significado diferente entre intratumoral e densidade de vasos linfáticos peritumoral no câncer gástrico: estudo retrospectivo de 123 casos

significado diferente entre intratumoral e densidade de vasos linfáticos peritumoral no câncer gástrico: estudo retrospectivo de 123 casos da arte abstracta
Fundo
pacientes com câncer gástrico na China têm pior resultado e pior prognóstico. linfangiogénese induzida por tumor desempenha um papel crucial na metástase e progressão tumoral. Os vasos linfáticos intratumorais e peritumoral deveriam ter diferentes efeitos biológicos. Três importantes factores de crescimento endotelial vascular, -A factor de crescimento (VEGF), o VEGF-C e VEGF-D, estão envolvidos no processo de activação através dos seus receptores (VEGFR). O objetivo do estudo é investigar a diferença significativa entre a densidade intratumoral e peritumoral linfática navio (LVD) em câncer gástrico e suas correlações com fatores de crescimento lymphangiogenetic.
Métodos
intratumoral LVD (I-LVD) e LVD peritumoral ( P-LVD) de 123 pacientes com câncer gástrico primário foram avaliados após coloração com D2-40, e confirmada por coloração dupla com D2-40 /CD34. atividade proliferativa do sistema linfático endotélio foi avaliada por coloração dupla com D2-40 /Ki-67. As associações foram analisados ​​entre I-LVD /P-LVD e o nível de expressão de VEGF-A, VEGF-C, VEGF-D e o receptor VEGFR-3, que foi medida por imuno-histoquimica (IHC). As correlações de I-LVD e P-LVD com o prognóstico do paciente também foram avaliados.
Resultados
(1) Os vasos linfáticos peritumoral (Policytask) eram relativamente alargada com lúmen dilatados comparação com os vasos linfáticos intratumorais (ITLS). O aumento da P-DBT foi significativamente maior do que o I-DBT (P
< 0,05). (2) P-LVD foi achado significativamente associado com metástase ganglionar (LNM) (P Art < 0,001), invasão de vasos linfáticos (LVI) (P Art < 0,001), VEGF-C (P
= 0,003), VEGF-D nível de expressão (P
= 0,005) e VEGFR-3 nível de expressão (P Art < 0,001) em tecidos peritumoral, apesar de nenhuma associação significativa foi encontrada entre acima variantes com I-LVD . No entanto, o aumento da I-DBT foi demonstrada estar associada com a diminuição do volume do tumor (P
< 0,001). Nem I-LVD nem P-DBT foi correlacionada com a expressão de VEGF-A (P
> 0,05). (3) observou-se actividade proliferativa dos vasos linfáticos no endotélio Policytask, apesar de ITLS. (4) Aumento da P-LVD, mas não I-LVD, foi indicado para ser um fator de risco independente para metástases em linfonodos por análise de regressão logística multivariada, e foi relacionada a pior sobrevida livre de doença e sobrevida global.
Conclusões
Policytask desempenham um papel na progressão do cancro gástrico. Aumento da P-LVD, mas não I-LVD, foi significativamente associada com C VEGF-D /system /VEGFR-3, e pode ser um fator de risco independente para metástases em linfonodos e fator prognóstico no câncer gástrico.
Fundo cancer
gástrico é a principal causa de morte relacionada ao câncer na China. Cerca de 80% ~ 90% dos pacientes são diagnosticados em estágio avançado com mau resultado, comumente com disseminação linfática e metástases à distância. Durante os últimos anos, linfangiogénese induzida por tumores conduzidos por factores de crescimento linfangiogênicas foi firmemente estabelecida como um novo mecanismo para a progressão do cancro. Hoje em dia, um número crescente de especialistas acreditam que linfáticos intratumorais (ITLS, os lymphtics dentro dos tumores) e linfáticos peritumoral (Policytask, lymphtics na periferia) desempenham papéis biológicos exatamente distintas no comportamento tumoral e prognóstico em diferentes tipos de tumores. No cancro gástrico, vários estudos têm indicado que os pacientes com maior I-LVD teve a maior presença de metástase ganglionar na fase inicial [1], enquanto a P-LVD pode ser um fator de risco independente para metástases em linfonodos e prognóstico [2]. No entanto, a função de I-LVD e P-LVD e suas correlações com a expressão VEGF ainda não foram esclarecidas.
