Avaliação da toxicidade aguda e atividade gastroprotetora do curcuma purpurascens BI. rizoma contra a lesão da mucosa gástrica induzida por etanol em ratazanas

Avaliação da toxicidade aguda e atividade gastroprotetora do purpurascens curcuma
BI. rizoma contra a lesão da mucosa gástrica induzida por etanol em ratos
Abstract Background
Curcuma purpurascens
BI. é uma planta medicinal a partir da família das Zingiberaceae, que é amplamente utilizado como uma especiaria e como medicina popular. O objetivo do presente estudo é investigar a atividade gastroprotetora do C. purpurascens
extrato de rizoma hexano (CPRHE) contra etanol- induzida úlceras gástricas em ratos.
Métodos
Teste de toxicidade aguda foi realizada em 36 ratos (18 machos e 18 fêmeas) com baixa dose de CPRHE (1 g /kg), dose elevada de CPRHE (2 g /kg) e veículo (5% de Tween 20). Para determinar o efeito gastroprotector do CPRHE, a acidez do suco gástrico, bruto e lesões gástricas histológicos, teor de muco e índice de úlcera foram avaliados em úlcera induzida por etanol em ratos. Além disso, foram examinados atividade da superóxido dismutase, o nível de óxido nítrico e avaliação imunoistoquímica de proteínas Bax e HSP70.
Resultados
O teste de toxicidade aguda CPRHE em ratos não revelaram quaisquer sinais de mortalidade e uma toxicidade até 2 g /kg . A administração oral de CPRHE em doses de 200 mg /kg e 400 mg /kg e o omeprazole (controlo positivo) a uma dose de 20 mg /kg a ratos lesões gástricas induzidas notavelmente atenuadas por etanol. Pré-tratamento de ratos com CPRHE reabastecido significativamente a depleção do teor de muco causada pela administração de etanol e reduziu a acidez de paredes gástricas. Um exame mais aprofundado do homogenato da mucosa gástrica revelou uma elevação significativa de superóxido dismutase e actividades de óxido nítrico e a redução no nível de malondialdeído no grupo tratado com CPRHE, em comparação com o grupo de controlo lesão. A avaliação histológica das paredes gástricas obtidos a partir de ratos pré-tratados com CPRHE demonstraram uma diminuição notável na lesões hemorrágicas na mucosa. coloração imuno-histoquímica mostrou a regulação negativa da proteína Bax e up-regulação da proteína Hsp70.
Conclusão
Tomados em conjunto, estes resultados confirmaram o efeito gastroprotective de Curcuma purpurascens
rizoma contra danos gástrico.
Palavras-chave
purpurascens Curcuma
Zingiberaceae toxicidade aguda úlcera gástrica Etanol omeprazol fundo
úlcera é uma lesão ou ferida aberta que geralmente refere-se à membrana mucosa ou pele do corpo. No sistema digestivo, úlcera péptica no revestimento do estômago ou do duodeno é uma doença que tem afligido irritante uma proporção notável da população mundial [1]. A interrupção no efeito protector da mucosa do estômago contra o ácido gástrico é uma causa comum de úlcera péptica [2]. Estudos têm mostrado que a etiologia desta doença está relacionada com o consumo de cigarros, o stress, infecções, deficiências nutricionais e consumo de álcool [3]. Helicobacter pylori
infecção, em particular, contribui para a ocorrência de 90% de úlceras duodenais e 80% de úlceras gástricas [4]. Além disso, a administração de fármacos anti-inflamatórios não-esteroidais permanece como uma das causas relacionadas com a droga de úlcera péptica [5]. Nos últimos anos, a exposição de humano para uma variedade de produtos químicos e agentes nocivos elevou significativamente o risco de ataques gástricas [6]. agentes anti-ulcerosos, os quais numerosos estão actualmente a ser utilizados no mercado, apresentam uma eficácia limitada e efeitos secundários graves consideráveis ​​sobre o corpo humano [7]. Por isso, o rastreio de novos agentes capazes de tratar úlceras pépticas precisa de continuar de modo a encontrar compostos com efeitos secundários reduzidos, mantendo uma elevada eficácia terapêutica.
Desenvolvimento de produtos farmacêuticos baseia-se, substancialmente, de nutracêuticos, incluindo uma grande variedade de categorias, tais como especiarias, produtos fitoterápicos, suplementos alimentares e alimentos funcionais [8]. Numerosas plantas de uma variedade de famílias taxonômicos têm sido estudadas por suas atividades anti-ulcerosos [5, 9-11]. Um desses família taxonômica, com amplos usos medicinais contra lesões da mucosa gástrica é Zingiberaceae. Numerosas espécies de plantas desta família, como Boesenbergia rotunda
[9], Curcuma longa
[12], Zingiber officinale
[7], Alpinia galanga
[13] e Elettaria cardamomum
[14] foram elucidadas por suas propriedades gastroprotective.
