Оценка острой токсичности и гастропротекторного активности куркумы ригригазсепз BI. корневище против этанол-индуцированного повреждения слизистой желудка у крыс

Оценка острой токсичности и гастропротекторного активности Куркума ригригазсепз
BI. корневище против этанол-индуцированного повреждения слизистой желудка у крыс
Аннотация
Справочная информация
Куркума ригригазсепз
BI. это лекарственное растение из семейства Zingiberaceae, который широко используется в качестве пряности и в качестве народной медицине. Целью настоящего исследования является изучение гастропротекторного активности C. ригригазсепз
корневище гексан экстракт (CPRHE) против этанол- индуцированной язвы желудка у крыс.
Методы
Испытание Острая токсичность проводили на 36 крысах (18 мужчин и 18 женщин) с низкой дозой CPRHE (1 г /кг), высокая доза CPRHE (2 г /кг) и транспортного средства (5% Tween 20). Для определения гастропротекторный эффекта CPRHE, кислотности желудочного сока, грубой и гистологических желудка поражений, содержание слизи и индекс язвы оценивали в этанол-индуцированной язвы у крыс. Кроме того, были рассмотрены активность супероксиддисмутазы, азотная уровень оксида и иммуногистохимическое оценка Bax и HSP70 белков.
Результаты
Испытание CPRHE острой токсичности на крысах не выявили каких-либо признаков токсичности и смертности до 2 г /кг , Пероральное введение CPRHE в дозах 200 мг /кг и 400 мг /кг и омепразол (положительный контроль) в дозе 20 мг /кг крысам заметно ослабленных желудка повреждений, вызываемых этанолом. Предварительная обработка крыс с CPRHE значительно пополнены истощение содержания слизи, вызванного введением этанола и снижение кислотности желудочного стенок. Дальнейшее изучение слизистой оболочки желудка гомогената показало значительное повышение супероксиддисмутазы и азотной активностей оксидов и снижение уровня малонового диальдегида в CPRHE-обработанной группе, по сравнению с контрольной группой поражения. Гистологические оценка стенок желудка, полученных от крыс, предварительно обработанных CPRHE продемонстрировали примечательную уменьшение геморрагического поражения слизистой. Иммуногистохимическое окрашивание показало, понижающая регуляция белка Вах и повышающей регуляции белка Hsp70.
Заключение
Взятые вместе, эти результаты подтвердили гастропротекторного эффект куркумы ригригазсепз
корневище против повреждения желудка.
Ключевые слова <бр> Куркума ригригазсепз
Zingiberaceae Острая токсичность язва желудка Этанол Омепразол Предпосылки
язва поражение или открытая рана, которая, как правило относится к слизистой оболочке или коже тела. В пищеварительной системе, язвенная болезнь желудка в слизистой оболочке двенадцатиперстной кишки или желудка является раздражающим заболеванием, которое огорчило заметную долю мирового населения [1]. Нарушение в защитном эффекте слизистой оболочки желудка с кислотой желудочного сока является частой причиной язвенной болезни [2]. Исследования показали, что этиология этого заболевания связано с курением сигарет, стресс, инфекции, недостаток питания и потребления алкоголя [3]. Helicobacter Pylori
инфекции, в частности, способствует возникновению 90% дуоденальных язв и 80% язв желудка [4]. Кроме того, введение нестероидных противовоспалительных препаратов остается в качестве одной из причин, связанных с наркотиками язвенной болезни [5]. В последние годы, их воздействие на человека с различными вредными химическими веществами и агентами значительно повышен риск приступов желудка [6]. Многочисленные противоязвенные средства, которые в настоящее время используются на рынке, демонстрируют ограниченную эффективность и значительные серьезные побочные эффекты на организм человека [7]. Таким образом, скрининг на новых агентов, способных обрабатывать пептической язвы необходимо продолжать, чтобы найти соединения с пониженными побочными эффектами при сохранении высокой эффективности-терапевтическим.
Разработка фармацевтических препаратов зависит в значительной степени от нутрицевтики, в том числе широкий спектр категорий, таких как специи, продукты растительного происхождения, биологически активные добавки и функциональные продукты питания [8]. Многочисленные растения из различных таксономических семей были изучены на предмет их противоязвенных деятельности [5, 9-11]. Одним из таких таксономических семьи с обширными использования в медицинских целях в отношении слизистой оболочки желудка поражений Zingiberaceae. Многочисленные виды растений этого семейства, такие как Boesenbergia ротонда
[9], Куркума Лонга
[12], Zingiber лекарственный
[7], альпиния галанга
[13] и Elettaria cardamomum
[14] были выяснены за их гастрозащитных свойств.
Куркума ригригазсепз
