Erilainen merkitys välillä kasvaimensisäisenä ja peritumoraalista imusuonien tiheys mahasyövän: retrospektiivinen tutkimus 123 tapausta

Erilainen merkitys välillä kasvaimensisäisenä ja peritumoraalista imusuonien tiheys mahasyövän: retrospektiivinen tutkimus 123 tapauksissa
tiivistelmä
tausta
Potilaat, joilla on mahasyövän Kiinassa on huonompi tulos ja huonompi ennuste. Kasvaimen aiheuttama lymfangiogeneesiä on keskeinen merkitys etäpesäkkeiden ja kasvaimen etenemistä. Kasvaimensisäinen ja peritumoraalista lymphatics piti olla erilaisia ​​biologisia vaikutuksia. Kolme suurta kasvutekijät, verisuonen endoteelin kasvutekijä (VEGF) -A, VEGF-C ja VEGF-D, ovat mukana aktivoinnin kautta niiden reseptorien (VEGFRs). Tarkoituksena Nykyinen tutkimus on tutkia merkittävä ero kasvaimensisäisenä ja peritumoraalista imusuonien tiheys (LVD) mahasyövän ja niiden korrelaatioita lymphangiogenetic kasvutekijöiden. Tool Menetelmät
kasvaimensisäisenä LVD (I-LVD) ja peritumoraalista LVD ( P-LVD) 123 primaarisessa mahalaukun syövän arvioitiin värjäyksen jälkeen D2-40, ja varmistettiin kaksinkertainen värjäys D2-40 /CD34. Proliferatiivinen aktiivisuus lymphatics endoteelin arvioitiin kaksinkertainen värjäys D2-40 /Ki-67. Liitot analysoitiin välillä I-LVD /P-LVD ja ekspressiotaso VEGF-A, VEGF-C, VEGF-D ja reseptori VEGFR-3, joka mitattiin immunohistokemiallinen (IHC). Korrelaatiot I-LVD ja P-LVD potilaan ennusteeseen myös arvostettu.
Tulokset
(1) peritumoraalista lymphatics (PTLs) olivat suhteellisen suurennettu kanssa laajentuneet lumenin verrattuna kasvaimensisäisenä lymphatics (ITLs). Lisääntynyt P-LVD oli huomattavasti korkeampi kuin I-LVD (P
< 0,05). (2) P-LVD havaittiin merkitsevästi yhteydessä imusolmuke etäpesäke (LNM) (P
< 0,001), imusuonien invaasiota (LVI) (P
< 0,001), VEGF-C (P
= 0,003), VEGF-D ekspressiotason (P
= 0,005) ja VEGFR-3 ekspressiotason (P
< 0,001) peritumoraalista kudoksissa, vaikka mitään merkittävää assosioitunut edellä variantteja I-LVD . Kuitenkin lisääntynyt I-LVD osoitettiin liittyvän vähentynyt kasvaimen tilavuus (P
< 0,001). Kumpikaan I-LVD eikä P-LVD korreloi VEGF-A ilmentymisen (P
> 0,05). (3) proliferatiivinen aktiivisuus imukudoksen endoteelin havaittiin PTLs huolimatta ITLs. (4) Lisääntynyt P-LVD, mutta en-LVD, osoitettiin olevan itsenäinen riskitekijä imusolmuke etäpesäke mukaan monimuuttuja logistista regressioanalyysiä ja liittyi huonompi tautivapaan elinajan ja kokonaiselossaolo.
Johtopäätökset
PTLs rooleja mahalaukun syövän etenemisessä. Lisääntynyt P-LVD, mutta en-LVD, oli merkitsevästi yhteydessä VEGF-C /-D /VEGFR-3-järjestelmä, ja se voisi olla itsenäinen riskitekijä imusolmuke etäpesäke ja ennustetekijä mahasyövän.
Tausta
Mahalaukun syöpä on tärkein johtava syy syövän liittyvän kuoleman Kiinassa. Noin 80% ~ 90% potilaista diagnosoidaan jo pitkällä huonon lopputuloksen kanssa, yleisesti kanssa imusuonten levittämiseen ja etäinen etäpesäke. Kuluneiden vuosien, kasvaimen aiheuttama lymfangiogeneesiä ohjaavat imusuoniston kasvutekijöitä on vakiinnuttanut uutena mekanismi syövän etenemisen. Nykyisin yhä useammat asiantuntijat uskovat, että kasvaimensisäisenä lymphatics (ITLs, The lymphtics sisällä kasvaimet) ja peritumoraalista lymphatics (PTLs, lymphtics kehällä) pelata täsmälleen erilliset biologiset tehtävät kasvaimen käyttäytymisen ja ennuste eri kasvaimia. Mahasyövän, useat tutkimukset ovat osoittaneet, että potilailla, joilla on korkeampi I-LVD oli korkeampi läsnäolo imusolmuke etäpesäke alkuvaiheen [1], kun taas P-LVD voi olla itsenäinen riskitekijä imusolmuke etäpesäke ja ennusteen [2]. Kuitenkin toiminta I-LVD ja P-LVD ja niiden korrelaatioita VEGFs ilme ei ole selvitetty vielä.
