PLoS ONE: zadovoljavajući model Teška, visoku učestalost autoimuni gastritis izazvan Polyclonal izvršnih T stanica i bez perturbacija regulacijskih T Cells

Sažetak pregled

autoimune gastritis od sloma T tolerancije stanica na želučane H ^{+ /K + ATPaze. Želučana H + /K + ATPaze je odgovoran za zakiseljavanje želučanog soka, a sastoji se od alfa podjedinice (H /Ka) i beta podjedinica (H /Kβ). Ovdje pokazujemo da CD4 + T stanica s H /Ka-deficijentnih miševa (H /Ka - /-) su visoko patogeni i autoimuni gastritis može se inducirati u sublethally ozračen divljeg tipa miševa adoptivni prijenos nefrakcionirani CD4 + T stanice iz H /Ka - /- miševa. Svi primatelja miševi dosljedno razvio najteži oblik autoimune gastritisa 8 tjedana nakon prijenosa, s hipertrofiju želučane sluznice, potpunog iscrpljenja parijetalni i zymogenic stanica i prisutnost antitijela na H + /K + enzima u serumu. Nadalje, pokazali smo da se bolest znatno utjecati na težinu u želucu i želučane pH primatelja miševa. Iscrpljivanje parijetalni stanice u ovom modelu bolesti potrebno prisustvo oba H /Ka i H /Kβ budući prijenos H /Ka - /- CD4 + T stanice nisu rezultirali iscrpljenja parijetalni stanice u H /Ka - /- ili H /Kβ - /- primatelj miševa. Konzistencija težine bolesti, korištenje poliklonskih T-stanica i odgovor T stanica na želučanu autoantigenskih čine ovaj idealni model bolesti za proučavanje mnogih aspekata autoimunosti organ-specifične, uključujući prevenciju i liječenje bolesti. Pregled}

Izvor: Tu E, Ang DKY, Hogan TV, čitanje S, Chia CPZ, Gleeson PA, et al. (2011) zadovoljavajući model Teška, visoku učestalost autoimuni gastritis izazvan Polyclonal izvršnih T stanica i bez perturbacija regulacijskih T-stanica. PLoS ONE 6 (11): e27153. doi: 10,1371 /journal.pone.0027153 pregled

Urednik: Ciriaco A. Piccirillo, McGill University Health Center, Kanada pregled

Primljeno: 21 siječnja 2011; Prihvaćeno: 11. listopada 2011; Objavljeno: 9. studeni 2011 pregled

Copyright: © 2011 Tu i sur. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Ovo djelo je podržan od strane istraživačke potpore iz Nacionalnog zdravstva i Medical Research Council of Australia i Sveučilišta u Melbourneu. U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

suprotstavljenih interesa. Autori mogu potvrditi da je Simon pročitan je na Sveučilištu u Melbourneu kada je ova studija bila završen i da je Novo Nordisk je njegova sadašnja adresa. Autori su izjavili nema suprotstavljenih interesa postoji. Pregled

Uvod pregled

autoimuni gastritis je odličan sustav istražiti gubitak T tolerancije stanica do vlastitog tkiva jer je to dobro karakterizira autoimuna bolest poznato ciljni antigen i model miša bolesti ima mnogo sličnosti s ljudskom ekvivalent. Opasan anemija, kraj faza autoimunog gastritisa, je procijenjena učestalost od 1,9% u Zapadnoj odrasle populacije starije od 60 godina [1], koja predstavlja najčešći uzrok vitamina B _{12 manjka u starijih osoba [2] , Autoimunog gastritisa ima infiltraciju mononuklearnih stanica u submukozi koja se pruža u sluznicu želuca, iscrpljivanje želučanog parijetalni i zymogenic stanica i hipertrofijom želučane sluznice [1]. Pregled}

ciljni antigen u autoimuni gastritis identificirana kao želučane H ^{+ /K + ATPaze izražava želuca parijetalni stanice [3] - [5]. Želučana H + /K + ATPaze je membrana protonske pumpe koji je odgovoran za zakiseljavanje želučanog soka, a to je heterodimer koji se sastoji od katalitičke alfa podjedinice (H /Ka) i glikoproteina P podjedinice (H /Kβ). Prethodna ispitivanja su pokazala da su oba H /Ka i H /Kβ ciljaju na autoimunog gastritisa [4], [6] - [8]. To je dobro dokumentirano da je u miševa i ljudi, CD4 + T stanice koje prepoznaju želučane H + /K + ATPaze pokrenuti autoimuni gastritis, a CD8 + T stanice i B-stanice su neučinkovit u tome [7] - [17]. Ipak, nakon početka bolesti, autoantitijela prema H + /K + ATPaze su proizvedeni i vrlo koristan dijagnostički alat bolesti iako nisu patogeni [3], [16], [18 ]. pregled}

