PLoS ONE: Miellyttävä malli Vaikea, yleisyys autoimmuunigastriitin aiheuttamat Polyklonaaliset T-soluja ja ilman häiritsemisestä sääntelykulttuurin T Cells

tiivistelmä

autoimmuunigastriitin johtuu jakautuminen T-solujen toleranssin mahalaukun H ^{+ /K + ATP. Mahalaukun H + /K + ATP vastaa happamoituminen mahanesteen ja koostuu α-alayksikön (H /Ka) ja β-alayksikköä (H /Kβ). Tässä osoitamme, että CD4 + T-solujen H /Ka-hiirillä (H /Ka - /-) ovat erittäin patogeeniseen ja autoimmuunigastriitin voidaan indusoida sublethally säteilytetään villityypin hiirien adoptiivinen siirto fraktioimattoman CD4 + T-solujen H /Ka - /- hiirissä. Kaikki saajahiiret johdonmukaisesti kehittäneet vakavin autoimmuunigastriitin 8 viikkoa siirron jälkeen, jossa liikakasvu mahalaukun limakalvon, täydellinen ehtyminen parietal ja tsymogeeninen soluja, ja läsnäolo autovasta H + /K + ATPaasi seerumissa. Lisäksi osoitimme, että tauti vaikuttaa merkittävästi mahan painon ja mahan pH saajahiiret. Ehtyminen parietaalisoluissa tämän taudin mallissa vaaditaan läsnäoloa sekä H /Ka ja H /Kβ koska siirto H /Ka - /- CD4 + T-solut eivät johtaneet ehtymiseen parietaalisoluissa H /Ka - /- tai H /Kβ - /- vastaanottaja hiiriä. Johdonmukaisuus sairauden vakavuudesta, käyttö polyklonaalisten T-solujen ja T-solun, vastauksena mahalaukun autoantigeenille tekevät tästä ihanteellisen tautimallina tutkimuksen monista näkökohdista elinspesifiseen autoimmuniteetin lukien ehkäisyyn ja hoitoon taudin.}

Citation: Tu E, Ang DKY, Hogan TV, Read S, Chia CPZ, Gleeson PA, et al. (2011) Miellyttävä malli Vaikea, yleisyys autoimmuunigastriitin aiheuttamat Polyklonaaliset T-soluja ja ilman häiritsemisestä säätelijä-T-soluja. PLoS ONE 6 (11): e27153. doi: 10,1371 /journal.pone.0027153

Editor: Ciriaco A. Piccirillo, McGill University Health Center, Kanada

vastaanotettu: 21. 2011; Hyväksytty: 11 lokakuu 2011; Julkaistu: 09 marraskuu 2011

Copyright: © 2011 Tu et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat tutkimusmäärärahat National Health ja Medical Research Council of Australia ja Melbournen yliopistossa. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat voi vahvistaa, että Simon Read oli The University of Melbourne, kun tämä tutkimus oli valmistunut ja että Novo Nordisk on hänen nykyinen osoite. Kirjoittajat ovat ilmoittaneet ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

autoimmuunigastriitin on erinomainen järjestelmä tutkia menetys T-solujen toleranssin itse kudoksiin, koska se on hyvin tunnettu autoimmuunisairaus kanssa tunnettu kohdeantigeeniä ja hiirimallissa tauti on monia yhtäläisyyksiä ihmisten vastaavien. Anemia, loppuvaiheessa autoimmuuni gastriitti, on arvioitu esiintyvyys 1,9% Länsi aikuisväestöstä yli 60 vuoden ikään [1], joka edustaa yleisin syy vitamiini B _{12 puute iäkkäillä [2] . Autoimmuuni gastriitti on tarjolla tunkeutumisen mononukleaaristen solujen submucosa, joka ulottuu mahan limakalvon, ehtyminen mahalaukun parietaalisolujen ja tsymogeeninen solujen liikakasvu mahalaukun limakalvon [1].}

kohdeantigeenin autoimmuuni gastriitti on tunnistettu kuten mahan H ^{+ /K + ATP ilmaiseman mahalaukun parietaalisoluista [3] - [5]. Mahalaukun H + /K + ATP on kalvo protonipumpun vastaa happamuuden mahanesteen ja se on heterodimeeri, joka koostuu katalyyttisen α-alayksikön (H /Ka) ja glykoproteiini β-alayksikön (H /Kβ). Aikaisemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että sekä H /Ka ja H /Kβ kohdentuvat autoimmuunigastriitin [4], [6] - [8]. On hyvin dokumentoitu, että niin hiirillä ja ihmisen CD4 + T-solut, jotka tunnistavat mahan H + /K + ATP aloittaa autoimmuunigastriitin taas CD8 + T-solut ja B-solut ovat tehoton näin [7] - [17]. Kuitenkin aloittamisen jälkeen sairauden, autovasta-aineiden H + /K + ATP tuotetaan ja ovat erittäin hyödyllinen diagnostinen väline taudin, vaikka ne eivät ole patogeenisiä [3], [16], [18 ].}

