Plos ONE: priročno model huda, visoka pojavnost avtoimunski gastritis so jo povzročile poliklonskih efektor T celice in brez motnje regulatornih celic T

Povzetek

Avtoimunske rezultati gastritis iz razdelitve T-celične tolerance do želodca H ^{+ /K + -ATPaze. Želodca H + /K + ATPaze je odgovorna za zakisljevanje želodčnega soka in je sestavljen iz alfa podenote (H /Kα) in beta podenoto (H /Kβ). Tukaj bomo pokazali, da CD4 + T celic miši H /Kα-pomanjkljivo (H /Kα - /-) so visoko patogene in avtoimunski gastritis lahko povzroča v subletalno obsevanih divjega tipa miši s posvojitelj prenos nefrakcioniranega CD4 + T celice iz H /Kα - /- miši. Vse miši prejemnice dosledno razvil najbolj hudo obliko avtoimunske gastritis 8 tednov po prenosu, ki se ponaša hipertrofija želodčne sluznice, popolno izčrpavanje parietalnih in zymogenic celice, in prisotnost avtoprotiteles v H + /K + ATPaze v serumu. Poleg tega smo dokazali, da je bolezen močno prizadela težo v želodcu in trebuhu pH miši prejemnic. Izčrpavanje parietalnih celic v tem modelu bolezni potrebna navzočnost obeh H /Kα in H /Kβ od prenosa H /Kα - /- CD4 + T celic ni prišlo do izčrpavanja parietalnih celic v H /miši prejemnice - Kα - /- ali H /Kβ - /. Skladnost resnosti bolezni, uporaba poliklonskih celic T in specifičen odziv celice T na želodčni avtoantigen da ta model, idealno bolezen proučevanje številnih vidikov avtoimunosti organov specifično vključuje preprečevanje in zdravljenje bolezni.}

Navedba: Tu E, Ang DKY, Hogan TV, Read S, Chia CPZ, Gleeson PA, et al. (2011) priročno Model huda, visoka pojavnost avtoimunski gastritis so jo povzročile poliklonskih efektor T celice in brez motnje predpisani T celice. PLoS ONE 6 (11): e27153. doi: 10,1371 /journal.pone.0027153

Urednik: Ciriaco A. Piccirillo, McGill University Health Center, Kanada

Prejeto: 21. januar 2011; Sprejeto: 11. oktober 2011; Objavljeno: 9. november 2011

Copyright: © 2011 Tu et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Financiranje:. To delo je podprlo raziskovalne štipendije iz državnega zdravje in Svetu za medicinske raziskave v Avstraliji in na Univerzi v Melbournu. Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi. Avtorji lahko potrdim, da je bil Simon Preberite na univerzi v Melbournu, ko je bila ta študija zaključena in da Novo Nordisk je njegov trenutni naslov. Avtorji so izjavili ni konkurenčnih interesov obstaja.

Uvod

avtoimunski gastritis je odličen sistem, raziskati izgubo T-celična toleranca za samozaposlene tkiva, saj je dobro označena, avtoimunska bolezen z znano ciljni antigen in model miši bolezni ima mnogo podobna človeški ekvivalent. Slabokrvnostjo, konec faza avtoimunski gastritis, je ocenjena prevalenca 1,9% v zahodni odraslih prebivalcev, starejših od 60 let [1], ki predstavlja najpogostejši vzrok vitamina B _{pomanjkanjem 12 pri starejših [2] . Avtoimunski gastritis značilnosti infiltracijo mononuklearnih celic v submucosa, ki se razprostira v želodčni sluznici, izčrpavanje želodčne stene in zymogenic celic in hipertrofija sluznice želodca [1].}

ciljni antigen avtoimunskih gastritis je bilo ugotovljeno kot želodčni H ^{+ /K + -ATPaze s celicah želodčne stene izražena [3] - [5]. Želodca H + /K + -ATPaze je membranska protonske črpalke odgovoren za kisanja želodčnega soka in je heterodimer, ki sestoji iz katalitične alfa podenoto (H /Kα) in glikoproteina P podenote (H /Kβ). Predhodne študije so pokazale, da sta oba H /Kα in H /Kβ usmerjeno avtoimunskih gastritis [4], [6] - [8]. To je dobro dokumentirano, da je v obeh miših in ljudeh, CD4 + T celic, ki priznavajo želodca H + /K + -ATPaze sproži avtoimunski gastritis, medtem ko so CD8 + celice T in celice B neučinkovit pri tem [7] - [17]. Kljub temu, po začetku bolezni, avtoprotitelesa do H + /K + -ATPaze so proizvedeni in so zelo uporabno diagnostično orodje bolezni, čeprav niso patogeni [3], [16], [18 ].}