Uma série de estudos têm demonstrado os papéis cruciais de expressões VEGFs na progressão tumoral e prognóstico no câncer gástrico. O VEGF-C e VEGF-D, dois membros da família VEGF, têm sido definidos como os factores de crescimento linfangiogênicas e desempenham um papel importante na linf angiogénese tumoral, através da activação de VEGFR-3, que é expresso principalmente em células endoteliais linfáticas (LECs). VEGF-C é um regulador dominante da linfangiogênese no câncer gástrico precoce e avançado tanto [3, 4]. O aumento da expressão de VEGF-C tinha uma correlação significativa com LVD, LVI e metástases em linfonodos [5], mas seu valor prognóstico permaneceu controversa. O VEGF-D foi envolvido na propagação linfática de células gástricas cancerosas e pode ser um marcador de prognóstico independente [6]. O VEGFR-3 também foi indicado como um factor de prognóstico [6]. Um outro factor de crescimento, VEGF-A, a qual regulada a angiogénese, também foi considerado para estimular a linfangiogénese por ligação a VEGFR-2 recentemente. Aumento VEGF-A nível de pacientes com câncer gástrico expressão tinha sido provado estar relacionado com a densidade microvascular (MVD), metástase hematogênica, disseminateion peritoneal e mau prognóstico. No entanto, não se sabe se ambos os lymphtics intratumorais e peritumoral são estimulados pelos três VEGF segregadas pelas células tumorais, ou se o jogo I-LVD e P-LVD significativamente diferentes papéis biológicos em metástases em linfonodos e prognóstico no câncer gástrico.
Métodos
pacientes e tumorais espécimes
amostras de tumor foram obtidas de 123 pacientes com câncer gástrico primário que aceitaram gastrectomia no Departamento de Cirurgia, Tongji Hospital da Universidade de Tongji de janeiro de 2000 a dezembro de 2003. Nenhum deles havia recebido pré-operacional quimioterapia ou tratamento com radioterapia. A população do estudo consistiu de 80 homens (65%) e 43 mulheres (35%). A média de idade no momento do diagnóstico foi de 65 anos (variando entre 28 e 87 anos). Trinta e um casos de câncer gástrico precoce (EGC) e 92 casos de cancro gástrico avançado (AGC) estavam envolvidos em. Estágio histológica foi baseada na classificação UICC TNM. Outras características clínicas foram resumidos na tabela 1. Todos os pacientes foram acompanhados clinicamente durante pelo menos 5 anos após a cirurgia. O tempo médio de acompanhamento foi de 56 meses (variou de 6 a 85 meses). A análise de sobrevida foi realizada, incluindo a sobrevida global (OS), sobrevida livre de doença (DFS) e sobrevida específica por câncer (CSS). OS, DFS e CSS foi calculado a partir da data da cirurgia para último contato para pacientes vivendo, à data do último follow-up para pacientes livres da doença, bem como à data da morte induzida por gástrica-câncer, respectivamente. Quatro casos EGC e 52 casos de AGC foram ocorreu recorrência. Onze pacientes tiveram disseminação peritoneal, 26 pacientes metástase hepática, e 19 casos recidiva no estômago após a operação. Quarenta pacientes morreram de câncer gástrico. O presente estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa do Hospital Tongji afiliada com a Universidade de Tongji. Os tecidos gástricos normais foram recolhidos como amostras de controlo. Todos os resultados foram realizadas por dois patologistas de forma independente, e os meios foram calculados para cada caso com base nos dados obtained.Table 1 Correlações de LVD com os parâmetros clínico e VEGFs expressões
