PLoS ONE: Patogi Modelis Rimtas, didelis sergamumas autoimuninio gastrito Sukelia Polikloninis Efektoriaus T ląstelių ir be pasipiktinimas reguliavimo T Cells

Anotacija

autoimuninio gastrito rezultatai nuo T ląstelių tolerancijos suskirstymas į skrandžio H ^{+ /K + ATPazės. Skrandžio H + /K + ATPazės yra atsakinga už skrandžio sulčių parūgštinant, sudaro blokuojama a subvieneto (H /Kα) ir ß subvieneto (H /Kβ). Čia mes parodome, kad CD4 + T ląstelės iš H /Kα trūkumas pelių (H /Kα - /-) yra labai patogenišku ir autoimuninio gastrito gali būti sukeltas sublethally apšvitinti laukinio tipo pelių įvaikinti perdavimo nefrakcionuotų CD4 + T ląstelės iš H /Kα - /- pelių. Visos priimančios pelės nuosekliai plėtojama labiausiai sunkios formos autoimuninio gastrito 8 savaites po perdavimo, siūlanti hipertrofiją skrandžio gleivinės, visiškai pasišalinimo pakauškaulio ir zymogenic ląstelių ir buvimą autoantikūnų į H + /K + ATPazės serume. Be to, mes parodė, kad liga smarkiai paveikė skrandžio svorį ir skrandžio pH gavėjų pelių. Išeikvojimas pakauškaulio ląstelių šiame ligų modelį reikėjo tiek H /Kα ir H /Kβ buvimą, nes perdavimo H /Kα - /- CD4 + T ląstelės nesukėlė išnaudosime pakauškaulio ląstelių H /Kα - /- arba H /Kβ - /- Gavėjo pelių. Tipo cukrinio diabeto sunkumo nuoseklumas, kad polikloninius T ląstelių naudojimas ir specifinis T ląstelių atsakas į skrandžio autoantigen, kad šis puiki liga modelis dėl daugelio aspektų organų-specifinis autoimuninės reakcijos, įskaitant profilaktikai ir gydymui ligos tyrimo.}

nurodomoji dalis: tu E Ang DKY, Hoganas televizija, Skaityti S Chia CPZ, Gleeson MA, et al., (2011) Patogi Modelis Rimtas, didelis sergamumas autoimuninio gastrito Sukelia Polikloninis Efektoriaus T ląstelių ir be pasipiktinimas reguliavimo T ląsteles. PLoS ONE 6 (11): e27153. Doi: 10,1371 /journal.pone.0027153

redaktorius: Ciriaco A. Piccirillo, McGill universiteto Sveikatos centras, Kanada

Įstojo: Sausis 21, 2011 m Priėmė: Balandis 11, 2011 m Paskelbta: 9 lapkričio, 2011

Visos teisės saugomos: © 2011 Tu et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Finansavimas:. Šis darbas parėmė mokslinių tyrimų dotacijų iš nacionalinio sveikatos ir medicinos tyrimų tarybos Australijoje ir Melburno universiteto. Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį

konkuruojančių interesų. Autoriai gali patvirtinti, kad Simonas Skaityti buvo Melburno universiteto, kai šis tyrimas buvo baigtas ir kad gamintojas yra Novo Nordisk yra jo dabartinis adresas. Autoriai pareiškė jokių konkuruojančių interesų egzistuoja.

Įvadas

autoimuninio gastrito yra puikus sistema ištirti T ląstelių tolerancijos savarankiškai audinių praradimas, nes jis yra gerai charakterizuojamas autoimuninė liga su žinomas tikslas antigenas ir pelės modelis ligos turi daug panašumų į žmogaus ekvivalentu. Žalingi anemija, galutinis etapas autoimuninio gastrito, turi numatomą paplitimą 1,9% Vakarų suaugusių gyventojų per 60 metų [1] amžiaus, kuri atstovauja dažniausia priežastis vitamino B _{12 trūkumas pagyvenusių žmonių [2] , Autoimuninio gastrito funkcijos vienbranduoliniq ląstelių submucosa kuri tęsiasi į skrandžio gleivinę, skrandžio Parietal ir zymogenic ląstelių išvešėjimas skrandžio gleivinės [1] išeikvojimas.}

tikslinė antigeno autoimuninio gastrito buvo nustatyta kaip skrandžio H ^{+ /K + ATPazės grupe, išreikšta skrandžio parietalinių ląstelių [3] - [5]. Skrandžio H + /K + ATPazės grupe, yra membrana protonų siurblio atsakingas už skrandžio sulčių parūgštinant, ji yra heterodimero, kuris susideda iš katalizinio alfa subvieneto (H /Kα) ir glikoproteino beta subvieneto (H /Kβ). Ankstesni tyrimai parodė, kad tiek H /Kα ir H /Kβ yra nukreiptos į autoimuninio gastrito [4], [6] - [8]. Jis yra gerai dokumentuota, kad abiejų pelių ir žmonių, CD4 + T ląstelių, kurios pripažįsta skrandžio O + /K + ATPazės inicijuoti autoimuninio gastrito, o CD8 + T ląstelių ir B ląstelės yra neveiksmingas tai padaryti [7] - [17]. Nepaisant to, pradėjus ligos, autoantikūnai į H + /K + ATPazės yra gaminami ir yra labai naudingas diagnostinė priemonė, ligos, nors jie nėra patogeninis [3], [16], [18 ].}