BALB /c miši so pokazale, da je najbolj dovzetna za-limfopenija povzroča avtoimunski gastritis z incidenco 30-90% [19], [20]. Bolezen se lahko inducira thymectomy 3 dni starih miših in odraslih thymectomy v kombinaciji z enim odmerkom ciklofosfamidom [19], [21]. Kljub temu, da je težko oceniti terapevtske učinke zdravljenja danih thymectomised miši saj spekter resnosti bolezni od blage do hude vedno opazuje in pojavnost se spreminja, so potrebni tako veliki velikosti skupin za testiranje statistične pomembnosti. Poleg tega je operacija vključeni in post-operativni vzdrževanje živali je tehnično zahtevna. Avtoimunski gastritis lahko povzročil tudi v BALB /c miši z imunizacijo z očiščenim želodca H ^{+ /K + -ATPaze [5]. Vendar pa je bolezen reverzibilna po prekinitvi imunizacijo in ima nizko resnosti. Prenos T celic BALB /c osiromašenim regulatornih T (Treg) celic v miši prejemnic povzroča hude avtoimunske gastritis [15]. Zato je nemogoče, da razklati razmerje med avtoreaktivne T celic in Treg celic med razvojem bolezni v tem okolju, saj so Treg celice odsoten.}

Visoka pojavnost spontanega avtoimunski gastritis so opazili pri transgenih miših, ki izražajo TCR specifični za H /Kα [8]. Vendar te miši ne predstavljajo model idealnega bolezni za vse poskuse, ker monoklonsko narava patogenih celic T, ne ponavljati poliklonsko odziv, ki se pojavlja v patofizioloških razmerah.

Iz tega vidika, smo razvili model bolezenskega ki se sklicuje na prenos poliklonski T celic iz H /Kα-pomanjkljivo (H /Kα ^{- /-) miši v subletalno-obsevanih mutantnimi ali divjimi tipi miši. Pokazali smo, da miši, ki so prejele nefrakcioniranem T celice iz H /Kα - /- miši vsi podlegli najbolj hudo avtoimunsko gastritis z patoloških sprememb, opaženih v celotnem želodcu. Poleg tega te patološke spremembe bistveno vplivale na fiziologijo želodec. Dokazali smo uporabnost tega modela, ki ga je razvidno, da je bil razvoj avtoimunskih gastritis v tem modelu popolnoma odvisna od prisotnosti obeh H + /K + -ATPaze a in beta podenote.}

Rezultati

Zvišane vrednosti T in odziv celic B in H /Kα ^{- /- miši po cepljenju s H + /k + -ATPaze}

da bi imeli sistem ki je primerna za preučevanje različnih vidikov avtoimunosti, smo vzpostavili model bolezen, pri kateri je bolezen, povzročene s patogenimi poliklonskih celic T in resnost bolezni, ki je dosledno hudo. A T celični odziv na H /Kα je potrebna za nastanek avtoimunskega gastritisa in je lahko glavni vir želodčnih avtoreaktivnih epitopov [7], [8], [22]. Kot je T-celična toleranca do H /Kα je malo verjetno, da pride v H /Kα ^{- /- miši, smo raziskovali če T celice, ki so bile značilne za H + /K + -ATPaze in lahko povzroča gastritis so bili prisotni v H /Kα - /-. miši}

če želite ugotoviti, ali so bili tam povišani imunske odzive H ^{+ /k + ATPaze v H /Kα - /- miši glede na divjetipski miši, miši dvakrat cepili s prečiščenim želodca H + /k + ATPaze. Po imunizaciji smo zaznali avtoprotitelesa, specifična za H + /K + ATPaze v imunizirane H /Kα - /- miši, ne pa tudi v mutantnimi ali divjimi tipi miših (slika 1A). T celični odziv na vitro
restimulation s H + /K + ATPaze je tudi značilno večje v H /Kα - /- miši kot v mutantnimi ali divjimi tipi miših (slika 1B). Zato, kot je bilo predhodno prikazano v H /Kβ - /- miši [23], je prav tako pomemben T in B celični odziv H + /K + ATPaze v H /Kα - /-. miši, ki ni prisoten v mutantnimi ali divjimi tipi miših}

