Odlišný význam medzi intratumorová a peritumorálního lymfatické cievy hustote u karcinómu žalúdka: retrospektívna štúdia 123 cases

iný význam medzi intratumorální a peritumorálního lymfatické cievy hustote u karcinómu žalúdka: retrospektívna štúdia 123 prípadov
abstraktné
pozadia
Pacienti s rakovinou žalúdka v Číne majú horší výsledok a horšiu prognózu. lymfangiogeneze nádorom indukovaná hrá kľúčovú úlohu v metastáz a progresii nádorov. V intratumorová a peritumorálního lymfatických ciev mali mať rozdielne biologické účinky. Tri hlavné rastové faktory, vaskulárny endoteliálny rastový faktor (VEGF) -A, VEGF-C a VEGF-D, sú zapojené do procesu aktivácie cez ich receptory (VEGFRs). Cieľom súčasnej štúdie je preskúmať významný rozdiel medzi intratumorální a peritumorálního lymfatické cievy hustote (LVD) u rakoviny žalúdka a ich korelácia s lymphangiogenetic rastových faktorov.
Metódy
intratumorová LVD (I-LVD) a peritumorálního LVD ( P-LVD) 123 pacientov s primárnou rakovinou žalúdka boli vyhodnotené po zafarbení D2-40, a potvrdené dvojitým farbením D2-40 /CD34. Proliferačnej aktivita lymfatických ciev endotelu bola hodnotená dvojakom farbením D2-40 /Ki-67. Asociácia bola analyzovaná medzi I-LVD /P-LVD a úroveň expresie VEGF-A, VEGF-C, VEGF-D a receptor VEGFR-3, ktorý sa meria pomocou imunohistochémia (IHC). boli tiež ocenené korelácií I-LVD a P-LVD s prognózou pacienta.
Výsledky
(1) peritumorálního Lymphatics (PTLs) boli relatívne zväčšený s rozšírených lumen v porovnaní s nitronádorových lymfatického systému (ITLs). Zvýšená P-LVD bol významne vyšší ako I-LVD (P
menšie ako 0,05). (2) P-LVD bol nájdený významne spojené s lymfatických uzlín (LNM) (P Hotel &0,001), lymfatická invázie nádoba (LVI) (P Hotel &0,001), VEGF-C (P
= 0,003), VEGF-D na úrovni expresie (P
= 0,005) a VEGFR-3 na úrovni expresie (P Hotel &0,001) v peritumorálního tkanivách, a to napriek nebola nájdená žiadna významná súvislosť medzi vyššie varianty s i-LVD , Avšak, zvýšené I-LVD bolo preukázané, že sú spojené so znížením objemu nádoru (P Hotel &0,001). Ani ja-LVD ani P-LVD korelovala s VEGF-A výrazu (P Hotel > 0,05). (3) proliferačnej aktivita lymfatických ciev endotelu bola pozorovaná u PTLs, napriek ITLs. (4) Zvýšenie P-LVD, ale nie ja-LVD, bolo uvedené, že je nezávislý rizikový faktor pre vznik lymfatických uzlín u viacrozmerné logistickej regresnej analýzy, a bol spojený s horšou bez ochorenia a celkovým prežívaním.
Závery
PTLs hrajú úlohu v progresii rakoviny žalúdka. Zvýšená P-LVD, ale nie I-LVD, bol významne spojené s VEGF-C /-D /systému VEGFR-3, a môže byť nezávislým rizikovým faktorom pre lymfatických uzlín a prognostický faktor u rakoviny žalúdka.
Pozadie rakovina žalúdka
je hlavnou hlavnou príčinou úmrtí na nádorové ochorenia v Číne. Asi 80% ~ 90% pacientov je diagnostikovaná v pokročilom štádiu so zlou prognózou, obyčajne s lymfatickým šírením a vzdialené metastázy. V priebehu posledných niekoľkých rokov, lymfangiogeneze nádorom indukovaná poháňaný lymphangiogenic rastovými faktormi bola pevne stanovená ako nový mechanizmus pre progresiu rakoviny. V súčasnej dobe rastie počet expertov sa domnieva, že intratumorová lymphatics (ITLs, že lymphtics vnútri nádorov) a peritumorálního lymfatické (PTLs, lymphtics na periférii) hrajú presne odlišné biologické role na správanie nádoru a prognózou u rôznych typov nádorov. V karcinómu žalúdka, niekoľko štúdií ukázali, že pacienti s vyššou I-LVD mal vyššiu prítomnosť lymfatických uzlín v ranej fáze [1], zatiaľ čo P-LVD môže byť nezávislým rizikovým faktorom pre lymfatických uzlín a prognózu [2]. Avšak, funkcia I-LVD a P-LVD a ich korelácia s expresiou VEGFs doteraz neboli objasnené.