BALB /c-hiirten on osoitettu olevan kaikkein alttiimpia lymfopeniaa aiheuttama autoimmuunigastriitin esiintyvyys 30-90% [19], [20]. Tauti voidaan indusoida kateenkorvan poisto on 3 päivää vanhoja hiiriä tai aikuinen kateenkorvan poisto yhdistettynä yhden annoksen syklofosfamidia [19], [21]. Tästä huolimatta on vaikea arvioida terapeuttisia vaikutuksia hoitoja annettiin thymectomised hiirille koska tautikirjona lievästä vaikeaan on aina havaita ja esiintyvyys on vaihteleva, siten suuret ryhmäkoot on testattava tilastollista merkittävyyttä. Lisäksi leikkaus mukana ja leikkauksen jälkeinen huolto eläinten on teknisesti vaativaa. Autoimmuunigastriitin voidaan myös indusoida BALB /c-hiirten immunisaatio puhdistetulla mahan H ^{+ /K + ATP [5]. Kuitenkin tauti on palautuva jälkeen immunisaation lopettamisen ja alhainen vakavuutta. Siirto BALB /c T-solut köyhdytetty säätelijä-T (Treg) solut kateenkorvattomiin saajahiiret aiheuttaa vakavia autoimmuunigastriitin [15]. Näin ollen on mahdotonta leikellä suhdetta autoreaktiivisten T-solujen ja Treg solujen aikana sairauksien kehittymisestä tässä asetelmassa koska Treg solut ovat poissa.}

korkea esiintyvyys spontaanien autoimmuunigastriitin havaitaan siirtogeenisiä hiiriä, jotka ekspressoivat TCR on spesifinen H /Ka [8]. Nämä hiiret eivät edusta ihanteellinen tautimallina kaikissa kokeissa, koska monoklonaalinen luonteen patogeenisten T-solujen ei kerrata polyklonaalinen vaste, joka ilmenee patofysiologisissa olosuhteissa.

Tästä näkökulmasta olemme kehittäneet taudin malli tukeutuen siirtoa polyklonaalisten T-solujen H /Ka-puutosta (H /Ka ^{- /-) hiirillä osaksi sublethally-säteilytetty villityypin hiirillä. Olemme osoittaneet, että hiirillä, jotka saivat fraktioimatonta T-solut H /Ka - /- hiirillä kaikki menehtyivät vakavin autoimmuunigastriitin kanssa patologisia muutoksia noudatetaan koko vatsaan. Lisäksi nämä patologiset muutokset vaikuttivat merkittävästi fysiologian vatsaan. Me osoittanut, että tätä mallia osoittamalla, että kehitys autoimmuunigastriitin tässä mallissa oli tiukasti riippuvainen läsnäolosta molemmat H + /K + ATP α ja β-alayksiköitä.}

Tulokset

Kohonneita T- ja B-soluvasteen H /Ka ^{- /- hiirissä immunisoinnin jälkeen H + /K + ATP}

jotta järjestelmä joka soveltuu tutkimuksen eri osa autoimmuniteetin, perustimme tauti malli, jossa sairauden aiheuttaa patogeenisten polyklonaalisten T-solujen ja taudin vakavuus on johdonmukaisesti vakava. T-solu vastaus H /Ka tarvitaan puhkeamista autoimmuunigastriitin voi olla hallitseva lähde mahalaukun autoreaktiivisten epitooppien [7], [8], [22]. Koska T-solujen toleranssin H /Ka oli epätodennäköinen H /Ka ^{- /- hiirissä, tutkimme jos T-solut, jotka olivat spesifisiä H + /K + ATP ja voi synnyttää gastriitti oli läsnä H /Ka - /- hiirissä.}

Voit selvittää, onko olivat koholla immuunivasteita H ^{+ /K + ATP H /Ka - /- hiirillä verrattuna villityypin hiiret, hiiret immunisoitiin kahdesti puhdistetulla mahalaukun H + /K + ATP. Immunisoinnin jälkeen, autovasta-aineet, jotka ovat spesifisiä H + /K + ATP havaittiin immunisoitujen H /Ka - /- hiirissä, mutta ei villityypin hiirissä (kuvio 1A). T-solujen vaste in vitro
-uudelleenstimulaation H + /K + ATP oli myös merkitsevästi enemmän H /Ka - /- hiirissä kuin villityypin hiirillä (kuvio 1 B). Näin ollen, kuten on aiemmin osoitettu H /Kβ - /- hiirissä [23], on myös merkittävä T-ja B-solujen vaste H + /K + ATP-H /Ka - /- hiirissä, joka ei ole läsnä villityypin hiirillä.}