CD4 ^{+ T celice iz H /Kα - /- miši so visoko patogene}

če želite ugotoviti, posvojitelj prenos T celic iz H /Kα ^{- /- miši bi lahko povzročila avtoimunski gastritis, smo obogatili CD4 + T celice bodisi H /Kα - /- ali mutantnimi ali divjimi tipi miših za ~85 % čistost in prenese 5 × 10 7 teh celic v subletalno obsevanih mutantnimi ali divjimi tipi miši. Ker je bilo že dokazano, da H + /K + -ATPaze specifične CD4 + T celice so se hitro črta na obrobju in ne morejo povzročiti avtoimunski gastritis pri nekadilcih, obsevanih mutantnimi ali divjimi tipi miših [24], vse miši prejemnice, ki se uporabljajo v tej študiji so bili rahlo obsevali na 600 radov za izboljšanje preživetja prenesenih celic T iz H /Kα - /-. miši}

Osem tednov po prenosu, miši, ki so prejele H /Kα ^{- /- CD4 + T celice razvite najbolj hude oblike avtoimunski gastritis (ocena 5 in 6). To je razvidno iz popolnega izčrpavanja parietalnih celicah in zymogenic celic ter hipertrofija želodčne sluznice (slika 2A, 2B). V nasprotju s tem, miših, ki so prejele divjetipskega CD4 bile + T celice popolnoma brez gastritis (slika 2A, 2B), ki je pokazala, da avtoimunskega gastritisa pri miših sprejemu H /Kα - /- CD4 + T celic z obsevanjem ni nastala per se
, temveč celica inokulum T.}

Patološke spremembe v želodcu gastritic miši bistveno vplivalo na želodec fiziologijo. Hipertrofija želodčne sluznice povzročila širitev želodčne rugae (slika 2C) in povečanje teže želodčne (slika 2D). Drugič, izčrpavanje parietalnih celicah povzročila povečanje želodčnega pH zaradi pomanjkanja izločanja želodčne kisline (slika 2E). Poleg tega, avtoprotitelesa, značilne za želodčno H ^{+ /K + -ATPaze mogoče zaznati v vseh gastritic miših (slika 2F). Avtoprotitelesa dosegle visoke ravni v vseh miših 6 tednov po prenosu (slika 2G). Skupaj ti rezultati dokazali prisotnost visoko patogene H + /K + -ATPaze specifične T celice v H /Kα - /-. Miši}

avtoimunski gastritis je s CD4 povzročil ^{+ T-celično vnetje}

Miške z avtoimunsko gastritis s prenosom H /Kα ^{inducirane - /- CD4 + T celice so imeli bistveno več celic v njihovi-želodcu odvajanje paragastric limfe vozlišča v primerjavi z običajnimi miših in podganah, ki so prejele CD4 + T celice od darovalcev mutantnimi ali divjimi tipi. V nasprotju s tem pa ni bilo nobene razlike v velikosti dimeljske bezgavke med gastritic in non-gastritic miših (slika 3A). Ta je predlagal, da je bilo povečanje celičnosti paragastric bezgavk v gastritic miših povzroča lokalno vnetje želodca in ne s prednostno preživetje ali širjenje H /Kα - /- CD4 + celic T v primerjavi z divjega CD4 + T celic po prenosu}

v teh poskusih celice iz donator H /Kα ^{-. /- ali divjetipski miši se lahko razlikujejo od prejemnic celic, ker so nosili različne CD90 alelov. Darovalec prebivalstva v paragastric bezgavke miši, ki je prejela H /Kα - /- CD4 + T celice so imeli bistveno več CD4 + T celice efektor /pomnilniško fenotipa z (CD44 hiCD62 lo) v primerjavi z miših, ki so prejele divjega tipa CD4 + T celic. Vendar je bila raven efektor /spominskih celic T podobna v ne-odvajanje bezgavke (slika 3B). Povzamemo, ti rezultati kažejo, da je razvoj avtoimunskega gastritisa pri miših, ki so prejemale CD4 + T celice iz H /Kα - /- miši so s T-celično posredovane vnetnega odgovora v želodčnem okolju povzročil namesto bolj splošen odgovor.}

