PLoS One: A kényelmes modellje súlyos, magas előfordulási autoimmun gastritis okozta poliklonális effektor T-sejtek nélkül zavarása szabályozó T Cells

absztrakt katalógusa

Az autoimmun gastritis eredmények bontását T-sejt-tolerancia a gyomor H ^{+ /K + ATP-áz. A gyomor H + /K + ATP-áz felelős a savasodás gyomorsav és áll egy α alegység (H /Ka), és egy β-alegység (H /Kβ). Itt megmutatjuk, hogy a CD4 + T-sejteket H /Ka-hiányos egereket (H /Ka - /-) erősen patogén és autoimmun gastritis indukálható majdnem halálosan besugárzott vad típusú egerekben adoptív transzfer nem frakcionált CD4 + T-sejteket: H /Ka - /- egerekben. Minden recipiens egerekben következetesen fejlesztette a legsúlyosabb formája az autoimmun gastritis után 8 héttel az átadás, mely túltengés a gyomornyálkahártya teljes kiürülését a parietális és zimogén sejtek és autoantitestek jelenléte a H + /K + ATP-a szérumban. Továbbá kimutattuk, hogy a betegség jelentős hatással gyomor tömegének és a gyomor pH-ja a recipiens egerek. Kiürülése parietális sejtek a betegség modell szükséges a jelenléte is H /Ka és a H /Kβ óta átadása H /Ka - /- CD4 + T-sejtek nem okozott kimerülése parietális sejtek H /Ka - /- vagy H /Kβ - /- recipiens egerek. A konzisztencia a betegség súlyosságától, a használata a poliklonális T-sejtek és a specifikus T-sejt választ a gyomor autoantigén hogy ez egy ideális betegség modell a tanulmány a sok szempontból a szerv-specifikus autoimmunitás beleértve a megelőzést és a betegség kezelésében.}

Citation: Tu E, Ang DKY, Hogan TV, Read S, Chia CPZ, Gleeson PA, et al. (2011) A kényelmes modellje súlyos, magas előfordulási autoimmun gastritis okozta poliklonális effektor T-sejtek nélkül zavarása szabályozó T-sejteket. PLoS ONE 6 (11): e27153. doi: 10,1371 /journal.pone.0027153 katalógusa

Szerkesztő: Ciriaco A. Piccirillo, McGill University Health Center, Canada katalógusa

Beérkezett: január 21, 2011; Elfogadva: október 11, 2011; Megjelent: november 9, 2011 katalógusa

Copyright: © 2011 Tu et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Forrás: Ez a munka támogatott kutatási támogatást a Nemzeti egészségügyi és Orvosi kutatási Tanács Ausztrália és a Melbourne-i Egyetem. A finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa

Érdekütközés: A szerzők megerősítik, hogy Simon Read volt a University of Melbourne, amikor ez a vizsgálat befejeződött, és a Novo Nordisk az ő helyét. A szerzők kijelentették nem versengő érdekek léteznek. Katalógusa

Bevezető katalógusa

Az autoimmun gastritis kiváló rendszer, hogy vizsgálja a veszteség T-sejt-tolerancia önálló szövetek, mivel ez egy jól jellemzett autoimmun betegség egy ismert célantigént és az egér modell a betegség sok hasonlóságot az emberi egyenértékű. Vészes vérszegénység, a végstádiumú autoimmun gastritis, a becslések prevalenciája 1,9% Nyugat felnőtt lakosság több mint a 60 év [1], amely a leggyakoribb oka a B-vitamin _{12 hiány az idősek [2] . Autoimmun gastritis funkciók infiltrációját mononukleáris sejtek a submucosa, amely benyúlik a gyomor nyálkahártya, a kimerülése gyomor parietális és zimogén sejtek és hipertrófia a gyomornyálkahártya [1].}

A megcélzott antigén autoimmun gastritis azonosították például a gyomor H ^{+ /K + ATP-áz által kifejezett gyomor parietális sejtek [3] - [5]. A gyomor H + /K + ATP-áz egy membrán protonpumpa felelős a savasodás a gyomornedv és ez egy heterodimer, amely egy katalitikus α alegység (H /Ka), és egy glikoprotein β alegység (H /Kβ). Korábbi tanulmányok azt mutatták, hogy mind a H /Ka és a H /Kβ célpontjává autoimmun gastritis [4], [6] - [8]. Ez jól dokumentált, hogy mindkét egerek és férfi, a CD4 + T-sejtek, amelyek felismerik a gyomor H + /K + ATP-áz kezdeményez autoimmun gastritis, míg a CD8 + T-sejtek és B-sejtek hatástalan ennek során [7] - [17]. Mindazonáltal megkezdését követően a betegség, autoantitestek a H + /K + ATPáz előállított és egy nagyon hasznos diagnosztikai eszköz a betegség bár nem patogén [3], [16], [18 ].}