BALB /c pelių buvo įrodyta, kad būti jautriausios limfopenija sukeltos autoimuninio gastrito su iš 30-90% [19] atvejų [20]. Liga gali būti sukeltas thymectomy nuo 3 dienų amžiaus pelių ar suaugusiųjų thymectomy kartu su viena dozė ciklofosfamidu [19], [21]. Nepaisant to, sunku įvertinti gydomąjį poveikį gydymo duotų thymectomised pelių nes ligos sunkumo spektro nuo lengvo iki sunkaus visada laikomasi ir dažnis yra kintamas, todėl didelė grupė dydžiai reikia išbandyti statistinį reikšmingumą. Be to, operacija dalyvavo ir po operacijos priežiūra gyvūnų techniškai sudėtinga. Autoimuninio gastrito taip pat gali būti sukeltas BALB /c pelių imunizacijos išgryninto skrandžio H ^{+ /K + ATPazės [5]. Tačiau, ši liga yra grįžtamas nutraukus imunizacijos ir turi mažą sunkumą. Perleidimas BALB /c T ląstelių išeikvoti reguliavimo T (TREG) ląstelių į athymic gaunančiose pelių sukelia stiprų autoimuninio gastrito [15]. Todėl neįmanoma perpjauti tarp autoreactive T ląstelių ir TREG ląstelių santykį ligos vystymosi šį nustatymą, nes TREG ląstelės yra išvykęs metu.}

didelis sergamumas spontaniškai autoimuninio gastrito pastebima transgeninių pelių, išreiškė TCR specifišką H /Kα [8]. Tačiau, šie pelių neatspindi idealus ligos modelį visam eksperimentų, nes monokloninis pobūdis patogeninių T ląstelių nėra reziumuoti polikloninis atsaką, kuris vyksta patofiziologinių sąlygomis.

iš šios perspektyvos, mes sukūrė ligos modelį kuri rėmėsi polikloninis T ląstelių perkėlimas iš H /Kα trūkumas (H /Kα ^{- /-) pelėms į sublethally-apšvitinti laukinio tipo pelėms. Mes parodė, kad pelėms, vartojusioms Nefrakcionuotas T ląsteles nuo H /Kα - /- pelėmis visi pasidavė skaudžiausias autoimuninio gastrito su patologinių pakitimų pastebėta visoje skrandį. Be to, šie patologiniai pokyčiai smarkiai paveikė skrandžio fiziologiją. Mes parodė šio modelio naudingumą parodant, kad autoimuninio gastrito plėtra šiame modelyje buvo griežtai priklauso nuo abiejų H + /K + ATPazės alfa ir beta padalinių buvimą.}

Rezultatai

Padidėjęs T ir B ląstelių atsakas H /Kα ^{- /- pelėmis imunizacijos H + /K + ATPazės}

norint turėti sistemą kad yra tinka įvairių aspektų autoimuninės reakcijos, tyrimo, mes nustatė ligos modelis, kuriame liga yra susidarę dėl patogeninių polikloninius T ląstelių ligos intensyvumas yra nuosekliai sunkus. T ląstelės atsakas į H /Kα yra reikalingas autoimuninio gastrito pradžios ir gali būti naudojamas dominuojantis energijos šaltinis skrandžio autoreactive epitopus [7], [8], [22]. Kaip T ląstelių toleranciją H /Kα buvo mažai tikėtina, kad pasitaiko H /Kα ^{- /- pelių, mes ištirti, ar T ląstelės, kurios buvo būdingos H + /K + ATPazės ir galėtų atsirasti gastritas buvo pateikti H /Kα - /-. pelėmis}

jei nustatyti, ar buvo padidėjusi imuninės H ^{+ /K + ATPazės H /Kα - /- pelių, palyginti su laukinio tipo pelėmis, pelių buvo paskiepyti du kartus išgrynintu skrandžio H + /K + ATFazės. Po imunizacijos, specifiniai H + /K + ATPazės autoantikūnai buvo aptikta paskiepytų H /Kα - /- pelių, bet ne laukinio tipo pelėms (1A pav.) T ląstelių atsakas į in vitro pervežimas restimuliavimo su H + /K + ATFazės taip pat buvo reikšmingai didesnis H /Kα - /- pelių negu laukinio tipo pelėms (1b pav.) Todėl, kaip jau buvo įrodyta H /Kβ - /- pelėmis [23], taip pat yra reikšmingas T ir B ląstelių atsakas į H + /K + ATPazės H /Kα - /-. pelėms, kad neatvyksta į laukinio tipo pelių}