Séria štúdií preukázala kľúčovej role VEGFs výrazov na progresiu nádoru a prognózou u rakoviny žalúdka. VEGF-C a VEGF-D, dvaja členovia rodiny VEGF, boli definované ako lymphangiogenic rastové faktory a zohrávajú dôležitú úlohu v nádorovej Lymfangiogeneze prostredníctvom aktivácie VEGFR-3, ktorý je exprimovaný hlavne v lymfatických endoteliálnych buniek (LEK). VEGF-C je dominantný regulátor Lymfangiogeneze ako ranej a pokročilej rakoviny žalúdka [3, 4]. Zvýšená expresia VEGF-C mal významnú koreláciu s LVD, LVI a lymfatických uzlín [5], ale jej prognostická hodnota zostala sporná. VEGF-D bol zapojený do lymfatického šírenia nádorových buniek žalúdočnej a môže byť nezávislý prognostický marker [6]. VEGFR-3 bola tiež uvedená ako prognostický faktor [6]. Ďalšie rastový faktor, VEGF-A, ktoré regulovaný angiogenézu, bol tiež považovaný za stimulovať lymfangiogeneze väzbou na VEGFR-2 v poslednej dobe. Zvýšená VEGF-A úroveň expresie u pacientov s karcinómom žalúdka bolo preukázané, že súvisí s hustotou mikrociev (MVD), hematogénne metastázy, peritoneálnej disseminateion a zlou prognózou. Je však známe, či oba nitronádorových a peritumorálního lymphtics sú stimulované tromi VEGFs vylučované nádorovými bunkami, alebo či I-LVD a P-LVD prehrávanie značne odlišné biologické role v lymfatických uzlín a prognózou u rakoviny žalúdka.
Metódy
pacientov au nádorových vzoriek
nádorové vzorky boli získané od 123 pacientov s primárnou rakovinou žalúdka, ktorí prijali gastrektómii na chirurgické klinike, Tonga nemocnice Tonga University od januára 2000 do decembra 2003. Žiadny z nich dostali predoperačnej chemoterapie alebo rádioterapie. Súbor pacientov tvorilo z 80 mužov (65%) a 43 žien (35%). Priemerný vek v čase diagnózy bol 65 rokov (rozmedzie 28 až 87 rokov). Tridsaťjeden prípadov predčasného rakoviny žalúdka (EGC) a 92 prípadov pokročilej rakoviny žalúdka (AGC) boli zapojení. Histologické etapa bola založená na UICC TNM klasifikácie. Iné klinické vlastnosti sú zhrnuté v tabuľke 1. Všetci pacienti boli sledovaní klinicky po dobu najmenej 5 rokov po operácii. Priemerná doba sledovania bola 56 mesiacov (rozmedzie 6 až 85 mesiacov). Survival analýza bola vykonaná, vrátane celkového prežitia (OS), prežitie bez príznakov ochorenia (DFS) a rakoviny špecifické prežitie (CSS). OS, DFS a CSS bola vypočítaná odo dňa chirurgia posledného kontaktu pre život pacientov, k dátumu posledného sledovania u pacientov bez ochorenia, a ku dňu žalúdočné rakovina vyvolané smrťou, resp. Štyri prípady EGC a 52 prípadov bolo AGC došlo k recidíve. Jedenásť pacientov malo peritoneálnej šírenie, 26 pacientov pečeňové metastázy a 19 prípadov došlo k relapsu do brucha po operácii. Štyridsať pacienti zomreli na rakovinu žalúdka. Súčasná štúdia bola schválená etickou komisiou pre výskum Tongji nemocnice pridružený k Tonga University. Normálny žalúdočné tkaniva boli odobraté ako kontrolné vzorky. Všetky výsledky boli vykonané dvoma patológmi nezávisle, a prostriedky boli vypočítané pre každý jednotlivý prípad na základe údajov obtained.Table 1 korelácie s klinicko-LVD parametrov a VEGFs výrazy