BALB /c egerekben kimutatták, hogy a leginkább fogékonyak a lymphopenia indukált autoimmun gastritis előfordulási gyakorisággal 30-90% [19], [20]. A betegség lehet indukálni timektómia 3 napos egerekből vagy felnőtt timektómia kombinálva egyetlen adag ciklofoszfamid [19], [21]. Ennek ellenére, nehéz értékelni terápiás hatásainak kezelések adott thymectomised egerekben, mivel a spektrumot a betegség súlyossága az enyhétől a súlyos mindig figyelhető meg, és előfordulási gyakorisága változó, így nagy csoport méretben van szükség, hogy teszteljék a statisztikai szignifikanciát. Továbbá, a műtét részt, és a műtét utáni karbantartása állatok technikailag igényes. Autoimmun gastritis is létre BALB /c egerekben végzett immunizálással tisztított gyomor H ^{+ /K + ATP-áz [5]. Azonban a betegség reverzibilis abbahagyása után immunizálás, és alacsony súlyosságát. Transzfer BALB /c T-sejtek kimerült a szabályozó T (Treg) sejtek thymushiányos recipiens egerek okoz súlyos autoimmun gastritis [15]. Lehetetlen tehát, hogy boncolgatni közötti kapcsolat T-sejtjeinek és Treg sejteket a betegség alakulását ezt a beállítást, mert Treg sejtek hiányoznak. Katalógusa}

Nagy a spontán autoimmun gastritis figyelhető expresszáló transzgenikus egerek egy TCR specifikus H /Ka [8]. Azonban ezek az egerek nem jelentenek ideális betegség modell valamennyi kísérlet, mert a monoklonális jellegét patogén T-sejtek nem ismétel a poliklonális választ fordul elő, hogy patológiás körülmények között. Katalógusa

Ebből a szempontból, kifejlesztettünk egy betegség modell amely támaszkodott átadása poliklonális T sejtek H /Ka-hiányos (H /Ka ^{- /-) egerekben a letális besugárzott vad típusú egerekben. Kimutattuk, hogy az egerekben, akik nem frakcionált T-sejtek H /Ka - /- egerek minden csábításnak, hogy a legsúlyosabb autoimmun gastritis kóros elváltozásokat figyeltek meg az egész gyomrot. Ráadásul ezek a kóros elváltozásokat jelentősen befolyásolja az élettani gyomorban. Mi hasznosságát bizonyította ezt a modellt mutatja, hogy az autoimmun gastritis ebben a modellben volt szigorúan függ a jelenléte is H + /K + ATPáz α és β alegységek. Katalógusa}

Eredmények

Emelkedett a T- és B-sejtes választ H /Ka ^{- /- egerekben immunizálás H + /K + ATPáz katalógusa}

Annak érdekében, hogy a rendszer , amely alkalmas a tanulmány a különböző aspektusait autoimmunitás, hoztunk létre egy betegség modell, amelyben a betegség által okozott patogén poliklonális T-sejtek és a betegség súlyossága következetesen súlyos. A T-sejt-válasz H /Ka szükséges a fellépő autoimmun gastritis, és lehet a domináns forrása a gyomor autoreaktív epitópok [7], [8], [22]. Például a T-sejt-tolerancia H /Ka volt valószínű, hogy előfordulnak H /Ka ^{- /- egerekben, megvizsgáltuk, ha a T-sejtek, amelyek specifikusak H + /K + ATP-áz, és képes okozó gastritis volt jelen H /Ka - /- egerekben. katalógusa}

Annak megállapítására, hogy emelkedettek voltak immunválaszt a H ^{+ /K + ATPáz H /Ka - /- egerek relatív a vad típusú egerek, egereket kétszer immunizáltuk a tisztított gyomor H + /K + ATP-áz. Az immunizálás után autoantitestek specifikus H + /K + ATP-áz detektáltunk a immunizált H /Ka - /- egerekben, de nem a vad típusú egerekben (1a ábra). T-sejt-válasz in vitro
restimuláció H + /K + ATP-áz szintén szignifikánsan nagyobb H /Ka - /- egerekben, mint a vad típusú egerek (1b ábra). Ezért, mint korábban kimutatták H /Kβ - /- egerekben [23], is van egy jelentős T és B sejt válasz H + /K + ATP-áz H /Ka - /- egerek hogy nincs jelen a vad típusú egerekben.}