CD4 ^{+ T-solujen H /Ka - /- hiiret olivat erittäin patogeenista}

Voit selvittää, adoptiivinen siirto T-solujen H /Ka ^{- /- hiirissä voisi aiheuttaa autoimmuuni gastriitti, me rikastettu CD4 + T-solujen joko H /Ka - /- tai villityypin hiirissä -85 % puhtaus ja siirrettiin 5 x 10 7 näiden solujen sublethally säteilytetty villityypin hiirillä. Koska se oli aiemmin osoitettu, että H + /K + ATP-CD4 + T-solut nopeasti poistettu periferiassa ja kyenneet indusoimaan autoimmuunigastriitin ulkopuolisissa säteilytetty villityypin hiirillä [24], kaikki vastaanottajan käytetyt hiiret tässä tutkimuksessa kevyesti säteilytettiin 600 rad parantaa selviytymisen siirrettyjen T-solujen H /Ka - /- hiirissä.}

Kahdeksan viikkoa siirron jälkeen, hiirillä, jotka saivat H /Ka- ^{- /- CD4 + T-solut kaikissa kehittyneissä vakavin muodoista autoimmuunigastriitin (pisteet 5 ja 6). Tämä osoitettiin täydellinen ehtyminen parietaalisoluihin ja tsymogeeninen solujen liikakasvu mahalaukun limakalvon (kuvio 2A, 2B). Sitä vastoin hiirillä, jotka saivat villityypin CD4 + T-solut olivat täysin vapaita gastriitti (kuvio 2A, 2B), mikä osoitti, että autoimmuuni gastriitti hiirillä, jotka saivat H /Ka - /- CD4 + T-solut ei aiheuttanut säteilytys sinänsä
, vaan T-solun inokulaatti.}

patologiset muutokset vatsassa gastritic hiirten merkittävästi vaikuttanut niiden vatsa fysiologia. Hypertrofiaa mahan limakalvon johti laajentumisen mahan rugae (kuvio 2C) ja kasvu mahan paino (kuvio 2D). Toiseksi, ehtyminen parietaalisolujen aiheutti lisääntymisen mahassa pH puutteen vuoksi hapon erityksen (kuvio 2E). Lisäksi autovasta-aineita spesifisiä mahalaukun H ^{+ /K + ATP voitiin havaita kaikissa gastritic hiirissä (kuvio 2F). Autovasta nousseet kaikkien hiirten 6 viikon kuluttua siirrosta (kuvio 2G). Yhdessä nämä tulokset osoittivat erittäin patogeenisen H + /K + ATP-T-soluja in H /Ka - /- hiirissä.}

autoimmuunigastriitin aiheutui CD4 + T-solu-välitteisen tulehduksen

Hiiret autoimmuuni gastriitti aiheuttama siirto H /Ka ^{- /- CD4 + T-soluja oli huomattavasti enemmän soluja niiden vatsa-tyhjennys paragastric imusolmukkeiden solmut verrattuna normaaleihin hiiriin, ja hiirillä, jotka saivat CD4 + T-solujen villityypin luovuttajilta. Sitä vastoin ei ollut eroa koko imusolmukkeet imusolmuke välillä gastritic ja ei-gastritic hiirillä (kuvio 3A). Tämä viittasi siihen, että kasvu solumäärän paragastric imusolmukkeiden gastritic hiirissä aiheutti paikallista mahalaukun tulehdusta eikä etuoikeutettu säilymisen tai laajentaminen H /Ka - /- CD4 + T-solujen villityyppiin verrattuna CD4 + T-solujen siirron jälkeen.}

näissä kokeissa solujen luovuttajalta H /Ka ^{- /- tai villityypin hiiret voitiin erottaa vastaanottajan soluista, koska he synnyttivät eri CD90 alleelit. Luovuttaja väestö paragastric imusolmuke hiirten, jotka saivat H /Ka - /- CD4 + T-solut oli merkittävästi enemmän CD4 + T-solut efektori /muisti fenotyyppi (CD44 hiCD62 lo) verrattuna hiirillä, jotka saivat villityypin CD4 + T-soluja. Kuitenkin tasot efektori /muisti-T-solut olivat samanlaisia ​​kuin kuivaava imusolmuke (kuvio 3B). Yhdessä nämä tulokset viittaavat siihen, että kehitys autoimmuunigastriitin hiirillä, jotka saivat CD4 + T-solut H /Ka - /- hiirillä aiheutti T-solu-välitteisen tulehdusreaktion mahalaukun ympäristön sijasta yleisempää vastausta.}

kehitys autoimmuunigastriitin tässä sairaudessa mallissa ei liittynyt määrää alennetaan säätelijä-T (Treg) solut koska gastritic hiiret sisälsivät samassa laajuudessa Treg solujen paragastric imusolmuke verrattuna ei -gastritic valvonta (kuvio 4A, 4B). Itse asiassa, huomattavasti Treg-soluja löytyy vatsassa hiirten autoimmuuni gastriitti (kuvio 4A, 4C).