razvoj avtoimunski gastritis v tem modelu bolezni ni bila povezana z zmanjšano stopnjo regulativnega T (Treg) celic, saj gastritic miši vsebuje podobne deleže Treg celic v paragastric bezgavke v primerjavi z ne -gastritic kontrole (slika 4A, 4B). V resnici je bilo precej več Treg celic v želodcu miši z avtoimunskega gastritisa (slika 4A, 4C)

H /Kα ^{-. /- CD4 + T celice hitro povzroča poškodbe tkiva v želodcu}

resnost avtoimunski gastritis smo analizirali v različnih časovnih točkah po prenosu H /Kα ^{- /- CD4 + T celic. Zmerno izčrpavanje parietalnih celic in zymogenic celic, kot jih rezultatom gastritis 4 [24] navedeno, bi lahko opazili že 2 tedna po prenosu in bolezen hitro napredovala z večino miših kaže hudo gastritis, kot je razvidno iz gastritis z rezultatom 5 in 6, 4 tedne po prenosu (slika 5).}

Želodec masa, ki se lahko uporablja kot kvantitativno merilo avtoimunski gastritis

smo pokazali, da miši z avtoimunskimi gastritis imel večjo težo v želodcu kot miši brez bolezni zaradi hipertrofija želodčne sluznice (slika 2D). Zato smo raziskovali če bi se masa želodca uporablja kot kvantitativno merilo za resnost avtoimunskega gastritisa. Za nadaljnjih preskusov, če bi teža želodec razlikovanje med različnimi stopnjam avtoimunski gastritis, smo pregledali neonatally-thymectomised miši, kot je bilo mogoče dobiti večje število miši z rezultati spremenljivo bolezni. Ugotovili smo, da so bile razlike v povprečni teži želodcu med vsako od prvih petih stopnjah avtoimunskega gastritisa (rezultat 0-4) (slika 6). Vendar srednji želodčne uteži gastritis točk 4, 5 in 6 niso bili pomembno različni drug od drugega (slika 6). To je verjetno posledica dejstva, da je stopnja hipertrofije želodčne sluznice ne poveča kot bolezen napreduje do poznih faz

Indukcija avtoimunskega gastritisa, ki ga H /Kα ^{-. /- CD4 + T celic je odvisna od prisotnosti H /Kα in H /Kβ}

hipotetično, da je patogenost CD4 ^{+ T celic iz H /Kα - /- miši je povzročil pomanjkanje strpnosti do H /Kα v odsotnosti tega želodca avtoantigena. Če želite to preizkusiti, so CD4 + T celice prenesejo iz H /Kα - /- miši v subletalno-obsevan H /Kα - /- tudi divjetipski miši. Dokazano je bilo, da je H /Kα, v odsotnosti H /Kβ, ni mogoče predstaviti MHC molekule [25] (S Allen, osebna komunikacija). Zato smo prenesli CD4 + T celice iz H /Kα - /- miši v subletalno-obsevanih H /Kβ - /- miši in jih primerjali s H /Kα - /- in divjetipskega miši prejemnice. Analiza avtoimunskega napada na želodčne sluznice je zapleten v H /Kα - /- in H /Kβ - /- miši s spremembami, ki se pojavijo v želodčni sluznici, saj pomanjkanje želodčne kisline v teh miših Rezultati v povišane ravni prehranjevalne hormona gastrina. To vodi do konstitutivne hipertrofijo in izčrpavanje zymogenic celic [26]. Zato, da bi ocenili, ali avtoimunska odgovor napade želodčne sluznice v teh miših, smo namesto tega določi razširjenost parietalnih celic, ki se običajno izčrpani v avtoimunskih gastritis, vendar jih najdemo v izobilju v H /Kα - /- in H /Kβ - /- miši, pa tudi prisotnost želodca avtoprotiteles}