Faktory
N
I-LVD
P-LVD


priemer ± SD
P
priemer ± SD
P
Tumor diferenciácie
0,802 0,739

Vysoko diferencované
11
8,18 ± 2,44
12,07 ± 4,49
Mederately /chudobné rozlíšené
112
8,00 ± 2,27
12,46 ± 3,60
veľkostí nádoru
< 0,001 Hotel < 0,001 Hotel < 3,2 cm
57
8,93 ± 2,34
11,18 ± 3,80
≥ 3,2 cm
66
7,23 ± 1,91
13,50 ± 3,21
Hĺbka invázie
0,433 0,026
pT1-2
69
8,16 ± 2,51
11,78 ± 3,52
pT3-4
54
7,83 ± 1,96
13,26 ± 3,71
lymfatických uzlín
0,056 * Hotel < 0,001
Negatívne
57
8,47 ± 2,27
10,50 ± 3,42
pozitívny
66
7,65 ± 2,24
13,98 ± 3,10
LVI
0,700 Hotel &0,001
Negatívne
83
8,08 ± 2,33
11,23 ± 3,29
Pozitívne
40
7,91 ± 2,22
14,36 ± 3,44
VI
0,905 Hotel < 0,001
Negatívne
86
8,00 ± 2.38
11,65 ± 3,81
pozitívny
37
8,05 ± 2,67
14,24 ± 2,53
TNM štádium
0,067 Hotel < 0,001
I - II
71
8,34 ± 2,42
11,33 ± 3,29
III - IV
52
7,58 ± 2,01
13,92 ± 3,66
VEGF-A prejavu
0,527
0,091
Low
44
7,84 ± 2,51
11,68 ± 3,54
vysoká
79
8,26 ± 2,21
12,84 ± 3,69
VEGF-C výraz
0,092 *
0,003
nízka
42
7,55 ± 2,37
11,06 ± 3,26
vysoká
81
8,00 ± 2,34
13,13 ± 3,69
expresie VEGF-D
0,514 0,005
Low
72
7,90 ± 2,47
11,65 ± 3,44
High
51
8,18 ± 1,99
13,53 ± 3,73
P
, t testovacie;
P *, Mann-Whitney U test
. Skratka: LVD: lymfatická hustota plavidlo; LVI: lymfatická invázie loď. VI :. Žilová invázie
Single imunohistochémia pre D2-40, VEGF-A, VEGF-C, VEGF-D a VEGFR-3 Apartmán V immunohistichemical farbenie, 4 um hrubé parafínu zaliate rezy boli rezané z každej štúdie blok. Rezy boli ošetrené 0,3% H 2O 2 po dobu 10 minút pri teplote miestnosti. Pre získanie antigénu, bola sklíčka zahrieva v mikrovlnnej rúre, obsahujúci 0,01 mmol citrát /L sodný (pH 6,0). Sklíčka sa vyliahli pri teplote 4 ° C cez noc vo vlhkej zásobníku primárnej protilátky, VEGF-A (myšia monoklonálna protilátka, 1: 100, DAKO), VEGF-C (kozie polyklonálne protilátka, 1: 100, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), VEGF-D (kozie polyklonálne protilátka, 1: 100, Santa Cruz), VEGFR-3 (kozie polyklonálne protilátka, 1: 100, Santa Cruz) a D2-40 (myšia monoklonálna protilátka, 1: 100, DAKO), resp. Sklíčka sa premyjú trikrát v 0,1 mmol /l PBS po dobu 2 minút, a inkubované počas 30 minút pri teplote miestnosti s kozie anti-králičie /myš chrenovou peroxidázou (Envision, DAKO, CA) na identifikáciu cieľ. Rezy boli vyvinuté s 3 '3-Diaminobenzidine. Normálny kozie IgG bol slúžil ako negatívna kontrola pre reakčnú farbením VEGF-C, VEGF-D a VEGFR-3, a bola slúžila ako negatívna kontrola pre reakčnú farbením VEGF-A a D2-40 normálneho IgG.