BI. является членом семьи Zingiberaceae. Это растение первоначально вырос в Индонезии и его корневище используется в качестве пряности [15]. C. ригригазсепз
растение широко известный также как "Temu ТИС" и "Koneng tinggang", как сообщается, имеют обширные традиционные виды использования в сельских общинах, аналогичные другим видам куркума
[15, 16]. Корневище этого растения используется в народной медицине для лечения ран, чесотки, зуд, лихорадка, кашель и кипит. Смесь из корневищ с аликсия Stellata
используется в качестве припарки после родов [15]. Несмотря на эти традиционные приложения, нет никакого научного исследования для потенциальных биоактивности этого растения. Поскольку натуральных продуктов с долгой историей народного применения может обеспечить новые терапевтические подходы для лечения различных заболеваний и недугов [17], в настоящее время исследование проводится с целью оценки острой токсичности и гастропротекторный активности C. ригригазсепз
корневище против этанол-индуцированной изъязвлением у крыс.
Методы
Химическая и наркотики
в этом исследовании омепразол в качестве ссылки противоязвенной медицины была получена из университета Малую медицинского центра и растворяют в 10% Tween 20 (Merck , Германия). Разбавлении Tween 20 (5% об /об), была использована в качестве транспортного средства. Сбор
Образец
The C. ригригазсепз
корневище была собрана из Джокьякарта, Индонезия. Ботаническое идентификация выступил г-н Леонг Teo Eng., Факультет естественных наук, Университет Малайи. Ваучер образец KL 5793 был депонирован в гербарии кафедры химии факультета естественных наук, Университет Малайя, Куала-Лумпур, Малайзия.
Приготовление экстракта
воздушно-высушенных и измельченных корневищ (1,0 кг) были вымоченных с н-гексаном при комнатной температуре в течение трех дней. Полученный фильтрат корневища концентрировали на роторном испарителе при 40 ° С и хранили при -20 ° С до использования. C. ригригазсепз
корневище гексан экстракт (CPRHE) растворяли в карбоксиметилцеллюлозы для в естественных условиях
животных исследования.
Газовая хроматография CPRHE
Анализ экстракта гексана проводили с использованием Agilent и LECO Рестэк , RXi-5MS капиллярная колонка (30 м, 0,25 мм ID, толщина пленки 0,25 мкм) и масс-спектрометра Pengasus HT High Throughput TOFMS, как описано ранее [18]. Соединения были идентифицированы от их масс-спектров, путем сравнения времени удерживания пиков с интерпретацией моделей фрагментации MS из библиотеки данных.
Животные и этические проблемы
здоровая женщина и мужчина Sprague Dawley
крыс (150-180 г, 6-8 недель) были получены из экспериментальной группы животных, медицинский факультет университета Малайи, Куала-Лумпур, Малайзия. Животных содержали в изолированной кабине в контролируемых условиях температуры (~ 24 ° С), влажность (~ 50%) и легкой (ежедневное соотношение 1: 1). Животным давали доступ к стандартным гранул крысиных и обратного осмоса воды. Все эксперименты на животных проводились в соответствии с национальными институтами здравоохранения Руководство по уходу и использованию лабораторных животных, а также с предварительного одобрения со стороны комитета Палаты животных, медицинский факультет, Университет Малайи (2014-03 этики No. -05 /PHAR /R /ER).
исследование острой токсичности
Чтобы определить безопасный диапазон доз для CPRHE, оценка токсичности CPRHE проводили, как описано ранее [19]. Вкратце, 36 крыс, в том числе 18 мужчин и 18 женщин были разделены на три группы, помеченных как транспортное средство (5% Tween 20), низкая доза CPRHE (1 г /кг) и высокой дозы CPRHE (2 г /кг). Крыс не кормили в течение 16 ч до введения дозы (вода была доступна в течение последних 2 ч, за исключением). После введения дозы пищи была удержана для другого от 1 до 3 ч. Любые другие признаки токсичностью и смертности были дополнительно записаны в период двух недель. На 15-й день, животных забивали для гематологического и гистологического анализа.
Этанол индуцированных язвы желудка
Исследовали профилактический потенциал CPRHE против поверхностных поражений слизистой оболочки геморрагический в нормальных крыс. До начала эксперимента, Sprague Dawley
самцов крыс кормили в течение 24 ч (вода была доступна в течение последних 2 часов за исключением). Тридцать крыс случайным образом разделены на 5 групп по 6 крыс в каждой, и предварительно обработанные соответствующим образом (таблица 1). Через 1 ч предварительной обработки, всех крыс через желудочный зонд с 5% Tween 20 (5 мл /кг) или абсолютном этаноле (5 мл /кг) на основе экспериментальных животных конструкции. Крыс умерщвляют Через 1 час с чрезмерной дозой ксилазином и кетамин и их желудки были немедленно excised.Table 1 Экспериментальный дизайн и технические характеристики исследования животных
групп