CD4 ^{+ T ląstelės iš H /Kα - /- pelėms buvo labai patogeniškas}

Norėdami nustatyti, ar įtėviui perdavimas T ląstelių iš H /Kα ^{- /- pelių galėtų sukelti autoimuninio gastrito, mes praturtintas CD4 + T ląstelės arba H /Kα - /- arba laukinio tipo peles ~85 % grynumo ir perkelti 5 × 10 7 šių ląstelių į sublethally apšvitinti laukinio tipo pelėms. Kadangi ji buvo anksčiau įrodyta, jog O + /K + ATPazės būdingas CD4 + T ląstelės buvo greitai pašalintas periferijoje ir negali sukelti autoimuninio gastrito į Neapšvitinti laukinio tipo pelių [24], visų įgyjančiosios pelės naudojami šiame tyrime buvo lengvai apšvitinti 600 rad sustiprinti perduotų T ląstelių iš H /Kα išlikimą - /-. pelėmis}

aštuonias savaites po perdavimo, pelėms, vartojusioms H /Kα ^{- /- CD4 + T ląstelės visose išsivysčiusiose skaudžiausias formas autoimuninio gastrito (rezultatas 5 ir 6). Tai buvo įrodyta, su visu išeikvoti parietalinėse ląstelėse ir zymogenic ląstelių, ir hipertrofija skrandžio gleivinės (pav 2a, 2b). Priešingai, pelių, kurios gavo laukinio tipo CD4 + T ląstelės buvo visiškai nemokama gastritas (pav 2A, 2B), kuri nurodė, kad autoimuninio gastrito pelėms gavimo H /Kα - /- CD4 + T ląstelių lėmė ne švitinimo , savaime
, o, T ląstelių užkratas.}

Patologiniai pokyčiai gastritais pelių skrandžio gerokai paveikė jų skrandžio fiziologiją. Hipertrofija skrandžio gleivinės lėmė skrandžio rugae (2c pav) ir į skrandžio kūno svorio padidėjimas (2d pav) plėtra. Antra, išeikvojimas pakauškaulio ląstelių sukėlė skrandžio pH padidėjimą dėl rūgšties sekrecijos trūkumo (2E pav.) Be to, konkrečios skrandžio H ^{+ /K autoantikūnai + ATPazės galima aptikti visose gastritais pelėmis (2F pav.) Autoantikūnai pasiekė aukštą lygį visose pelių 6 savaitėms po perdavimo (2G pav.) Kartu šie rezultatai parodė labai patogeniško H buvimą + /K + ATPazės-specifiniai T ląstelių H /Kα - /-. Pelėmis}

autoimuninio gastrito sukėlė CD4 ^{+ T, ląstelinis uždegimas}

Pelės su autoimuninio gastrito sukeltos perdavimo H /Kα ^{- /- CD4 + T ląstelės turėjo žymiai daugiau ląstelių savo skrandžio-nusausinti paragastric limfos mazgai, palyginti su įprastais pelių ir pelių, kurios gavo CD4 + T ląsteles nuo laukinio tipo donorais. Priešingai, nebuvo jokio skirtumo, atsižvelgiant į kirkšnies limfmazgiuose tarp gastritais ir ne gastritais pelėmis (3a paveikslas) dydžio. Tai pasiūlė, kad į paragastric limfmazgių gastritais pelių ląstelių skaičius padidėjimą lėmė vietos skrandžio uždegimas, o ne lengvatinis išlikimo arba plėsti H /Kα - /- CD4 + T ląstelių, lyginant su laukinio tipo CD4 + T ląstelės po perdavimo}