Fatores
N
I-LVD
P-LVD


média ± SD
P
média ± SD
P
Tumor diferenciação
0,802
0,739
High diferenciado
11
8,18 ± 2,44
12,07 ± 4,49
Mederately /pobre diferenciado
tamanho 112
8,00 ± 2,27
12,46 ± 3,60
Tumor
< 0,001 Art < 0,001 Art < 3,2 cm
57
8,93 ± 2,34
11,18 ± 3,80
≥ 3,2 centímetros
66
7,23 ± 1,91
13,50 ± 3,21
profundidade de invasão
0,433
0,026
pT1-2
69
8,16 ± 2,51
11,78 ± 3,52
pT3-4
54
7,83 ± 1,96
13,26 ± 3,71
metástase linfática
0,056 * Art < 0,001
negativo
57
8,47 ± 2,27
10,50 ± 3,42
Positive
66
7,65 ± 2,24
13,98 ± 3,10
LVI
0,700 Art < 0,001
negativo
83
8,08 ± 2,33
11,23 ± 3,29
positiva
40
7,91 ± 2,22
14,36 ± 3,44
VI
0,905 Art < 0,001
negativo
86
8,00 ± 2,38
11,65 ± 3,81
positiva
estágio 37
8,05 ± 2,67
14,24 ± 2,53
TNM
0,067 Art < 0,001
I - II
71
8,34 ± 2,42
11,33 ± 3,29
III - IV
52
7,58 ± 2,01
13,92 ± 3,66
VEGF-A expressão
0,527
0,091
Baixa
44
7,84 ± 2,51
11,68 ± 3,54
alta
79
8,26 ± 2,21
12,84 ± 3,69
VEGF-C de expressão
0,092 *
0,003
Baixa
42
7,55 ± 2,37
11,06 ± 3,26
alta
81
8,00 ± 2,34
13,13 ± 3,69
expressão de VEGF-D
0,514
0,005
Baixa
72
7,90 ± 2,47
11,65 ± 3,44
alta
51
8,18 ± 1,99
13,53 ± 3,73
P
, teste t; P
*, Mann-Whitney U
teste. Abreviatura: LVD: densidade de vasos linfáticos; LVI: invasão de vasos linfáticos. VI:. Invasão venosa
imunohistoquímica único para D2-40, VEGF-A, VEGF-C, VEGF-D e VEGFR-3
Para a coloração immunohistichemical, 4 slides embebidos em parafina mm de espessura foram cortadas de cada estudo quadra. As secções foram tratadas com 0,3% H 2O 2 durante 10 min à temperatura ambiente. Para a recuperação de antigénio, as lâminas foram aquecidas num forno de micro-ondas contendo citrato /L de sódio 0,01 mmol (pH 6,0). As lâminas foram incubadas a 4 ° C durante a noite em uma bandeja de humidade com anticorpos primários, VEGF-A (anticorpo monoclonal de ratinho, 1: 100, Dako), VEGF-C (anticorpo policlonal de cabra, 1: 100, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), o VEGF-D (anticorpo policlonal de cabra, 1: 100, Santa Cruz), VEGFR-3 (anticorpo policlonal de cabra, 1: 100, Santa Cruz) e D2-40 (anticorpo monoclonal de ratinho, 1: 100, Dako), respectivamente. As lâminas foram lavadas três vezes em 0,1 mmol /l de PBS durante 2 min, e incubou-se durante 30 min à temperatura ambiente com anticorpo de cabra anti-coelho /rato de peroxidase de rábano (Envision, DAKO, CA) para identificar o alvo. As secções foram desenvolvidas com 3 '3-diaminobenzidina. A IgG de cabra normal foi serviu como controlo negativo para a coloração de reacção de VEGF-C, VEGF-D e VEGFR-3, e a IgG de coelho normal foi serviu de controlo negativo para a coloração de reacção do VEGF-A e D2-40.