BALB /c miševa su pokazala da su najosjetljivija na limfopenija inducirani autoimuni gastritis s incidencijom od 30-90% [19], [20]. Bolest može se inducirati timektomija 3 dana starih miševa ili odraslih timektomija kombinaciji s jednom dozom ciklofosfamida [19], [21]. Unatoč tome, teško je procijeniti terapijski učinak tretmana s obzirom na thymectomised miševa jer spektra težine bolesti od blagih do teških uvijek poštuje, a učestalost je promjenjiva, tako velike veličine grupe su potrebni za testiranje statističke značajnosti. Nadalje, operacije su uključeni i postoperativna održavanje životinja je tehnički zahtjevna. Autoimunog gastritisa također može izazvati u BALB /c miševa imunizacijom s pročišćenom želučane H ^{+ /K + ATPaze [5]. Međutim, bolest je reverzibilna nakon prestanka imunizacije i ima nisku ozbiljnosti. Prijenos BALB /c T stanica iscrpljena regulatornih T (Treg) stanica u atimičnih miševa primatelja uzrokuje tešku autoimunu gastritis [15]. Stoga je nemoguće raščlaniti odnos između autoreaktivne T-stanica i Treg stanica tijekom razvoja bolesti u ovom okruženju, jer Treg stanice odsutni. Pregled}

Visoka učestalost spontanog autoimunog gastritisa je promatrana u transgeničnim miševima eksprimiraju TCR specifičnog za H /Ka [8]. Međutim, ovi miševi ne predstavljaju idealan model bolesti za sve eksperimente jer je monoklonsko priroda patogenih T stanica ne rckapituliraju poliklonalnog odgovor koji se javlja u patofiziološkim stanjima. Pregled

Iz ove perspektive, razvili smo model bolesti koji se oslanjao na prijenos poliklonski T stanica iz H /Ka-manjkav (H /Ka ^{- /-) miševa u sublethally-ozračenih divljeg tipa miševa. Pokazali smo da su miševi koji su primili nefrakcioniranih T stanice iz H /Ka - /- miševa svi podlegli najtežoj autoimuni gastritis s patološkim promjenama promatrane tijekom cijelog trbuha. Nadalje, te patološke promjene značajno utječu na fiziologiju želuca. Pokazali smo korisnost ovog modela, pokazujući da je razvoj autoimune gastritis u ovom modelu je isključivo ovisi o prisutnosti oba H + /K + ATPaze a i P podjedinica. pregled}

Rezultati

Povišeni T i odgovor B stanica u H /Ka ^{- /- miševa nakon imunizacije s H + /K + ATPaze pregled}

kako bi se sustav koji je pogodan za proučavanje različitih aspekata autoimunosti, ustanovili smo model bolesti kod kojih je bolest uzrokovana patogenim poliklonalnim T stanicama i ozbiljnosti bolesti dosljedno teške. Stanica odgovor T u H /Ka je potreban za početak autoimunog gastritisa i može biti dominantan izvor želučanih autoreaktivnih epitopa [7], [8], [22]. Kao T tolerancije stanice na H /Ka je vjerojatno da će se pojaviti u H /Ka ^{- /- miševa, istražili smo ako T-stanice koje su specifične za H + /K + ATPaze i sposoban je uzrok tog gastritis bili prisutni u H /Ka - /-. miševa pregled}

kako bi se utvrdilo da li postoje povišene imuni odgovor na H ^{+ /K + enzima u H /Ka - /- miševa u odnosu na divlji tip miševa, miševi imunizirani dvaput s pročišćenim želučanu H + /K + ATPaze. Nakon imunizacije, antitijela specifična za V + /K + ATPaze otkrivene su u imuniziranih H /Ka - /- miševa, ali ne kod divljeg tipa miševa (Slika 1A). T stanica odgovor na in vitro
restimulacije s H + /K + ATPaze je također bio značajno veći u H /Ka - /- miševa nego u divlji tip miševa (Slika 1b). Dakle, kao što je ranije pokazano u H /Kβ - /- miševa [23], tu je i značajan T i B stanični odgovor na H + /K + enzima u H /Ka - /-. miševi koji nije prisutan u divlji tip miševa pregled}