double imunohistochemické farbenie na D2-40 /CD34
dvojitým imunohistochemickým farbením na D2-40 /CD34 sa ďalej spracováva vyhodnotiť špecifickosť D2-40 prejavu v lymfatickom endotelu. Návrh bol podľa návodu výrobcu (č: 95-9999, Histostain-DS Kit, Zymed, CA). Parafínových 4 um rezy boli zbavené parafínu a rehydratované xylénom. Sklíčka sa ponoria do peroxidáze temperovacie roztoku po dobu 10 minút. Potom, čo sa inkubujú cez noc pri 4 ° C s primárnymi protilátkami proti CD34 (myšia monoklonálna protilátka, 1: 100, DAKO, Carpinteria, CA) boli rezy liečení séra blokovacím roztokom, a následne sú inkubované s biotinylizované sekundárnou protilátkou (DAKO ). Následne konjugát alkalickej fosfatázy bola použitá pre každý úsek po dobu 10 minút. A potom boli rezy ošetrené substrátu chromogénu a dvojitým farbením enhancer. Sérum blokovanie Roztok sa znovu použitá, bola sklíčka inkubovaná s inou primárnou protilátkou proti D2-40 (myšia monoklonálna protilátka, 1: 200, GM36190, Gene Tech Company Limited, Shanghai, Čína), po dobu 60 minút a biotinylizované druhú anti-imunoglobulínu (Ig) (Dako) sa spracuje. Po nanesení sa konjugát enzýmu po dobu 10 minút, bola sklíčka inkubovaná so zmesou substrátu chromogénový pufra, roztok a 0,6% peroxidu vodíka na HRP a sledovať pod mikroskopom. Voda z vodovodu s obsahom 0,05% Tween-20 ukončila reakcia. Pre negatívne kontroly, boli rezy zafarbené non-imunitným sérom namiesto rovnakej koncentrácie primárnej protilátky. CD34 pozitívne krvné cievy ukázali intenzívnu červenú škvrnu a D2-40 pozitívne lymfatické cievy ukázal tmavo fialovej škvrny.
Dvojité farbenie pre D2-40 /Ki-67
pre detekciu proliferačnej aktivity lymfatických ciev , bola vykonaná metóda dvojitého imunobarvení pre D2-40 /Ki-67. Protilátka D2-40 bola použitá na farbenie lymfatické cievy endotel, spolu s Ki-67 (králičie monoklonálna protilátka, 1: 200, Santa Cruz, USA), aby sa škvrny proliferatívnych buniek. Ki-67 farbenie (červená), bol vyvinutý s alkalickou fosfatázou sekundárnou protilátkou konjugovanou a D2-40 farbenie (hnedá) bol vyvinutý s peroxidáze konjugovanou sekundárnou protilátkou. Proliferačnej lymfatické cievy boli potvrdené Ki-67 pozitívne zafarbených jadier, ktoré tiež mali súbežne pozitívne cytoplazme farbenie v D2-40 pozitívnych buniek. Miera dvojito značené plavidiel bola stanovená spočítaním jadier D2-40-pozitívne plavidiel s nádorom spojených (100 jadier v každom nádore) [7].
Stanovenie LVD
intratumorová LVD (hot spots boli umiestnené na nádor uprostred) a peritumorálního LVD (hot spots boli umiestnené na obvode tkaniva do 2 mm nádoru priliehajúce k invazívnej vpredu) boli hodnotené oddelene [2, 7-9]. Kvantitatívna analýza lymfatické cievy hustoty bola vykonaná v úsekoch, ktoré boli single-zafarbené na D2-40. Päť oblastí s väčšina lymfatických ciev regiónov ( "hot spots"), boli vybraní na x 40 zväčšenie svetelným mikroskopom. LVD bola hodnotená spočítajú všetky postriekané plavidiel na x 200 zväčšenie. Priemerný počet lymfatik hodnotených bola stanovená LVD. Bola zistená lymfatická loď invázie (LVI) byť prítomný, ak aspoň jeden zhluk nádorových buniek bola v D2-40 pozitívna nádoby [10]. Bodovania a počítanie boli vykonané nezávisle na sebe dvaja vyšetrovatelia, ktorí nemali klinické informácie o pacientoch. Stredné hodnoty P-LVD a I-LVD boli vypočítané pre každý prípad.
