Diverso significatività tra intratumorale e peritumorale densità dei vasi linfatici nel cancro gastrico: uno studio retrospettivo di 123 cases

diversa significatività tra la densità dei vasi linfatici intratumorale e peritumorale in cancro gastrico: uno studio retrospettivo di 123 casi
Abstract
sfondo
pazienti con cancro gastrico in Cina hanno peggiori esiti e più poveri prognosi. linfoangiogenesi neoplastica gioca un ruolo cruciale nella progressione e metastatizzazione del tumore. I vasi linfatici intratumorale e peritumorali avrebbero dovuto avere diversi effetti biologici. Tre fattori di crescita importanti, vascolare endoteliale -A crescita factor (VEGF), VEGF-C e VEGF-D, sono coinvolte nel processo di attivazione tramite i loro recettori (VEGFRs). Lo scopo del presente studio è quello di indagare la significativa differenza tra la densità intratumorale e peritumorale linfatico nave (LVD) nel carcinoma gastrico e le loro correlazioni con fattori di crescita lymphangiogenetic
. Metodi
intratumorale LVD (I-LVD) e LVD peritumorale ( P-LVD) di 123 pazienti con cancro gastrico primaria sono stati valutati dopo colorazione con D2-40, e confermato da doppia colorazione con D2-40 /CD34. attività proliferativa dei vasi linfatici endotelio è stata valutata mediante doppia colorazione con D2-40 /Ki-67. Le associazioni sono state analizzate tra I-LVD /P-LVD e il livello di espressione di VEGF-A, VEGF-C, VEGF-D e il recettore VEGFR-3, che è stata misurata mediante immunoistochimica (IHC). Le correlazioni di I-LVD e P-LVD con la prognosi del paziente sono stati valutati.
Risultati
(1) I linfatici peritumorali (PTL) erano relativamente allargata con lume dilatati rispetto ai vasi linfatici intratumorale (ITLS). Aumento della P-LVD era significativamente più alta di me-LVD (P
< 0,05). (2) P-LVD è stato trovato significativamente associato con metastasi linfonodali (LNM) (P
< 0,001), invasione vascolare linfatica (LVI) (P
< 0,001), VEGF-C (P
= 0.003), VEGF-D livello di espressione (P
= 0.005) e VEGFR-3 livelli di espressione (P
< 0,001) nei tessuti peritumorali, nonostante nessuna associazione significativa è stata trovata tra sopra varianti con I-LVD . Tuttavia, l'aumento I-LVD è stato dimostrato di essere associati con una diminuzione del volume del tumore (P
< 0,001). Né io né-LVD P-LVD è stata correlata con VEGF-A espressione (P
> 0,05). (3) L'attività proliferativa dei linfatici endotelio è stata osservata in PTL, nonostante ITLS. (4) Aumento della P-LVD, ma non ho-LVD, è stato indicato per essere un fattore di rischio indipendente per metastasi linfonodali da analisi di regressione logistica multivariata, ed era legato a peggiorare la sopravvivenza libera da malattia e la sopravvivenza globale.
Conclusioni
PTL giocano un ruolo nella progressione del cancro gastrico. Aumento della P-LVD, ma non ho-LVD, era significativamente associato con VEGF-C /Sistema -D /VEGFR-3, e potrebbe essere un fattore di rischio indipendente per la metastasi linfonodali e un fattore prognostico nel carcinoma gastrico. Sfondo
cancro gastrico
è la principale causa di morte per cancro in Cina. Circa l'80% ~ 90% dei pazienti sono diagnosticati in fase avanzata con esito sfavorevole, comunemente con diffusione linfatica e metastasi a distanza. Nel corso degli ultimi anni, linfoangiogenesi neoplastica guidata da fattori di crescita lymphangiogenic è stata affermata come un nuovo meccanismo per la progressione del cancro. Al giorno d'oggi, un numero crescente di esperti ritengono che i vasi linfatici intratumorale (ITLS, i lymphtics all'interno dei tumori) e linfatici peritumorali (PTL, lymphtics alla periferia) svolgono ruoli biologici esattamente distinti sul comportamento del tumore e la prognosi in diversi tipi di tumori. Nel cancro gastrico, diversi studi hanno indicato che i pazienti con più alta I-LVD avuto la più alta presenza di metastasi linfonodali in fase precoce [1], mentre la P-LVD potrebbe essere un fattore di rischio indipendente per la metastasi linfonodali e la prognosi [2]. Tuttavia, la funzione di I-LVD e P-LVD e le loro correlazioni con l'espressione VEGF non sono stati ancora chiariti.