CD4 ^{+ T-sejteket: H /Ka - /- egerek erősen patogén}

Annak meghatározására, hogy adoptív transzfer származó T-sejtek, H /Ka ^{- /- egerek lenne képes okozni autoimmun gastritis, mi dúsított CD4 + T-sejteket mindkét H /Ka - /- vagy vad típusú egerek ~85 % -os tisztaságú, és átvittük az 5 × 10 7 ezen sejtek majdnem halálosan besugárzott vad típusú egerekben. Mivel korábban kimutatta, hogy a H + /K + ATPáz-specifikus CD4 + T-sejteket gyorsan elhagyták a periférián, és nem tud indukálni autoimmun gastritis a nem besugárzott vad típusú egerekben [24], az összes recipiens egerekben, amelyek ebben a vizsgálatban enyhén besugározzuk 600 rad, hogy fokozza a túlélését átvitt T-sejtek: H /Ka - /- egerekben.}

nyolc héttel a transzfer után, kapott egerek H /Ka ^{- /- CD4 + T-sejtek fejlett legsúlyosabb formája az autoimmun gastritis (pontszám 5 és 6). Ezt bizonyítja az a teljes kimerülése parietális sejtek és zimogén sejtek és hipertrófia a gyomornyálkahártya (ábra 2A, 2B). Ezzel szemben, a kapott egerek a vad típusú CD4 + T-sejtek voltak, teljesen mentes a gastritis (ábra 2A, 2B), ami azt jelezte, hogy az autoimmun gasztritisz kapó egerekben H /Ka - /- CD4 + T-sejtek nem okozott besugárzás önmagában katalógusa, hanem a T-sejt oltóanyagot. katalógusa}

kóros elváltozásai a gyomorban gastritic egerek jelentősen befolyásolja a gyomor fiziológia. A hipertrófia a gyomornyálkahártya eredményezte a bővítés gyomor rugae (2C ábra), és növeli a gyomor súly (2D, ábra). Másodszor, kimerülése parietalis sejtek növekedését okozta gyomor pH hiánya miatt a savszekréció (ábra 2E). Ezen túlmenően, autoantitestek kifejezetten a gyomor H ^{+ /K + ATP-áz volt kimutatható minden gastritic egerekben (ábra 2F). Autoantitestek magas szintet ért el minden egérben 6 hét után transzfer (ábra 2G). Együttesen ezek az eredmények igazolták a jelenlétét erősen patogén H + /K + ATP-áz-specifikus T-sejtek in H /Ka - /- egerekben.}

autoimmun gastritis okozta CD4 + T-sejt-közvetített gyulladást

egerek autoimmun gastritis által kiváltott átadása H /Ka ^{- /- CD4 + T-sejtek szignifikánsan nagyobb sejtek a gyomor-elvezetését paragastric nyirok csomópontok, mint a normális egerek és kapott egerek CD4 + T-sejtek vad típusú donorok. Ezzel szemben, nem volt különbség a méret a lágyéki nyirokcsomó között gastritic és nem-gastritic egereket (3A ábra). Ez azt sugallta, hogy a növekedés a cellularitásának paragastric nyirokcsomók gastritic egerekben okozta helyi gyomor gyulladás és nem a preferenciális túlélésének vagy terjeszkedését H /Ka - /- CD4 + T-sejteket, mint a vad típusú CD4 + T-sejtek az átvitel után.}

ezekben a kísérletekben, a sejteket a donor H /Ka ^{- /- vagy vad típusú egerek lehetett különböztetni a recipiens sejtek, mert szült különböző CD90 allélek. A donor népesség az paragastric nyirokcsomó kapott egerek H /Ka - /- CD4 + T-sejtek szignifikánsan több CD4 + T-sejtek egy effektor /memória fenotípus (CD44 hiCD62 LO), összehasonlítva a kapott egerek a vad típusú CD4 + T-sejteket. Azonban, a szintek effektor /memória T-sejtek hasonló volt a nem álló nyirokcsomó (3B ábra). Együttesen ezek az eredmények azt sugallják, hogy a fejlődés autoimmun gastritis egerekben, amely megkapta a CD4 + T-sejteket: H /Ka - /- egerek okozta egy T-sejt által közvetített gyulladásos válasz a gyomor környezetben helyett általánosabb választ. katalógusa}