CD4 ^{+ T stanice iz H /Ka - /- miševa bili su visoko patogeni pregled}

kako bi se utvrdilo je li posvojitelj prijenos T stanica iz H /Ka ^{- /- miševa bi mogli izazvati autoimuni gastritis, obogaćeni smo CD4 + T stanice, ili H /Ka - /- ili divljeg tipa miševa ~85 % čistoće i prenese 5 × 10 7 ovih stanica u sublethally ozračenih divljeg tipa miševa. Jer je ranije pokazano da 'H sup> + /K + ATPaze specifične CD4 + T stanice su brzo izbrisani u perifernom i stanju inducirati autoimuni gastritis i izvan ozračenih divljeg tipa miševa [24], a sve primatelja miševi koji se koriste u ovom istraživanju su lagano ozrači na 600 rd kako bi se poboljšala opstanak prenesenih T-stanica iz H /Ka - /-. miševa pregled}

Osam tjedana nakon prijenosa, miševi koji su dobili H /Ka ^{- /- CD4 + T stanice razvili su najteže oblike autoimuni gastritis (ocjena 5 i 6). Ovo je prikazano pomoću potpunog iscrpljenja parietalnim stanicama i zymogenic stanica, te hipertrofije želučane sluznice (slika 2a, 2b). Za razliku od toga, miševa koji su primili divljeg tipa CD4 + T stanice su u potpunosti slobodni od gastritisa (Slika 2A, 2B), što ukazuje da je autoimuni gastritis kod miševa prima H /Ka - /- CD4 + T stanice nije uzrokovana zračenjem per pregled, nego, stanica inokuluma T. pregled}

Patološke promjene u želucu gastritic miševa značajno utjecalo na njihov želudac fiziologiju. Hipertrofije želučane sluznice rezultiralo povećanjem želuca rugae (Slika 2C) i povećanje težine u želucu (Slika 2D). Drugo, iscrpljenje parietalnim stanicama uzrokuje povećanje pH u želucu zbog nedostatka izlučivanja kiseline (Slika 2E). Osim toga, antitijela specifična za želučanu H ^{+ /K + ATPaze mogla biti detektirana u svim gastritic miševa (Slika 2F). Autoantitijela dosegao visoke razine u svim miševima 6 tjedana nakon prijenosa (Slika 2G). Zajedno, ovi rezultati su pokazali prisutnost visoko patogene H + /K + ATPaze-specifičnih T stanica u H /Ka - /-. Miševa pregled}

autoimuni gastritis je uzrokovan CD4 ^{+ T-stanica posredovane upala pregled}

Miševi s autoimunim gastritis induciranog prijenosa H /Ka ^{- /- CD4 + T stanice imali su značajno više stanica u želucu crpe paragastric limfe čvorovi u usporedbi s normalnim miševima i miševa koji su primili CD4 + T stanice od donora divljeg tipa. Nasuprot tome, nije bilo razlike u veličini Slabinski limfni čvor između gastritic i ne-gastritic miševa (Slika 3A). To navodi na zaključak da je povećanje celularnosti paragastric limfne čvorove u gastritic miševa uzrokovano lokalnim želučane upale, a ne po povlaštenoj opstanak ili proširenje H /Ka - /- CD4 + T stanica u odnosu na divlji tip CD4 + T stanice nakon prijenosa pregled}

