Vrednotenje akutne toksičnosti in gastroprotektivni dejavnosti kurkume purpurascens BI. korenike proti-etanola povzroča želodca sluznice poškodb pri podganah

Vrednotenje akutne toksičnosti in gastroprotektivni dejavnosti kurkume purpurascens
BI. korenike proti-etanola povzroča želodčne poškodbe sluznice pri podganah
Abstract
Ozadje
Curcuma purpurascens
BI. je zdravilna rastlina iz družine Zingiberaceae, ki se pogosto uporablja kot začimba in kot ljudski medicini. Namen te študije je, da razišče gastrozaščitnega dejavnost C. purpurascens
korenika heksan ekstrakt (CPRHE) proti etanolom inducirane želodčnih razjed pri podganah.
Metode
Preskus akutne toksičnosti je bila izvedena na 36 podganah (18 moških in 18 samic) z nizkim odmerkom CPRHE (1 g /kg), visoki dozi CPRHE (2 g /kg) in vozila (5% Tween 20). Za določitev gastroprotektivnih učinek CPRHE, želodčnega soka kislost, bruto in histološke želodca poškodb, so bile vsebnosti sluzi in indeks razjeda ocenili v-etanola povzroča razjede na podganah. Poleg tega so bili pregledani, superoksid dismutaza dejavnost, raven dušikovega oksida in imunohistokemični vrednotenje Bax in Hsp70 beljakovin.
Rezultati
preskusu CPRHE akutne toksičnosti na podganah ni pokazala nobenih znakov umrljivosti in toksičnosti do 2 g /kg . Oralna uporaba CPRHE pri odmerkih 200 mg /kg in 400 mg /kg in omeprazol (pozitivna kontrola) v odmerku 20 mg /kg pri podganah izjemno oslabljena želodčne sluznice etanol inducirani. Predhodno zdravljenje podgan s CPRHE bistveno dopolniti izčrpavanje vsebine, sluzi, ki etanola uprave škodo in zmanjšala kislost želodčne stene. Nadaljnja preiskava želodčne sluznice homogenata pokazala znatno zvišanje superoksid dismutazo in dejavnosti, dušikovega oksida in zmanjšanje ravni malondialdehida v CPRHE-zdravljeni skupini, v primerjavi s kontrolno lezija skupini. Histološka ocena želodčnih sten, pridobljenih od podgan predhodno zdravljenih z CPRHE pokazala omembe zmanjšanje hemoragični sluznice poškodb. Imunohistokemijsko pokazala navzdol ureditev Bax beljakovin in regulacijo navzgor proteinom Hsp70.
Zaključek PODJETJA
Vse te ugotovitve potrdili gastrozaščitnega učinek kurkume purpurascens
korenike proti želodčni poškodbami.
Ključne besede
kurkume purpurascens
Zingiberaceae Akutna toksičnost Želodčna razjeda Etanol Omeprazol Ozadje
razjeda je poškodba ali odprta rana, ki se na splošno nanaša na sluznice ali kože telesa. V prebavnem sistemu, želodčne razjede v sluznici dvanajstnika ali želodca je razdražljiv bolezni, ki je prizadela opazen delež svetovnega prebivalstva [1]. Motnje v zaščitni učinek želodčne sluznice proti želodčni kislini je pogost vzrok peptične razjede [2]. Študije so pokazale, da je etiologija te motnje povezane s kajenjem cigaret, stresa, infekcij, prehranske pomanjkljivosti in porabo alkohola [3]. Helicobacter pylori,
okužbe zlasti pripomore k nastanku 90% dvanajstniku in 80% želodčnih razjed [4]. Poleg tega uporaba nesteroidnih protivnetnih zdravil ostaja kot eden od vzrokov, povezanih z drogami iz peptičnega [5]. V zadnjih letih je izpostavljenost človeka na različnih škodljivih kemikalij in agentov znatno povišano tveganje želodčnih napade [6]. Številni protiulkusna sredstva, ki se trenutno uporabljajo na trgu, kažejo omejeno učinkovitost in znatne resne stranske učinke na človeško telo [7]. Zato presejanje za nove dejavnike lahko zdravljenje peptične razjede mora nadaljevati, da bi našli spojine z manjšimi stranskimi učinki hkrati pa ohranja visoko-terapevtsko učinkovitost.