Useat tutkimukset ovat osoittaneet ratkaisevan roolit VEGFs ilmaisujen taudin etenemiseen ja ennusteeseen mahasyövän. VEGF-C ja VEGF-D, kaksi jäsentä VEGF-perheen, on määritelty imusuoniston kasvutekijöitä ja niillä on tärkeä rooli kasvaimen imusuonten aktivoimalla VEGFR-3, joka ilmentyy pääasiassa lymfaattisissa endoteelisoluissa (LEC). VEGF-C on hallitseva säätelijä imusuonten niin aikaisin ja kehittynyt mahasyöpä [3, 4]. Lisääntynyt VEGF-C ilme oli merkittävä korrelaatio LVD, LVI ja imusolmuke etäpesäke [5], mutta sen ennusteen arvioinnissa pysynyt kiistanalainen. VEGF-D oli mukana imusuonten leviämisen mahasyövän solujen ja voi olla itsenäinen prognostinen markkeri [6]. VEGFR-3 oli ilmoitetaan lisäksi ennustetekijä [6]. Toinen kasvutekijä, VEGF-A, joka säännelty angiogeneesi, katsottiin myös stimuloida imusuonten sitoutumalla VEGFR-2 äskettäin. Lisääntynyt VEGF-A ilmentymisen taso mahasyövän potilaat olivat osoittautuneet liittyvät mikroverisuonitiheys (MVD), hematogenous etäpesäke, vatsakalvon disseminateion ja huonon ennusteen. On kuitenkin vielä tiedetä molemmat kasvaimensisäisenä ja peritumoraalista lymphtics stimuloidaan kolmella VEGFs kasvainsolujen erittämiä, vai onko I-LVD ja P-LVD pelata merkittävästi erilaisia ​​biologisia rooleja imusolmuke etäpesäke ja ennusteen mahasyövässä.
menetelmät
potilaat ja kasvaimen yksilöitä
kasvaimen näytteet saatiin 123 primaarisessa mahalaukun syövän, jotka hyväksyivät gastrectomy osastolla Surgery, Tongji sairaalan Tongji yliopiston tammikuusta 2000 joulukuuhun 2003. Yksikään heistä oli saanut esioperatiivisten kemoterapian tai sädehoidon. Tutkimus koostui 80 miestä (65%) ja 43 naista (35%). Keskimääräinen ikä diagnoosin aikana oli 65 vuotta (vaihteli 28-87 vuotta). Kolmekymmentäyksi tapauksia varhaisen mahalaukun syövän (EGC) ja 92 tapausta edennyt mahasyöpä (AGC) olivat mukana. Histologinen vaiheessa perustui UICC TNM luokittelu. Muut kliiniset piirteet on esitetty yhteenvetona taulukossa 1. Kaikki potilaat on seurattu kliinisesti vähintään 5 vuotta leikkauksen jälkeen. Keskimääräinen seuranta-aika oli 56 kuukautta (vaihteli 6-85 kuukautta). Survival analyysi suoritettiin, kuten kokonaiselinaika (OS), tautivapaan elinajan (DFS) ja syöpää tautivapaalle (CSS). OS, DFS ja CSS laskettiin alkaen leikkaus viime kontakti elävien potilaiden, että viimeisimmän seuranta-ajan taudista vapaan potilaita, sekä päivämäärä mahalaukun syövän aiheuttama kuolema, vastaavasti. Neljä EGC tapauksissa ja 52 AGC tapausta ilmeni toistumisen. Yksitoista potilasta oli vatsakalvon levittämistä, 26 potilasta maksan etäpesäke, ja 19 tapausta uusiutunut vatsassa jälkeen. Neljäkymmentä potilasta kuoli syöpään. Nykyinen tutkimus hyväksyttiin Research eettiselle toimikunnalle Tongji sairaalan sidoksissa Tongjin yliopiston. Normaali mahan kudokset kerättiin ohjaus yksilöitä. Kaikki tulokset saatiin aikaan kahdella patologien itsenäisesti, ja keinot laskettiin kussakin tapauksessa tietojen perusteella obtained.Table 1 korrelaatiot LVD kanssa kliinis parametrien ja VEGFs ilmaisuja