u ovim eksperimentima stanice od donora H /Ka ^{-. /- ili potomstvo divljeg tipa miševa može se razlikovati od stanica primatelja jer su nosili različite CD90 alela. Donator stanovništva u paragastric limfnom čvoru miševa koji su primili H /Ka - /- CD4 + T stanice imali su značajno više CD4 + T stanice s efektora /memorijske fenotipa (CD44 hiCD62 lo) u odnosu na miševe koji su primili divljeg tipa CD4 + T stanice. Međutim, razina efektora /memorijske T stanice bile su slične u ne-drenirajućem limfnom čvoru (slika 3B). Ovi rezultati ukazuju na to da je razvoj autoimunog gastritisa u miševa koji su primili CD4 + T stanice iz H /Ka - /- miševa uzrokovano T stanično posredovanog upalnog odgovora u probavnom traktu prije nego općenitiji odgovor. pregled}

razvoj autoimune gastritis u ovom modelu bolesti nije bila povezana sa smanjenom razinom regulatorne T (Treg) stanica jer gastritic miševa sadrži slične proporcije Treg stanica u paragastric limfni čvor u odnosu na ne -gastritic kontrole (Slika 4A, 4B). U stvari, značajno više Treg stanice su pronađeni u želucu kod miševa s autoimuni gastritis (Slika 4A, 4C) pregled

H /Ka ^{-. /- CD4 + T stanice brzo inducirana oštećenja tkiva u želucu Netlogu}

ozbiljnost autoimunog gastritisa je analiziran u različitim vremenskim točkama nakon prijenosa H /Ka ^{- CD4 + T stanice - /. Umjereno osiromašeni parijetalni stanica i zymogenic stanica, kao što je navedeno od strane gastritis rezultatom 4 [24], može se uočiti već 2 tjedna nakon transfera i bolest napredovala vrlo brzo s većinom od miševa koji pokazuje ozbiljne gastritis, kao što je prikazano od strane gastritis zbroj 5 i 6, 4 tjedna nakon prijenosa (Slika 5). pregled}

želuca težine može se upotrijebiti kao kvantitativan mjera autoimuni gastritis

smo pokazali da miševi s autoimuni gastritis imao veća težina u želucu nego miševi bolesti bez posljedica na hipertrofije želučane sluznice (Slika 2D). Ispitivali smo da težina u želucu može se koristiti kao mjera za kvantitativno težini autoimuni gastritis. Za daljnje ispitivanje ako težina u želucu može razlikovati između različitih severityi za autoimune gastritis, ispitali smo neonatalno-thymectomised miševi što veći broj miševa s promjenjivim rezultatima bolesti mogu se dobiti. Otkrili smo da postoje značajne razlike u srednje težine u želucu između svakog od prvih pet razina autoimuni gastritis (rezultat 0-4) (Slika 6). Međutim, srednja želudac utezi od gastritisa ocjenama 4, 5 i 6 nisu bili značajno različiti jedan od drugoga (slika 6). To je vjerojatno zbog činjenice da je stupanj hipertrofije sluznice želuca ne povećava kao bolest napreduje do kasne faze pregled

Indukcija autoimunog gastritisa pomoću H /Ka ^{-. /- CD4 + T stanica je ovisna o prisutnosti H /Ka i H /Kβ pregled}

pretpostavka da je patogenost CD4 ^{+ T stanice iz H /Ka - /- miševa uzrokovano nedostatak tolerancije na H /Ka u odsutnosti ovog želučanog autoantigenskih. Da biste to provjerili, CD4 + T stanice su prenesene iz H /Ka - /- miševa u sublethally ozračena H /Ka - /- i divljeg tipa miševa. Pokazano je da je H /Ka, u odsutnosti H /Kβ, ne može se predstaviti MHC molekula [25] (S Allen, osobna komunikacija). Stoga smo prebacili CD4 + T stanice iz H /Ka - /- miševa u sublethally-ozračenih H /Kβ - /- miševa te ih usporediti s H /Ka - /- i divlji tip primatelja miševe. Analiza autoimunog napada na sluznicu želuca je komplicirano u H /Ka - /- i H /Kβ - /- miševa na promjene koje se događaju u sluznici želuca, jer nedostatak želučane kiseline kod tih miševa rezultira povišenim razinama trofični hormon gastrin. To dovodi do konstitutivne hipertrofije i osiromašeni zymogenic stanica [26],. Stoga, kako bi se procijenila ako autoimuni odgovor napada sluznicu želuca kod tih miševa, mi umjesto toga odrediti prevalenciju parijetalni stanica, koje su normalno iscrpljena u autoimune gastritis, ali se nalaze u izobilju u H /Ka - /- i H /Kβ - /- miševa, ali i prisutnost želučanih autoantitijela}