H /Ka - /- CD4 + T-solujen indusoituu nopeasti kudosvaurion vatsassa

vakavuus autoimmuunigastriitin analysoitiin eri ajankohtina siirron jälkeen H /Ka ^{- /- CD4 + T-soluja. Kohtalainen ehtyminen parietaalisoluihin ja tsymogeeninen soluja, kuten osoitetaan gastriitti pisteet 4 [24], voitiin havaita jo 2 viikon kuluttua siirrosta ja tauti eteni nopeasti ja suurin osa hiiristä osoittaa vakavaa gastriitti, joka ilmeni gastriitti pisteet 5 ja 6, 4 viikon kuluttua siirrosta (kuva 5).}

Maha painoa voidaan käyttää määrällinen mitta autoimmuunigastriitin

Olemme osoittaneet, että hiirten autoimmuunigastriitin oli suurempi vatsa painoa kuin taudista vapaan hiirillä johtuen liikakasvun mahalaukun limakalvon (kuvio 2D). Siksi tutkimme mikäli vatsa painoa voitaisiin käyttää kvantitatiivinen mitta vakavuuden autoimmuuni gastriitti. Edelleen testi, jos vatsa paino voisi erottaa eri vaikeusasteeltaan erilaisia ​​autoimmuunigastriitti, tutkimme neonatally-thymectomised hiirten suurempi määrä hiiriä vaihteleva sairaus tulokset voitiin saada. Huomasimme, että oli huomattavia eroja keskimääräisen vatsassa paino kunkin viiden ensimmäisen tasoa autoimmuunigastriitin (0-4) (kuva 6). Kuitenkin keskimääräinen mahan painot gastriitti tulokset 4, 5 ja 6 eivät olleet merkittävästi erilaisia ​​toisiinsa nähden (kuvio 6). Tämä johtuu todennäköisesti siitä, että aste liikakasvun mahan limakalvon ei kasva taudin edetessä ja loppuvaiheen.

induktio autoimmuunigastriitin H /Ka - /- CD4 + T-solut oli riippuvainen läsnä H /Ka ja H /Kβ

oletettu, että patogeenisyys CD4 ^{+ T-solut H /Ka - /- hiirillä aiheutti puute toleranssin H /Ka puuttuessa tämän mahan autoantigeeni-. Tämän testaamiseksi CD4 + T-solut siirrettiin H /Ka - /- hiiret osaksi sublethally-säteilytetty H /Ka - /- ja villityypin hiirillä. On osoitettu, että H /Ka, puuttuessa H /Kβ, ei voida MHC-molekyylien esittelemiä [25] (S Allen, henkilökohtainen tiedonanto). Siksi siirrettävä CD4 + T-solujen H /Ka - /- hiiret osaksi sublethally-säteilytetty H /Kβ - /- hiiret ja vertasi niitä H /Ka - /- ja villityypin vastaanottajan hiirillä. Analyysi autoimmuunihyökkäys mahan limakalvon monimutkainen H /Ka - /- ja H /Kβ - /- hiirissä, jotka tapahtuvat muutokset mahalaukun limakalvon koska puute mahahapon näissä hiirissä johtaa kohonneet ravinnerakennetta hormonin gastriini. Tämä johtaa konstitutiiviset liikakasvua ja ehtyminen tsymogeeninen solujen [26],. Näin ollen, jotta voidaan arvioida, jos autoimmuunivasteen hyökkää mahan limakalvon näissä hiirissä, me sen sijaan määrittää esiintyvyys parietaalisoluissa, joita tavallisesti tyhjentynyt autoimmuunigastriitin mutta niitä löytyy runsaasti H /Ka - /- ja H /Kβ - /- hiirissä, ja myös läsnäolo mahalaukun autovasta.}