Factors
N
I-LVD
P-LVD


keskiarvo ± SD
P
keskiarvo ± SD
P
kasvain eriyttäminen
0,802
0,739
korkea eriytetty
11
8,18 ± 2,44
12,07 ± 4,49
Mederately /huono eriytetään
112
8,00 ± 2,27
12,46 ± 3,60
Tuumorikoko
< 0,001
< 0,001
< 3,2 cm
57
8,93 ± 2,34
11,18 ± 3,80
≥ 3,2 cm
66
7,23 ± 1,91
13.50 ± 3,21
syvyys invaasion
0,433
0,026
pT1-2
69
8,16 ± 2,51
11,78 ± 3,52
pT3-4
54
7,83 ± 1,96
13,26 ± 3,71
Imusolmuke etäpesäke
0,056 *
< 0,001
Negative
57
8,47 ± 2,27
10,50 ± 3,42
Positiivinen
66
7,65 ± 2,24
13,98 ± 3,10
LVI
0,700
< 0,001
Negative
83
8,08 ± 2,33
11.23 ± 3.29
Positiivinen
40
7,91 ± 2,22
14,36 ± 3,44
VI
0,905
< 0,001
Negative
86
8,00 ± 2.38
11,65 ± 3,81
Positiivinen
37
8,05 ± 2,67
14,24 ± 2,53
TNM
0,067
< 0,001
I - II
71
8,34 ± 2,42
11,33 ± 3,29
III - IV
52
7,58 ± 2,01
13,92 ± 3,66
VEGF-A ilmaisu
0,527
0,091
Low
44
7,84 ± 2,51
11,68 ± 3,54
korkea
79
8,26 ± 2,21
12,84 ± 3,69
VEGF-C ilme
0,092 *
0,003
Low
42
7,55 ± 2,37
11,06 ± 3,26
korkea
81
8,00 ± 2,34
13,13 ± 3,69
VEGF-D ilmaisu
0,514
0,005
Low
72
7,90 ± 2,47
11,65 ± 3,44
korkea
51
8,18 ± 1,99
13.53 ± 3,73
P
, t-testillä; P
*, Mann-Whitney U
Test. Lyhenne: LVD: imusuonien tiheys; LVI: imusuonien hyökkäystä. VI: laskimoiden hyökkäystä.
Single immunohistokemiaa D2-40, VEGF-A, VEGF-C, VEGF-D ja VEGFR-3
For immunohistichemical värjäystä, 4 pm paksu parafinoidut dioja leikattiin kunkin tutkimuksen lohko. Leikkeitä käsiteltiin 0,3% H 2O 2 10 minuutin ajan huoneenlämmössä. Antigeenin haku, kalvot kuumennettiin mikroaaltouunissa, joka sisältää 0,01 mmol /l natriumsitraattia (pH 6,0). Leikkeitä inkuboitiin 4 ° C: ssa yön yli kosteassa lokeroon primaarisilla vasta-aineilla, VEGF-A (hiiren monoklonaalinen vasta-aine, 1: 100, DAKO), VEGF-C (vuohen polyklonaalinen vasta-aine, 1: 100, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), VEGF-D (vuohen polyklonaalinen vasta-aine, 1: 100, Santa Cruz), VEGFR-3 (vuohen polyklonaalinen vasta-aine, 1: 100, Santa Cruz) ja D2-40 (hiiren monoklonaalinen vasta-aine, 1: 100, DAKO), vastaavasti. Huuhdottiin kolmesti 0,1 mmol /l PBS: ssä 2 minuutin ajan, ja inkuboitiin 30 minuuttia huoneenlämpötilassa vuohen anti-kani /hiiri piparjuuriperoksidaasi (Envision, DAKO, CA) tunnistaa kohde. Leikkeitä kehitettiin 3 '3-diaminobentsidiiniä. Normaali vuohen IgG toimi negatiivisen reaktion kontrolli värjäykseen VEGF-C, VEGF-D ja VEGFR-3, ja normaali kanin IgG toimi negatiivisen reaktion kontrolli värjäykseen VEGF-A: n ja D2-40.