želudac morfologija u H /Ka ^{-. /- miševi ili H /Kβ - /- miševa nije utjecala na prijenos H /Ka - /- CD4 + T stanice (Slika 7A, 7B). Konkretno, bilo osiromašeni parijetalnih stanica ukazuje na nedostatak autoimunog odgovora. Nasuprot tome, kompletna osiromašeni parietalnim stanicama opažen kod miševa divljeg tipa primaoca koji su primili H /Ka - /- CD4 + T stanica (Slika 7c). Od želuci od H /Ka - /- i H /Kβ - /- miševa pojavio razlikuje od normalnih i gastritic miševa, nismo mogli procijeniti ove miševe pomoću naše standardni sustav gastritis bodovanja. Međutim, H + /K + ATPaze specifične autoantitijela, još jedan znak autoimune gastritis, nije otkriven u serumu oba H /Ka - /- i H /Kβ - /- primatelja miševa, ali otkrivene su u miševa divljeg tipa primatelja (Slika 7d). Ovi rezultati pokazuju da je potrebno prisustvo oba a i P podjedinica za osiromašeni parijetalni stanice pomoću H /Ka - /-. CD4 + T stanice pregled}

Rasprava pregled

autoimuni gastritis može izazvati u BALB /c miševa na nekoliko načina, uključujući i neonatalne timektomija, odraslih timektomija s ciklofosfamid [19], [21], cijepljenje sa želučanim H ^{+ /K + ATPaze [5] i generacija H + /K + ATPaze specifične TCR transgeni miševi [7], [8]. Međutim, imunološki sustav prevladavaju T stanica s jednom specifičnost je uočen u TCR transgeni miševi ne sliči normalnim fiziološkim uvjetima. Nadalje, timektomija i imunizacija ne daju dosljedne ozbiljnost bolesti i oni su tehnički zahtjevan, što ga čini nezgodno koristiti ove modele za analizu imunoterapije. Stoga smo razvili novi model bolesti koje se oslonio na prijenosu T stanica iz H /Ka - /-. miševi, poliklonsko populacija koja je sadržavala visoko gastritogenic T stanice pregled}

Otkrili smo da imunizacija H /Ka ^{- /- miševa s pročišćenom H + /K + ATPaze inducirani snažan odgovor T stanica, kao rezultat nedostatka T tolerancije stanice na želučani autoantigenskih, što ukazuje na prisustvo H + /K + ATPaze-specifičnih T stanica u H /Ka - /- miševa. Mi i dalje pokazali da prijenos CD4 + T stanica populacije iz H /Ka - /- miševa induciranih oštećenja želučanog tkiva primatelja miševe ubrzo nakon prijenosa. Autoimuni gastritis izazvana prijenosom H /Ka - /- CD4 + T stanica je konstantno ozbiljan: svi primatelj miševi razvili najviše tešku bolest osam tjedana nakon prijenosa i njihov želudac fiziologija je značajno utjecalo na što ukazuje povećanje težine u želucu i pH. Ovaj model je prednost, jer je ozbiljnost i učestalost pristupa bolesti koji su zabilježeni u TCR transgeni miševi još uzrokovana poliklonskog repertoara je tehnički jednostavno ustanoviti, ne oslanjaju na perturbacije normalnog staničnog repertoara Treg. Pregled}

donator populacija stanica iz H /Ka ^{- /- miševa je obogaćen za ~85% CD4 + T stanice od strane "negativna selekcija" postupak, jer je glavni cilj ovog rada bio je izraditi jednostavan , jeftin i praktičan modela bolesti. Zaključujemo da je CD4 + T stanica u inokuluma koja je uzrokovala autoimuni gastritis jer je čvrsto utemeljena od strane mnogih studija koje CD4 + T stanica, a ne druge vrste stanica su u stanju pokrenuti autoimuni gastritis [7 ] - [17]. Jasno je da je T i B stanice populacije reagiraju na H + /K + ATPaze prisutni u repertoaru normalnih miševa [5], [14] - [16], [21] [24 ], [28] - [33]. Stoga predlažemo da se H + /K + ATPaze-specifičnih T i B stanice iz primatelju onda su regrutirani na leziju i primatelja izveden iz B stanice su odgovorne za proizvodnju antitijela.}