šių eksperimentų, ląstelės nuo donoro H /Kα ^{-. /- arba laukinio tipo pelės gali būti atskirta nuo pagalbą gaunančių ląstelių, nes jie nešė įvairių CD90 alelių. Donoras populiacija paragastric limfmazgiuose pelių, gavusių H /Kα - /- CD4 + T ląstelės turėjo žymiai daugiau CD4 + T ląsteles efektoriaus /atminties fenotipo (CD44 hiCD62 Lo), lyginant su pelėmis, kurios gavo laukinio tipo CD4 + T ląsteles. Tačiau efektoriaus /atminties T ląstelių kiekis buvo panašus į ne-nuteka limfmazgio (3B pav). Kartu, šie rezultatai rodo, kad autoimuninio gastrito plėtros pelėms, kad gauta CD4 + T ląstelių iš H /Kα - /- pelėms sukėlė T ląstelės medijuojamo uždegiminio atsako skrandžio aplinkos, o ne daugiau apibendrintas atsakymas.}

autoimuninė gastritas plėtra šioje ligos modeliu nebuvo susijęs su mažesniu reguliavimo T lygio (TREG) ląstelių, nes gastritais pelės esančios panašios proporcijos TREG ląstelių paragastric limfmazgiuose, palyginti su ne -gastritic valdikliai (pav 4A, 4B). Tiesą sakant, žymiai daugiau TREG ląstelės buvo rasta pelių pilvo autoimuninio gastrito (pav 4A, 4C)

H /Kα ^{-. /- CD4 + T ląstelės greitai sukeltas audinių pažeidimas skrandyje}

autoimuninė gastritas sunkumas buvo analizuojami įvairiais laiko momentais po H /Kα pavedimu ^{- /- CD4 + T ląstelės. Vidutiniškai išeikvojimas pakauškaulio ląstelių ir zymogenic ląsteles, kaip nurodyta pagal gastritas rezultatas 4 [24], gali būti pastebėta anksčiau kaip 2 savaitėms po perdavimo ir liga sparčiai progresavo su dauguma pelių aiškių gastritas, kaip parodė gastritas rezultatas 5 ir 6 4 savaites po perkėlimo (5 paveikslas).}

Skrandžio svoris gali būti naudojamas kaip kiekybinį matą autoimuninio gastrito

parodė, kad pelėms su autoimuninio gastrito buvo didesnė skrandžio svoris nei ligų be pelių dėl į skrandžio gleivinę (2d pav) hipertrofija. Todėl, mes ištirti, jei skrandžio svoris gali būti naudojamas kaip kiekybiniam apribojimui dėl autoimuninio gastrito sunkumo. Tolesnio bandymo, jei skrandžio svoris gali atskirti tarp skirtingų sunkumo autoimuninio gastrito, mes išnagrinėjo neonatally-thymectomised peles, kaip būtų galima gauti daugiau numeriai pelių su kintančia ligų balai. Mes nustatėme, kad ten buvo reikšmingų skirtumų vidurkio skrandžio svorio tarp kiekvienos iš pirmųjų penkių lygių autoimuninio gastrito (Finišavo 0-4) (6 paveikslas). Tačiau, vidutinis skrandžio svoriai gastritas balų 4, 5 ir 6 nebuvo žymiai skiriasi viena nuo kitos (6 paveikslas). Tai greičiausiai dėl to, kad hipertrofija skrandžio gleivinės laipsnis neturi didėti, nes liga progresuoja į etapus

indukcija autoimuninio gastrito H /Kα ^{-. /- CD4 + T ląstelės buvo priklausomas nuo H /Kα ir H /Kβ}

Spėjama, kad CD4 + T ląstelės iš H /Kα ^{buvimas - /- pelėms sukėlė tolerancijos H /Kα trūksta šio skrandžio autoantigen nėra. Norėdami tai patikrinti, CD4 + T ląstelės buvo perkelta iš H /Kα - /- pelės į sublethally-apšvitintas H /Kα - /- ir laukinio tipo pelėms. Buvo įrodyta, kad H /Kα, atsižvelgiant į H /Kβ nesant, negali būti pateikta MHC molekulių [25] (S Allen, asmeninio bendravimo). Todėl perduota CD4 + T ląstelės iš H /Kα - /- pelės į sublethally-apšvitinti H /Kβ - /- pelių ir palyginti juos su H /Kα - /- ir laukinio tipo įgyjančiosios pelių. Autoimuninių atakos analizė skrandžio gleivinės sudėtingas H /Kα - /- ir H /Kβ - /- pelių pokyčius, kurie atsiranda skrandžio gleivinės nes skrandžio rūgšties trūkumo šių pelių padidėja lygių mitybos hormono Gastrino. Tai veda prie steigiamojo hipertrofija ir išnaudosime zymogenic ląstelių [26],. Todėl, siekiant įvertinti, ar autoimuninė reakcija atakuoja skrandžio gleivinę šių pelių, mes vietoj lėmė pakauškaulio ląstelių, kurios paprastai sumažėję autoimuninio gastrito, bet rasti gausa H /Kα paplitimą - /- ir H /Kβ - /- pelės, taip pat skrandžio autoantikūnų buvimas}