a fejlődés autoimmun gastritis ebben a betegségben modellt nem társított csökkentett szintű szabályozó T (Treg) sejtek, mivel gastritic egerek tartalmazott hasonló arányban Treg sejtek paragastric nyirokcsomó, mint a nem -gastritic kontrollokat (ábra 4a, 4b). Tény, hogy szignifikánsan több Treg-sejteket találtak a gyomor egerek autoimmun gastritis (4a ábra, 4C).

H /Ka - /- CD4 + T-sejtek gyorsan indukált szöveti károsodás a gyomorban katalógusa

a súlyossága autoimmun gastritis elemezték különböző időpontokban után transzfer a H /Ka ^{- /- CD4 + T-sejteket. Mérsékelt kimerülése parietális sejtek és zimogén sejteket, amint azt egy gastritis pontszám 4 [24], volt megfigyelhető már 2 hét után az átadás, és a betegség előrehaladtával gyorsan legtöbb egerek, amely súlyos gastritis, amint azt egy gastritis pontszám 5 és 6, 4 héttel a transzfer után (5. ábra).}

Gyomor súly lehet használni, mint egy kvantitatív mértéke autoimmun gastritis

Kimutattuk, hogy egerek autoimmun gastritis volt nagyobb gyomor súlya, mint a betegségtől mentes egerek miatt a hipertrófia a gyomornyálkahártya (2D, ábra). Ezért megvizsgáltuk, ha gyomor súly lehetne használni, mint egy kvantitatív mértéke a súlyosságát autoimmun gastritis. Ahhoz, hogy tovább vizsgálatot, ha a gyomor súlya lehetett megkülönböztetni a különböző súlyossági autoimmun gastritis, megvizsgáltuk újszülött korban-thymectomised egerek nagyobb számban egerek változó betegség pontszámok lehetne szerezni. Azt találtuk, hogy nem volt szignifikáns különbség az átlagos gyomor tömege közötti minden egyes első öt szint az autoimmun gasztritisz (pontszám 0-4) (6. ábra). Az átlagos, gyomor súlya gastritis pontszámok a 4., 5. és 6. nem voltak szignifikánsan eltérőek egymástól (6. ábra). Ez valószínűleg annak a ténynek köszönhető, hogy a mértéke hipertrófia gyomornyálkahártya nem növekszik a betegség előrehaladtával a késői szakaszban.

indukciója autoimmun gastritis által H /Ka - /- CD4 + T sejtek jelenlététől függ a H /Ka és a H /Kβ

Azt feltételeztük, hogy a patogenitását CD4 ^{+ T-sejteket: H /Ka - /- egerek okozta a tolerancia hiánya, hogy a H /Ka hiányában ezen a gyomor autoantigén. Ennek tesztelésére CD4 + T sejteket H /Ka - /- egerekben a letális besugárzott H /Ka - /- és vad típusú egerekben. Bebizonyosodott, hogy a H /Ka, annak hiányában a H /Kβ, nem lehet bemutatni MHC-molekulák által [25] (S Allen, személyes közlés). Ezért át CD4 + T-sejteket: H /Ka - /- egerekben a majdnem halálosan besugárzott H /Kβ - /- egerek és összehasonlítottuk őket a H /Ka - /- és vad típusú recipiens egerekben. Az elemzés az autoimmun támadás a gyomornyálkahártya bonyolítja H /Ka - /- és a H /Kβ - /- egerekben a változásokat, amelyek előfordulnak a gyomornyálkahártya mivel hiányzik a gyomorsav ezekben az egerekben eredményez megemelkedett a táplálkozási hormon gasztrinszint. Ez vezet a konstitutív túltengés és kiürülését zimogén sejtek [26],. Ezért, annak érdekében, hogy értékelje, ha egy autoimmun válasz támad a gyomornyálkahártya ezekben az egerekben, mi ehelyett határozza prevalenciája parietális sejtek, amelyeket általában kimerül az autoimmun gastritis, de nagy mennyiségben megtalálható H /Ka - /- és H /Kβ - /- egerekben, valamint jelenlétét a gyomor autoantitestek.}