prethodno je dokumentirano da CD4 ^{+ T stanice iz H /Kβ - /- miševa inducira autoimuni gastritis u atimičnih BALB /c miševa, ali ne i u ozračenim divljeg tipa miševa [24]. CD4 + T stanice iz H /Ka - /- miševa uzrokovano gastritis u ozračenim divljeg tipa miševa ukazuje na to da je ova populacija je više patogen od CD4 + T stanica iz H /Kβ - /- miševa , Ovi podaci podupiru više dominantnu ulogu imunosnog odgovora protiv H /Ka u patogenezi autoimunih gastritisa, u skladu s nalazima u TCR transgeni miševi [7], [8]. Pregled}

Za razliku od drugih modela bolesti koje koriste Treg stanica -depleted poliklonski T stanice iz divljeg tipa miševa da se izazove autoimunog [15], to nije bilo potrebno ukloniti Treg stanice iz H /Ka ^{- /- CD4 + T stanične populacije za izazivanje teške autoimune gastritis. Nadalje, razvoj autoimune gastritis u miševa primaoca nije bio uzrokovan smanjenom razinom Treg stanica od donora stanovništva jer gastritic miševa sadrži sličnu udio Treg stanica u paragastric limfnom čvoru u odnosu na ne-gastritic kontrola. Prethodno smo pokazali da Treg stanice H /Ka - /- miševi bili su učinkoviti kao Tregs stanicama divljeg tipa miševa u suzbijanju H /Ka specifične autoreaktivne T stanice [34]. Dakle, naši rezultati ovdje podržati dosadašnji rad pokazuje da T-stanica repertoara koji nisu prošli kroz periferni T brisanje stanica ne mogu se potisnuti normalno Treg populacije stanica [24], [35]. Pregled}

Iako normalnu razinu stanice Treg je otkriven u paragastric limfnom čvoru gastritic miševa, i značajno veći postotak Treg stanica je nađen u želucu gastritic miševa u usporedbi s normalnim miševima, Treg stanice nisu mogli spriječiti ili potisnuti bolesti. To je u skladu s nalazom da iako Treg stanice nakupila u CNS kada je pokrenula eksperimentalni alergijski encefalomijelitis [36], oni nisu bili u stanju spriječiti širenje i funkciju mijelin oligodendrocitnim glikoprotein-specifičnih T stanica, jer je lokalna sredina upalni citokin donio patogenih T-stanice otporne na Treg suzbijanje. pregled

Iscrpljivanje parijetalni stanice je znak autoimune gastritis i glavni razlog da perniciozne anemije je po život opasne bolesti, jer parijetalni stanice proizvode unutarnji faktor, nedostatak što je kobno , otkrili smo da iscrpljivanje parietalnim stanicama u ovom modelu bolesti bio je ovisan o prisutnosti oba H ^{+ /K + ATPaze podjedinice kao CD4 + T stanice iz H /Ka - /- miševa potaknuti samo parijetalni stanica u divlji tip miševa, ali ne u H /Ka - /- i H /Kβ - /- miševa. Parijetalni stanica osiromašeni nije uzrokovana odgovor T stanica prema H /Kβ jer H /Ka - /- CD4 + T stanice ne induciraju parijetalni stanica u H /Ka - /- primatelj miševi istodobno s H /Kβ je izražen kod ovih miševa [26]. S druge strane, nepostojanje parijetalni osiromašeni stanica u H /Kβ - /- primatelja miševa koji su primili H /Ka - /- CD4 + T stanice ojačana naše prijašnje studije koje ukazuju na potrebu za H /Kβ kako za H /Ka će biti predstavljena u MHC molekula [22]. Zajedno, ovi rezultati sugeriraju da tjemeni stanica u tom modelu prijenosa razvila kao posljedica imunološkog odgovora na H /Ka CD4 + T stanice iz H /Ka - /- miševa. Napominjemo da je u dosadašnjem radu smo utvrdili da parijetalni stanice nisu iscrpljena u bilo H /Ka - /-, niti H /Kβ - /- miševa nakon neonatalne timektomija, koja ističe konzistentnost ovog novog modela s rezultatima prethodnoj, dobro uspostavljenim modelu. pregled}