Una serie di studi hanno dimostrato il ruolo cruciale di VEGF espressioni sulla progressione del tumore e la prognosi nel cancro gastrico. VEGF-C e VEGF-D, due membri della famiglia VEGF, sono stati definiti come i fattori di crescita lymphangiogenic e giocare un ruolo importante nel linfoangiogenesi tumorale attraverso l'attivazione di VEGFR-3, che si esprime soprattutto nelle cellule endoteliali linfatiche (LECs). VEGF-C è un regolatore dominante di linfoangiogenesi sia precoce e cancro gastrico avanzato [3, 4]. L'aumento dell'espressione di VEGF-C ha avuto una correlazione significativa con LVD, LVI e linfonodo [5] metastasi, ma il suo valore prognostico è rimasto controverso. VEGF-D è stato coinvolto in linfatica diffusione delle cellule di cancro gastrico e potrebbe essere un marcatore prognostico indipendente [6]. VEGFR-3 è stato anche indicato come un fattore prognostico [6]. Un altro fattore di crescita, VEGF-A, che regolava l'angiogenesi, è stato considerato per stimolare linfangiogenesi legandosi a VEGFR-2 di recente. Maggiore-A livello di espressione di VEGF dei pazienti affetti da cancro gastrico era stato dimostrato essere correlato con densità dei microvasi (MVD), metastasi ematogena, disseminateion peritoneale e prognosi infausta. Tuttavia, rimane noto se entrambi i lymphtics intratumorale e peritumorali sono stimolati da tre VEGF secreti dalle cellule tumorali, o se il gioco I-LVD e P-LVD significativamente diversi ruoli biologici di metastasi linfonodali e la prognosi nel cancro gastrico.
Metodi
pazienti e tumorali esemplari
campioni tumorali sono stati ottenuti da 123 pazienti con cancro gastrico primaria che hanno accettato gastrectomia presso il Dipartimento di Chirurgia, Tongji Hospital di Tongji University dal gennaio 2000 al dicembre 2003. Nessuno di loro aveva ricevuto pre-operativi chemioterapia o radioterapia. La popolazione dello studio era costituito da 80 uomini (65%) e 43 donne (35%). L'età media al momento della diagnosi era di 65 anni (a distanza da 28 a 87 anni). Trentuno casi di cancro gastrico precoce (EGC) e 92 casi di cancro gastrico avanzato (AGC) sono stati coinvolti in. Fase istologica si è basata su UICC TNM classificazione. Altre caratteristiche cliniche sono state riassunte nella Tabella 1. Tutti i pazienti sono stati seguiti clinicamente per almeno 5 anni dopo l'intervento chirurgico. Il tempo medio di follow-up è stata di 56 mesi (a distanza da 6 a 85 mesi). L'analisi di sopravvivenza è stata effettuata, compresa la sopravvivenza globale (OS), la sopravvivenza libera da malattia (DFS) e la sopravvivenza cancro-specifica (CSS). OS, DFS e CSS è stato calcolato a partire dalla data di intervento chirurgico per ultimo contatto per i pazienti che vivono, alla data dell'ultimo follow-up per i pazienti liberi da malattia, e la data della morte gastrico-cancro indotto, rispettivamente. Quattro casi EGC e 52 casi sono stati verificati AGC recidiva. Undici pazienti avevano diffusione peritoneale, 26 pazienti metastasi epatiche, e 19 casi recidiva nello stomaco dopo l'operazione. Quaranta pazienti sono morti di cancro gastrico. L'attuale studio è stato approvato dal Comitato Etico di ricerca della Tongji Hospital affiliato con la Tongji University. I tessuti gastrici normali sono stati raccolti come campioni di controllo. Tutti i risultati sono stati raggiunti da due patologi indipendentemente, ed i mezzi sono stati calcolati per ogni singolo caso in base ai dati obtained.Table 1 Correlazioni di LVD con i parametri clinico-patologici e VEGF espressioni
Fattori
N
I-LVD
P-LVD