Double immunohistokemiallinen värjäys D2-40 /CD34
kaksinkertainen immunohistokemiallinen värjäytyminen D2-40 /CD34 käsiteltiin edelleen arvioida spesifisyyttä D2-40 ilmaisun lymfaattiseen endoteeliin. Ehdotus mukaan valmistajan ohjeiden (nro: 95-9999, Histostain-DS Kit, Zymed, CA). Parafinoidut 4 um: n leikkeitä poistettiin parafiini ksyleenillä ja nesteytyksestä. Objektilasit upotettiin peroksidaasi sammutusta liuokseen 10 min ajan. Sen jälkeen, kun niitä inkuboitiin yön yli 4 ° C: ssa primaaristen vasta-aineiden vastaan ​​CD34 (hiiren monoklonaalinen vasta-aine, 1: 100, DAKO, Carpinteria, CA), leikkeet käsiteltiin seerumin estää liuoksen, minkä jälkeen sen inkuboitiin biotinyloidun sekundaarisen vasta-aineen (DAKO ). Sen jälkeen, alkalisen fosfataasin konjugaattia käytettiin kunkin osan 10 minuuttia. Ja sitten, leikkeet käsiteltiin substraatilla kromogeeni seoksen ja kaksinkertainen värjäys tehostajana. Seerumi estää levitettiin jälleen, laseja inkuboitiin toisen primaarisen vasta-aineen vasten D2-40 (hiiren monoklonaalinen vasta-aine, 1: 200, GM36190, Gene Tech Company Limited, Shanghai, Kiina) 60 min ja biotinyloitu toinen anti-immunoglobuliini (Ig) (DAKO), käsiteltiin. Levittämisen jälkeen entsyymin kanssa konjugaattia 10 min, levyt inkuboitiin seoksen kanssa substraattipuskuria, kromogeeniliuoksen ja 0,6% vetyperoksidia HRP ja valvotaan mikroskoopilla. Vesijohtovettä, joka sisälsi 0,05% Tween-20 lopetetaan reaktio. Negatiivisia kontrolleja varten leikkeet värjättiin ei-immuuni seerumi sijasta saman pitoisuuden primaarisen vasta-aineen. CD34 positiivinen verisuonten osoitti voimakkaan punainen tahra, ja D2-40 positiivinen imusuonten osoitti tumma violetti tahra.
Kaksoisvärjäys for D2-40 /Ki-67
havaitsemiseksi proliferatiivista aktiivisuutta imusuonten menetelmä kaksinkertaisen immuunivärjäykseen D2-40 /Ki-67 suoritettiin. D2-40 vasta-ainetta käytettiin värjäämään imusuonten endoteeliin yhdessä Ki-67 (kani monoklonaalinen vasta-aine, 1: 200, Santa Cruz, USA) värjäämään lisääntyvät solut. Ki-67-värjäys (punainen) on kehitetty alkalisella fosfataasilla konjugoitua sekundaarista vasta-ainetta, ja sitten D2-40 värjäytymistä (ruskea) kehitettiin peroksidaasi-konjugoidun sekundaarisen vasta-aineen. Proliferative imusuonten varmistettiin Ki-67 positiivisesti värjäytyneet ytimet että oli myös samanaikainen positiivinen sytoplasmista värjäytymistä D2-40 positiivisissa soluissa. Määrä kaksoisleimattua alusten määritettiin laskemalla ytimet kasvaimeen liittyvien D2-40-positiivisia suonia (100 ytimiä kussakin kasvain) [7].
Assesment LVD
kasvaimensisäisenä LVD (kuumat pisteet sijaitsivat at kasvain keskellä) ja peritumoraalista LVD (hot spot sijaitsivat kehällä kudoksen 2 mm kasvaimen vieressä invasiivisia edessä) arvioitiin erikseen [2, 7-9]. Kvantitatiivinen analyysi imusuonten suonitiheys suoritettiin osissa, jotka olivat single-värjättiin D2-40. Viisi alueilla useimpien lymphatics alueiden ( "hot spot") valittiin klo × 40 suurennus valomikroskoopilla. LVD arvioitiin laskemalla kaikki värjätty aluksille × 200 suurennus. Keskimääräinen lukumäärä lymphatics arvioitu määritettiin LVD. Imusuonien invaasio (LVI) havaittiin esiintyvän, jos vähintään yksi kasvain soluklusterin oli D2-40 positiivinen aluksia [10]. Pisteytys ja laskenta suoritettiin itsenäisesti kaksi tutkijaa, jolla ei ollut kliinistä tietoa potilaista. Keskimääräinen P-LVD ja I-LVD laskettiin kussakin tapauksessa.