Stanovenie VEGFs a VEGFR-3 výrazy
pozitívne farbenie VEGF-A, C a D expresie bola definovaná ako predchádzajúce štúdie [6 , 11]. Farbenie výsledky pre vyššie uvedené tri VEGFs boli hodnotené semikvantitatívne Imunohistochemické skóre v kombinácii s percentom nádorových buniek vykazujúcich špecifickú imunoreaktivitu. Farbenie intenzita bola daná s štyroch stupňoch: none (0), slabý (1), stredné (2) a silné (3). Percento pozitívnych buniek karcinómu boli uvedené v stupňoch: 0 (0%), 1 (1% ~ 10%), 2 (11% ~ 49%), 3 (50% ~ 100%), v danom poradí. Celkové skóre bolo vypočítané vynásobením intenzity farbenia a percento pozitívnych nádorových buniek. Medián skóre bola vybraná ako limitná, podľa ktorého nádory boli rozdelené do nízko (0 ~ 3) a s vysokou expresiou (4 ~ 6) nádorov [6, 11]. VEGFR-3-pozitívna nádoby boli stanovené, ako je opísané skôr [12]. Plavidlá troch hot spots oblastiach boli počítané na x 400 zväčšenie. Farbenie bol považovaný za pozitívny, ak viac ako 5% z endotelu vykazoval farbenie [6]. Peritumorálního VEGFR-3-pozitívna nádoby (P-VEGFR-3) a intratumorální VEGFR-3-pozitívna nádoby (I-VEGFR-3) bola hodnotená ako je uvedené vyššie pre nízke napätie.
Štatistická analýza
Štatistická analýza bola vykonaná s použitím štatistiky balíček pre softvér Social Science (verzia 11.5; SPSS Inc., Chicago, IL). Vzorky boli rozdelené do dvoch kategórií podľa priemerných hodnôt z I-LVD a P-LVD, v danom poradí. Tieto korelácie I-LVD a P-LVD s patologickým parametrami a VEGFs výrazy boli analyzované pomocou nezávislých vzoriek T
testu alebo Mann-Whitney U
testu. Tieto korelácie VEGFR-3 prejavu s klinickými parametre boli analyzované pomocou Pearson Chi-kvadrát testy. Tieto faktory spojené asi lymfatických uzlín u karcinómu žalúdka boli vykonané pomocou multivariantné logistickej regresnej analýzy. Krivky prežitia boli získané za použitia metódy Kalplan-Meier a porovnané pomocou log-rank testu. Analýza s mnohými premennými prežitia bola hodnotená pomocou pomernú metódou nebezpečenstvo Coxa. Všetky štatistická analýza bola dve strany s významom definovaná ako P Hotel < 0,05.
Výsledky
intratumorová a peritumorálního lymfatických charakteristík v rakovinou žalúdka
D2-40-pozitívnych lymfatických ciev mal nepravidelnú morfológiu a tenkostenných lumen. Lymfatické cievy v žalúdočnej tkanive boli predovšetkým vo vrstve submukóze (obrázok 1). Lymfatických ciev (D2-40-poloha) a krvné cievy (CD34-bodový) boli jasne odlíšené od ďalšieho dvojitým farbením (obrázok 2). Intratumorová lymfatické cievy zvyčajne sa zrútil, malý a nepravidelný (obrázok 3), ale niektoré noncollapsed lymfatické ukázal otvorené lumen, a občas obsahovala napádať nádorové bunky zhluky (obrázok 4). V peritumorálního lymfatické cievy v povrchné a hlboké časti submukóze boli všetci zväčšený s lymfatických dutinami rozšírených (obrázok 5, obrázok 6). Lymfatické invázia nádoba bola pozorovaná v 38 prípadoch. Žiadna významná korelácia bola zistená medzi číslami LVD nádorové centre a v kontrolných tkanivách (8,02 ± 2,28 vs 8.13 ± 1,04, P Hotel > 0,05). Avšak, množstvo P-LVD (12,15 ± 3,75) boli významne vyššie než u kontrolných tkanív a nádorov centrum (P