coloração imuno-histoquímica de casal para D2-40 /CD34
a coloração imuno-histoquímica de casal para D2-40 /CD34 foi ainda processado para avaliar a especificidade de expressão D2-40 no endotélio linfático. A proposta foi de acordo com as instruções do fabricante (Não: 95-9999, Histostain-DS Kit, Zymed, CA). Parafina-embedded 4 mm cortes foram desparafinados com xilol e reidratados. As lâminas foram imersas em solução de têmpera da peroxidase durante 10 min. Após ser incubada durante a noite a 4 ° C com os anticorpos primários contra CD34 (anticorpo monoclonal de ratinho, 1: 100, DAKO, Carpinteria, CA), as secções foram tratadas com soro de solução de bloqueio, sendo em seguida incubadas com o anticorpo secundário biotinilado (Dako ). Subsequentemente, o conjugado de fosfatase alcalina foi utilizado para cada secção durante 10 min. E, em seguida, as secções foram tratadas com a mistura de substrato cromogénio e intensificador coloração dupla. A solução de bloqueio de soro foi novamente aplicado, as lâminas foram incubadas com anticorpo primário contra o outro D2-40 (anticorpo monoclonal de ratinho, 1: 200, GM36190, Gene Tech Company Limited, Xangai, China) durante 60 min e o segundo anti-imunoglobulina biotinilada (Ig) (DAKO) foi tratada. Após a aplicação com o conjugado de enzima durante 10 minutos, as lâminas foram incubadas com a mistura de tampão de substrato, solução de cromogénio e 0,6% de peróxido de hidrogénio para HRP e monitorizado sob um microscópio. A água da torneira contendo 0,05% de Tween-20 terminada a reacção. Para controlos negativos, as secções foram coradas com um soro não imune, em vez de a mesma concentração de anticorpo primário. Os vasos sanguíneos positivos CD34 mostrou a intensa coloração vermelha, e os vasos linfáticos positivos D2-40 mostrou a mancha roxa escura.
Coloração dupla para D2-40 /Ki-67
para detectar a atividade proliferativa dos vasos linfáticos , foi realizado o método de imuno duplo para D2-40 /Ki-67. O anticorpo D2-40 foi utilizado para corar o endotélio dos vasos linfáticos, em conjunto com 67-Ki (anticorpo monoclonal de coelho, 1: 200, Santa Cruz, EUA) para corar as células proliferativas. Ki-67 de coloração (vermelho) foi desenvolvido com o anticorpo secundário conjugado com fosfatase alcalina, e em seguida, a coloração D2-40 (Brown) foi desenvolvido com o anticorpo secundário conjugado com peroxidase. vasos linfáticos proliferativas foram confirmados por Ki-67 núcleos positivamente coradas, que também tiveram coloração citoplasmática positiva concomitante D2-40 células positivas. A taxa de vasos duplamente marcada foi determinada por contagem dos núcleos dos vasos D2-40-positivos associados a tumores (100 núcleos em cada tumor) [7].
Assesment de LVD
intratumoral DBT (pontos quentes foram localizados no centro do tumor) e LVD peritumoral (hot spots foram localizados no tecido periferia dentro de dois milímetros de tumor adjacente ao front invasivo) foram avaliadas separadamente [2, 7-9]. A análise quantitativa da densidade de vasos linfáticos foi realizada em secções que eram single-coradas para D2-40. Cinco áreas com as regiões a maioria dos vasos linfáticos ( "hot spots") foram escolhidos × 40 ampliação por microscopia de luz. LVD foi avaliada pela contagem de todos os navios manchadas pelo × 200 ampliação. O número médio de vasos linfáticos avaliadas foi determinada como DBT. invasão de vasos linfáticos (LVI) foi detectado a estar presente se, pelo menos, um grupo de células de tumor era em D2-40 vasos positivos [10]. Pontuação e contagem foram realizadas independentemente por dois investigadores que não tinham informação clínica dos pacientes. O valor médio de P-LVD e I-LVD foram calculados para cada caso.