media ± SD
P
media ± SD
P
differenziazione del tumore
0,802 0,739

alta differenziata
11
8.18 ± 2.44
12.07 ± 4.49
Mederately /poveri differenziato
112
8.00 ± 2.27
12,46 ± 3,60
Tumore dimensioni
< 0,001
< 0,001
< 3.2 cm
57
8.93 ± 2.34
11,18 ± 3,80
≥ 3,2 centimetri
66
7.23 ± 1.91
13,50 ± 3,21
profondità dell'invasione
0,433 0,026

pT1-2
69
8.16 ± 2.51
11,78 ± 3,52
pT3-4
54
7.83 ± 1.96
13.26 ± 3.71
metastasi linfonodali
0,056 *
< 0,001
negativo
57
8.47 ± 2.27
10.50 ± 3.42
positivo
66
7.65 ± 2.24
13.98 ± 3.10
LVI
0.700
< 0,001
negativo
83
8.08 ± 2.33
11.23 ± 3.29
positivo
40
7.91 ± 2.22
14,36 ± 3,44
VI
0,905
< 0,001
negativo
86
8.00 ± 2.38
11.65 ± 3.81
positivo
stadio 37
8.05 ± 2.67
14.24 ± 2.53
TNM
0,067
< 0,001
I - II
71
8.34 ± 2.42
11.33 ± 3.29
III - IV
52
7.58 ± 2.01
13,92 ± 3,66
VEGF-A espressione
0,527
0,091
basso
44
7.84 ± 2.51
11.68 ± 3.54
alta
79
8.26 ± 2.21
12,84 ± 3,69
espressione di VEGF-C
0,092 * 0,003