menšie ako 0,05). Žiadne štatisticky významné rozdiely boli zistené medzi týmito dvoma spôsobmi detekcie lymfatických ciev (Single farbenie na D2-40 a dvojitým farbením na D2-40 /CD34) (I-LVD, 8,02 ± 2,28 vs 7,80 ± 2,33; P-LVD, 12,15 ± 3,75 vs. 12,42 ± 3,67, P Hotel &0,05). Obrázok 1 D2-40-pozitívne lymphantics umiestnené prevažne na vrstve submukóze v žalúdočnej tkanive (šípky). IHC, zväčšenie :. × 200
Obrázok 2 dvojité imunohistochemické farbenie pre D2-40 a CD34 jasne odlíšiť lymfatických ciev (čierna šípka) z krvných ciev (červená šípka). . IHC, zväčšenie: x 400
Obrázok 3 intratumorová lymfatické cievy u karcinómu žalúdka boli zrútil (šípka); Double imunohistochemické farbenie, zväčšenie :. × 200
Obrázok boli prítomné v lymfatickej invázie ciev (LVI) 4 rakovinové bunky klastra napádajúci. Double imunohistochemické farbenie na D2-40 /CD34, zväčšenie :. × 400
Obrázok 5 peritumorálního lymfatické cievy u karcinómu žalúdka boli zväčšené s rozšírených lumen umiestnenými na povrchné submukóze. IHC, zväčšenie :. × 200
Obrázok The peritumorálního lymfatické cievy v karcinómu žalúdka boli zväčšené s rozšírených lumen nachádzajúcich sa v hlbokej časti submukóze 6. IHC, zväčšenie :. × 200
Korelácia I-LVD a P-LVD s patologickým parametrami a VEGFs výrazov
korelácií I-LVD a P-LVD s patologickým parametre boli uvedené v tabuľke 1. Zvýšený I- LVD boli významne spojené s menšou veľkosťou nádoru (P Hotel &0,001). Žiadna korelácia bola zistená medzi I-LVD a VEGFs výrazy, zatiaľ čo P-LVD významne koreluje s väčšou veľkosťou nádoru (P Hotel &0,001), hĺbka invázie (P
= 0,026), lymfatických uzlín (P Hotel &0,001), LVI (P Hotel &0,001), žilovej invázie (VI), (P Hotel &0,001), TNM fázy (P Hotel &0,001), VEGF-C ( P
= 0,003) a expresie VEGF-D (P
= 0,005).
expresie troch VEGFs vykázali pozitívne cytoplasmatického farbenie vo buniek karcinómu žalúdka. Vysoká úroveň expresie VEGF-A (obrázok 7), VEGF-C (obrázok 8), a VEGF-D (Obrázok 9), boli pozorované u 64,2% (79/123), 65,9% (81/123) a 41,5% (51 /123) vzoriek, v danom poradí. Ani ja-LVD ani P-LVD bol nájdený významne spojené s VEGF-A výrazu (P Hotel &0,05). Obrázok 7 VEGF-A expresiu v cytoplazme v karcinómu žalúdka. IHC, zväčšenie :. × 400
Obrázok 8 výraz VEGF-C v cytoplazme v rakoviny žalúdka. IHC, zväčšenie :. × 400
Obrázok 9 expresiu VEGF-D v cytoplazme v rakoviny žalúdka. IHC, zväčšenie :. X 200
proliferatívnej aktivity v intra- a lymfatických ciev peritumorálního
proliferačnej lymfatické cievy boli nájdené v nádore obvode (obrázok 10). Miera Ki-67 pozitívnych lymfatických ciev jadier v nádorovej periférii bol (0,81 ± 0,13)%. Žiadny proliferačnej lymfatická nádoba bola nájdená v nádorovej centre (Obrázok 11). Lymfatické invázie bolo možné pozorovať v peritumorálního tkanivách (obrázok 12). Obrázok 10 Ki-67-pozitívne lymfatické jadra nádob (šípky) boli zistené v nádorovom obvode. Double farbenie na D2-40 /Ki-67, zväčšenie :. × 400
Obrázok 11 nie Ki-67 pozitívna expresia v lymfatických ciev nitronádorových jadier. Double farbenie na D2-40 /Ki-67, zväčšenie :. × 400
Obrázok 12 lymfatických ciev invázii bola zistená v peritumorálního tkanive (šípky). Double farbenie na D2-40 /Ki-67, zväčšenie :. × 400
VEGFR-3 expresie v lymfatických ciev