Assesment de VEGF e VEGFR-3 expressões
coloração positiva do VEGF-A, -C e -D expressão foi definida como os estudos anteriores [6 , 11]. Resultados da coloração para os três VEGFs acima foram avaliadas semi-quantitativamente por uma avaliação imuno-histoquímica combinada com a percentagem de células de tumor que mostram a imunorreactividade específica. intensidade da coloração foi dado com quatro tipos: nenhum (0), fraco (1), moderada (2) e forte (3). A percentagem de células de carcinoma positivos foi dado com os graus: 0 (0%), 1 (1% ~ 10%), 2 (11% ~ 49%), 3 (50% ~ 100%), respectivamente. A pontuação total foi calculado multiplicando a intensidade da coloração e a percentagem de células tumorais positivas. A mediana da pontuação foi seleccionado como o nível de corte de acordo com a qual os tumores foram classificados em baixo (0 ~ 3) e tumores de elevada expressão (4 ~ 6) [6, 11]. VEGFR-3-positivos vasos foram determinados como descrito anteriormente [12]. Os vasos de três áreas hot spots foram contadas aos × 400 ampliação. A coloração foi considerada positiva quando mais de 5% do endotélio mostrou uma coloração [6]. vasos peritumoral VEGFR-3-positivos (P-VEGFR-3) Os navios de VEGFR-3-positivos intratumorais e (I-VEGFR-3) foram avaliadas como acima LVD.
análise estatística
análise estatística foi realizada utilizando as Estatísticas pacote para o software de Ciências Sociais (versão 11.5; SPSS Inc, Chicago, IL). Os espécimes foram divididos em duas categorias de acordo com os valores médios de I-LVD e P-LVD, respectivamente. As correlações de I-LVD e P-LVD com parâmetros e VEGFs clínico-patológicas expressões foram analisados ​​por amostras independentes t
teste ou Mann-Whitney U
teste. As correlações entre a expressão de VEGFR-3, com parâmetros clínicos foram analisados ​​por testes de Qui-quadrado de Pearson. Os fatores relacionados cerca de metástase linfática no câncer gástrico foram realizadas utilizando a análise de regressão logística multivariante. As curvas de sobrevida foram obtidos usando o método Kalplan-Meier e comparadas pelo teste de log-rank. A análise multivariada foi avaliada usando o método de risco proporcional de Cox. Toda a análise estatística foi dois lados com significado definido como P Art < 0.05.
Resultados
intratumoral e características linfáticos peritumoral em câncer gástrico
Os vasos linfáticos D2-40-positivos tinham morfologia irregular e lúmen de paredes finas. vasos linfáticos nos tecidos gástricos foram localizados principalmente na camada de submucosa (Figura 1). Os vasos linfáticos (D2-40-posição) e vasos sanguíneos (CD34-posição) foram claramente distinguidos pela coloração mais duas vezes (Figura 2). vasos linfáticos intratumorais foram geralmente em colapso, pequeno e irregular (Figura 3), mas alguns vasos linfáticos noncollapsed mostrou lúmen aberto, e ocasionalmente contidos invadindo aglomerados células tumorais (Figura 4). Os vasos linfáticos peritumoral na parte superficial e profunda da submucosa foram todos alargada com as cavidades linfáticos dilatados (Figura 5, Figura 6). A invasão de vasos linfáticos foi observada em 38 casos. Nenhuma correlação significativa foi encontrada entre os números de LVD no centro do tumor e nos tecidos de controle (8,02 ± 2,28 vs 8,13 ± 1,04, P Restaurant > 0,05). No entanto, os números de P-DBT (12,15 ± 3,75) foram significativamente maiores do que em tecidos de controlo e do centro do tumor (P