vatsa morfologia H /Ka ^{- /- hiirillä tai H /Kβ - /- hiiret ei vaikuttanut siirto H /Ka - /- CD4 + T-solujen (kuvio 7A, 7B). Erityisesti, ei ole vähenemistä parietaalisolujen osoittaa puute autoimmuunivaste. Sen sijaan täydellinen ehtyminen parietaalisoluissa havaittiin villityypin vastaanottaja hiirillä, jotka saivat H /Ka - /- CD4 + T-solut (kuvio 7C). Koska vatsat H /Ka - /- ja H /Kβ - /- hiiret näyttivät eri sekä tavallisia gastritic hiiret, emme voisi arvioida näitä hiiriä käyttämällä standardia gastriitti pisteytysjärjestelmä. Kuitenkin H + /K + ATP-erityisiä autovasta, toinen tunnusmerkki autoimmuunigastriitti, ei havaittu seerumeissa molemmat H /Ka - /- ja H /Kβ - /- vastaanottaja hiiriä, mutta havaittiin villityypin saajahiiret (kuvio 7D). Nämä tulokset osoittivat, että läsnäolo molempien α ja β-alayksiköitä tarvittiin ehtyminen parietaalisolujen H /Ka - /- CD4 + T-soluja.}

Keskustelu

autoimmuunigastriitin voidaan aiheuttaa BALB /c-hiirissä monin tavoin, kuten vastasyntyneiden kateenkorvan poisto, aikuisten kateenkorvan poisto syklofosfamidin kanssa [19], [21], immunisaatio mahalaukun H ^{+ /K + ATP [5] ja sukupolven H + /K + ATP-spesifisten TCR siirtogeeniset hiiret [7], [8]. Kuitenkin immuunijärjestelmä hallitsee T-solut yhdellä spesifisyys kuin havaittu TCR siirtogeenisiä hiiriä ei muistuta normaaleissa fysiologisissa olosuhteissa. Lisäksi kateenkorvan poisto ja immunisointi eivät anna johdonmukaista sairauden vakavuuden ja ne ovat teknisesti vaativia, mikä tekee siitä hankalaa käyttää näitä malleja analysointia immunoterapian. Siksi kehitettiin uusi tauti malli, joka tukeutui siirto T-solujen H /Ka - /- hiirissä, polyklonaalinen populaatio, joka sisälsi erittäin gastritogenic T-soluja.}

Huomasimme, että immunisointiin H /Ka ^{- /- hiirissä puhdistetulla H + /K + ATP indusoi voimakkaan T-soluvasteen seurauksena ei ole T-solujen toleranssin mahalaukun autoantigeeni, joka osoitti, että läsnä H + /K + ATP-spesifisten T-solujen in H /Ka - /- hiirissä. Olemme lisäksi osoittaneet, että siirto CD4 + T-solujen populaatioita H /Ka - /- hiiret aiheuttama vahinko mahalaukun kudoksiin saajahiiret pian siirron jälkeen. Autoimmuunigastriitin aiheuttama siirto H /Ka - /- CD4 + T-solut oli johdonmukaisesti vaikea: kaikki vastaanottajan hiirille kehittyi vakavin tauti kahdeksan viikon kuluessa siirron ja niiden vatsa fysiologia vaikutti merkittävästi osoittamalla tavalla kasvu mahan painon ja pH. Tämä malli on edullinen, koska vakavuus ja ilmaantuvuus taudin lähestymistapoja, jotka havaittiin TCR siirtogeenisiä hiiriä, mutta aiheuttaa polyklonaalinen ohjelmisto, on teknisesti helppo luoda, se ei perustu häiriön normaalin Treg solurepertoaari.}

luovuttajan solupopulaatio H /Ka- ^{- /- hiirillä rikastettu -85% CD4 + T-solut on "negatiivisen valinnan" menettely, koska suurten työn tarkoituksena oli tuottaa yksinkertainen , halpa ja kätevä tauti malli. Olemme päätellä, että se on CD4 + T-solujen inokulaatin aiheuttaneen autoimmuunigastriitin koska on vakiinnuttanut monet tutkimukset, jotka CD4 + T-solujen eikä muita solutyyppejä kykenevät aloittamaan autoimmuunigastriitin [7 ] - [17]. On selvää, että T- ja B-solupopulaatioiden reaktiivinen H + /K + ATP on läsnä ohjelmistoon normaalien hiirten [5], [14] - [16], [21], [24 ], [28] - [33]. Siksi ehdotamme, että H + /K + ATP-spesifisten T-ja B-soluja vastaanottajan sitten rekrytoidaan vaurio ja vastaanottajan johdetut B-solut ovat vastuussa autovasta-aineiden tuotannon.}

aiemmin on dokumentoitu, että CD4 ^{+ T-solut H /Kβ - /- hiirissä, aiheuttaa autoimmuuni gastriitti, joilta puuttuu kateenkorva BALB /c-hiiristä, mutta ei säteilytetty villityypin hiirissä [24]. CD4 + T-solujen H /Ka - /- hiirissä aiheutti gastriitti säteilytettyjen villityypin hiirillä viittaa siihen, että tämä populaatio on patogeenisempi kuin CD4 + T-solujen H /Kβ - /- hiiret . Nämä tulokset tukevat aiempaa hallitseva rooli immuunivasteen H /Ka patogeneesissä autoimmuuni gastriitti, sopusoinnussa havaintojen TCR siirtogeenisiä hiiriä [7], [8].}