VEGFR-3-pozitívna expresiu v nádorovej periférii (P-VEGFR-3) bol nájdený v 55 z 123 prípadov, niekedy s rakovinou zhlukov buniek napadajúce (obrázok 13). Avšak iba 34 z 123 prípadov mal VEGFR-3-pozitívnej expresie v nádorovej centra (I-VEGFR-3) (obrázok 14). Tieto lode boli väčšinou tenkostenné, nepravidelný tvar a obsahovala žiadne alebo len málo červených krviniek. Obrázok 13 VEGFR-3-pozitívnej expresie v endotelových bunkách cytoplazme v nádorovej obvode (P-VEGFR-3), niekedy s rakovinou bunkovej zhluky napadajúce (šípky). IHC, zväčšenie :. X 400
Obrázok 14 VEGFR-3-pozitívnych výrazov sa nachádza v centre nádoru (šípky). . IHC, zväčšenie: x 200
v periférnych nádorových tkanivách, VEGFR-3 výrazy boli významne korelované skôr s VEGF-C vysokú expresiu (P Hotel < 0,000), VEGF-D vysoká expresia (P =
0,043), zvýšená P-LVD (P Hotel &0,001) a prítomnosť LVI (P
= 0,003), ako s VEGF-a výraz, zvýšené i-LVD, žilovej invázie a metastáz lymfatických uzlín (P Hotel &0,05). neboli pozorované žiadne korelácia medzi I-VEGFR-3 prejavu a klinických parametrov (P Hotel &0,05). (Tabuľka 2) Tabuľka 2 Korelácia VEGFR-3 prejave na differenr nádoru lokalite s klinickými parametrami
Faktory
N

I-VEGFR-3
P-VEGFR-3


N (%)
P

N (%)
P
VEGF-A výraz
0,107 0,067
Low
44
16 (36,36)
15 (34,09)
High
79
18 (22,78)
40 (50.63)
expresiu VEGF-C
0,795 Hotel < 0.001
Low
42
11 (26,19)
9 (21,43)
High
81
23 (28,40)
46 (56,79)
VEGF- D výraz
0,968 0,043
Low
72
20 (27.78)
27 (37,50)
High
51
14 (27,45)
28 (54,90)
P-LVD
0,813 Hotel < 0,001 Hotel < 14
60
16 (26,67)
10 (16,67)
≥ 14
63
18 (28,57)
45 (71.43)
I-LVD
0,412 0,153
Hotel < 8
58
14 (24,14)
22 (37,93)
≥ 8
65
20 (30,77)
33 (50.77)
metastáz do lymfatických uzlín
0,934 0,190
Negatívne
55
19 (34,55)
21 (38,18)
Pozitívne
68
15 (22,06)
34 (50.00)
LVI
0,681 0,003

Negatívne
76
22 (28,95)
26 (34,21)
Pozitívne
47
12 (25,53)
29 (61.70)
VI
0,387
0,448
Negatívne
87
26 (29.89)
37 (42,53)
Pozitívne
36
8 (22,22)
18 (50,00)
Skratka: LVD: lymfatická hustota plavidlo; LVI: lymfatická invázie plavidla; VI: žilovej invázie; I-VEGFR-3: VEGFR-3 pozitívna expresia v nádorovom stredu; P-VEGFR-3: VEGFR-3 pozitívna expresia v nádore obvode
Prediktívny hodnota LVD lymfatických uzlín
V dôsledku viacnásobnej logistickej regresnej analýzy v tabuľke 3, VEGF-C expresie a P-LVD. boli významne asscoiated s lymfatických uzlín (P
= 0,024, p = 0,045
, v tomto poradí). I-LVD VEGF-A, VEGF-D a P-VEGFR-3 výraz nepreukázalo prediktívnu hodnotu pre lymfatických uzlín u karcinómu žalúdka. (Tabuľka 3) Tabuľka 3 Viacrozmerná logistická regresná analýza pre lymfatických uzlín
Faktory
pomer šancí
95% CI

P
P-LVD
3,548
1,030 -12,226
0,045
I-LVD
1,300
0,964 až 1,754 0,085

VEGF-A
0,510
0,138-1,884
0,313
VEGF-C
4.069
1.198 - 13,820 0,024
VEGF-D
3.162
, 834-11,992
0,091
P-VEGFR-3
2,919
0,747-11,403
0,123
Skratka: LVD: lymfatická hustota plavidlo; P-VEGFR-3 :. VEGFR-3 pozitívna expresia v nádore obvode
prognostický význam I-LVD a P-LVD
Na jednorozmerné analýze prežitia, P-LVD bola spojená so zlou celkového prežitia (obrázok 15, P Hotel &0,001), prežitie bez ochorenia (Obrázok 16, P Hotel &0,001) a prežitie karcinóm špecifických (Obrázok 17, P Hotel &0,001). Avšak, I-LVD korelovala s nevýznamne trendom všetkých vyššie uvedenom poradí (celkové prežitie v, P = 0.5835
, Obrázok 18, prežívanie bez ochorenia, P = 0.2844
, Obrázok 19, prežitie rakoviny špecifických P
= 0,6246, obrázok 20). Obrázok 15 Vzťah medzi P-LVD s celkovým prežitím (P < 0,001).
Obrázok 16 Vzťah medzi P-LVD s prežitie bez choroby (P 0,001).
Obrázok 17 Vzťah medzi P-LVD s karcinóm špecifické prežitie (P < 0,001) ..