morfologija želodec in H /Kα ^{-. /- miši ali H /Kβ - /- miši ni bila prizadeta s prenosom H /Kα - /- CD4 + T celic (slika 7A, 7B). Zlasti ni bilo izčrpavanje parietalnih celicah navajajo pomanjkanje avtoimunske odziv. V nasprotju s tem pa je bila popolna izčrpanost parietalnih celic pri miših divjetipskega prejemnikov, ki so prejeli H /Kα - /- CD4 + T celic (slika 7c). Ker želodci H /Kα - /- in H /Kβ - /- miših pojavila drugačna, tako običajnih in gastritic miši, nismo mogli oceniti te miši uporabo našega standardnega gastritis sistem točkovanja. Vendar H + /K + -ATPaze specifične avtoprotitelesa, en znak avtoimunski gastritis, niso bili odkriti v serumu tako H /Kα - /- in H /Kβ - /- miši prejemnice, pa so odkrili pri miših divjetipskega prejemnicah (slika 7a). Ti rezultati pokazali, da je potrebna navzočnost obeh alfa in beta podenote za izčrpavanje parietalnih celic, ki jih H /Kα - /-. CD4 + T celic}

Pogovor

avtoimunski gastritis lahko povzroča v BALB /c miši na različne načine, vključno z neonatalno thymectomy, adult thymectomy s ciklofosfamidom [19], [21], imunizacijo z želodčnim H ^{+ /K + -ATPaze [5] generacija H + /K + -ATPaze-specifične TCR transgenih miših [7], [8]. Vendar pa imunski sistem s T celicami prevladujejo z enim specifičnostjo kot je bilo ugotovljeno v TCR transgenske miši ne spominja normalnih fizioloških pogojih. Poleg tega thymectomy in imunizacija ne dajejo dosledne resnost bolezni in so tehnično zahtevni, zaradi česar je neprijetno za uporabo teh modelov za analizo imunoterapije. Zato smo razvili nov model, bolezni, ki sklicuje na prenos T celic iz H /Kα - /-. miši, monoklonsko populacijo, ki vsebuje visoko gastritogenic celice T}

Ugotovili smo, da imunizacija H /Kα ^{- /- miši z očiščenim H + /k + -ATPaze inducirane odločno odziva T celic kot posledica pomanjkanja T-celične tolerance za želodčni avtoantigen, ki je pokazal prisotnost H + /K + -ATPaze specifične T celice v H /Kα - /- miši. Nadaljevali smo dokazali, da je prenos CD4 + T populacije celic iz H /Kα - /- miši povzročene škode na želodcu tkiva miši prejemnic kmalu po prenosu. Avtoimunski gastritis s prenosom H /Kα povzročil - /- CD4 + T celic je vedno huda: vse miši prejemnica razvil najbolj hudo bolezen osem tednov po prenosu in njihov želodec fiziologija bila znatno prizadeta, kakor je navedeno povečanje mase želodcu in pH. Ta model je koristno, ker resnost in pogostnost pristopov bolezni, ki jih opazili pri TCR transgenske miši, vendar ga poliklonskega repertoar povzročile, da je tehnično enostavna ugotoviti, da se ne opira na motnje normalnega Treg celičnega repertoarja.}

populacija celica darovalca iz H /Kα ^{- /- miši je obogatiti ~85% CD4 + T celic po postopku "negativna selekcija", ker je bil glavni cilj tega dela za pripravo preprost , model, poceni in priročno bolezen. Sklepamo, da gre za CD4 + T celic v inokulumu ki povzroča avtoimunsko gastritis, ker je bila trdno zasidrana številnih študij, ki CD4 + T celice in ne druge vrste celic so sposobni sprožiti avtoimunskega gastritisa [7 ] - [17]. Jasno je, da so T in B celic populacije reaktivnih s H + /K + ATPaze prisoten v repertoarju normalnih miši [5], [14] - [16], [21], [24 ], [28] - [33]. Zato predlagamo, da se H + /K + -ATPaze specifične T in B celic iz prejemnika se nato zaposlila na poškodbe in B celice, prejemnice pridobljeni so odgovorni za proizvodnjo protiteles.}