skrandžio morfologija H /Kα ^{-. /- pelių arba H /Kβ - /- pelės nebuvo paveikti H /Kα pavedimu - /- CD4 + T ląstelių (7A pav, 7B). Visų pirma, nebuvo pakauškaulio ląstelių, liudijančių autoimuninės reakcijos stokos išeikvojimas. Priešingai, visiškai išeikvojimas pakauškaulio ląstelių buvo pastebėtas laukinio tipo gaunančiose pelių, kurios gavo H /Kα - /- CD4 + T ląstelių (7c pav). Nuo skrandžiai H /Kα - /- ir H /Kβ - /- pelių atsirado skiriasi tiek normaliomis ir gastritais pelių, mes negalėjome įvertinti šias peles naudojant mūsų standartinę gastritas vertinimo sistemą. Tačiau, H + /K + ATPazės-specifiniai antikūnai, kita autoimuninio gastrito požymis nebuvo aptikta tiek H /Kα Sera - /- ir H /Kβ - /- Gavėjo pelių, bet buvo aptikta laukinio tipo gaunančiose pelėmis (7d pav). Šie rezultatai parodė, kad buvo reikalaujama abiejų alfa ir beta padalinių buvimas dėl pakauškaulio ląstelių išeikvojimas H /Kα - /-. CD4 + T ląstelės}

Diskusijos

autoimuninio gastrito gali būti sukeltas BALB /c pelių keliais būdais, įskaitant naujagimių thymectomy, suaugusiųjų thymectomy su ciklofosfamidu [19], [21], imunizacijos skrandžio H ^{+ /K + ATPazės [5] ir kartos H + /K + ATPazės-specifiniai TCR transgeninių pelių [7], [8]. Tačiau imuninė sistema dominuoja T ląstelių su vienu ypatingumu, pastebėta TCR transgeninių pelių nėra panašus normalias fiziologines sąlygas. Be to, thymectomy ir imunizacijos nesuteikia nuoseklų ligos sunkumo ir jie yra techniškai sunku, todėl nepatogu naudoti šiuos modelius už imunoterapijos analizė. Todėl mes sukūrėme nauja liga modelį, kuris rėmėsi T ląstelių perkėlimas iš H /Kα - /-. pelėms, polikloninis gyventojų, kad pateikta labai gastritogenic T ląstelių}

Mes nustatėme, kad imunizacija H /Kα ^{- /- pelių išgrynintu H + /K + ATPazės sukėlė energingai T ląstelių atsaką kaip į T ląstelių tolerancijos stokos skrandžio autoantigen, kuriame nurodyta, kad H buvimą + /K + ATPazės-specifiniai T ląstelių H /Kα - /- pelių. Mes taip pat parodė, kad CD4 perdavimas + T ląstelių populiacijos iš H /Kα - /- pelių sukeltos žalos skrandžio audinių gaunančiose pelių netrukus po perdavimo. Autoimuninio gastrito, sukelta H /Kα pavedimu - /- CD4 + T ląstelės buvo nuosekliai sunkus: visos įgyjančiosios pelės sukūrė labiausiai sunkia liga aštuonias savaites po perdavimo ir jų skrandžio fiziologija buvo reikšmingai paveikta, kaip nurodyta skrandžio sulčių masę ir pH padidėjimas. Šis modelis yra naudingas, nes sunkumas ir dažnis liga metodus, kad pastebėtas TCR transgeninių pelių dar sukelia polikloniniu repertuarą, ji yra techniškai paprasta nustatyti, ji neturi remtis sutrikdymo normaliai TREG ląstelių repertuarą.}

donoro ląstelių populiacija iš H /Kα ^{- /- pelėms buvo praturtintas į ~85% CD4 + T ląstelės pagal "neigiamas atrankos procedūra", nes didžioji šio darbo tikslas buvo gaminti paprastas , nebrangūs ir patogūs liga modelis. Galime daryti išvadą, kad jis yra CD4 + T ląstelių bandinyje, kad sukelia autoimuninio gastrito, nes jis buvo gerai žinomi daugelio tyrimų, kad CD4 + T ląstelių, o ne kitų tipų ląstelių gali inicijuoti autoimuninio gastrito [7 ] - [17]. Akivaizdu, kad T ir B ląstelių populiacijos reaguoja į H + /K + ATPazės buvimą normaliomis pelėmis repertuaro [5], [14] - [16], [21], [24 ], [28] - [33]. Todėl mes rekomenduojame, kad H + /K + ATPazės-specifiniai T ir B ląstelės gavėjo tada įdarbinti pažeidimo ir gavėjų gautas B ląstelės yra atsakingos už autoantikūnų gamyba.}