Toisin kuin muut tautimallien että hyödynnetään Treg solu -depleted polyklonaalinen T-solujen villityypin hiirillä aiheuttaa autoimmuniteetin [15], ei ollut tarpeen poistaa Treg soluja H /Ka ^{- /- CD4 + T-solujen populaation induktioon vaikean autoimmuuni gastriitti. Lisäksi kehittäminen autoimmuunigastriitin vastaanottajan hiirillä ei johdu alentuneen Treg soluja luovuttajalta väestöstä koska gastritic hiiret sisälsivät saman verran Treg solujen paragastric imusolmuke verrattuna ei-gastritic valvontaa. Olemme aiemmin osoittaneet, että Treg-solut H /Ka - /- hiiret olivat yhtä tehokkaita kuin Tregs solut villityypin hiiristä tukahduttamaan H /Ka-spesifisten autoreaktiivisten T-solujen [34]. Siksi meidän havainnot tässä tukevat aikaisempia työtä osoittaa, että T-solujen kokoelmaa, jotka eivät ole suorittaneet perifeerinen T-solujen poisto voi tukahdutetaan normaalin Treg solupopulaation [24], [35].}

Vaikka normaalitasolla ja Treg-solujen havaittiin paragastric imusolmuke on gastritic hiirillä, ja huomattavasti suurempi prosenttimäärä Treg-solujen havaittiin mahalaukun gastritic hiirillä verrattuna normaaleihin hiiriin, Treg-solut eivät pystyneet estää tai vähentää sairauden. Tämä on yhdenmukainen sen havainnon kanssa, että vaikka Treg solut kertynyt CNS kun kokeellinen allerginen enkefalomyeliitti laukaisi [36], he eivät pystyneet estämään laajentamiseen ja toiminta myeliinioligodendrosyyttiglykoproteiinin glykoproteiinin spesifisten T-solujen, koska paikalliset tulehduksellinen sytokiini miljöö sulatettu patogeenisiä T-soluja vastustuskykyisiä Treg tukahduttamista.

ehtyminen parietaalisoluissa on tunnusmerkki autoimmuunigastriitin ja pääsyy siihen, että anemia on hengenvaarallinen sairaus, koska parietaalisoluihin tuottavat sisäinen tekijä, joiden puuttuminen on kohtalokasta . Huomasimme, että ehtyminen parietaalisoluissa tämän sairauden malli oli riippuvainen läsnäolo molemmat H ^{+ /K + ATP alayksiköstä kuin CD4 + T-solujen H /Ka - /- hiiret vain aiheuttama perietaalisolun ehtyminen villityypin hiirillä mutta ei H /Ka - /- ja H /Kβ - /- hiirissä. Perietaalisolun ehtyminen ei aiheuttanut T-soluvaste kohti H /Kβ koska H /Ka - /- CD4 + T-solut eivät aiheuttaneet perietaalisolun ehtyminen H /Ka - /- vastaanottaja hiiriä taas H /Kβ ilmennettiin näissä hiirissä [26]. Toisaalta, puuttuminen parietaalisolun ehtyminen H /Kβ - /- vastaanottaja hiirillä, jotka saivat H /Ka - /- CD4 + T-solujen vahvistaneet aikaisempia tutkimuksia viittaa tarpeeseen H /Kβ jotta H /Ka joka esitetään MHC-molekyylien [22]. Yhdessä nämä tulokset viittaavat siihen, että parietaalisolujen ehtyminen tämän siirron kehittämää seurauksena immuunivasteiden H /Ka-CD4 + T-solut H /Ka - /- hiirissä. Toteamme, että aikaisemmissa tutkimuksissa on havaittu, että parietaalisoluihin eivät vähene joko H /Ka- - /- eikä H /Kβ - /- hiirillä vastasyntyneiden kateenkorvan poisto, jossa korostetaan johdonmukaisuutta tämä uusi malli tuloksiin aiemman, vakiintunut malli.}