Assesment of VEGFs ja VEGFR-3 ilmaisuja
Positiivinen värjäys VEGF-A, -C ja -D ilmentyminen määritettiin aiemmissa tutkimuksissa [6 , 11]. Värjäys tulokset kolmen edellä mainitun VEGFs oli semikvantitatiivisesti arvioi immunohistokemiallinen pisteet yhdistettynä prosenttiosuus kasvainsolujen osoittaa erityistä immunoreaktiivisuus. Värjäytymisvoimakkuus annettiin neljään luokkaan: none (0), heikko (1), kohtalainen (2) ja vahva (3). Prosenttiosuus karsinooman soluja annettiin kanssa laadut: 0 (0%), 1 (1% ~ 10%), 2 (11% ~ 49%), 3 (50% ~ 100%), vastaavasti. Kokonaispistemäärä laskettiin kertomalla värjäyksen intensiteetti ja prosenttiosuus positiivisia kasvainsoluja. Mediaani pisteet valittiin cutoff taso, jonka mukaan kasvaimet luokitella osaksi matala- (0 ~ 3) ja korkea-ilmentyminen (4 ~ 6) kasvaimet [6, 11]. VEGFR-3-positiiviset suonet määritettiin kuten aiemmin on kuvattu [12]. Alukset Kolmen hot spotteja alueet laskettiin × 400 suurennus. Värjäys pidettiin positiivisena, kun yli 5% endoteelin osoittivat värjäytymistä [6]. Peritumoraalista VEGFR-3-positiivisia suonia (P-VEGFR-3) ja kasvaimensisäisenä VEGFR-3-positiivisia suonia (I-VEGFR-3) arvioitiin kuten edellä LVD.
Tilastollinen analyysi
Tilastollinen analyysi suoritettiin käyttämällä tilasto paketti Social Science (versio 11.5, SPSS Inc., Chicago, IL). Näytteet jaettiin kahteen ryhmään sen mukaan mediaaniarvot I-LVD ja P-LVD, vastaavasti. Korrelaatiot I-LVD ja P-LVD kanssa ennusteeseen viittaavia parametreja ja VEGFs ilmaisuja analysoitiin riippumattomien otosten t
testiä tai Mann-Whitney U
testi. Korrelaatiot VEGFR-3 ilmaisutapoja kliinisten parametrien analysoitiin Pearson Chi-Square testit. Tähän liittyvä tekijät noin imusolmuke etäpesäke mahasyövän saatiin aikaan käyttämällä multivariant regressioanalyysimme. Survival käyrät saatiin käyttäen Kalplan-Meier menetelmällä ja verrattiin log-rank-testi. Monimuuttuja eloonjääminen analyysi arvioitiin käyttämällä Coxin suhteellista vaaraa menetelmällä. Kaikki tilastollisen analyysin oli molempien osapuolten merkitys määriteltiin P
< 0.05.
Tulokset
kasvaimensisäisenä ja peritumoraalista imusuonten ominaisuudet mahasyövän
D2-40-positiivinen imusuonten oli epäsäännöllinen morfologia ja ohutseinäisiä lumenia. Imusuonten mahalaukun kudoksissa käytti enimmäkseen sijaitsee kerroksen submukoosasta (kuvio 1). Imusuonitulehdus (D2-40-asento) ja verisuonet (CD34-asento) on selvästi erottuu edelleen kahden värjäytymistä (kuva 2). Kasvaimensisäistä imusuonten yleensä olivat romahtaneet, pieni ja epäsäännöllinen (kuva 3), mutta jotkut kokoonmenneeseen lymphatics osoitti avoin ontelo, ja joskus sisälsi tunkeutuvat kasvainsolujen klustereita (kuva 4). Peritumoraalista imusuonten on pinnallinen ja syvä osa submukoosan olivat kaikki laajentuneen kanssa imusuonten onteloita laajentuneet (kuva 5, kuva 6). Imusuoniston invaasio havaittiin 38 tapausta. Mitään merkittävää korrelaatio löytyi numerot LVD kasvaimen keskelle ja valvonta kudoksissa (8,02 ± 2,28 vs. 8,13 ± 1,04, P
> 0,05). Kuitenkin määrä P-LVD (12,15 ± 3,75) olivat merkittävästi korkeampi kuin kontrolli kudosten ja kasvain keskus (P
< 0,05). Tilastollisesti merkittäviä eroja löytynyt kahden menetelmiä havaitsemiseksi lymphatics (single värjäytymistä D2-40 ja kaksinkertainen värjäytyminen D2-40 /CD34) (I-LVD, 8,02 ± 2,28 vs. 7,80 ± 2,33; P-LVD, 12,15 ± 3,75 vs. 12,42 ± 3,67, P
> 0,05). Kuva 1 D2-40-positiivinen lymphantics pääasiassa sijaitsee kerroksen submukoosasta mahalaukun kudoksesta (nuolet). IHC, suurennus: × 200.
Kuva 2 Kaksinkertainen immunohistokemiallinen värjäys D2-40 ja CD34 selvästi erottaa imusuonitulehdus (musta nuoli) verisuonista (punainen nuoli). IHC, suurennus: × 400.