basso
42
7.55 ± 2.37
11.06 ± 3.26
alta
81
8.00 ± 2.34
13.13 ± 3.69
espressione di VEGF-D
0.514
0.005
basso
72
7.90 ± 2.47
11.65 ± 3.44
alta
51
8.18 ± 1.99
13.53 ± 3.73
P
, test t; P
*, Mann-Whitney U
test. Abbreviazione: LVD: densità dei vasi linfatici; LVI: linfatica invasione vascolare. VI:. Invasione venosa
immunoistochimica unico per D2-40, VEGF-A, VEGF-C, VEGF-D e VEGFR-3
Per la colorazione immunohistichemical, 4 micron di spessore scivoli inclusi in paraffina sono stati tagliati da ogni studio bloccare. Le sezioni sono state trattate con 0,3% H 2O 2 per 10 min a temperatura ambiente. Per il recupero dell'antigene, i vetrini sono stati riscaldati in un forno a microonde, contenente 0,01 mmol citrato /L di sodio (pH 6,0). I vetrini sono stati incubati a 4 ° C durante la notte in un vassoio di umidità con anticorpi primari, VEGF-A (anticorpo monoclonale mouse, 1: 100, DAKO), VEGF-C (anticorpi policlonali di capra, 1: 100, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), VEGF-D (anticorpo policlonale di capra, 1: 100, Santa Cruz), VEGFR-3 (capra anticorpo policlonale, 1: 100, Santa Cruz) e D2-40 (il mouse anticorpo monoclonale, 1: 100, DAKO), rispettivamente. I vetrini sono stati risciacquati tre volte in 0,1 mmol /L PBS per 2 min, ed incubate per 30 min a temperatura ambiente con anticorpi di capra anti-coniglio /mouse perossidasi di rafano (Envision, DAKO, CA) per identificare la porta. Le sezioni sono state sviluppate con 3 '3-diaminobenzidina. Il normale IgG di capra è stato servito come controllo reazione negativa per la colorazione di VEGF-C, VEGF-D e VEGFR-3, e la normale IgG di coniglio è stato servito come controllo di reazione negativa per la colorazione di VEGF-A e D2-40.
doppia colorazione immunoistochimica per D2-40 /CD34
la colorazione immunoistochimica doppia D2-40 /CD34 è stato ulteriormente elaborato per valutare la specificità di espressione D2-40 in endotelio linfatico. La proposta è stata secondo le istruzioni del produttore (No: 95-9999, Histostain-DS Kit, Zymed, CA). Paraffina 4 sezioni micron sono stati deparaffinate con xilene e reidratata. I vetrini sono stati immersi in soluzione tempra perossidasi per 10 minuti. Dopo essere incubate overnight a 4 ° C con gli anticorpi primari contro CD34 (topo anticorpo monoclonale, 1: 100, DAKO, Carpinteria, CA), le sezioni sono state trattate con siero soluzione bloccante, seguita da essere incubate con l'anticorpo secondario biotinilato (DAKO ). Successivamente, il coniugato di fosfatasi alcalina è stato usato per ciascuna sezione per 10 min. E poi, le sezioni sono state trattate con la miscela substrato cromogeno e doppio enhancer colorazione. Il siero soluzione bloccante è stata applicata ancora una volta, le diapositive sono state incubate con un altro anticorpo primario contro D2-40 (topo anticorpo monoclonale, 1: 200, GM36190, Gene Tech Company Limited, Shanghai, Cina) per 60 minuti ed il secondo biotinilato anti-immunoglobulina (Ig) (DAKO) è stato trattato. Dopo l'applicazione con enzima coniugato per 10 min, i vetrini sono stati incubati con la miscela di tampone substrato cromogeno e perossido di idrogeno 0,6% per HRP e monitorati al microscopio. L'acqua del rubinetto contenente lo 0,05% di Tween-20 termina la reazione. Per controlli negativi, le sezioni sono state colorate con un siero non immune anziché la stessa concentrazione di anticorpo primario. I vasi sanguigni positive CD34 ha dimostrato l'intensa macchia rossa, ei D2-40 vasi linfatici positivi hanno mostrato la macchia viola scuro.
Doppia colorazione per D2-40 /Ki-67
Per rilevare l'attività proliferativa dei vasi linfatici , è stato eseguito il metodo della doppia immunocolorazione per D2-40 /Ki-67. L'anticorpo D2-40 è stato utilizzato per macchiare vasi linfatici endotelio, insieme con Ki-67 (anticorpi di coniglio monoclonale, 1: 200, Santa Cruz, USA) per colorare le cellule proliferative. Ki-67 colorazione (rosso) è stato sviluppato con anticorpo secondario coniugato con fosfatasi alcalina, e quindi D2-40 colorazione (marrone) è stato sviluppato con anticorpo secondario coniugato con perossidasi. vasi linfatici proliferativi sono stati confermati da Ki-67 nuclei positivamente colorate che avevano anche concomitante colorazione citoplasmatica positivo in D2-40 cellule positive. Il tasso di navi a doppio marcato è stato determinato contando i nuclei di vasi D2-40-positivi associati al tumore (100 nuclei in ogni tumore) [7].
Assesment di LVD