osoitti myös tässä, että vatsa painoa voidaan käyttää kvantitatiivinen mitta taudin vakavuudesta, koska liikakasvu mahalaukun limakalvon havaittiin hiirillä autoimmuunigastriitin ja johtivat in kasvu mahan painon [37]. Oli merkittävä korrelaatio vatsan painon ja vakavuus autoimmuunigastriitin hiirillä, jotka saivat H /Ka ^{- /- CD4 + T-soluja. Tämä korrelaatio vahvistettiin lisäksi in neonatally-thymectomised hiiriä, joissa keskimääräinen mahan paino kussakin gastriitti pisteet ovat merkittävästi erilaiset toiseen. Kuitenkin, koska vaihtelu ryhmissä, suuren näytteen koko tarvitaan, jos vatsa paino on tarkoitus käyttää arvioimaan taudin vakavuus. Siksi histologinen tutkimus yhdistettynä vatsa painoa voidaan nähdä toisiaan täydentävinä toimenpiteiden vakavuuden arvioinnissa autoimmuunigastriitin.}

Osoitimme, että autoimmuunigastriitin aiheuttama otto- siirto H /Ka ^{- /- CD4 + T-solut edustaa erinomainen tautimallina leikkelyn autoimmuuni- vaste ja suunnittelu interventionary hoitoja autoimmuunisairauksiin. Tässä sairaudessa mallissa autoimmuunigastriitin syynä oli fraktioimaton polyklonaalinen T-solujen populaatio, joka sisälsi patogeenisiä T-soluja, jotka ovat spesifisiä yhdelle antigeenille, ja yhdenmukainen korkea-asteen sairauden vaikeusasteen noudatetaan kaikissa saajahiiret. Lisäksi olemme osoittaneet, että taudin vakavuus voitaisiin helposti määrittää mahan painon, vatsan pH ja histologinen tarkastelu vatsan osassa.}

Materiaalit ja menetelmät

Ethics selvitys

Tämä työ pyrkii saada yksityiskohtaisempaa tietoa autoimmuunisairaus ja immunologisia mekanismeja, jotka estävät autoimmuniteetin normaaleissa yksilöissä. Koska immuunijärjestelmä on erittäin monimutkainen, integroitu verkko, eläimiä tarvitaan oikein arvioida näitä kysymyksiä.

Suurin osa menettelyt olivat kliiniset testit suoritettiin veri- ja kudosnäytteet otetaan hiiristä, jotka säilyvät erinomaisessa asuinolot . Hiiriä seurattiin tarkasti ja tapettiin jos vaikuttaa rankasti tai ahdistuneita. Päättyessä Jokaisen kokeen, hiiret tapettiin CO2 tukehtumisen tai niskanmurrolla, jotka liittyvät vähintään hätä.

Kaikki kokeet huolellisesti suunniteltu vähentämään eläinten määrä ja suoritetaan noudatettava tarkoin ohjeita saneli yliopiston Melbournen Animal koe eettinen komitea; ehkäisemisestä eläinsuojelu Act 1986; ja NHMRC /CSIRO /AAC Australian käytännesäännöt Care ja eläinten käyttö tieteellisiin tarkoituksiin (1997).

Tämä työ oli hyväksynyt University of Melbourne Animal eettisen komitean alle projektin numero +0706327,3.

Hiiret

BALB /cCrSlc [38], BALB /cCrSlc.CD90.1 kongeeniset, H /Ka ^{- /- [26], H /Kβ - /- [ ,,,0],27] ja BALB.B6- Gasa
kongeeniset hiirissä [20] on kuvattu aiemmin. Molemmat H /Ka - /- ja H /Kβ - /- hiirillä oli takaisinristeytettiin yli 10 kertaa BALB /cCrSlc. H /Ka - /- hiiret risteytettiin BALB /c.CD90.1 hiirten tuottamiseksi H /Ka - /-. CD90.1 hiirillä. Kaikki hiiret pidettiin tavanomaisessa eläimen laitokseen klo Bio21 Molecular Science and Biotechnology Institute, University of Melbourne. Kaikki hiiret ja kokeet hyväksynyt University of Melbourne Animal Experimentation eettisen komitean.}

Vasta-aineet ja virtaussytometria analyysi

Anti-CD3-FITC (145-2C11), anti-CD90.1- FITC (HIS51), anti-CD90.2-FITC (30H-12), anti-CD62L-PE (MEL-14), anti-CD4-PerCP (RM4-5), ja anti-CD8-APC (53-6,7) hankittiin BD Pharmingen; anti-CD44-APC (IM-7) hankittiin eBioscience. Solunsisäinen värjäys Foxp3 suoritettiin käyttäen anti-Foxp3-APC (FJK-16S) ja Foxp3 Värjäys Kit (eBioscience) mukaan valmistajan ohjeiden. Virtaussytometria suoritettiin Becton Dickinson FACSort-virtaussytometrillä ja analysoitiin käyttäen CellQuest Pro -ohjelmisto tai Beckman Coulter syaani ja analysoitiin käyttäen Summit ohjelmistoa.

