pregled C15H9O7 pregled Kvercetin pregled 11. pregled 7.42 pregled 603,07928 pregled 3,894 pregled C30H19O14 pregled Kvercetin dimer pregled 12. pregled 7.67 pregled 255,06636 pregled 4,605 ​​pregled C15H11O4 pregled pinocembrin pregled 13.
8,14 pregled 593,13116 pregled 3,697 pregled C30H25O13 pregled kempferol-3-O pregled -glucoside pregled 14. pregled 8.18 pregled 315,05196 pregled 6,478 pregled C16H11O7
Rhamnetin
15.
8,55 pregled 271,06094 pregled 3.099
C15H12O5 pregled Pinobaksin pregled 16. pregled 8,94 pregled 285,04037 pregled 3,528 pregled C15H9O6
kempferol pregled 17. pregled 10.80
253,05063 pregled 4,326 pregled C15H9O4 pregled Chyrsin sam
18.
11.67
253.05099
5.749
C15H9O4
Chyrsin II
19. pregled 11.91
299,05597 pregled 3,195 pregled C16H11O6 pregled Kaempferide pregled 20. pregled 12.56
313,07245 pregled 5,703 pregled C17H13O6 pregled Ermanin sam
21
12.78
313.07230
5.224
C17H13O6 pregled Ermanin II pregled 22. pregled 13.32
269,08194 pregled 4,105 pregled Sl. Sl. Svi autori pročitali i odobrili konačnu rukopis. Pregled

• Utjecaj nikotina na želučanu myoelectrical aktivnosti u ICR miševa
• Kliničkopatološkim značaj claudin-4 u želučanoj carcinoma