Curcuma purpurascens
BI. é um membro da família das Zingiberaceae. Esta planta originalmente cresceu na Indonésia e seu rizoma é usado como tempero [15]. O C. purpurascens
planta vulgarmente conhecida também como "Temu tis" e "Koneng tinggang" tem sido relatada a ter amplos usos tradicionais das comunidades rurais, semelhante a outras espécies curcuma
[15, 16]. Rizoma desta planta tem sido utilizada na medicina popular para o tratamento de feridas, sarna, coceira, febre, tosse e ferve. A mistura dos rizomas com alyxia stellata
é usado como um cataplasma após o parto [15]. Apesar destas aplicações tradicionais, não há investigação científica para os potenciais bioatividades desta planta. Dado que os produtos naturais com uma longa história de aplicação popular pode fornecer novas abordagens terapêuticas para o tratamento de várias doenças e afecções [17], o presente estudo é conduzido para avaliar a toxicidade aguda e a actividade protectora gástrica do C. purpurascens
contra rizoma ulceração induzida por etanol em ratos.
Métodos
química e drogas
neste estudo, o omeprazole como o medicamento de referência anti-úlcera foi obtida a partir da Universidade da Malásia Medical Center e dissolvido em 10% de Tween 20 (Merck , Alemanha). Uma diluição de Tween 20 (5% v /v) foi utilizado como o veículo.
Recolha de amostra of the C. purpurascens
rizoma foi recolhido a partir de Yogyakarta, Indonésia. A identificação botânica foi feita pelo Sr. Teo Leong Eng., Faculdade de Ciências da Universidade de Malaya. Um voucher de espécime KL 5793 foi depositado no herbário do Departamento de Química da Faculdade de Ciências da Universidade de Malaya, Kuala Lumpur, Malásia.
Preparação do extrato
Os rizomas secas ao ar e em pó (1,0 kg) foram macerados com n-hexano à temperatura ambiente durante três dias. O filtrado resultante do rizoma foi concentrado por um evaporador rotativo a 40 ° C e armazenado a -20 ° C até à sua utilização. O C. purpurascens
extrato de rizoma hexano (CPRHE) foi dissolvido em carboximetilcelulose para in vivo
estudo animal cromatografia gasosa.
De CPRHE
A análise do extrato hexano foi realizada usando um Agilent e LECO Restek , coluna capilar Rxi-5MS (30 m, 0,25 mm ID, 0,25 um espessura de filme) e um espectrómetro de massa Pengasus HT High throughput TOFMS, como previamente descrito [18]. Os compostos foram identificados a partir de seus espectros de massa, por comparação dos tempos de retenção dos picos com a interpretação dos padrões de fragmentação MS da biblioteca de dados.
Animais e questões éticas
fêmea saudável e masculino Sprague Dawley
ratos (150-180 g, 6-8 semanas de idade) foram obtidos a partir da Unidade de animal Experimental da Faculdade de Medicina da Universidade de Malaya, Kuala Lumpur, Malásia. Os animais foram alojados numa cabine isolado sob condições controladas de temperatura (~ 24 ° C), humidade (~ 50%) e a luz (uma razão diária de 1: 1). Os animais foram deixados com acesso peletes de rato padrão e água RO. Todas as experiências com animais foram realizados de acordo com o National Institutes of Health Guide para o cuidado e uso de animais de laboratório e com a aprovação prévia da comissão de Casa Animal, Faculdade de Medicina da Universidade de Malaya (Ética No. 2014-03 -05 /PHAR /R /ER).