intratumorale LVD (hot spot si trovavano al tumore centro) e LVD peritumorale (hot spot erano situati in tessuto periferia entro 2 mm di tumore adiacente al fronte invasivo) sono stati valutati separatamente [2, 7-9]. L'analisi quantitativa della densità dei vasi linfatici è stata eseguita in sezioni che erano single-macchiato per D2-40. Cinque aree con la maggior parte delle regioni linfatici ( "hot spot") sono stati scelti a × 40 ingrandimenti al microscopio ottico. LVD è stata valutata contando tutte le navi macchiate a × 200 ingrandimenti. Il numero medio di vasi linfatici valutati è stato determinato come LVD. invasione vascolare linfatico (LVI) è stato rilevato di essere presente, se almeno un cluster di cellule tumorali era in D2-40 vasi positivi [10]. Punteggi e contando sono stati eseguiti in modo indipendente da due ricercatori che non avevano informazioni cliniche dei pazienti. Il valore medio di P-LVD e I-LVD sono stati calcolati per ogni singolo caso.
Assesment di VEGF e VEGFR-3 espressioni
colorazione positiva di VEGF-A, -C -D e l'espressione è stata definita come studi precedenti [6 , 11]. risultati della colorazione per i suddetti tre VEGF sono stati semiquantitativamente valutati da un punteggio immunoistochimica combinato con la percentuale di cellule tumorali mostrano immunoreattività specifica. intensità di colorazione è stato dato con quattro gradi: nessuno (0), debole (1), moderata (2) e forte (3). La percentuale di cellule di carcinoma positivi è stato somministrato con i gradi: 0 (0%), 1 (1% ~ 10%), 2 (11% ~ 49%), 3 (50% ~ 100%), rispettivamente. Il punteggio totale è stato calcolato moltiplicando l'intensità di colorazione e la percentuale di cellule tumorali positive. La mediana del punteggio è stato selezionato come il livello di cut-off in base al quale i tumori sono stati classificati in basso (0 ~ 3) e ad alta espressione (4 ~ 6) tumori [6, 11]. VEGFR-3-positivi navi sono state determinate come descritto in precedenza [12]. I vasi di tre aree hot spot sono stati contati a × 400 ingrandimenti. La colorazione è stata considerata positiva quando più del 5% di endotelio mostrato una colorazione [6]. vasi peritumorale VEGFR-3-positivi (P-VEGFR-3) ed i vasi VEGFR-3-positivi intratumorale (I-VEGFR-3) sono stati valutati come sopra LVD.
Analisi statistica
analisi statistica è stata effettuata utilizzando le statistiche pacchetto per il software di Scienze sociali (versione 11.5, SPSS Inc., Chicago, iL). I campioni sono stati divisi in due categorie in base ai valori mediani rispettivamente I-LVD e P-LVD,. Le correlazioni di I-LVD e P-LVD con parametri e VEGF clinico-espressioni sono state analizzate con campioni indipendenti t
test o di Mann-Whitney U
test. Le correlazioni di VEGFR-3 espressione con parametri clinici sono stati analizzati mediante test Pearson Chi-quadrato. I fattori relativi a circa metastasi linfonodali nel carcinoma gastrico sono stati compiuti utilizzando l'analisi di regressione logistica multivariata. Le curve di sopravvivenza sono stati ottenuti utilizzando il metodo Kalplan-Meier e confrontate con log-rank test. analisi di sopravvivenza multivariata è stata valutata utilizzando il metodo di rischio proporzionale di Cox. Tutte le analisi statistica è stata due lati con un significato definito come P
< 0.05.
Risultati
intratumorale e le caratteristiche linfatici peritumorali a cancro gastrico
I vasi linfatici D2-40-positivo avevano morfologia irregolare e lumen con pareti sottili. I vasi linfatici nei tessuti gastriche sono stati per lo più situati nello strato di sottomucosa (Figura 1). I vasi linfatici (D2-40-posizione) e vasi sanguigni (CD34-posizione) erano chiaramente distinti da ulteriori doppia colorazione (Figura 2). vasi linfatici intratumorale di solito erano crollati, piccole e irregolari (Figura 3), ma alcuni vasi linfatici noncollapsed mostrato lume aperte, e, occasionalmente, contenevano invadere le cellule tumorali cluster (Figura 4). I vasi linfatici peritumorali nella parte superficiale e profonda della sottomucosa erano tutti allargata con le cavità linfatici dilatati (Figura 5, Figura 6). L'invasione vasi linfatici è stata osservata in 38 casi. Nessuna correlazione significativa è stata trovata tra il numero di LVD nel centro del tumore e nei tessuti di controllo (8,02 ± 2,28 vs 8,13 ± 1,04, P
> 0,05). Tuttavia, il numero di P-LVD (12.15 ± 3.75) erano significativamente superiore a quella nei tessuti di controllo e il centro del tumore (P
< 0,05). Nessuna differenza statistica è stata trovata tra i due metodi di rilevazione linfatici (singola colorazione per D2-40 e doppia colorazione per D2-40 /CD34) (I-LVD, 8,02 ± 2,28 vs 7,80 ± 2,33; P-LVD, 12.15 ± 3,75 vs 12.42 ± 3.67, P