a gyomor morfológia H /Ka ^{- /- egerek vagy H /Kβ - /- egerekben nem befolyásolta az átadása H /Ka - /- CD4 + T-sejtek (ábra 7A, 7B). Különösen nem volt kimerülése parietalis sejtek hiányának kijelzése egy autoimmun választ. Ezzel szemben a teljes kimerülés parietális sejtek volt látható vad típusú recipiens egerek kaptak H /Ka - /- CD4 + T-sejtek (ábra 7C). Mivel gyomor H /Ka - /- és a H /Kβ - /- egerek megjelent különbözik a normál és gastritic egerek, nem tudtuk értékelni ezeket egereken végzett standard gyomorhurut pontozási rendszer. Azonban H + /K + ATPáz-specifikus autoantitestek egy másik jellemzője az autoimmun gastritis, nem voltak kimutathatók szérumában egyaránt H /Ka - /- és a H /Kβ - /- recipiens egereket, de kimutatható volt a vad típusú recipiens egerekben (ábra 7D). Ezek az eredmények azt igazolták, hogy a jelenléte is α és β alegységek volt szükség kimerülését parietális sejtek H /Ka - /- CD4 + T-sejteket. Katalógusa}

Vita katalógusa

autoimmun gastritis lehet létre BALB /C egerekben számos eszköz, beleértve az újszülöttkori timektómia, felnőtt timektómia ciklofoszfamiddal [19], [21], immunizálás gyomor H ^{+ /K + ATP-áz [5] és generációs H + /K + ATP-áz-specifikus TCR transzgenikus egerek [7], [8]. Azonban, az immunrendszer által dominált T-sejtek egyetlen specifitással megfigyelt TCR transzgenikus egerekben nem hasonlít a normál fiziológiai körülmények között. Továbbá timektómia immunizálás nem ruházzák következetes betegség súlyossága és technikailag igényes, ami miatt kényelmetlen használni ezeket a modelleket az elemzéshez immunterápiás. Ezért kifejlesztettünk egy új betegség modell támaszkodott átadása T sejtek H /Ka - /- egerekben, poliklonális népesség tartalmazott nagyon gastritogenic T-sejteket. Katalógusa}

Azt találtuk, hogy az immunizálás H /Ka ^{- /- egerek tisztított H + /K + ATP-áz indukált erőteljes T-sejt választ, mint a hiánya miatt a T-sejt-tolerancia a gyomor autoantigén, amely jelenlétét jelzi a H + /K + ATP-áz-specifikus T-sejtek in H /Ka - /- egerekben. Azt is kimutatták, hogy az átadás a CD4 + T-sejt-populációk H /Ka - /- egerek okozta károkat a gyomor szöveteit recipiens egerek hamarosan átvitel után. Autoimmun gastritis okozta átadása H /Ka - /- CD4 + T-sejtek következetesen súlyos: a recipiens egereknek a legsúlyosabb betegséget követő nyolc héten transzfer a gyomrukat fiziológia jelentősen befolyásolták által jelzett a növekedés a gyomor tömegének és a pH. Ez a modell előnyös, mert a súlyossága és előfordulási gyakorisága a betegség megközelítések megfigyelt TCR transzgenikus egerekben még okozza poliklonális repertoár, ez technikailag egyszerű létrehozni, nem támaszkodik zavarása az normális Treg-sejt-repertoár.}

a donor sejt populáció a H /Ka ^{- /- egerek dúsítottuk ~85% CD4 + T-sejtek egy "negatív szelekció" eljárást, mert a fő cél az volt, hogy készítsen egy egyszerű , olcsó és kényelmes betegség modell. Arra a következtetésre jutottunk, hogy ez a CD4 + T-sejtek az inokulum hogy okozott autoimmun gastritis, mivel ez már megszilárdult által számos tanulmány, hogy a CD4 + T-sejtek, és nem más sejttípusokban képesek kezdeményezni autoimmun gastritis [7 ] - [17]. Egyértelmű, hogy a T- és B-sejt-populációk reaktív a H + /K + ATP-áz vannak jelen a repertoárját normális egerekben [5], [14] - [16], [21], [24 ], [28] - [33]. Ezért azt javasoljuk, hogy a H + /K + ATP-áz-specifikus T-és B-sejtek a recipiens ezután toborzott a lézió és a címzett-eredetű B-sejtek felelősek a termelési autoellenanyagok.}