estudo de toxicidade aguda
para determinar uma gama segura de doses para CPRHE, avaliação da toxicidade de CPRHE foi realizada como previamente descrito [19]. Resumidamente, 36 ratos, dos quais 18 do sexo masculino e 18 do sexo feminino foram divididas em três grupos rotulado como o veículo (5% de Tween 20), baixa dose de CPRHE (1 g /kg) e dose elevada de CPRHE (2 g /kg). Os ratos foram mantidos em jejum durante 16 horas antes da dosagem (água foi acessíveis, excepto para o último 2 h). Após a dosagem, o alimento foi retido durante mais 1 a 3 h. Quaisquer outros sinais de toxicidade e mortalidade foram ainda registadas durante o período de duas semanas. No dia 15, os animais foram sacrificados para hematológicas e análise histológica. Ulceração gástrica induzida por etanol
O potencial preventivo de CPRHE contra lesões hemorrágicas mucosas superficiais foram investigados em ratos normais. Antes do experimento, Sprague Dawley
ratos machos foram mantidos em jejum durante 24 horas (a água estava acessíveis, excepto para o último 2 h). Trinta ratos foram divididos aleatoriamente em 5 grupos de 6 ratos cada e pré-tratadas de acordo com (Tabela 1). Após 1 h de pré-tratamento, todos as ratazanas foram tratadas por gavage com 5% de Tween 20 (5 ml /kg) ou etanol absoluto (5 ml /kg) com base na concepção experimental animal. Os ratos foram sacrificados 1 hora mais tarde com uma dose ao longo de xilazina e cetamina e seus estômagos estavam imediatamente excised.Table 1 O delineamento experimental e as especificações do estudo animais
Grupos
Descrição

Pré-tratamento
tratamento
Grupo A
controle normal
5% Tween 20 (5 ml /kg)
5% Tween 20
Grupo B
controle Lesão
5% Tween 20 (5 ml /kg) etanol
absoluta
Grupo C
controle Tratamento
omeprazol (20 mg /kg)
absoluta etanol
grupo D
grupo1 Experimental
CPRHE (200 mg /kg)
etanol absoluto
grupo E
group2 Experimental
CPRHE (400 mg /kg) de etanol
absoluta determinação da perda de conteúdo da mucosa gástrica e acidez de suco
o estômago de cada ratazana foi dissecados ao longo da maior curvatura, e titulação medidor de pH com NaOH 0,1 N foi utilizado para analisar a concentração do ião hidrogénio nos conteúdos gástricos expressos em mEq /Eu valorizo. Em seguida, uma lâmina de vidro foi aplicado para raspar suavemente a mucosa gástrica dos ratos, seguido pela pesagem do muco obtidos com um equilíbrio electrónico de precisão.
Análise macroscópica das lesões
De acordo com diversos estudos, úlceras induzidas por etanol sobre a mucosa gástrica foram caracterizados como bandas alongadas de lesões hemorrágicas paralelas ao eixo longo do estômago [11, 20]. O dano hemorrágica do estômago foi determinado por avaliação da superfície luminal. O potencial de protecção (P%) de cada pré-tratamento foi calculado usando um planímetro (10 × 10 milímetros 2) e dissecando microscópio (1,8 ×), onde UC e UT foram a área da úlcera do controle e grupo tratado, respectivamente . A medição da área da úlcera foi realizada como previamente descrito em detalhe por Abdelwahab et ai. [9]. P
%
=
U
C
-
U
T
U
C
×
100
a avaliação histológica de lesões gástricas
a análise histológica dos espécimes das paredes gástricas foi realizada utilizando 10% de formalina tamponada para a fixação. As amostras foram embebidos em parafina seguido pelo seccionamento 5 mm e coloração com hematoxilina e eosina.
Determinação da actividade peroxidação lipídica utilizando o ácido tiobarbitúrico substância reactiva ensaio
Para medir malondialdeído concentração (MDA), realizou-se ácido tiobarbitúrico substância de ensaio (TBARS) reactivo como descrito anteriormente [21]. Em breve, o estômago homogeneizado (10% w /v) em 0,1 mol /l de PBS foi centrifugado a 4 ° C durante 10 min. Em seguida, o sobrenadante (3 ml) foi misturada com uma solução de ácido tricloroacético a 20% e 0,67% de ácido 2-tiobarbitúrico e subsequente aquecimento em banho-maria (95 ° C) durante 30 min. Em seguida, a concentração de MDA do sobrenadante obtido foi determinada espectrofotometricamente a 532 nm. As concentrações de proteína foram expressos como proteína de MDA umol /g utilizando o método de Lowry [22].
Determinação da actividade da superóxido dismutase (SOD)
A actividade da enzima SOD foi estimada por determinação do seu potencial para suprimir a reacção fotoquímica de NBT (azul nitro de tetrazólio), como previamente descrito por Sun e colegas [23]. Neste ensaio, os tecidos foram homogeneizado centrifugado duas vezes a 4 ° C durante 10 e 20 min. Numa câmara escura, o reagente (1 ml, tampão de fosfato 50 mM, 100 nM de EDTA e 13 mM de L-metionina, pH 7,8) foi misturado com o sobrenadante resultante (30 ul), NBT (150 ul, 75 mM) e riboflavina (300 ul, 2

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