Kuva 3 Kasvaimensisäinen imusuonten mahasyövän oli romahtanut (nuoli); Double immunohistokemiallinen värjäys, suurennus: × 200.
Kuva 4 hyökkääviä syöpäsolujen klusteri oli läsnä imusuonien invaasiota (LVI). Double immunohistokemiallinen värjäys D2-40 /CD34, suurennus: × 400.
Kuva 5 peritumoraalista imusuonten mahasyövän suurennettiin kanssa laajentuneet lumenia sijaitsee pinnallinen submukoosasta. IHC, suurennus: × 200.
Kuva 6 peritumoraalista imusuonten mahasyövän suurennettiin kanssa laajentuneet lumenia sijaitsevat syvällä osa submukoosasta. IHC, suurennus: × 200.
Korrelaatiot I-LVD ja P-LVD kanssa ennusteeseen viittaavia parametreja ja VEGFs ilmaisuja
korrelaatiot I-LVD ja P-LVD kanssa ennusteeseen viittaavia parametreja esitetään taulukossa 1. Lisääntynyt I- LVD oli merkitsevästi yhteydessä pienempi kasvaimen kokoa (P
< 0,001). Ei korrelaatioita välillä havaittiin I-LVD ja VEGFs ilmaisuja, kun taas P-LVD korreloi merkitsevästi suurempi kasvaimen kokoa (P
< 0,001), syvyys invaasio (P
= 0,026), imusolmuke etäpesäke (P
< 0,001), LVI (P
< 0,001), laskimoiden invaasio (VI) (P
< 0,001), TNM (P
< 0,001), VEGF-C ( P
= 0,003) ja VEGF-D ilmentymisen (P
= 0,005).
Expression kolmesta VEGFs myönteisesti sytoplasmista värjäytymistä mahalaukun syöpäsoluja. Korkea ilmentymistaso VEGF-A: n (kuvio 7), VEGF-C (kuvio 8), ja VEGF-D (kuvio 9) havaittiin 64,2% (79/123), 65,9% (81/123) ja 41,5% (51 /123) yksilöiden, vastaavasti. Kumpikaan I-LVD eikä P-LVD havaittiin merkitsevästi yhteydessä VEGF-A ilmentymisen (P
> 0,05). Kuva 7 VEGF-A ilmentymistä sytoplasmassa mahasyövän. IHC, suurennus: × 400.
Kuva 8 VEGF-C ilmentymisen sytoplasmassa mahasyövän. IHC, suurennus: × 400.
Kuva 9 VEGF-D ilmentymisen sytoplasmassa mahasyövän. IHC, suurennus: × 200.
Proliferative toimintaa sisäisessä ja peritumoraalista lymphatics
Proliferative imusuonten löydettiin kasvain periferiassa, (kuva 10). Määrä Ki-67-positiivisia imusuonien ytimien kasvaimen reuna oli (0,81 ± 0,13)%. Ei proliferatiivinen imusuonien havaittiin kasvaimen keskustasta (kuviossa 11). Lymphatics invaasio voitiin havaita peritumoraalista kudoksissa (kuvio 12). Kuvio 10 Ki-67-positiivisia imusuonien ytimet (nuolet) havaittiin kasvaimen kehällä. Double värjäys D2-40 /Ki-67, suurennus: × 400.
Kuva 11 Ei Ki-67 positiivista ilmentymistä kasvaimensisäisenä lymphatics ytimet. Double värjäys D2-40 /Ki-67, suurennus: × 400.
Kuva 12 Imusuonia invaasio havaittiin peritumoraalista kudoksessa (nuolet). Kaksinkertainen värjäys D2-40 /Ki-67, suurennus: x 400.
VEGFR-3: n ekspressio imusuonten
VEGFR-3-positiivinen ekspressio kasvaimen reuna-(P-VEGFR-3) havaittiin 55 on 123 tapauksissa ajoittain syöpäsolun klustereita hyökkääviä (kuva 13). Kuitenkin vain 34 123 tapausta oli VEGFR-3-positiivinen ekspressio kasvaimen keskustasta (I-VEGFR-3) (kuvio 14). Nämä alukset olivat enimmäkseen ohutseinäisiä, epäsäännöllisen muotoisia ja sisältäneet tai muutaman RBCs. Kuvio 13 VEGFR-3-positiivinen ekspressio endoteelisoluissa sytoplasmaan kasvaimen kehällä (P-VEGFR-3), ajoittain syöpäsolun klustereita valtaavat (nuolet). IHC, suurennus: x 400.
Kuva 14 VEGFR-3-positiiviset ilmaisut sijaitsivat kasvaimen keskusta (nuolet). IHC, suurennus: × 200.