Ugotovljeno je bilo predhodno dokumentirano, da CD4 ^{+ T celice iz H /Kβ - /- miši inducira avtoimunske gastritis pri atimičnih BALB /c miših, vendar ne obsevanih mutantnimi ali divjimi tipi miših [24]. CD4 + T celice iz H /Kα - /- miši povzroča gastritis v obsevanih mutantnimi ali divjimi tipi miših kaže, da je ta populacija bolj patogeni kot CD4 + T celic iz H /Kβ - /- miši . Ti podatki potrjujejo bolj dominantno vlogo imunskega odziva proti H /Kα v patogenezo avtoimunskega gastritisa, skladno z ugotovitvami TCR transgenih miših [7], [8].}

Za razliko od drugih modelov bolezni, ki uporabljeni Treg celic -depleted poliklonalni T celice mutantnimi ali divjimi tipi miši za indukcijo avtoimunosti [15], ni bilo potrebno odstraniti Treg celice H /Kα ^{- /- CD4 + T celične populacije, za indukcijo hudo avtoimunskega gastritisa. Poleg tega je bil razvoj avtoimunskega gastritisa pri miših prejemnicah z znižano stopnjo Treg celic iz populacije dajalca ni povzročila, saj gastritic miši vsebuje podoben delež Treg celic v paragastric bezgavke v primerjavi z ne-gastritic kontrol. Prej smo dokazali, da Treg celice iz H /Kα - /- miši so bili tako učinkoviti, kot Tregs celic mutantnimi ali divjimi tipi miši pri preprečevanju H /Kα specifične avtoreaktivne T celice [34]. Zato naše ugotovitve tu podpirajo prejšnje delo, ki kaže, da so T celic repertoarja, ki niso bili izpostavljeni periferni T brisanje celice ne morejo zatreti z običajnimi Treg celic prebivalstva [24], [35].}

Čeprav normalno raven za Treg celice so odkrili v paragastric bezgavke v gastritic miši, in bistveno večji odstotek Treg celic je bilo v želodcu gastritic miših v primerjavi z običajnimi miši, Treg celice niso mogli preprečiti ali zatiranje bolezni. To je v skladu z ugotovitvijo, da čeprav Treg celice nabrali v centralnem živčnem sistemu, ko se je sprožil eksperimentalni alergični encefalomielitis [36], niso mogli preprečiti širitev in funkcijo mielin oligodendrocitnih celic T glikoprotein specifična, saj je lokalna vnetna citokinov milje opravljene patogenih celic T, odpornih proti Treg zatiranje.

Izčrpavanje parietalnih celic je znak avtoimunska gastritis in je glavni razlog, da je slabokrvnostjo smrtno nevarno bolezen, ker parietalnih celicah proizvajajo notranjo faktor, pomanjkanje, ki je usodno . Ugotovili smo, da izčrpavanje parietalnih celicah v tem modelu bolezni je odvisen od prisotnosti obeh H ^{+ /K + -ATPaze podenote kot CD4 + T celice iz H /Kα - /- miši samo povzroča izčrpavanje parietalnih celic v mutantnimi ali divjimi tipi miših, ne pa v H /Kα - /- in H /Kβ - /- miši. izčrpavanje parietalnih celic, ki jih T-celičnem odzivu do H /Kβ ni nastala, ker H /Kα - /- CD4 + T celice niso povzročijo tanjšanje parietalnih celic v H /Kα - /- miši prejemnice medtem ko H /Kβ je bila izražena v teh miših [26]. Po drugi strani pa odsotnost parietalnih izčrpavanje celica v H /Kβ - miši prejemnikov, ki so prejeli H /Kα - - //- CD4 + T celic okrepiti naše prejšnje študije, ki kažejo na potrebo po H /Kβ da za H /Kα, ki bi ga MHC molekule [22]. Skupaj ti rezultati predlagal, da parietalnih izčrpavanje celic v tem modelu prenosa razvil kot posledica imunske odzive na H /Kα s CD4 + T celice iz H /Kα - /- miši. Opažamo, da je v prejšnjem delu smo ugotovili, da parietalnih celicah niso izčrpane v obeh H /Kα - /- niti H /Kβ - /- miši po neonatalni thymectomy, ki poudarja usklajenost tega novega modela z rezultati iz te prejšnje, uveljavljenega modela.}