> 0,05). Figura 1 I lymphantics D2-40-positive localizzate prevalentemente a livello della sottomucosa in tessuto gastrico (frecce). IHC, ingrandimento:. × 200
Figura 2 La doppia colorazione immunoistochimica per D2-40 e CD34 chiaramente distinto i vasi linfatici (freccia nera) da vasi sanguigni (freccia rossa). . IHC, ingrandimento: × 400
Figura 3 I vasi linfatici intratumorali a cancro gastrico sono stati crollata (freccia); Doppia colorazione immunoistochimica, ingrandimento:. × 200
Figura 4 le cellule tumorali grappolo d'invasione erano presenti in invasione vasi linfatici (LVI). Doppia colorazione immunoistochimica per D2-40 /CD34, ingrandimento:. × 400
Figura 5 I vasi linfatici peritumorali di cancro gastrico è stato ampliato con lume dilatati situati nella sottomucosa superficiale. IHC, ingrandimento:. × 200
Figura 6 I vasi linfatici peritumorali a cancro gastrico sono stati ampliati con lume dilatati situati a profondità parte della sottomucosa. IHC, ingrandimento:. × 200
Correlazioni di I-LVD e P-LVD con parametri clinico-patologiche e VEGF espressioni
Le correlazioni di I-LVD e P-LVD con i parametri clinico-patologici sono stati mostrati in tabella 1. Aumento I- LVD era significativamente associato con dimensioni del tumore più piccolo (P
< 0,001). Nessuna correlazione è stata trovata tra VEGF espressioni I-LVD e, mentre P-LVD è risultata significativamente correlata con le grandi dimensioni del tumore (P
< 0,001), profondità di invasione (P = 0.026
), metastasi linfonodali (P
< 0,001), LVI (P
< 0,001), l'invasione venosa (VI) (P
< 0,001), stadio TNM (P
< 0,001), VEGF-C ( P
= 0.003) e l'espressione di VEGF-D (P
= 0.005)
. espressione dei tre VEGF hanno mostrato una colorazione citoplasmatica positivo in cellule di cancro gastrico. livello di espressione alta di VEGF-A (figura 7), VEGF-C (Figura 8) e VEGF-D (Figura 9) sono stati osservati nel 64,2% (79/123), 65,9% (81/123) e 41,5% (51 /123) dei campioni, rispettivamente. Né io né-LVD P-LVD è stato trovato significativamente associato con VEGF-A espressione (P
> 0,05). Figura 7 VEGF-A espressione nel citoplasma di cancro gastrico. IHC, ingrandimento:. × 400
Figura espressione 8 VEGF-C nel citoplasma di cancro gastrico. IHC, ingrandimento:. × 400
Figura espressione 9 VEGF-D nel citoplasma di cancro gastrico. IHC, ingrandimento:. × 200
attività proliferativo in vasi linfatici intra ed peritumorali
vasi linfatici proliferativa sono stati trovati nella periferia del tumore, (figura 10). Il tasso di nuclei vasi linfatici Ki-67-positivo nella periferia tumore era (0,81 ± 0,13)%. N vaso linfatico proliferativa è stato trovato nel centro del tumore (Figura 11). Linfatici invasione potrebbe essere osservato nei tessuti peritumorali (Figura 12). Figura nuclei dei vasi linfatici 10 Ki-67-positive (frecce) sono stati rilevati nella periferia del tumore. Doppia colorazione per D2-40 /Ki-67, ingrandimento:. × 400
Figura 11 No Ki-67 espressione positiva nei vasi linfatici intratumorali nuclei. Doppia colorazione per D2-40 /Ki-67, ingrandimento:. × 400
Figura 12 vasi linfatici invasione è stata rilevata nel tessuto peritumorale (frecce). Doppia colorazione per D2-40 /Ki-67, ingrandimento:. × 400
VEGFR-3 espressione in vasi linfatici
L'espressione VEGFR-3-positivi in ​​periferia del tumore (P-VEGFR-3) è stato trovato nel 55 dei 123 casi, di tanto in tanto con grappoli di cellule di cancro invasione (Figura 13). Tuttavia, solo 34 su 123 casi avevano un'espressione VEGFR-3-positivi al centro tumorale (I-VEGFR-3) (Figura 14). Queste navi erano per lo più a parete sottile, di forma irregolare e non contenevano o pochi globuli rossi. Figura 13 L'espressione VEGFR-3-positivi nelle cellule endoteliali citoplasma in periferia del tumore (P-VEGFR-3), di tanto in tanto con grappoli di cellule di cancro che invade (frecce). IHC, ingrandimento:. × 400
Figura 14 Le espressioni VEGFR-3-positivi sono stati situato al centro del tumore (frecce). . IHC, ingrandimento: × 200
in tessuti tumorali periferici, VEGFR-3 espressioni erano significativamente correlati piuttosto con VEGF-C ad alta espressione (P
< 0.000), VEGF-D ad alta espressione (P =
0,043), aumentato P-LVD (P
< 0,001) e la presenza di LVI (P
= 0.003), che con VEGF-A espressione, aumentato I-LVD, l'invasione venosa e metastasi linfonodali (P Hotel > 0,05). Non sono state osservate correlazioni tra I-VEGFR-3 espressione e di parametri clinici (P
> 0,05). (Tabella 2) Tabella 2 Correlazioni di VEGFR-3 espressione in localizzazione del tumore differenr con i parametri clinici
Fattori
N