Jis buvo anksčiau dokumentais, kad CD4 ^{+ T ląstelės iš H /Kβ - /- pelėms sukelia autoimuninio gastrito į athymic BALB /c pelių, tačiau ne apšvitinto laukinio tipo pelių [24]. CD4 + T ląstelės iš H /Kα - /- pelėms sukelia gastritą ir spinduliuojančiam laukinio tipo pelėmis rodo, kad ši populiacija yra labiau patogeniškas nei CD4 + T ląsteles nuo H /Kβ - /- pelių , Šie duomenys paremti daugiau dominuojantį vaidmenį už imuninio atsako prieš H /Kα atsižvelgiant į autoimuninio gastrito patogenez, nuosekliai su išvadomis TCR transgeninių pelių [7], [8].}

Skirtingai nuo kitų ligų modelių, naudojamų TREG ląstelių -depleted polikloninis T ląstelės iš laukinio tipo pelių sukelti autoimuninės reakcijos [15], tai nebuvo būtina pašalinti TREG ląsteles nuo H /Kα ^{- /- CD4 + T ląstelių populiaciją, dėl sunkios autoimuninio gastrito indukcija. Be to, autoimuninio gastrito plėtra gaunančių pelių sukėlė ne sumažintą TREG ląstelių lygį nuo donoro gyventojų nuo gastritais pelės esančius panaši dalis TREG ląstelių paragastric limfmazgiuose, palyginti su ne gastritais kontrolės. Mes jau anksčiau įrodė, kad TREG ląstelės iš H /Kα - /- pelių buvo toks pat veiksmingas kaip Tregs ląstelių iš laukinio tipo pelių slopinant H /Kα konkrečius autoreactive T ląstelių [34]. Todėl, mūsų išvados čia remti ankstesnę darbą, nurodantis, kad T ląstelių repertuarus, kad nebuvo atliktos periferinių T ląstelių naikinimui negali būti nuslepiami normalu TREG ląstelių populiacijos [24], [35].}

Nors normalų lygį apie TREG ląstelės buvo aptikta paragastric limfmazgiuose iš gastritais pelių ir žymiai didesnis procentas TREG ląstelių buvo rastas į gastritais pelių skrandžio, palyginti su normaliomis pelėmis, TREG ląstelės negalėjo išvengti ar slopinti liga. Tai dera su teiginiu, kad nors TREG ląstelės kaupiasi CNS, kai eksperimentinis alergija encefalomielitas buvo vykdoma [36], jie negali išvengti plėtrą ir funkcijos mielino oligodendrocito glikoproteino-specifinis T ląstelių, nes suteiktas vietinis uždegiminis citokinų Milieuģ patogeninių T ląstelės atsparios TREG slopinimas.

išeikvojimas pakauškaulio ląstelių yra autoimuninio gastrito požymis ir pagrindinė priežastis, kad piktybinė mažakraujystė yra gyvybei pavojinga liga, nes parietalinės ląstelės gamina vidinis faktorius, kurios trūkumas yra mirtinas , Mes nustatėme, kad pakauškaulio ląstelių išeikvojimas šiame ligų modelis buvo priklauso nuo abiejų H ^{+ /K + ATPazės padalinių buvimą kaip CD4 + T ląsteles nuo H /Kα - /- pelėms tik sukeltas Išorinis ląstelių išeikvoti laukinio tipo pelėms, bet ne H /Kα - /- ir H /Kβ - /- pelės. Išorinis ląstelių išeikvojimas sukėlė ne T ląstelių atsako link H /Kβ nuo H /Kα - /- CD4 + T ląstelės nesukėlė parietalinėje ląstelių išeikvojimas H /Kα - /- Gavėjo pelėms, kartu H /Kβ buvo išreikšta šių pelių [26]. Kita vertus, nebuvimas parietalinių ląstelių išeikvojimas H /Kβ - /- paramą gaunančių pelių, kurios gavo H /Kα - /- CD4 + T ląstelės sustiprino mūsų ankstesnius tyrimus, rodančius, kad H poreikį /Kβ tam, kad H /Kα turi būti pateikta iki MHC molekulių [22]. Kartu šie rezultatai rodo, kad parietalinėje ląstelių išeikvojimas šioje perdavimo modelio sukurta kaip imuninio atsako į H /Kα pasekmė CD4 + T ląstelės iš H /Kα - /- pelių. Atkreipiame dėmesį, kad ankstesniame darbe mes nustatėme, kad parietalinės ląstelės nėra sumažėję arba H /Kα - /-, nei H /Kβ - /- pelės po naujagimių thymectomy, kurioje pabrėžiama, kad šio naujo modelio nuoseklumą su rezultatų iš šio ankstesnio, gerai-nustatytą modelį.}