Razvoj farmacevtskih izdelkov v bistvu temelji na farmacevtskih dodatkov, vključno s široko paleto kategorij, kot so začimbe, zeliščni izdelki, prehranska dopolnila in funkcionalna živila [8]. Številne rastline iz različnih taksonomskih družin so preučevali po svojih anti-razjed dejavnosti [5, 9-11]. En tak taksonomske družine z obsežnimi zdravili uporabah proti želodca lezij na sluznicah je Zingiberaceae. Številne rastlinske vrste v tej družini, kot Boesenbergia rotunda
[9], Curcuma longa
[12], Zingiber officinale
[7], Alpinia galanga
[13] in Elettaria cardamomum
[14] so bili pojasnjeni za svoje gastroprotektivnih lastnosti.
Curcuma purpurascens
bI. je član družine Zingiberaceae. Ta rastlina prvotno rasla v Indoneziji in korenike se uporablja kot začimba [15]. C. purpurascens
obrat splošno znan tudi kot "Temu tis" in "Koneng tinggang" so poročali, da so obsežne tradicionalne uporabe v podeželskih skupnostih, podobno kot druge vrste kurkume
[15, 16]. Korenika te rastline se uporablja v ljudskem zdravilstvu za zdravljenje ran, garje, srbenje, vročina, kašelj in vre. Mešanica korenike s Alyxia stellata
se uporablja kot obloga po porodu [15]. Kljub teh tradicionalnih vlog, ni znanstveno raziskovanje potencialnih bioactivities te rastline. Od naravnih proizvodov, ki imajo dolgo zgodovino ljudske prijave lahko zagotovijo nove terapevtske pristope za zdravljenje različnih bolezni in bolezni [17], ki je trenutno študije za ovrednotenje akutno toksičnost in gastroprotektivnih dejavnost C. purpurascens
korenike proti razjede-etanol povzroča pri podganah.
Metode
Chemical in droge
v tej študiji je omeprazol kot referenčna protiulkusnega zdravila je bilo pridobljeno iz University of Malaya Medical Center in raztopimo v 10% Tween 20 (Merck , Nemčija). Redčenja, Tween 20 (5% v /v), je bila uporabljena kot vozilo. Zbiranje
vzorcev
C. purpurascens
korenike so se zbirali od Yogyakarta, Indonezija. Botanično Identifikacija je izdelal gospod Teo Leong Eng., Fakulteta za znanosti Univerze v Malaya. Dokazni vzorec KL 5793 je bila deponirana v herbarij Oddelka za kemijo, Fakulteta za znanosti Univerze v Malaya, Kuala Lumpur, Malezija.
Priprava ekstrakta
posušimo na zraku in prahu korenik (1,0 kg) smo maceriramo z n-heksan pri sobni temperaturi tri dni. Nastali filtrat korenike smo koncentrirali na rotavaporju pri 40 ° C in shranili pri -20 ° C do uporabe. C. purpurascens
korenika heksan ekstrakt (CPRHE) raztopimo v karboksimetil za in vivo
študija na živalih.
Plinska kromatografija CPRHE
Analiza ekstrakta heksan smo izvedli z uporabo Agilent in LECO Restek , Rxi-5MS kapilarna kolona (30 m, 0,25 mm id, 0,25 um debeline filma) in masni spektrometer Pengasus HT visoko zmogljivimi TOFMS, kot je opisano zgoraj [18]. Spojine so bile ugotovljene od svojega masnih spektrov, s primerjavo retencijskih časov z vrhov z razlago MS drobljenja vzorcev iz knjižnice podatkov.