Описание
<бр> Предварительная обработка

Treatment

Группа A
Обычный контроль
5% твин 20 (5 мл /кг)
5% твин 20
Группа B
контроль 5 поражений
% твин 20 (5 мл /кг)
абсолютного этанола
Группа C
контроля лечения
Омепразол (20 мг /кг)
абсолютного этанола
Группа D
Экспериментальная group1
CPRHE (200 мг /кг)
абсолютного этанола
Группа E
Экспериментальная group2
CPRHE (400 мг /кг)
абсолютного этанола
Определение потерь в слизистой оболочке содержание и кислотности желудочного сока
желудок каждой крысы рассекают вдоль большой кривизны, и рН-метр титрование 0,1 N NaOH использовали для анализа концентрации водородных ионов в желудочном содержании, выраженных в мг-экв /Я ценю. Затем предметное стекло наносили осторожно соскоблить слизистую оболочку желудка крыс с последующим взвешиванием полученных слизи с электронным балансом точности.
Макроскопический анализ поражений
В соответствии с некоторыми исследованиями, этанол-индуцированной язвы на слизистую оболочку желудка, были охарактеризованы как удлиненные полосы геморрагических поражений параллельно длинной оси желудка [11, 20]. Повреждение геморрагический желудка определяли путем оценки поверхности полостной. Защитный потенциал (P%) каждой предварительной обработки была рассчитана с использованием планиметр (10 × 10 мм 2) и рассекает микроскоп (1,8 ×), где UC и UT были области язвы контроля и обработанной группы соответственно , Измерение площади язвенного проводили, как описано ранее подробно Абдельвахабом и соавт. [9]. P
%
<Мо> = U

C
<мо> -
U
T U

C
<Мо> ×
100
Гистологическое исследование желудочной поражений
Гистологический анализ образцов желудочной стенки проводили с использованием 10% буферный формалин для фиксации. Образцы заливали в парафин с последующим секционирования 5 мкм и окрашивания гематоксилином и эозином.
Определение активности перекисного окисления липидов с помощью тиобарбитуровой кислоты химически активных веществ для анализа
Для измерения концентрации малонового диальдегида (МДА), мы провели тиобарбитуровой кислоты реактивное вещество (ТБКРВ) анализа, как было описано ранее [21]. Короче говоря, гомогенизируют в желудке (10% вес /объем) в 0,1 моль /л PBS, центрифугировали при 4 ° С в течение 10 мин. Затем супернатант (3 мл) смешивали с 20% -ным раствором трихлоруксусной кислоты и 0,67% 2-тиобарбитуровой кислоты с последующим нагреванием на водяной бане (95 ° С) в течение 30 мин. Затем концентрацию МДА полученного супернатанта определяли спектрофотометрически при 532 нм. Концентрации белка выражены как MDA мкмоль /г белка с использованием метода Лоури [22].
Определение супероксиддисмутазы (СОД)
Активность СОД фермента оценивали путем определения его потенциала для подавления фотохимической реакции NBT (тетразола), как описано выше, Солнцем и его коллегами [23]. В этом анализе гомогенизируют ткани центрифугировали дважды при температуре 4 ° С в течение 10 и 20 мин. В темной камере, в качестве реагирующего вещества (1 мл, 50 мМ фосфатный буфер, 100 нМ ЭДТА и 13 мМ L-метионин, рН 7,8) смешивали с полученной надосадочной жидкости (30 мкл), NBT (150 мкл, 75 мкМ) и рибофлавина (300 мкл, 2 мкМ). Полученный раствор подвергали воздействию люминесцентных ламп (15 Вт) в течение 15 мин и поглощательной способности определ ли при 560 нм с использованием спектрофотометра.
Азотная уровня оксида
Для оценки влияния CPRHE на оксид азота (NO), генерация в желудочно-кишечном тракте, реакция Грисса использовали для определения уровней общего нитриты /нитраты, как это описано ранее Цикас и его коллегами [24]. Вкратце, супернатант (50 мкл) гомогенизируют желудка смешивают с реагентом Грисса. Через 10 мин, последующее колориметрический анализ проводили при 540 нм с использованием Tecan Бесконечную 200 Pro микропланшет-ридер (Tecan, Mannedorf, Швейцария). Сгенерированный NO в культуральной надосадочной жидкости определ ли с использованием стандартной кривой, нитрита натрия и результаты выражали в виде мкмолей нитрита /нитрата на грамм белка.
Иммуногистохимическое оценки
иммуногистохимического анализа Вах и HSP70 белков проводили, как ранее описано с некоторыми изменениями [25]. Короче говоря, ткани paraffinized в ксилоле и регидратации, используя дифференцированный спирт. Кипящую цитрат натрия буфера (10 мМ) используется для поиска информации антигена с последующим иммуногистохимического окрашивания в соответствии с инструкцией завода-изготовителя (DakoCytomation, США). После блокирования эндогенной пероксидазы с блоком пероксидаза, Bax (1: 200) или Hsp70 (1: 500) биотинилированные первичные антитела были применены и срезы инкубировали в течение 15 мин. Затем срезы инкубировали с соответствующим количеством стрептавидин-HRP в течение 15 мин. Затем срезы подвергали воздействию диаминобензидино substratechromagen в течение 5 с, а затем погружали в слабом аммиака (0,037 моль /л) в течение десяти раз. Коричневые пятна на слайдах показали положительные результаты иммуногистохимического окрашивания, как наблюдали под световым микроскопом.
Статистический анализ
Все данные были представлены как среднее ± стандартное отклонение. Статистические значимые различия между группами определяли с помощью однофакторного дисперсионного анализа с последующим многократным сравнительного теста постфактум Тьюки. Значение р &
ЛТ; 0,05 считают значимым