< 0,05). Nenhuma diferença estatística foi encontrada entre os dois métodos de detecção de vasos linfáticos (coloração única para D2-40 e coloração dupla para D2-40 /CD34) (I-LVD, 8,02 ± 2,28 vs 7,80 ± 2,33; P-LVD, 12,15 ± 3,75 vs 12,42 ± 3,67, P
> 0,05). Figura 1 Os lymphantics D2-40-positiva localizados principalmente na camada de submucosa no tecido gástrico (setas). IHC, ampliação:. × 200
Figura 2 A coloração imuno-histoquímica de casal para D2-40 e CD34 distinguiu claramente os vasos linfáticos (seta preta) de vasos sanguíneos (seta vermelha). . IHC, ampliação: × 400
Figura 3 Os vasos linfáticos intratumorais em câncer gástrico foram entrou em colapso (seta); , Ampliação coloração imuno-histoquímica dupla:. × 200
Figura 4 O cluster células cancerosas invasoras estavam presentes na invasão de vasos linfáticos (LVI). coloração dupla imuno-histoquímica para D2-40 /CD34, ampliação:. × 400
Figura 5 Os vasos linfáticos peritumoral em câncer gástrico foram ampliadas com lúmen dilatados localizadas na submucosa superficial. , Ampliação IHC:. × 200
Figura 6 Os vasos linfáticos peritumoral em câncer gástrico foram ampliadas com lúmen dilatados localizados em profunda parte da submucosa. IHC, ampliação:. × 200
Correlações de I-LVD e P-LVD com parâmetros clínico-patológicas e VEGFs expressões
As correlações de I-LVD e P-LVD com os parâmetros clínico-patológicas foram apresentados na Tabela 1. O aumento da I- LVD foi significativamente associada com o tamanho do tumor menor (P Art < 0,001). Nenhuma correlação foi encontrada entre o I-LVD e expressões VEGFs, enquanto a P-LVD foi significativamente correlacionada com o tamanho do tumor maior (P Art < 0,001), profundidade da invasão (P
= 0,026), metástase linfonodal (P
< 0,001), LVI (P
< 0,001), invasão venosa (VI) (P
< 0,001), fase TNM (P
< 0,001), o VEGF-C ( P
= 0,003) e a expressão de VEGF-D (P = 0,005
).
expressão dos três VEGF mostraram uma coloração citoplasmática positiva em células de cancro gástrico. nível de expressão elevado do VEGF-A (Figura 7), o VEGF-C (Figura 8) e VEGF-D (Figura 9) foram observados em 64,2% (79/123), 65,9% (81/123) e 41,5% (51 /123) de amostras, respectivamente. Nem I-LVD nem P-DBT foi significativamente associado com a expressão de VEGF-A (P
> 0,05). Figura 7 VEGF-A expressão no citoplasma em cancro gástrico. IHC, ampliação:. × 400
Figura expressão 8 VEGF-C no citoplasma no câncer gástrico. IHC, ampliação:. × 400
Figura expressão 9 VEGF-D no citoplasma no câncer gástrico. IHC, a ampliação:. × 200
actividades proliferativas em linfáticos intra- e peritumorais
vasos linfáticos proliferativas foram encontrados na periferia do tumor (Figura 10). A taxa de núcleos dos vasos linfáticos-Ki-67 positivo na periferia do tumor foi de (0,81 ± 0,13)%. Nenhuma vaso linfático proliferativa foi encontrada no centro do tumor (Figura 11). Linfáticos invasão podia ser observada nos tecidos peritumorais (Figura 12). Figura núcleos dos vasos linfáticos 10 Ki-67-positivas (setas) foram detectadas na periferia do tumor. coloração dupla para D2-40 /Ki-67, a ampliação:. × 400
Figura 11 Sem Ki-67 expressão positiva nos vasos linfáticos núcleos intratumorais. coloração dupla para D2-40 /Ki-67, a ampliação:. × 400
Figura 12 linfática vasos invasão foi detectado no tecido peritumoral (setas). coloração dupla para D2-40 /Ki-67, a ampliação:. × 400
VEGFR-3 nos vasos linfáticos expressão