Obrázok 18 Vzťah medzi I-LVD sa celkového prežitia (p = 0,5825)
Obrázok 19 Vzťah medzi I-LVD s prežitím bez známok ochorenia (p = 0,2844) .
Obrázok 20 Vzťah medzi I-LVD s prežitím rakoviny špecifické (p = 0,6246).
Viacrozmerná regresná analýza indicateded, že P-LVD by mohlo byť nezávislý prognostický faktor pre celkové prežívanie (p = 0,045
) a prežívanie bez známok ochorenia (P
= 0,031), a to napriek prežitie rakoviny špecifické. Okrem toho, prítomnosť LVI a TNM fáze by mohla slúžiť ako nezávislé prediktory pre všetky tri, ktoré prežili (LVI, P
= 0,040, 0,043, 0,039, TNM fáza, P
= 0,048, 0,001, 0,001, tabuľka 4) , VEGF-A výraz bol nezávislý prognostický prediktor iba pre celkové prežívanie (P
= 0,033). Neboli zistené štatisticky významné korelácie pre I-LVD, VEGF-C, VEGF-D a P-VEGFR-3, s ktorýmkoľvek zo ktoré prežili. (Tabuľka 4) Tabuľka 4 Cox regresnej analýzy nezávislých faktorov, ktoré ovplyvňujú prežívanie bez známok ochorenia, prežitie rakoviny špecifické a celkové prežitie
Factors
Rakovina špecifické prežitie
prežívanie bez príznakov ochorenia
Celkové prežitie

OR (95% CI)

P
OR (95% CI)
P
OR (95% CI)
P

P-LVD
2.099 (0.91-4.87)
0,084
2.418 (1.08-5.40)
0,031
2.895 (1.02-8.19)
0,045
I-LVD
1,205 (0,56-2,63)
0,639 1,325
(0.62-2.85)
0,472
1.959 (0.90-4.24)
0.088
VEGF-A
1.386(0.50-3.83)
0.528
1.364(0.67-2.78)
0.391
2.437(1.10-5.45)
0.030
VEGF-C
2.423(0.89-6.63)
0.085
1.630(0.77-3.47)
0.205
1.562 (0,79 - 3,34)
0,182
VEGF-D
0,511 (0.19-1.36)
0,178
1.916 (0.90-4.10)
0,094
1.621 (0.81-3.98)
0,190
LVI
2.716 (1.05-7.04)
0,040
2.477 (1.03-5.97)
0,043
2.578 (1.05-6.34)
0,039
LNM
2,115 (0,68-6,60)
0,197
2.428 (1.18-5.02)
0,017
3.426 (1.66-7.06)
0.001
VI
2.943(0.89-9.77)
0.078
1.697(0.75-3.87)
0.208
1.477(0.63-3.48)
0.373
P-VEGFR-3
1. 499 (0,98 - 2,31)
0,067
1.099 (0.53-2.28)
0.800
1.402 (0.68-2.90)
0,361
TNM štádia
1.523 (1.00-2.31)
0,048 1,674
(25.1.-25.02.)
0,001 1,656
(1.23-2.23)
0,001
Skratka: P-LVD: peritumorálního hustotu lymfatické cievy; I-LVD: intratumorová lymfatická hustota plavidla; LVI: lymfatická invázie plavidla; LNM: lymfatických uzlín; VI: žilovej invázie; P-VEGFR-3 :. VEGFR-3 pozitívneho expresie na nádorové obvode
Diskusia
V poslednej dobe sa D2-40 protilátka, nový marker pre lymfatického endotelu, bol identifikovaný ako špecifické protilátky proti ľudskému podoplanin [13] , Mnoho štúdií uvedený imunologické z D2-40 je špecifický pre vyhodnotenie lymfatické invázie a lymfatického hustotou mikrociev v ľudských nádorových ochorení, vrátane rakoviny žalúdka [14-17]. V tejto štúdii, LVD a lymfatické invázie nádoba boli identifikované farbením D2-40, a potvrdené dvojitým farbením na D2-40 a CD34, čo jasne diskriminované lymfatických ciev z krvných ciev ďalej.

• P27Kip1, regulované kináza glykogénsyntázu-3p, vedie k diferenciácii HMBA indukovanej ľudských buniek karcinómu žalúdka
• Retrospektívnej kohortnej štúdie u pacientov s žalúdka a pečene rakoviny: dopad komorbidity a etnicity na onkologickej starostlivosti a výsledky