määritys T-soluvasteita immunisoiduissa hiirissä H + /K + ATP

Puhdistettua sian mahan H ^{+ /K + ATP valmistettiin 1:01 suhde Freundin täydellistä adjuvanttia (Life Technologies). Hiiret injektoitiin ihonalaisesti kummallekin puolelle hännän juureen. H /Ka - /- ja BALB /cCrSlc hiiret immunisoitiin kahdesti 30 ug: H + /K + ATP, yhden kuukauden välein, immunisointien. Viikon kuluttua toisen immunisoinnin jälkeen hiiret tapettiin niiden seerumit ja nivusten imusolmukkeet. H + /K + ATP-spesifisiä autovasta havaittiin ELISA: lla. Solut nivusimusolmukkeista käytettiin T-solujen lisääntymisen määrityksessä. 1 x 10 5-soluja viljeltiin 72 tunnin ajan 2 x 10 4 pernan DC BALB /cCrSlc hiirissä. T-soluproliferaatiota arvioitiin sisällyttämällä 3H-tymidiinin yli lopullinen 16 tunnin viljelyn. T-soluja viljeltiin kolmena rinnakkaisena joko DC-antigeeniä (50 ug /ml hiiren mahan kalvo) tai DC yksinään. Mahalaukun membraanit valmistettiin hiiren maha kuten aikaisemmin on kuvattu [5].}

induktio autoimmuuni gastriitti hiirillä

CD4 ^{+ T-solut rikastetaan > 85%: n puhtaudella imusolmukkeista ja pernat H /Ka - /- ja BALB /cCrSlc hiirillä. Yhden solun suspensioita inkuboitiin sekoitus F4 /80 ja B220 hybridoomasupernatantteja plus anti-CD8-vasta-ainetta (53.6.72, BioXCell). Ei-CD4-solut poistettiin käyttäen anti-rotta-IgG-päällystettyjä magneettisia helmiä (Dynal, Invitrogen). CD4 + (5 x 10 7) T-soluja joko H /Ka - /- tai BALB /cCrSlc hiiret injektoitiin sublethally säteilytettyä (600 rad) villityyppiseen kongeeniset BALB /cCrSlc.CD90.1 hiirille vatsaonteloon. Joissakin kokeissa puhdistettiin H /Ka - /- CD4 + T-solut injektoitiin säteilytettiin BALB /cCrSlc, H /Ka - /- ja H /Kβ - /- hiirissä. Kaikki vastaanottaja hiiriä säteilytettiin 600 rad yksi päivä ennen T-solujen siirtoa. Kahdeksan viikkoa myöhemmin, vastaanottajan hiiret tapettiin ja vatsat, imusolmukkeet ja seerumit kerättiin.}

BALB /cCrSlc ja BALB.B6- Gasa
kongeeniset hiiriä käytettiin kateenkorvan poiston kokeissa. Vastasyntyneen kateenkorvan poiston suoritettiin, kuten aiemmin on kuvattu [20].

histologinen tutkimus vatsat ja mittaus mahan pH

Vatsa leikkeet tutkittiin läsnäolo patologisia muutoksia, kuten aikaisemmin on kuvattu [24]. Pisteytys suoritettiin sokkotavalla kullekin lasille sen itsenäisesti tekee vähintään kaksi henkilöä. Mittaamiseksi mahan pH, hiiret nälässä yön yli ennen tappamista. Mahat leikattiin auki ja huuhdellaan 1 ml suolaliuosta, joka kerättiin ja mitattiin pH-mittarilla.

H + /K + ATP-erityinen entsyymi immunosorbenttimääritys (ELISA) B

ELISA havaita H ^{+ /K + ATP-spesifisten autovasta-aineiden suoritettiin käyttämällä puhdistettua sian H + /K + ATP kuten aikaisemmin on kuvattu [29].}

tilastollinen

tilastollinen analyysi suoritettiin käyttäen GraphPad Prism 5.0 (GraphPad). Tiedot analysoitiin käyttäen Mann-Whitneyn U-testiä tai Spearmanin korrelaatio testi ja P-arvo < 0,05 pidettiin merkittävänä.

• PLoS ONE: geeniekspressioprofilointi sisään mahan limakalvoa helikobakteerilta-tartunnan ja Infektoimaton potilaalla, joille krooninen pinnallinen Gastritis
• PLoS ONE: Tarkkuus ja raja-arvot on Pepsinogeenit I, II ja gastriini 17 Diagnoosi Mahalaukun Fundic surkastuminen: Influence of Gastritis