prav tako je pokazala tukaj, da teža želodec lahko uporablja kot kvantitativno merilo resnosti bolezni, saj hipertrofija želodčne sluznice so opazili pri miših z avtoimunsko gastritis, kar je povzročilo v povečanju teže v želodcu [37]. Tam je bila statistično značilna korelacija med težo v želodcu in resnosti avtoimunskega gastritisa pri miših, ki so prejemale H /Kα ^{- /- CD4 + T celic. Ta povezava je bila nadalje potrjena v neonatally-thymectomised miših, pri čemer je povprečna teža v želodcu, v vsakem gastritis rezultat pa bistveno drugačen od drugega. Vendar pa zaradi razlik v skupinah, bodo potrebne velike velikosti vzorca, če je masa želodec, ki se uporablja za oceno resnosti bolezni. Zato lahko histološki pregled v kombinaciji s težo v želodcu je treba obravnavati kot dopolnilne ukrepe za oceno resnosti avtoimunskega gastritisa}

Pokazali smo, da avtoimunski gastritis jih povzroča posvojitelj prenosom H /Kα ^{-. /- CD4 + T celic predstavljal model odlično bolezni za seciranje avtoimunskega odziva in oblikovanje interventionary terapij za avtoimune bolezni. V tem modelu bolezni, je avtoimunski gastritis povzročena na nefrakcioniranem poliklonski T-celične populacije, ki je vsebovala patogenih T celice, specifične za posamezni antigen, in v skladu resnost bolezni visoke stopnje so opazili pri vseh miših prejemnicah. Poleg tega smo pokazali, da se resnost bolezni, lahko določi po teži v želodcu, želodčne pH in histološko preiskavo oddelka želodca.}

Materiali in metode

Etika izjava

To delo skuša pridobiti podrobnejše podatke o avtoimunskih bolezni in imunološke mehanizme, ki preprečujejo nastanek avtoimunosti pri zdravih posameznikih. Ker je imunski sistem zelo zapleten, celostno omrežje, morajo živali za pravilno ovrednotenje teh vprašanj.

je bila večina postopkov klinični testi izvedeni na krvi in ​​tkivnih vzorcih, odvzetih iz miši, ki se vzdržujejo v odličnih stanovanjskih razmerah . Miši so bile skrbno spremljati in, če je resno prizadeta ali stiski ubili. Ob zaključku vsakega poskusa smo miši ubili z zadušitvijo CO2 ali cervikalno dislokacijo, ki so povezane z najmanj stiski.

Vsi poskusi so skrbno načrtovane za zmanjšanje števila živali in se izvajajo strogo v skladu s smernicami, ki jih narekuje Univerza v odboru Melbournu živali eksperimentiranje etiko; preprečevanje krutosti do zakona Animals 1986; in NHMRC /CSIRO /AAC Avstralski kodeks ravnanja za nego in uporabi živali v znanstvene namene (1997).

To delo je bilo odobreno na Univerzi v Melbournu Odbor za etiko živali v okviru projekta številko 0706327.3.

Miške

BALB /cCrSlc [38], BALB /cCrSlc.CD90.1 congenic, H /Kα ^{- /- [26], H /Kβ - /- [ ,,,0],27] in BALB.B6- gasa
congenic miši [20] je bilo prej opisano. Oba H /Kα - /- in H /Kβ - /- so bile miši backcrossed več kot 10-krat na BALB /cCrSlc. H /Kα - /- miši so prestopili k BALB /c.CD90.1 miših za ustvarjanje H /Kα - /-. CD90.1 miši. Vse miši so se ohranila v običajnem objektu živali na Bio21 molekularno znanost in biotehnologija inštituta, Univerze v Melbournu. Vse miši in poskusi so bili odobreni s strani Univerze v Melbournu odbora živali eksperimentiranje etiko.}

Protitelesa in pretočna citometrična analiza

Anti-CD3-FITC (145-2C11), anti-CD90.1- FITC (HIS51), anti-CD90.2-FITC (30H-12), anti-CD62L-PE (MEL-14), anti-CD4 PerCP (RM4-5) in anti-CD8-APC (53-6,7) so bile kupljene od BD Pharmingen; anti-CD44-APC (IM-7) je bila kupljena od eBioscience. Znotrajcelična barvanje FoxP3 je bila izvedena z anti-FoxP3-APC (FJK-16S) in FoxP3 barvanjem Kit (eBioscience) v skladu z navodili proizvajalca. Tok je bil citometrijo izvedena na Becton Dickinson FACSort tok citometrom in analizirali z Cellquest Pro programske opreme ali Beckman Coulterjevega cyan in analizirali z uporabo programske opreme vrha.