Azt már korábban dokumentált, hogy a CD4 ^{+ T-sejteket: H /Kβ - /- egerek indukálnak autoimmun gastritis thymushiányos BALB /c egerekben, de nem besugárzott vad típusú egerekben [24]. CD4 + T-sejteket: H /Ka - /- egerekben okozott gasztritisz besugárzott vad típusú egerekben azt sugallja, hogy ez a populáció több patogén, mint a CD4 + T-sejteket: H /Kβ - /- egerekben . Ezek az adatok alátámasztják a dominánsabb szerepet elleni immunválasz H /Ka az az autoimmun gastritis, egybevág a TCR transzgenikus egerek [7], [8]. Katalógusa}

Más betegség modellek hasznosított Treg sejt -depleted poliklonális T-sejtek vad típusú egerek autoimmunitása [15], nem volt szükséges eltávolítani Treg sejtek H /Ka ^{- /- CD4 + T-sejt-populáció az indukció a súlyos autoimmun gastritis. Továbbá, az autoimmun gastritis a recipiens egerekben nem okozott csökkent szintje a Treg sejtek a donor népesség óta gastritic egerek tartalmazott hasonló arányban Treg sejtek a paragastric nyirokcsomó, mint a nem-gastritic ellenőrzéseket. Korábban már kimutatták, hogy a Treg sejtek H /Ka - /- egerek voltak olyan hatékonyak, mint Treg sejtek vad típusú egerek elfojtásában H /Ka-specifikus autoreaktív T-sejtek [34]. Ezért a megállapítások itt alátámasztják a korábbi munka azt mutatja, hogy a T-sejt repertoár, hogy nem esett volna át a perifériás T-sejt-megsemmisítéshez képtelenek elnyomja a normális Treg sejt populációja [24], [35]. Katalógusa}

Bár a normális szintre a Treg sejtek detektáltunk a paragastric nyirokcsomójából gastritic egerek, és jelentősen nagyobb százalékát Treg sejtek a gyomorban található a gastritic egerek, mint a normál egerekben, Treg sejtek nem voltak képesek megakadályozni, vagy elnyomja betegség. Ez összhangban van azzal a megállapítással, hogy bár a Treg-sejtek halmozott a CNS-ben, amikor a kísérleti allergiás encephalomyelitis kiváltott [36], nem voltak képesek megakadályozni a tágulási és funkciója mielin oligodendrocita glikoprotein-specifikus T-sejtek, mivel a helyi gyulladásos citokin miliő kiolvasztott patogén T-sejtek rezisztensek Treg elnyomás. katalógusa

kiürülése parietális sejtek fémjelzi autoimmun gastritis és a fő oka annak, hogy a vészes vérszegénység egy életveszélyes betegség, mert parietális sejtek intrinsic faktor, amelynek hiánya végzetes . Azt találtuk, hogy kimerülése parietális sejtek a betegség modell függ a jelenléte is H ^{+ /K + ATP-áz alegységből CD4 + T-sejteket: H /Ka - /- egerekben csak indukált parietális sejt depléciót vad típusú egerekben, de nem H /Ka - /- és a H /Kβ - /- egerekben. Parietális sejtek kimerülése nem okozott T sejt válasz felé H /Kβ óta H /Ka - /- CD4 + T-sejtek nem indukált parietális sejtek számának csökkenését H /Ka - /- recipiens egerek, miközben H /Kβ fejeztük ezekben az egerekben [26]. Másrészt, a hiánya parietális sejt depléciót H /Kβ - /- recipiens kapott egerek H /Ka - /- CD4 + T-sejtek fokozott korábbi tanulmányok arra utal, hogy szükség van a H- /Kβ ahhoz H /Ka-ig kell benyújtani az MHC-molekulák [22]. Együttesen ezek az eredmények arra utalnak, hogy a parietális sejt depléciót ez a transzfer kidolgozott modell következtében immunválaszok H /Ka CD4 + T-sejteket: H /Ka - /- egerekben. Megjegyezzük, hogy a korábbi munka azt találtuk, hogy a parietális sejtek nem fogy sem a H /Ka - /- és nem H /Kβ - /- egerekben újszülöttkori timektómia, amely kiemeli a következetesség az új modell kapott eredményekkel ezt korábbi, jól bevált modell.}