Živali in etična vprašanja
zdravo žensko in Sprague Dawley
podgane (150-180 g, so bili 6-8 tednov stari), pridobljeno iz eksperimentalne enote živali, Medicinska fakulteta, Univerza v Malaya, Kuala Lumpur, Malezija. Živali so bile nastanjene v izolirani kabini pod nadzorovanimi pogoji temperature (~ 24 ° C), vlažnost (~ 50%) in lahka (dnevni razmerje 1: 1). Živali so se dovoli dostop do standardnih podganjih peletov in RO vode. Vsi poskusi so živali so bile izvedene v skladu z National Institutes of Health navodilih za nego in uporabo laboratorijskih živali in s predhodno odobritvijo pristojnega odbora House živali, Medicinska fakulteta, Univerza v Malaya (etiko št 2014-03 -05 /PHAR /R /ER).
študije akutne strupenosti
za določitev varne razpon odmerkov za CPRHE, je vrednotenje toksičnosti CPRHE izvedena kot je opisano prej [19]. Na kratko smo 36 podgan, vključno s 18 moških in 18 žensk razdelimo v tri skupine označeni kot vozilo (5% Tween 20), nizka odmerek CPRHE (1 g /kg) in visok odmerek CPRHE (2 g /kg). Podgane smo postili 16 ur pred doziranjem (voda je dostopen le za zadnji 2 uri). Po doziranju smo hrana odtegne za drugo 1 do 3 h. Vse druge znake toksičnih in umrljivosti so nadalje zabeležili v obdobju dveh tednov. Na dan 15., smo živali žrtvovali za hematoloških in histološko analizo.
-Etanol povzroča razjede želodca
preventivni potencial CPRHE proti površinskih hemoragični sluznice poškodb so raziskali pri običajnih podganah. Pred eksperimentom, smo Sprague Dawley
samci podgan postimo 24 ur (vodo je dostopen le za zadnji 2 uri). Trideset podgane smo naključno razdelili v 5 skupin po 6 podgan vsakega in predhodno obdelani v skladu s (tabela 1). Po 1 h predobdelavo so bile vse podgane gavaged s 5% Tween 20 (5 ml /kg) ali absolutnem etanolu (5 ml /kg), ki temelji na eksperimentalni zasnovi živali. Podgane so žrtvovali 1 h kasneje s prekomerno dozo ksilazina in ketamin in njihovi želodci so bili takoj excised.Table 1 eksperimentalni dizajn in specifikacije v študiji na živalih
skupin
Opis

predobdelava
zdravljenje
Skupina A
Normal nadzor
5% Tween 20 (5 ml /kg)
5% Tween 20 ABB Group B
nadzor lezij
5% Tween 20 (5 ml /kg)
absolutni etanol
Skupina C
nadzor zdravljenja
Omeprazol (20 mg /kg)
absolutnega etanola
skupina D
Experimental GROUP1
CPRHE (200 mg /kg)
absolutni etanol
skupina E
Eksperimentalni group2
CPRHE (400 mg /kg)
absolutnega etanola
določanje izgube vsebine sluznice in želodčnega soka kislosti
želodcu vsake podgane seciramo vzdolž večje ukrivljenosti in pH-meter titracije z 0,1 N NaOH smo uporabili za analizo koncentracijo vodikovega ionskega v želodčne vsebine, izražena v mEq /cenim. Nato je bila uporabljena steklena drsna nežno strganje želodčne sluznice podgan sledi tehtanje dobljenih sluzi z natančnim elektronskim ravnotežje.
Makroskopske analize za poškodbe
V skladu z več študijami, razjede etanol povzroča na želodčne sluznice bila označena kot podolgovate pasov hemoragičnih lezij vzporednih na podolžno os želodca [11, 20]. Škoda hemoragični želodca smo določili z oceno luminalno površino. Zaščitni potencial (P%) vsake predhodne obdelave je bila izračunana z uporabo planimeter (10 x 10 mm 2) in seciranje mikroskopom (1,8 x), kjer so bili UC in UT razjeda območje nadzora in obdelano skupino, oziroma . Merjenje razjedo območja smo izvedli kot je bilo predhodno podrobneje opisani v Abdelwahab et al. [9]. P
%
=
U
C
-
U
T
U
C
×
100
Histološka preiskava želodca lezij
histološko analizo vzorcev želodca zidov je bila izvedena s pomočjo 10% pufrske formalina za pritrditev. Vzorci so bili vgrajeni v parafin, ki mu sledi 5 um odseke in barvanje s hematoksilinom in eozinom.