Результаты газовой хроматографии Профиль CPRHE
Как показано на рисунке 1, экстракт гексана характеризовался использованием GC-MS-TOF.. Хроматограмма показал, что основные соединения в CPRHE являются C-elemene (1), бензофуран, 6-этинил-4,5,6,7-тетрагидро-3,6-диметил-5-изопропенил (2), 3,7- cyclodecadien-1-он, 3,7-диметил-10- (1-метилэтилиден) (3), turmerone (4) и курлон (5) (таблица 2). Рисунок 1 Типичная хроматограмма газа. Хроматограмма показали химические компоненты C. ригригазсепз
гексана экстракта.
Таблица 2 Основные биологически активные соединения C. ригригазсепз экстракт гексана характеризуемая с помощью анализа GC-MS-TOF
Peak No.

Имя Соединения

Время удерживания (ов)

Масса


1 с-elemene
1812.55
189
2 <бр> бензофуран, 6-ethenyl-4,5,6,7-tetrahydro-3,6-dimethyl-5-isopropenyl
1931.3
216
3
3,7-cyclodecadien-1-one,3,7-dimethyl-10-(1-methylethylidene)
2123.3
218
4
turmerone
2254.45
218
5
curlone
2326.55
218
Острая токсичность исследование
При изучении острой токсичности, все крысы выжили и не проявляли никаких признаков токсичности и ненормальности на 1 и 2 г /кг дозировки. Для продолжительностью 14 дней, было обнаружено не было поведенческие или изменения веса тела и никаких аномальных признаков. Как показано в таблице 3, были зафиксированы в сыворотке крови биохимические показатели нормальной. Гематологический анализ почек и печени не вызывают каких-либо изменений в примечательные обработанной группе по сравнению с контрольной группой (рисунок 2). 50% оральный летальную дозу (ЛД <суб> 50) для крыс самцов и самок было больше, чем 2 г /кг массы тела weight.Table 3 Сыворотка биохимический анализ крыс. Влияние на CPRHE (а) испытания функции почек, (б) тест функции печени и (с) гематологический анализ грызуны
групп животных

Serum биохимический анализ на
( а) Почки биохимические показатели


натрия (мМ /л)

калия (ммоль /л)

хлорид (мМ /л)

Co2 (мМ /л)

Анион (мМ /л)

Мочевина (ммоль /л)

Креатинин (μ M /L)