A expressão de VEGFR-3-positivo em periferia do tumor (P-VEGFR-3) foi encontrada em 55 dos 123 casos, ocasionalmente, com os conjuntos de células cancerosas invasoras (Figura 13). No entanto, apenas 34 dos 123 casos tinha uma expressão de VEGFR-3-positivo no centro do tumor (I-VEGFR-3) (Figura 14). Estes navios eram em sua maioria de paredes finas, de forma irregular e não continha nenhuma ou poucas hemácias. Figura 13 A expressão de VEGFR-3-positiva nas células endoteliais citoplasma na periferia do tumor (P-VEGFR-3), ocasionalmente, com cachos de células cancerosas invasoras (setas). IHC, a ampliação:. × 400
Figura 14 As expressões VEGFR-3-positivos foram localizados no centro do tumor (setas). . IHC, ampliação: × 200 Online em tecidos tumorais periféricas, VEGFR-3 expressões foram significativamente correlacionados sim com alta expressão de VEGF-C (P Art < 0,000), alta expressão de VEGF-D (P =
0,043), o aumento da P-LVD (P Art < 0,001) ea presença de LVI (P
= 0,003), do que com VEGF-a expressão, aumentou I-LVD, invasão venosa e linfática metástase (P
> 0,05). Não foram observadas correlações entre o I-VEGFR-3 expressão e parâmetros clínicos (P Restaurant > 0,05). (Tabela 2) Tabela 2 Correlações de expressão VEGFR-3 na localização do tumor differenr com parâmetros clínicos
Fatores
N

I-VEGFR-3
P-VEGFR-3


N (%)
P

N (%)
P
VEGF-A expressão
0,107
0,067
Baixa
44
16 (36,36)
15 (34,09)
alta
79
18 (22.78)
40 (50,63)
expressão VEGF-C
0,795 Art < 0,001
Baixa
42
11 (26.19)
9 (21,43)
alta
81
23 (28.40)
46 (56,79)
VEGF expressão D
0,968
0,043
Baixa
72
20 (27,78)
27 (37,50)
alta
51
14 (27,45)
28 (54,90)
P-LVD
0,813 Art < 0,001 Art < 14
60
16 (26,67)
10 (16,67)
≥ 14
63
18 (28,57)
45 (71,43)
I-LVD
0,412
0,153 Art < 8
58
14 (24.14)
22 (37.93)
≥ 8
65
20 (30,77)
33 (50,77)
metástases linfonodais
0,934
0,190
negativo
55
19 (34.55)
21 (38,18)
positiva
68
15 (22.06)
34 (50,00)
LVI
0,681
0,003
Negative
76
22 (28,95)
26 (34,21)
positiva
47
12 (25.53)
29 (61,70)
VI
0,387
0,448
negativo
87
26 (29.89)
37 (42.53)
positiva
36
8 (22,22)
18 (50,00)
Abreviatura: LVD: densidade de vasos linfáticos; LVI: invasão de vasos linfáticos; VI: invasão venosa; I-VEGFR-3: VEGFR-3 expressão positiva no centro do tumor; P-VEGFR-3: expressão positiva VEGFR-3 na periferia do tumor
valor preditivo de DBT para metástase ganglionar
Como resultado da análise de regressão logística multivariada na Tabela 3, a expressão de VEGF-C e P-LVD. foram significativamente asscoiated com metástases em linfonodos (P
= 0,024, P
= 0,045, respectivamente). I-LVD, VEGF-A, VEGF-D e expressão P-VEGFR-3 não apresentaram o valor preditivo de metástases em linfonodos no câncer gástrico. (Tabela 3) Tabela 3 multivariada análise de regressão logística para metástase ganglionar
Fatores
odds ratio
95% CI

P
P-LVD
3.548
1.030 -12,226
0,045
I-LVD
1.300
0,964-1,754
0,085
VEGF-A
0.510
0,138-1,884
0,313
VEGF-C
4,069
1,198-13,820
0,024
VEGF-D
3.162
,834-11,992
0,091
P-VEGFR-3
2.919
,747-11,403
0,123
Abreviatura: LVD: densidade de vasos linfáticos; P-VEGFR-3:. Expressão positiva VEGFR-3 na periferia do tumor
significado prognóstico da I-LVD e P-LVD
Na análise de sobrevida univariada, P-LVD foi associado à sobrevida global pobres (Figura 15, P Art < 0,001), sobrevida livre de doença (Figura 16, Art <P; 0,001) e sobrevida específica por câncer (Figura 17, P Art < 0,001). No entanto, I-LVD foi correlacionado com uma tendência não significativamente em relação a todos o (sobrevida global acima, respectivamente, P = 0,5835
, Figura 18, a sobrevida livre de doença, P = 0,2844
, Figura 19, a sobrevida específica para o câncer, P
= 0,6246, Figura 20). Figura 15 Relação entre P-LVD com a sobrevida global (P < 0,001).