Mi smo također pokazali da se ovdje težina u želucu može se upotrijebiti kao kvantitativan mjera težine bolesti od hipertrofije želučanoj sluznici primijećenih u miševa s autoimuni gastritis i rezultiralo u povećanju težine u želucu [37]. Postojala je značajna korelacija između težine u želucu i ozbiljnosti autoimunog gastritisa u miševa koji su primili H /Ka ^{- /- CD4 + T stanice. Ova korelacija je dalje potvrđeno neonatalno-thymectomised miševa, a srednja težina u želucu u svakom gastritisa rezultat je znatno razlikuje od druge. Međutim, s obzirom na varijacije unutar grupe, velika veličina uzorka će biti potrebna ako težina u želucu će se koristiti za procjenu težine bolesti. Dakle, histološki pregled u kombinaciji s težinom u želucu može se promatrati kao komplementarne mjere za procjenu ozbiljnosti autoimunog gastritisa pregled}

Mi smo pokazali da autoimuni gastritis izazvana posvojitelj prijenos H /Ka ^{-. /- CD4 + T stanice predstavljala izvrstan model bolesti za presjecanjem autoimunom odgovoru i dizajn interventionary terapija za autoimune bolesti. U ovom modelu bolesti, autoimuni gastritis uzrokovan s populacijom stanica nefrakcionirani poliklonsko T koji je sadržavao patogene T stanica specifičnih za jedan antigen, i dosljedno visoke kvalitete ozbiljnosti bolesti opažena kod svih miševa primaoca. Osim toga, pokazali smo da težina bolesti mogu se lako odrediti težinu u želucu, želučane pH i histološki pregled članka želuca. Pregled}

materijali i postupci

Etika izjava pregled

Ovaj rad nastoji dobiti detaljnije poznavanje autoimune bolesti i imunološke mehanizme koji sprječavaju autoimunog u normalnim pojedincima. Kako imunološki sustav je vrlo složen, integrirana mreža, životinje su potrebni za pravilno procijeniti te probleme. Pregled

Većina postupaka bili su klinički testovi izvode na krvi i tkiva uzoraka uzetih iz miševa koji se održava u odličnim uvjetima stanovanja , Miševi su pomno pratiti, a ubijen ako zahvaćene ili nevolji. Na završetku svakog pokusa, miševi su ubijeni udisanjem CO2 ili cervikalnom dislokacijom, koje su povezane s najmanje uznemirenosti. Pregled

Svi pokusi su pažljivo planira smanjiti broj životinja i izvode uz strogo pridržavanje smjernica koje diktira Sveučilišta u Pokusi na životinjama etičkog povjerenstva Melbournea; sprečavanje okrutnosti Zakona Animals 1986; a NHMRC /CSIRO /AAC Australski Kodeks za njegu životinja i njihovo korištenje u znanstvene svrhe (1997). pregled

Ovaj rad je odobren od strane Sveučilišta u Melbourneu životinja etičkog povjerenstva pod projekta broj 0706327.3.

Miševi

BALB /cCrSlc [38], BALB /cCrSlc.CD90.1 congenic, H /Ka ^{- /- [26], H /Kβ - /- [ ,,,0],27] i BALB.B6- Gasa pregled congenic miševa [20] su prethodno opisani. I H /Ka - /- i H /Kβ - /- miševi su povratno križaju više od 10 puta na BALB /cCrSlc. H /Ka - /- miševi su prešli na BALB /c.CD90.1 miševa za generiranje H /Ka - /-. CD90.1 miševi. Svi miševi su održavani u konvencionalnom životinja objekta na Bio21 molekularnih znanosti i biotehnologije Institute, University of Melbourne. Svi miševi i eksperimenti su odobreni od strane University of Melbourne pokusa na životinjama etičkog povjerenstva. Pregled}

Antitijela i analizu na protočnom citometru pregled

Anti-CD3-FITC (145-2C11), anti-CD90.1- FITC (HIS51), anti-CD90.2-FITC (30H-12), anti-CD62L-PE (MEL-14), anti-CD4 PerCP (RM4-5), i anti-CD8-APC (53-6,7) nabavljeni su od BD Pharmingen; anti-CD44-APC (IM-7) se nabavlja od eBioscience. Unutarstanični bojenje Foxp3 je izvedena pomoću anti-Foxp3-APC (FJK-16) i Foxp3 kompleta za bojanje (eBioscience) u skladu s uputama proizvođača. Protočna citometrija se izvodi na Becton Dickinson FACSort protočnom citometru i analizirani pomoću CellQuest Pro ili Beckman Coulter cijan i analizirani pomoću softvera Summit, pregled