Azt is kimutatták, hogy itt gyomor súly lehet használni, mint egy kvantitatív, a betegség súlyosságát, mivel hipertrófia a gyomornyálkahártya volt megfigyelhető egerekben autoimmun gastritis és eredményezte a növekedést gyomor súly [37]. Szignifikáns korreláció gyomor tömegének és súlyosságától autoimmun gastritis egerekben, amely megkapta a H /Ka ^{- /- CD4 + T-sejteket. Ezt az összefüggést is megerősítette újszülött korban-thymectomised egerek, az átlagos gyomor mennyisége minden gyomorhurut pontszám lényegesen eltér egymástól. Azonban, mivel a variáció a csoportokon belüli, a nagy mintaméret lesz szükség, ha a gyomor súly kell becslésére használható a betegség súlyosságát. Ezért szövettani vizsgálat kombinált gyomor súlya lehet tekinteni, mint a kiegészítő intézkedések értékeléséhez súlyosságának autoimmun gastritis. Katalógusa}

Megmutattuk, hogy az autoimmun gastritis által kiváltott örökbefogadó átadása H /Ka ^{- /- CD4 + T-sejtek képviselik kiváló betegség modellje a boncolás autoimmun választ és a design interventionary terápiák autoimmun betegségek. Ebben a betegségben a modell, autoimmun gastritis okozta egy nem frakcionált poliklonális T-sejt-populáció tartalmazott patogén T-sejtek specifikus egy egyetlen antigén, és következetes high-grade betegség súlyossága figyelhető meg valamennyi recipiens egerekben. Sőt, azt mutatta, hogy a betegség súlyosságát lehet könnyen meghatározni gyomor súly, gyomor pH és a szövettani vizsgálat gyomor oldalán. Katalógusa}

Anyagok és módszerek katalógusa

Etikai nyilatkozat katalógusa

Ez a munka célja, szerezni egy részletesebb ismereteket autoimmun betegségek és az immunológiai mechanizmusokat, amelyek megakadályozzák autoimmunitás normális egyének. Mivel az immunrendszer egy rendkívül összetett, integrált hálózat, állatokat kell megfelelően értékelni ezeket a kérdéseket. Katalógusa

A legtöbb eljárás volt végzett klinikai vizsgálatok a vér és a szövetek vett minták egerek, amelyek fenntartják a kiváló lakáskörülmények . Az egereket gondosan ellenőrizni, és elpusztulnak, ha súlyosan érintett vagy szomorú. A felmondás az egyes kísérletben egereket megölte CO2 fulladás vagy csigolyatörés, amely összefüggésbe hozható a minimális a fájdalom. Katalógusa

Minden kísérletet gondosan megtervezett, hogy csökkentsék az állatok száma és végzi a szigorú ragaszkodás irányelveket diktált a University of Melbourne Kísérleti etikai bizottság; megelőzéséről szóló állatkínzás Act 1986; és a NHMRC /CSIRO /AAC ausztrál Gyakorlati Kódex a Care and Use of állatok tudományos célokra (1997). katalógusa

Ezt a munkát hagyta jóvá a Melbourne-i Egyetem Állat Etikai Bizottság szerint a projekt több 0.706.327,3.

egér katalógusa

BALB /cCrSlc [38], BALB /cCrSlc.CD90.1 kongenikus, H /Ka ^{- /- [26], H /Kβ - /- [ ,,,0],27] és BALB.B6- Gasa
kongenikus egerekben [20] már korábban leírtuk. Mindkét H /Ka - /- és a H /Kβ - /- egerekben már visszakereszteztünk nagyobb, mint 10-szer, hogy a BALB /cCrSlc. H /Ka - /- egereket keresztezzük BALB /c.CD90.1 egerek generálni H /Ka - /-. CD90.1 egerekben. Minden egereket tartottunk hagyományos állatházában a Bio21 Molecular Science and Biotechnology Institute, University of Melbourne. Az összes egér és kísérleteket jóvá a Melbourne-i Egyetem Kísérleti Etikai Bizottság. Katalógusa}

Az ellenanyagok és áramlási citometria katalógusa

Anti-CD3-FITC (145-2C11), anti-CD90.1- FITC (HIS51), anti-CD90.2-FITC (30H-12), anti-CD62L-PE (MEL-14), anti-CD4-PerCP (RM4-5), és anti-CD8-APC-vel (53-6,7) vásároltunk a BD Pharmingen; anti-CD44-APC (IM-7) a vásárolt eBioscience. Intracelluláris festéssel Foxp3 végeztünk anti-Foxp3-APC (FJK-16S) és Foxp3 Staining Kit (eBioscience) alkalmazásával a gyártó utasításai. Áramlási citometria végeztük a Becton Dickinson FACSort áramlási citométer és analizáltuk CellQuest Pro szoftver vagy a Beckman Coulter cián és analizáltuk Summit szoftver.