I-VEGFR-3
P-VEGFR-3


N (%)
P

N (%)
P
VEGF-A espressione
0,107 0,067

basso
44
16 (36.36)
15 (34.09)
alta
79
18 (22.78)
40 (50.63)
espressione di VEGF-C
0.795
< 0.001
Basso
42
11 (26.19)
9 (21.43)
alta
81
23 (28.40)
46 (56.79)
VEGF- espressione D
0,968 0,043

basso
72
20 (27.78)
27 (37,50)
alta
51
14 (27.45)
28 (54.90)
P-LVD
0,813
< 0,001
< 14
60
16 (26.67)
10 (16.67)
≥ 14
63
18 (28.57)
45 (71.43)
I-LVD
0.412
0,153
< 8
58
14 (24.14)
22 (37.93)
≥ 8
65
20 (30.77)
33 (50.77)
metastasi linfonodali
0,934
0.190
negative
55
19 (34.55)
21 (38.18)
positivo
68
15 (22.06)
34 (50.00)
LVI
0,681
0.003

negativo 76
22 (28.95)
26 (34.21)
positivo
47
12 (25.53)
29 (61.70)
VI
0.387
0.448
negativo
87
26 (29.89)
37 (42.53)
positivo
36 Pagina 8 (22.22)
18 (50.00)
Abbreviazione: LVD: densità dei vasi linfatici; LVI: linfatica invasione vascolare; VI: l'invasione venosa; I-VEGFR-3: VEGFR-3 espressione positiva al centro del tumore; P-VEGFR-3: VEGFR-3 espressione positiva alla periferia del tumore
valore predittivo di LVD per metastasi linfonodali
Come risultato di analisi multivariata di regressione logistica nella tabella 3, l'espressione di VEGF-C e P-LVD. erano significativamente asscoiated con metastasi linfonodali (P = 0,024
, P = 0.045
, rispettivamente). I-LVD, VEGF-A, VEGF-D e P-VEGFR-3 espressione non hanno mostrato il valore predittivo per metastasi linfonodali nel carcinoma gastrico. (Tabella 3) Tabella 3 multivariata analisi di regressione logistica per metastasi linfonodali
Fattori
odds ratio
95% CI

P
P-LVD
3.548
1.030 -12,226
0,045
I-LVD
1.300
0,964-1,754
0,085
VEGF-A
0.510
0,138-1,884
0,313
VEGF-C
4.069
1,198-13,820
0.024
VEGF-D
3.162
,834-11,992
0,091
P-VEGFR-3
2.919
,747-11,403
0.123
Abbreviazione: LVD: densità dei vasi linfatici; P-VEGFR-3:. VEGFR-3 espressione positiva alla periferia del tumore
significato prognostico della I-LVD e P-LVD
All'analisi univariata della sopravvivenza, P-LVD è stato associato a scarsa sopravvivenza globale (Figura 15, P
< 0,001), la sopravvivenza libera da malattia (Figura 16, Hotel <P; 0,001) e la sopravvivenza cancro-specifica (Figura 17, P
< 0,001). Tuttavia, I-LVD è stata correlata con un trend non significativo verso tutte le rispettivamente al di sopra (sopravvivenza globale, P = 0,5835
, Figura 18, la sopravvivenza libera da malattia, P = 0,2844
, figura 19; sopravvivenza cancro-specifica, P = 0,6246
, Figura 20). Figura 15 Relazione tra P-LVD con la sopravvivenza generale (P < 0,001).
Figura 16 Relazione tra P-LVD con la sopravvivenza libera da malattia (P < 0,001).
Figura 17 Relazione tra P-LVD con -cancro specifico sopravvivenza (P < 0,001)..
Figura 18 relazione tra I-LVD con la sopravvivenza globale (p = 0,5825)
Figura 19 relazione tra I-LVD con la sopravvivenza libera da malattia (p = 0,2844) .
Figura 20 relazione tra I-LVD con la sopravvivenza cancro-specifica (p = 0,6246).
l'analisi multivariata di regressione indicateded che P-LVD potrebbe essere un fattore indipendente di prognosi sia per la sopravvivenza globale (P = 0.045
) e libera da malattia di sopravvivenza (p = 0,031
), nonostante la sopravvivenza cancro-specifica. Inoltre, la presenza di LVI e lo stadio TNM potrebbe servire come i predittori indipendenti per tutte e tre le sopravvivenze (LVI, P = 0,040
, 0.043, 0.039, stadio TNM, P = 0.048
, 0.001, 0.001, Tabella 4) . VEGF-A espressione era il predittore prognostico indipendente solo per la sopravvivenza globale (P = 0,033
). Statisticamente trovato correlazioni significative per I-LVD, VEGF-C, VEGF-D e P-VEGFR-3 con qualsiasi sopravvivenza. (Tabella 4) Tabella 4 Cox analisi di regressione di fattori indipendenti che influenzano la sopravvivenza libera da malattia, la sopravvivenza cancro-specifica e la sopravvivenza globale
Fattori
specifica per il tumore sopravvivenza
sopravvivenza libera da malattia
sopravvivenza complessiva