Mes taip pat parodė, čia, kad skrandžio svoris gali būti naudojamas kaip kiekybiniam apribojimui nuo ligos sunkumo nuo hipertrofija skrandžio gleivinės buvo stebėtas pelėms su autoimuninio gastrito, ir dėl to į skrandžio sulčių svorio [37] padidėjimas. Ten buvo reikšminga koreliacija tarp skrandžio svorį ir autoimuninio gastrito sunkumo pelių, kurios gavo H /Kα ^{- /- CD4 + T ląstelės. Ši koreliacija labiau patvirtino neonatally-thymectomised pelėmis, su vidutine pilvo svoris kiekvienos gastritas rezultatas yra žymiai skiriasi nuo kito. Tačiau, dėl to, kad variacijos per grupių, didelis mėginio dydis bus reikalaujama, jei skrandžio svoris turi būti naudojamas įvertinti ligos sunkumą. Todėl histologinis ištyrimas kartu su skrandžio svoris gali būti laikomos viena kitą papildančiomis priemonėmis vertinant autoimuninio gastrito sunkumą}

parodė, kad autoimuninio gastrito sukeltas įvaikinti perdavimo H /Kα ^{-. /- CD4 + T ląstelių, atstovaujama puikų ligos modelį autoimuninės reaguojant išpjaustymą, ir interventionary terapijos dizaino autoimuninių ligų. Šiuo ligų modelis, autoimuninio gastrito buvo sukelia nefrakcionuotų polikloninis T ląstelių populiacijos, kuriame buvo patogeninių T ląstelių konkrečius vieno antigeno ir atitinka aukštos kokybės liga sunkumas pastebėtas visose pagalbą gaunančiose pelių. Be to, mes parodėme, kad liga sunkumas gali būti lengvai nustatoma skrandžio svorio, skrandžio pH ir histologinio tyrimo skrandžio skyriuje.}

Medžiagos ir metodai

Etika pareiškimas

Šis darbas siekia gauti išsamesnių žinių autoimunine liga ir imunologinius mechanizmus, kurie užkirstų kelią autoimuninės reakcijos normali. Kaip imuninė sistema yra labai sudėtinga, integruotas tinklas, gyvūnai privalo tinkamai įvertinti šias problemas.

procedūrų dauguma buvo klinikiniai bandymai, atliekami kraujo ir audinių mėginių, paimtų iš pelių, kurios yra išlaikomos puikios laikymo sąlygos , Pelės buvo atidžiai stebimas ir, jei smarkiai paveikta ar nelaimę žuvo. Kiekvieno eksperimento nutraukimo, pelės žuvo CO2 uždusimo ar slankstelių dislokaciją, kurios susijusios su nelaimės minimumo.

Visi eksperimentai yra kruopščiai planuojama sumažinti naudojamų gyvūnų skaičių ir atliekamos griežtai laikantis diktuoja gaires iki Melburno bandymus su gyvūnais etikos komiteto universiteto; žiauraus elgesio prevencija 1986 Gyvūnai aktu; ir NHMRC /CSIRO /AAC Australijos praktikos kodeksas dėl apsaugos ir naudojimo gyvūnų mokslo tikslais (1997).

Šis darbas buvo patvirtintas Melburnas gyvūnų etikos komiteto universiteto pagal projekto numerį 0706327.3.

Pelės

Balb /cCrSlc [38], Balb /cCrSlc.CD90.1 congenic H /Kα ^{- /- [26], kad H /Kβ - /- [ ,,,0],27] ir BALB.B6- gasa
congenic pelių [20] buvo aprašyta anksčiau. Abi H /Kα - /- ir H /Kβ - /- pelėms buvo backcrossed didesnis nei 10 kartų BALB /cCrSlc. H /Kα - /- pelėms buvo kirto į Balb /c.CD90.1 pelių generuoti H /Kα - /-. CD90.1 pelėms. Visi pelėms buvo išlaikytas įprastu gyvūnų įrenginio prie Bio21 molekulinės mokslo ir biotechnologijos institutas, Melburno universiteto. Visi pelių ir eksperimentai buvo patvirtintas Melburnas bandymus su gyvūnais etikos komiteto universitete.}

Antikūnai ir srauto citometrijos analizė

anti-CD3-FITC (145-2C11), anti-CD90.1- FITC (HIS51), anti-CD90.2-FITC (30H-12), anti-CD62L-PE (MEL-14), anti-CD4 PerCP (RM4-5), ir anti-CD8-APC (53-6,7) buvo įsigytas iš BD Pharmingen; anti-CD44-APC (MP-7) buvo įsigytas iš eBioscience. Ląstelės viduje dažymo Foxp3 buvo atliekama naudojant anti-Foxp3-APC (FJK-16) ir Foxp3 Dažymo rinkinį (eBioscience) pagal gamintojo nurodymus. Tėkmės citometrijos buvo atliktas ant Becton Dickinson FACSort tekėti citometre ir analizuojami naudojant CellQuest Pro programinę įrangą arba Beckman Coulter cyan ir analizuojami naudojant Summit programinę įrangą.