Določanje aktivnosti peroksidacijo lipidov pomočjo thiobarbituric sekvenco reaktivne snovi Preskusno
Za merjenje koncentracije malondialdehida (MDA), smo izvedli thiobarbituric kislino reaktivne snovi (TBARS) test, kot je prej opisano [21]. Na kratko, homogeniziramo želodec (10% m /v) v 0,1 mol /l je bil PBS centrifugirali pri 4 ° C za 10 minut. Nato supernatant (3 ml) zmešamo s 20% raztopine trikloroocetne kisline in 0,67% 2-thiobarbituric kislino, ki ji sledi s segrevanjem v vodni kopeli (95 ° C) za 30 minut. Naslednja je bila koncentracija MDA dobljenega supernatanta določimo spektrofotometrično pri 532 nm. Koncentracije proteinske so izražene kot MDA mol /g beljakovin z metodo Lowry [22].
Določitev superoksid dismutaza (SOD) dejavnosti
bil Aktivnost SOD encima ocenjene z ugotavljanjem njegovega potenciala za zaviranje fotokemično reakcijo NBT (nitroblue tetrazolijevega), kot je že opisal sonca in sodelavci [23]. V tem testu so bile homogeniziramo tkiva dvakrat centrifugirali pri 4 ° C za 10 do 20 minut. V temno komoro, smo reaktant (1 ml, 50 mM fosfatni pufer, 100 nm EDTA in 13 mM L-metionina, pH 7,8) pomešamo z dobljenega supernatanta (30 ul), NBT (150 ul, 75 uM) in riboflavina (300 ul, 2 uM). Nastalo raztopino smo izpostavljeni fluorescenčnih sijalk (15 W) za 15 minut in absorbanco bila določena pri 560 nm valovne dolžine z uporabo spektrofotometra.
Raven dušikovega oksida
Za ovrednotenje učinka CPRHE na dušikovega oksida (NO) generacija v prebavnem traktu, so Griess reakcija se uporablja za določanje skupne vrednosti nitrit /nitratov, kot Tsikas in sodelavci [24] že prej opisali. Na kratko smo supernatant (50 ul) iz homogeniziramo želodca zmešamo z Griess reagentom. Po 10 minutah je naknadno kolorimetrično analizo izvedemo pri 540 nm ob uporabi Tecan Infinite 200 Pro mikroploščnega čitalnika (Tecan, Männedorf, Švica). Ustvarjeni NO v supernatanta kulture smo določili z uporabo standardnega krivulje natrijevega nitrita in rezultati so bili izraženi v p.molov nitrit /nitrat na gram proteina.
Imunohistokemičnim vrednotenje
imunohistokemični analizi Bax in Hsp70 proteinov smo izvedli kot je bilo predhodno opisal z nekaj spremembami [25]. Na kratko, so tkiva paraffinized v ksilenu in hidracijo uporabo stopenjske alkohola. Vrela natrijev citrat (10 mM) smo uporabili za postopek pridobivanja antigen, ki mu sledi imunohistokemičnim barvanjem po navodilom proizvajalca (Dakocytomation, ZDA). Po blokiranje endogenega peroksidazo z peroksidaze blokom, Bax (1: 200) ali Hsp70 (1: 500) so bile uporabljene Biotinilirane primarna protitelesa in odseki inkubiramo 15 minut. Naslednji so sekcije inkubirali z ustrezno količino streptavidina-HO 15 min. Dalje so bili odseki izpostavljeni diaminobenzidine substratechromagen za 5 sekund, nato potopi v šibkem amoniaka (0,037 mol /L) za desetkrat. Rjavi madeži na diapozitivih navedla pozitivne ugotovitve imunohistokemičnim barvanjem kot pod svetlobnim mikroskopom.