Assay of T-sejt válaszokat immunizált egerekben H + /K + ATP-áz

Tisztított sertés gyomor H ^{+ /K + ATP-áz állítunk elő a 01:01 arányban Freund-féle komplett adjuváns (Life Technologies). Az egereket szubkután injekciózzuk mindkét oldalán a farok bázis. H /Ka - /- és BALB /cCrSlc egereket immunizálunk kétszer 30 ug H + /K + ATP-áz, az egy hónap különbséggel között a védőoltások. Egy héttel a második immunizálás után az egereket leöltük azok szérumok és inguinalis nyirokcsomók. H + /K + ATPáz-specifikus autoantitestek voltak ELISA. Származó sejteket a lágyéki nyirokcsomók vontunk be egy T-sejt-proliferációs vizsgálati eljárásban. 1 × 10 5 sejteket tenyésztettünk 72 órán 2 × 10 4 léperedetű DC BALB /cCrSlc egerekben. T sejt proliferációt pedig az beépítésével 3H-timidin az utolsó 16 órában a kultúra. T sejteket tenyésztünk három példányban akár DC antigénnel (50 ug /ml egér gasztrikus membrán), vagy a DC egyedül. Gyomor membránokat állítottunk elő egér gyomor korábban leírtak [5].}

indukálása autoimmun gastritis egerekben

CD4 ^{+ T-sejteket dúsított > 85% -os tisztaságú a nyirokcsomókból és lépében H /Ka - /- és BALB /cCrSlc egerekben. Egysejtes szuszpenzióit inkubáltuk, mégpedig az F4 /80 és B220 hibridóma felülúszókat plusz anti-CD8 antitesttel (53.6.72, BioXCell). A nem-CD4 sejteket eltávolítottuk anti-patkány IgG-bevonatú mágneses gyöngyök (Dynal, Invitrogen). CD4 + (5 × 10 7) T-sejtek vagy H /Ka - /- vagy BALB /cCrSlc egereknek a letális besugárzott (600 rad) vad típusú kongenikus BALB /cCrSlc.CD90.1 egereket intraperitoneálisan. Néhány kísérletben tisztított H /Ka - /- CD4 + T-sejteket injektáltunk Besugárzott Balb /cCrSlc, H /Ka - /- és a H /Kβ - /- egerekben. Minden recipiens egerek besugárzása 600 rad-dal előtt egy nappal a T-sejt transzfer. Nyolc héttel később recipiens egereket megölték és gyomor, a nyirokcsomók és a szérumokat összegyűjtöttük. Katalógusa}

BALB /cCrSlc és BALB.B6- Gasa katalógusa kongenikus egereket használtunk a timektómia kísérletekben. Újszülött timektómia végeztük a korábban leírtak [20].

szövettani vizsgálata gyomor és mérése a gyomor pH

Gyomor metszeteket vizsgáltunk jelenlétében patológiás változások a korábban leírtak [24]. A pontozás végeztük vak és az egyes kijáró függetlenül szerzett legalább két ember. Annak érdekében, hogy mérjük a gyomor pH-t, az egereket éheztettük egy éjszakán előtt áldozatot. Gyomrokat felvágják, öblítjük és 1 ml sóoldatban, amelyet összegyűjtünk és mérjük pH-mérő.

H + /K + ATP-áz-specifikus enzimhez kötött immunszorbens vizsgálat (ELISA) katalógusa

Egy ELISA kimutatására H ^{+ /K + ATP-áz-specifikus autoantitestek végeztünk tisztított sertés H + /K + ATP-áz a korábban leírt [29].}

Statisztikai analízis

a statisztikai elemzést végeztünk GraphPad Prism 5.0 (GraphPad). A statisztikai analízist a Mann-Whitney U-teszt, vagy Spearman korrelációs tesztet, illetve a P-érték < 0,05 értéket tekintettük szignifikánsnak. Katalógusa

• PLoS One: génexpressziós a gyomornyálkahártya Helicobacter pylori-fertőzött és nem fertőzött átesett betegeknél a krónikus gyomorhurut Felületes
• PLoS One: Pontosság és küszöbértékek az Pepsinogens I, II és gasztrin 17. diagnózisa Gyomor fundus atrófia: Influence of gyomorhurut