Syrjäisillä tuumorikudoksia, VEGFR-3 ilmaisuja merkittävästi korreloi melko VEGF-C korkea ilmentymisen (P
< 0,000), VEGF-D korkea ilmentymisen (P
= 0,043), lisääntynyt P-LVD (P
< 0,001) ja läsnäolo LVI (P
= 0,003), kuin VEGF-A ilmaisua, lisääntynyt I-LVD, laskimoiden invaasion ja imusolmuke etäpesäke (P
> 0,05). Ei yhteyttä ei havaittu I-VEGFR-3 ilmaisun ja kliinisten parametrien (P
> 0,05). (Taulukko 2) Taulukko 2 korrelaatiot VEGFR-3 ilmentymistä differenr kasvaimen sijainti kliinisten parametrien
Factors
N

I-VEGFR-3
P-VEGFR-3


N (%)
P

N (%)
P
VEGF-A ilmaisu
0,107
0,067
Low
44
16 (36.36)
15 (34,09) B korkea
79
18 (22,78)
40 (50.63)
VEGF-C ilmaisu
0,795
< 0,001
Low
42
11 (26,19) B 9 (21,43) B Korkea
81
23 (28.40)
46 (56.79) B VEGF- D ilmaisu
0,968
0,043
Low
72
20 (27,78)
27 (37.50) B korkea
51
14 (27.45) B 28 (54.90) B P-LVD
0,813
< 0,001
< 14
60
16 (26,67)
10 (16,67)
≥ 14
63
18 (28,57)
45 (71,43) B I-LVD
0,412
0,153
< 8
58
14 (24,14)
22 (37.93)
≥ 8
65
20 (30,77)
33 (50,77) B Imusolmuke etäpesäke
0,934
0.190
Negatiivinen
55
19 (34,55)
21 (38.18)
Positiivinen
68
15 (22.06)
34 (50,00) B LVI
0,681
0,003
Negatiiviset
76
22 (28,95)
26 (34.21)
Positiivinen
47
12 (25.53)
29 (61,70) B VI
0,387
0,448
Negative
87
26 (29.89)
37 (42.53)
Positiivinen
36
8 (22.22)
18 (50,00)
lyhenne: LVD: imusuonien tiheys; LVI: imusuonien invaasio; VI: laskimoiden invaasio; I-VEGFR-3: VEGFR-3-positiivisten ilmentyminen kasvaimen keskelle; P-VEGFR-3: VEGFR-3-positiivisten ilmentymisen kasvaimen kehällä.
Ennakoiva arvo LVD imusolmukkeen etäpesäke
seurauksena monimuuttuja regressioanalyysimme taulukossa 3, VEGF-C-ilmaisun ja P-LVD merkittävästi asscoiated kanssa imusolmuke etäpesäke (P
= 0,024, P
= 0,045, tässä järjestyksessä). I-LVD, VEGF-A, VEGF-D ja P-VEGFR-3 ilmaisu ei näytä ennustearvo imusolmuke etäpesäke mahasyövän. (Taulukko 3) Taulukko 3 monimuuttuja regressioanalyysimme imusolmukkeen etäpesäke
tekijät
Ristitulosuhde
95% CI

P
P-LVD
3,548
1.030 -12,226
0,045
I-LVD
1.300
0,964-1,754
0,085
VEGF-A
0,510
0,138-1,884
0,313
VEGF-C
4,069
+1,198-+13,820
0,024
VEGF-D
3,162
+0,834-+11,992
0,091
P-VEGFR-3
2,919
+0,747-+11,403
0,123
lyhenne: LVD: imusuonien tiheys; P-VEGFR-3: VEGFR-3-positiivisten ilmentymisen kasvaimen reuna.
Prognostic merkitys I-LVD ja P-LVD
yhden muuttujan eloonjääminen analyysi, P-LVD liittyi huono kokonaiselinaikaa (kuva 15, P
< 0,001), tautivapaan elinajan (kuva 16, P
< 0,001) ja syöpää erityisiä eloonjäämisen (kuva 17, P
< 0,001). Kuitenkin I-LVD korreloi kanssa nonsignificantly suuntauksena kaikki edellä vastaavasti (kokonaiselinaika, P
= 0,5835, kuva 18; tautivapaan elinajan, P
= 0,2844, kuva 19, syöpää erityisiä selviytymisen, P
= 0,6246, kuvio 20). Kuva 15 suhde P-LVD kanssa kokonaiselinaikaa (P < 0,001).
Kuva 16 suhde P-LVD kanssa tautivapaan elinajan (P < 0,001).
Kuva 17 suhde P-LVD kanssa syöpäspesifisessä eloonjäämisen (P < 0,001).