OR (95% CI)

P
OR (95% CI)
P
OR (95% CI)
P

P-LVD
2.099 (0,91-4,87)
0,084
2.418 (1,08-5,40)
0,031
2.895 (1,02-8,19)
0,045
I-LVD
1.205 (0,56-2,63)
0,639
1.325 (0,62-2,85)
0,472
1.959 (0.90-4.24)
0.088
VEGF-A
1.386(0.50-3.83)
0.528
1.364(0.67-2.78)
0.391
2.437(1.10-5.45)
0.030
VEGF-C
2.423(0.89-6.63)
0.085
1.630(0.77-3.47)
0.205
1.562 (0,79-3,34)
0,182
VEGF-D
0.511 (0,19-1,36)
0,178
1.916 (0,90-4,10)
0,094
1.621 (0,81-3,98)
0.190
LVI
2.716 (1,05-7,04)
0,040
2.477 (1,03-5,97)
0.043
2.578 (1,05-6,34)
0,039
LNM
2.115 (0,68-6,60)
0,197
2.428 (1,18-5,02)
0.017 3.426
(1.66-7.06)
0.001
VI
2.943(0.89-9.77)
0.078
1.697(0.75-3.87)
0.208
1.477(0.63-3.48)
0.373
P-VEGFR-3
1. 499 (0,98-2,31)
0,067
1.099 (0,53-2,28)
0.800
1.402 (0,68-2,90)
0,361
stadio TNM
1.523 (1,00-2,31)
0,048
1.674 (1,25-2,25)
0.001
1.656 (1,23-2,23)
0.001
Abbreviazione: P-LVD: peritumorale densità dei vasi linfatici; I-LVD: intratumorale densità dei vasi linfatici; LVI: linfatica invasione vascolare; LNM: metastasi linfonodali; VI: l'invasione venosa; P-VEGFR-3:. VEGFR-3 espressione positiva alla periferia del tumore
Discussione
Recentemente, l'anticorpo D2-40, un nuovo marker per endotelio linfatico, è stato identificato come l'anticorpo specifico contro podoplanin umana [13] . Molti studi hanno indicato l'immunocolorazione di D2-40 è specifico per la valutazione di invasione linfatica e linfatica densità dei microvasi in tumori umani, tra cui in cancro gastrico [14-17]. In questo studio, LVD e l'invasione dei vasi linfatici sono stati identificati da D2-40 colorazione, e confermati dalla doppia colorazione per D2-40 e CD34, che chiaramente discriminato linfatici dai vasi sanguigni ulteriormente.

• P27Kip1, regolato da glicogeno sintasi chinasi-3β, si traduce in differenziazione HMBA-indotta delle cellule di cancro gastrico umano
• Uno studio retrospettivo di coorte di pazienti con tumori allo stomaco e al fegato: l'impatto delle comorbidità ed etnia sulla cura del cancro e di esiti