Figura 16 Relação entre P-LVD com sobrevida livre de doença (P < 0,001).
Figura 17 Relação entre P-LVD com cancer-specific sobrevivência (P < 0,001)..
Figura 18 Relação entre I-LVD com a sobrevida global (P = 0,5825)
Figura 19 Relação entre I-LVD com sobrevida livre de doença (P = 0,2844) .
Figura 20 Relação entre I-LVD com a sobrevida específica por câncer (P = 0,6246).
análise de regressão multivariada indicateded que P-LVD poderia ser um fator independente de prognóstico tanto para a sobrevida global (P = 0,045
) e sobrevida livre de doença (P
= 0,031), apesar de a sobrevida específica para o câncer. Além disso, a presença de LVI e estágio TNM poderia servir como preditores independentes para todos os três sobreviventes (LVI, P
= 0,040, 0,043, 0,039; estágio TNM, P
= 0,048, 0,001, 0,001, Tabela 4) . VEGF-A expressão foi o preditor prognóstico independente apenas para a sobrevida global (P
= 0,033). Nenhuma correlações estatisticamente significativas para I-LVD, VEGF-C, VEGF-D e VEGFR-P-3 com qualquer das sobrevivências foram encontrados. (Tabela 4) Tabela 4 Cox análise de regressão dos fatores independentes que afetam a sobrevida livre de doença, sobrevida específica do câncer e sobrevida global
Fatores
Cancer-Specific Survival
Disease-Free Survival
sobrevida global

OR (IC 95%)

P
OR (95% CI)
P
OR (IC 95%)
P

P-LVD
2.099 (0,91-4,87)
0,084
2.418 (1,08-5,40)
0,031
2.895 (1,02-8,19)
0,045
I-LVD
1.205 (0,56-2,63)
0,639
1.325 (0,62-2,85)
0,472
1.959 (0.90-4.24)
0.088
VEGF-A
1.386(0.50-3.83)
0.528
1.364(0.67-2.78)
0.391
2.437(1.10-5.45)
0.030
VEGF-C
2.423(0.89-6.63)
0.085
1.630(0.77-3.47)
0.205
1.562 (0,79-3,34)
0,182
VEGF-D
0,511 (0,19-1,36)
0,178
1.916 (0,90-4,10)
0,094
1.621 (0,81-3,98)
0,190
LVI
2.716 (1,05-7,04)
0,040
2.477 (1,03-5,97)
0,043
2.578 (1,05-6,34)
0,039
LNM
2.115 (0,68-6,60)
0,197
2.428 (1,18-5,02)
0,017
3,426 (1.66-7.06)
0.001
VI
2.943(0.89-9.77)
0.078
1.697(0.75-3.87)
0.208
1.477(0.63-3.48)
0.373
P-VEGFR-3
1. 499 (0,98-2,31)
0,067
1.099 (0,53-2,28)
0,800
1.402 (0,68-2,90)
0,361
estágio TNM
1.523 (1,00-2,31)
0,048
1.674 (1,25-2,25)
0,001
1.656 (1,23-2,23)
0,001
Abreviatura: P-LVD: peritumoral densidade de vasos linfáticos; I-LVD: densidade de vasos linfáticos intratumoral; LVI: invasão de vasos linfáticos; LNM: linfonodo metástases; VI: invasão venosa; P-VEGFR-3:.
Expressão positiva do VEGFR-3 na periferia do tumor Discussão
Recentemente, o anticorpo D2-40, um novo marcador para endotélio linfático, foi identificado como sendo o anticorpo específico contra podoplanina humano [13] . Muitos estudos têm indicado o imunocoramento D2-40 é específico para avaliação de invasão linfática e densidade microvascular linfática em cancros humanos, incluindo no câncer gástrico [14-17]. Neste estudo, LVD e invasão de vasos linfáticos foram identificadas por D2-40 coloração, e confirmada por coloração dupla para D2-40 e CD34, o que claramente discriminados linfáticos dos vasos sanguíneos mais.

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