Ispitivanje odgovora T stanica kod miševa imuniziranih s H ^{+ /K + ATPaze pregled}

Pročišćeni svinjskog želuca H ^{+ /K + ATPaze pripravljen je 1:1 omjeru s Freundovim potpunim adjuvantom (Life Technologies). Miševi su subkutano na svakoj strani baze repa. H /Ka - /- i BALB /cCrSlc su miševi imunizirani dvaput sa po 30 ug H + /K + ATPaze, s razmakom od mjesec dana između imunizacije. Jedan tjedan nakon druge imunizacije, miševi su žrtvovani, njihove serumu i Slabinski limfni čvorovi. H + /K + ATPaze-specifična antitijela detektirana su ELISA. Stanice iz Slabinski limfni čvorovi koristiti u ispitivanju u T staničnoj proliferaciji. 1 × 10 5 stanice su kultivirane tijekom 72 sata sa 2 × 10 4 slezene DC iz BALB /cCrSlc miševa. T stanična proliferacija je procijenjena ugradnjom 3H-timidinom tijekom završnih 16 sati kulture. T-stanice uzgojene su u triplikatu s bilo DC s antigenom (50 ug želuca membrani /ml mišjeg) ili DC sama. Želučani Membrane su bile pripravljene iz mišjih želuca kao što je ranije opisano [5] pregled}

Indukcija autoimunog gastritisa u miševa

CD4 ^{+ T stanice su obogaćene na >, čistoća 85% iz limfnih čvorova i slezene H /Ka - /- i BALB /cCrSlc miševa. Stanične suspenzije pojedinačni inkubirani u mješavinu F4 /80 i B220 supernatantu hibridoma plus anti-CD8 antitijelima (53.6.72, BioXCell). Ne-CD4 stanice su uklonjene pomoću anti-štakorovim IgG-om prevučene magnetske kuglice (Dynal, Invitrogen). CD4 + (5 x 10 7) T stanice iz bilo H /Ka - /- ili BALB /cCrSlc miševima ubrizgane u sublethally ozračenih (600 rd) divljeg tipa congenic BALB /cCrSlc.CD90.1 miševi preko intraperitonealno. U nekim eksperimentima, pročišćen H /Ka - /- CD4 + T stanice su injektirane u ozračen BALB /cCrSlc, H /Ka - /- i H /Kβ - /- miševa. Svi primatelja miševi su ozračeni na 600 rd jedan dan prije prijenosa T stanica. Osam tjedana kasnije, primatelj miševi su ubijeni, a želuci, limfni čvorovi i serumi su skupljene. Pregled}

BALB /cCrSlc i BALB.B6- Gasa pregled congenic miševi su korišteni u ispitivanju timektomija. Novorođeni timektomija se obavlja kao što je ranije opisano [20]. Pregled

Histološko ispitivanje želuca i mjerenje pH želuca pregled

Želudac Rezovi su ispitani na prisutnost patoloških promjena kao što je opisano [24]. Ocjenjivanje je provedeno u slijepom način i svako stakalce je samostalno postigao najmanje dvije osobe. Kako bi se izmjerila pH u želucu, miševi su ostavljene preko noći prije žrtvovanja. Želuci su otvoreni te isprane u 1 ml fiziološke otopine koja je prikupljena i mjereno pH-metar. Pregled

H ^{+ /K + ATPaze specifične imunoenzimskim testom (ELISA) pregled}

ELISA za otkrivanje p ^{+ /K + ATPaze-specifičnih antitijela je provedena pomoću pročišćenog svinja H + /K + ATPaze kao što je prethodno opisano [29]. pregled}

Statistička analiza pregled

Statistička analiza je provedena upotrebom GraphPad Prism 5.0 (GraphPad). Podaci su analizirani korištenjem Mann-Whitney U-test ili Kopljanik korelacije testa i vrijednost P < 0.05 je smatrana značajnom pregled.