Автомобиль
142,23 ± 0,45
4,85 ± 0,06
104,59 ± 0,45
23,89 ± 0,64
19,36 ± 0,48
5,28 ± 0,58
30,75 ± 1,87
CPRHE ( 1 г /кг)
143,54 ± 0,37 5,12 ±
0,72
106,24 ± 0,54 21,49 ±
0,73
19,58 ± 0,75 ± 5,93
0,43
29,81 ± 2,27
CPRHE (2 г /кг)
143,85 ± 0,82
4,91 ± 0,034
105,27 ± 0,56
22,85 ± 0,48 19,95 ±
0,39
5,68 ± 0,37
31,46 ± 2,19 <бр> группы животных
(б) Печень биохимические параметры изображения Общий белок (г /л)
Альбумин (г /л)
глобулин (г /л)
ТБ (М моль /л )
CB (ц моль /л)
AP (МЕ /л)
ALT (МЕ /л)
АСТ (МЕ /л)
ГГТ (МЕ /л)
Автомобиль
60,76 ± 0,94
9,56 ± 0,39
51,07 ± 1,28 2,19 ±
0,13
0,87 ± 0,17
154,45 ± 5,37
50,49 ± 1,34
173,82 ± 5,38
3,45 ± 0,27
CPRHE (1 г /кг)
58,37 ± 0,57
8,35 ± 0,53
50,68 ± 1,32
2,14 ± 0,16 0,91 ±
0,14
153,23 ± 5,87
45,65 ± 1,74
175,48 ± 6,49 3,37 ±
0,53
CPRHE (2 г /кг)
59,67 ± 1,29
8,87 ± 0,19
50,25 ± 1,45
2,15 ± 0,14 0,84 ±
0,16
155,73 ± 6,82
46,76 ± 1,48
176,27 ± 6,52
3,57 ± 0,43
групп животных
(с) гематологические параметры
HGB (г /дл)
НСТ (%)
RBC (10 6 /мкл)
MCV (фл)
МЧ (стр)
МСНС (г /дл)
RDW ( %)
WBC (10 3 /мкл)
тромбоцитами (10 3 /мкл)
Автомобиль
15,03 ± 0,13
46 ± 0,00 ± 9,38
0,13
59,12 ± 0,65
19,25 ± 0,31 34,22 ±
0,19
17,03 ± 0,44 ± 6,12
0,47
986,75 ± 23,65
CPRHE (1 г /кг)
15,47 ± 0,13
46 ± 0,00 ± 9,64
0,18
58,54 ± 0,63 18,89 ±
0,36
34,04 ± 0,33 18,23 ±
0,58
6,23 ± 0,34
995,36 ± 25,32
CPRHE (2 г /кг)
15,98 ± 0,12
46 ± 0,00
9,83 ± 0,16 57,78 ±
0,76
18,59 ± 0,29 33,93 ±
0,28
18,77 ± 0,34
6,31 ± 0,39
1011,52 ± 23,18
значения выражены как среднее ± SEM. ALT, аланинаминотрансферазы; АСТ, аспартатаминотрансферазы; AP, щелочной фосфатазы; CB, билирубин; ГГТ: G-глутамилтрансфераза; НСТ, гематокрита; HGB, гемоглобин; МЧ, средний эритроцитарный гемоглобин; МСНС, средняя концентрация гемоглобина; MCV, средний объем эритроцита; РБК, подсчет красных кровяных телец; RDW, красная ширина распределения клеток; ТБ: общий билирубин; WBC, белую клетку.
Результаты не показали каких-либо значимых различий между группами. Рисунок 2
гистологических срезов. Гистологическое почки (первая строка) и печени (второй ряд) в исследовании острой токсичности, представляющей крыс, получавших носитель (5% Tween 20), CPRHE (1 г /кг) и CPRHE (2 г /кг). Результат не показал существенных различий в структурах почек и печени между обработанными и контрольными группами (20 × увеличениях).
РН желудочного содержимого и определения слизи
кислотности желудочного содержимого у грызунов вводят перорально этанол был значительно увеличен по сравнению с нормальной контрольной группой, как показано в таблице. 4. После того, как лечение с омепразолом (положительный контроль), кислотность была значительно ослабляется (P &ЛТ;
0.
05) и животных, предварительно обработанных CPRHE при высокой дозе и низкой дозы вызывали значительное (Р &л;
0.
05) повышение рН. Желудочный содержание слизи был значительно обеднен животных, предварительно обработанных этиловым спиртом. В то же время, омепразол и лечение CPRHE значительно пополнили потери контента через слизистую оболочку P &Лт;
0.
05, таблица 4). Результаты обоих параметров предложили анти-язвенных эффект CPRHE.Table 4 гастропротекторного эффекта CPRHE против этанол-индуцированного повреждения желудка
групп животных

групп животных

рН желудочной ткани

Слизь Вес (г)

Язва площадь (мм) 2

• прогрессирование рака желудка связаны с развитием местного гуморального иммунного responses
• Тяжелая желудка варикозных вен кровотечение из-за тромбоза селезеночной артерии и последовательной артериа…