Statistična analiza
so vse vrednosti poročali kot povprečje ± SD. Statistične pomembne razlike med skupinami so se izračuna z uporabo enosmerne ANOVA sledi s testom multiple primerjave po hoc Tukey je. Vrednost p
< 0,05 smo imeli za signifikanten
Rezultati
Plinska kromatografija profil CPRHE
Kot je prikazano na sliki 1, je ekstrakt heksan označen z uporabo GC-MS-TOF.. Kromatogram je pokazala, da so glavne sestavine v CPRHE c-elemene (1), benzofuran, 6-etenil-4,5,6,7-tetrahidro-3,6-dimetil-5-izopropenil (2), 3,7 cyclodecadien-1-on, 3,7-dimetil-10- (1-metiletiliden) (3), turmerone (4) in curlone (5) (tabela 2). Slika 1 tipična plinski kromatogram. Kromatogram pokazala kemičnih sestavin iz C. purpurascens
izvleček heksan.
Tabela 2 Glavni bioaktivne spojine C purpurascens heksan ekstrakt, kot je opredeljen z uporabo GC-MS-TOF analiza
Peak št

Ime spojine
hrambi čas (s)
maši
1
c-elemene
1812.55
189
2
benzofuran, 6-ethenyl-4,5,6,7-tetrahydro-3,6-dimethyl-5-isopropenyl
1931.3
216
3
3,7-cyclodecadien-1-one,3,7-dimethyl-10-(1-methylethylidene)
2123.3
218
4
turmerone
2254.45
218
5
curlone
2326.55
218
Študije akutne strupenosti
V študiji akutne toksičnosti, vse podgane preživela in ni izrazila nobenih znakov toksičnosti in anomalije na 1 in 2 g /kg odmerka. Za obdobje 14 dni, pa je bilo opaziti nobenih vedenjskih ali spremembe telesne teže in brez neobičajnih znakov. Kot je prikazano v tabeli 3, so poročali, da je normalno v serumu biokemijskih parametrov. Hematološki analiza ledvic in jeter niso povzročali nobenih omembe vrednih sprememb v zdravljeni skupini v primerjavi s kontrolno skupino (slika 2). 50% ustni smrtni odmerek (LD 50) za moške in ženske podganah je bil za več kot 2 g /kg telesne weight.Table 3 Serum biokemijska analiza podgan. Vpliv CPRHE na (a) preizkus delovanja ledvic, (b) vrednosti jetrnih laboratorijskih preiskav in (c) analiza hematologija z glodalci
živalskih skupin
serumskih analizo
( a) ledvic biokemijskih parametrov
natrijev (mM /L)
kalijev (mM /L)
klorid (mM /L)
Co2 (mM /L)
Anion (mM /L)
Urea (mM /L)
kreatinin (μ M /L)

vozilo
142,23 ± 0,45
4,85 ± 0,06
104,59 ± 0,45
23,89 ± 0,64
19,36 ± 0,48
5,28 ± 0,58
30,75 ± 1,87
CPRHE ( 1 g /kg)
143,54 ± 0,37
5,12 ± 0,72
106,24 ± 0,54
21,49 ± 0,73
19,58 ± 0,75
5,93 ± 0,43
29,81 ± 2,27
CPRHE (2 g /kg)
143,85 ± 0,82
4,91 ± 0,034
105,27 ± 0,56
22,85 ± 0,48
19,95 ± 0,39
5,68 ± 0,37
31.46 ± 2.19
živalskih skupin
(b) jetrnih biokemijskih parametrov
Skupaj beljakovin (g /L)
albumin (g /L)
globulin (g /L)
TB (

• Želodca napredovanje raka povezana z lokalno humoralno imun responses
• Huda želodca variceal krvavitev zaradi vranice tromboze arterij in zapored arterijske bypass