Analiza odgovorov T celic pri miših, cepljenih s H + /K + -ATPaze

prečiščena pig želodca H ^{+ /K + ATPaze je bila pripravljena v razmerju 1:1 z Freundov popolni adjuvans (Life Technologies). Miši smo injicirali subkutano v vsaki strani korenu repa. H /Kα - /- in BALB /cCrSlc miši dvakrat cepili s 30 ug H + /K + -ATPaze, pri enem mesecu, razen med cepljenj. En teden po drugi imunizaciji miši žrtvovali za njihovo serume in dimeljske bezgavke. H + /K + -ATPaze specifične avtoprotitelesa so odkrili z ELISA. Celice iz dimeljske bezgavke so bile uporabljene v testu celične proliferacije T. 1 x 10 5 celice smo gojili 72 ur z 2 × 10 4 vranice DC iz BALB /cCrSlc miših. proliferacija celic T je bila ocenjena z vključitvijo 3H-timidina pri končnih 16 ur kulture. T celice smo gojili v treh izvodih bodisi z DC z antigenom (50 ug /ml miš želodca membrane) ali DC sam. Želodčne membrane smo pripravili iz želodcev miško, kot je prej opisano [5]}

Indukcija avtoimunski gastritis pri miših

CD4 ^{+ T celice smo obogatili s >. 85% čistost od bezgavk in vranica H /Kα - /- in BALB /cCrSlc miših. suspenzije enocelične inkubiramo v mešanici F4 /80 in B220 hibridnih supernatantih plus anti-CD8 protiteles (53.6.72, BioXCell). V-CD4 nahajajo celice so bile odstranjene s pomočjo anti-podgana-IgG obložene magnetne kroglice (Dynal, Invitrogen). CD4 + (5 x 10 7) T celice bodisi H /Kα - /- ali BALB /cCrSlc miši smo injicirali v subletalno obsevanih (600 radov) divjetipskega congenic BALB /cCrSlc.CD90.1 miši preko intraperitonealni poti. V nekaterih poskusih, očistimo H /Kα - /- so CD4 + T celice vbrizgali v obsevan BALB /cCrSlc, H /Kα - /- in H /Kβ - /- miši. Vse miši prejemnice so obsevali na 600 radov en dan pred prenosom T celic. Osem tednov kasneje so miši prejemnice ubitih in požanjemo želodci, bezgavke in sera.}

BALB /cCrSlc in BALB.B6- gasa
congenic miši so bili uporabljeni v thymectomy poskusih. Neonatalno thymectomy bila izvedena, kot je opisano prej [20].

Histološki pregled želodcev in merjenje pH v želodcu

želodcu odsekih so bile pregledane na prisotnost patoloških sprememb, kot je opisano zgoraj [24]. Sedaj je bila izvedena v slepem način in vsak drsni je neodvisno dosegel najmanj dve osebi. Za merjenje želodčne pH miši sestradana čez noč pred žrtvovanje. Želodci so Rasporiti in nato spere z 1 ml fiziološke raztopine, ki je bilo zbrano in izmerjeno s pH-metrom.

H + /K + -ATPaze specifično encimsko-imunskim testom (ELISA)

ELISA za odkrivanje H ^{+ /k + -ATPaze specifične avtoprotitelesa je bila izvedena s pomočjo prečiščenega pig H + /k + -ATPaze kot je opisano prej [29].}

Statistična analiza

Statistična analiza je bila opravljena s pomočjo GraphPad Prism 5.0 (GraphPad). Podatki so bili analizirani s pomočjo Mann-Whitney U-test ali test primerjalno Spearman in vrednost P < 0,05 je zdelo pomembno
.

• Plos ONE: Gene Expression profiliranje v želodčne sluznice s Helicobacter pylori, okuženih in neokuženih bolnikih, ki prestajajo Kronična Površinski Gastritis
• Plos ONE: Natančnost in mejne vrednosti za Pepsinogens I, II in gastrin 17 za diagnozo želodca Fundic atrofije: Vpliv Gastritis