Analizės T ląstelių atsakus pelėms paskiepytų su H + /K + ATPazės

Išgrynintas kiaulių skrandžio O ^{+ /K + ATPazės buvo paruošti 1:1 santykis su pilname Freund adjuvantu (Life Technologies). Buvo suleidžiama po oda kiekviename uodegos pagrindo pusėje. H /Kα - /- ir Balb /cCrSlc pelėms buvo paskiepyti du kartus su 30 mikrogramų H + /K + ATPazės, su vieno mėnesio, išskyrus tarp skiepus. Vieną savaitę po to, kai antrojo skiepijimo, pelės buvo paaukotos už jų serumas ir kirkšninį limfinių mazgų. O + /K + ATPazės-specifiniai antikūnai buvo aptikti ELISA. Ląstelės iš kirkšninį limfmazgių buvo naudojamas T ląstelių proliferacijos tyrimu. 1 × 10 5 ląstelės buvo auginamos 72 val 2 × 10 4 blužnies DC nuo Balb /cCrSlc pelių. T ląstelių proliferacija buvo vertinama naudojant steigimo 3H-timidino per paskutinius 16 valandų kultūrą. T ląstelės buvo auginamos tris kartus su arba DC su antigeno (50 mikrogramai /ml pelės skrandžio membranos) arba vien tik DC. Skrandžio membranos buvo ruošiamas iš pelės skrandžius kaip aprašyta anksčiau [5]}

indukcija autoimuninio gastrito pelėms

CD4 ^{+ T ląstelės buvo turtingi ir >. 85% grynumo iš limfmazgių ir blužnis H /Kα - /- ir Balb /cCrSlc pelių. Vienviečiai ląstelių suspensijos buvo inkubuojami su F4 /80 ir B220 hibridomos nuopile plius anti-CD8 antikūnas (53.6.72, BioXCell) mišinį. Ne CD4 ląstelės buvo pašalintos naudojant anti-žiurkių IgG dengtos magnetinius rutuliukus (Dynal, Invitrogen). CD4 + (5 × 10 7) T ląstelės arba H /Kα - /- arba Balb /cCrSlc pelėms buvo švirkščiamas į sublethally apšvitinti (600 rad) laukinio tipo congenic BALB /cCrSlc.CD90.1 pelėms per pilvo ertmę maršrutu. Kai eksperimentų, išgrynintas H /Kα - /- CD4 + T ląstelės buvo švirkščiamas į apšvitintas BALB /cCrSlc H /Kα - /- ir H /Kβ - /- pelių. Visos priimančios pelėms buvo apšvitinti 600 rad vieną dieną prieš T ląstelių perdavimo. Aštuoni savaičių gavėjos pelės žuvo ir skrandžiai, limfmazgiai ir serumai buvo nuimta.}

Balb /cCrSlc ir BALB.B6- gasa
congenic pelėms buvo naudojamas thymectomy eksperimentams. Naujagimių thymectomy buvo atliktas kaip buvo aprašyta anksčiau [20].

išnagrinėjo histologinis tyrimas skrandžius ir matavimo skrandžio pH

Skrandžio skyriuose dėl patologinių pokyčių akivaizdoje, kaip buvo aprašyta anksčiau [24]. Atsakomają buvo atliktas akliname būdu ir kiekviena skaidrė buvo nepriklausomai įmušė bent dviejų žmonių. Siekiant įvertinti skrandžio pH, pelėms buvo alkanas naktį prieš auką. Skrandžiai buvo prapjauti ir perskalauti 1 ml fiziologinio tirpalo, kuris buvo surinkta ir matuojant pH-metro.

O + /K + ATPazės konkrečių IMUNOFERMENTINĖS analizės (ELISA),

IFA aptikti H ^{+ /K + ATPazės konkrečius autoantikūnus buvo atliekamas naudojant valytas kiaulių O + /K + ATPazės kaip aprašyta anksčiau [29].}

Statistinė analizė

Statistinė analizė atlikta naudojant GraphPad Prism 5.0 (GraphPad). Duomenys buvo analizuojami naudojant Mann-Whitney U testą arba Spearman koreliacijos testą ir p reikšmė < 0,05 buvo laikomas reikšminga
.

• PLoS ONE: Genų ekspresijos į skrandžio gleivinę nuo Helicobacter pylori infekuotiems ir sveikų pacientų, kuriems atliekama Lėtinis gastritas paviršutiniškas
• PLoS ONE: Tikslumas ir atjungimo vertės Pepsinogens I, II ir gastrinas 17 diagnozuoti Skrandžio Fundic atrofija: įtaka gastritas