Kuva 18 väliset I-LVD kanssa kokonaiselinaikaa (P = 0,5825).
Kuvio 19 väliset I-LVD kanssa tautivapaan elinajan (P = 0,2844) .
Kuva 20 väliset I-LVD syöpää erityisiä eloonjäämisen (P = 0,6246).
monimuuttujamenetelmät regressioanalyysin indicateded että P-LVD voi olla itsenäinen ennustetekijä molemmille kokonaiselinaikaa (P
= 0,045 ) ja taudista vapaan eloonjäämisen (P
= 0,031), vaikka syöpää erityisiä selviytymisen. Lisäksi läsnäolo LVI ja TNM-luokitus voisi olla riippumaton ennustajia kaikkien kolmen eloon jäämisestä (LVI, P
= 0,040, 0,043, 0,039, TNM, P
= 0,048, 0,001, 0,001, taulukko 4) . VEGF-A ilmaisu oli itsenäinen ennustetekijöiden ennustaja vain kokonaiselinaikaa (P
= 0,033). Ei tilastollisesti merkitseviä korrelaatioita I-LVD, VEGF-C, VEGF-D: n ja P-VEGFR-3, joilla on jokin eloonjääneiden löytynyt. (Taulukko 4) Taulukko 4 Coxin regressioanalyysiä riippumattomien vaikuttavista tekijöistä tautivapaan elinajan, syöpää erityisiä elossaolo ja kokonaiselossaoloaika
Factors
Cancer-Specific Survival
tautivapaan elinajan
Kokonaiselossaoloaika

OR (95% CI) B
P
OR (95% CI)
P
OR (95% CI)
P

P-LVD
2,099 (0,91-4,87) B 0,084
2,418 (1,08-5,40) B 0,031
2,895 (1,02-8,19) B 0,045
I-LVD
1,205 (0,56-2,63)
0,639
1,325 (0,62-2,85) B 0,472
1,959 (0.90-4.24)
0.088
VEGF-A
1.386(0.50-3.83)
0.528
1.364(0.67-2.78)
0.391
2.437(1.10-5.45)
0.030
VEGF-C
2.423(0.89-6.63)
0.085
1.630(0.77-3.47)
0.205
1.562 (0,79-3,34) B 0,182
VEGF-D
0,511 (+0,19-+1,36) B 0,178
1,916 (0,90-4,10) B 0,094
1,621 (0,81-3,98)
0,190
LVI
2,716 (1,05-7,04) B 0,040
2,477 (1,03-5,97) B 0,043
2,578 (1,05-6,34) B 0,039
LNM
2.115 (0,68-6,60)
0,197
2,428 (1,18-5,02) B 0,017
3,426 (1.66-7.06)
0.001
VI
2.943(0.89-9.77)
0.078
1.697(0.75-3.87)
0.208
1.477(0.63-3.48)
0.373
P-VEGFR-3
1. 499 (0,98-2,31)
0,067
1.099 (0,53-2,28) B 0,800
1.402 (0,68-2,90) B 0,361
TNM
1,523 (1,00-2,31)
0,048
1,674 (1,25-2,25)
0,001
1,656 (1,23-2,23) B 0,001
lyhenne: P-LVD: peritumoraalista imusuonien tiheys; I-LVD: kasvaimensisäisenä imusuonien tiheys; LVI: imusuonien invaasio; LNM: imusolmuke etäpesäke; VI: laskimoiden invaasio; P-VEGFR-3: VEGFR-3-positiivisten ilmentymisen kasvaimen kehällä.
Keskustelu
Äskettäin D2-40-vasta-aine, joka on uusi markkeri lymfaattiseen endoteeliin, tunnistettiin spesifinen vasta-aine ihmisen podoplanin [13] . Monet tutkimukset ovat osoittaneet immunovärjäyksen D2-40 on spesifinen arviointi imusuonten hyökkäyksen ja imusuonten mikroverisuonitiheys ihmisen syövissä, kuten mahasyövän [14-17]. Tässä tutkimuksessa LVD ja imusuonien invaasio tunnistettiin D2-40 värjäys, ja vahvistettu kaksinkertainen värjäystä D2-40 ja CD34, jotka selvästi syrjivät lymphatics verisuonista edelleen.

• P27Kip1, säätelee glykogeenisyntaasikinaasi-3β, tulokset HMBA aiheuttama erilaistumista ihmisen mahasyövän cells
• Retrospektiivinen kohorttitutkimus kärsivien potilaiden mahan ja maksan syövät: vaikutus liitännäissairauksia ja etnisen alkuperän syövän hoitoon ja outcomes