A diferencia significativa entre la densidad intratumoral y peritumoral de vasos linfáticos en el cáncer gástrico: un estudio retrospectivo de 123 casos

A diferencia significativa entre intratumoral y peritumoral densidad de vasos linfáticos en el cáncer gástrico: un estudio retrospectivo de 123 casos
Resumen Antecedentes

pacientes con cáncer gástrico en China tienen un peor resultado y un peor pronóstico. linfagiogénesis inducida por el tumor desempeña un papel crucial en la metástasis y la progresión tumoral. Se suponía que los vasos linfáticos intratumorales y peritumoral tener diferentes efectos biológicos. Tres principales factores de crecimiento, -a vascular factor de crecimiento endotelial (VEGF), VEGF-C y VEGF-D, están involucrados en el proceso de activación a través de sus receptores (VEGFRs). El propósito del presente estudio es investigar la diferencia significativa entre la densidad intratumoral y peritumoral linfático buque (LVD) en el cáncer gástrico y sus correlaciones con factores de crecimiento lymphangiogenetic.
Métodos
intratumoral LVD (I-LVD) y LVD peritumoral ( P-LVD) de 123 pacientes con cáncer gástrico primario se evaluaron después de teñir con D2-40, y confirmado por doble tinción con D2-40 /CD34. La actividad proliferativa de los linfáticos del endotelio se evaluó mediante doble tinción con D2-40 /Ki-67. Las asociaciones se analizaron entre I-LVD /P-LVD y el nivel de expresión de VEGF-A, VEGF-C, VEGF-D y el receptor VEGFR-3, que se midió mediante técnicas de inmunohistoquímica (IHC). También se valoran las correlaciones de I-LVD y P-LVD con el pronóstico del paciente.
Resultados gratis (1) Los linfáticos peritumoral (LPT) eran relativamente ampliada con el lumen dilatados en comparación con los vasos linfáticos intratumorales (ITLS). El aumento de P-LVD fue significativamente mayor que la I-LVD (P Hotel < 0,05). (2) P-LVD se encuentra asociado significativamente con metástasis en los ganglios linfáticos (MNV) (P Hotel < 0,001), linfática invasión de vasos (LVI) (P Hotel < 0,001), VEGF-C (P
= 0,003), el nivel de expresión de VEGF-D (P = 0,005
) y VEGFR-3 nivel de expresión (P Hotel < 0,001) en los tejidos peritumoral, a pesar de no se encontró asociación significativa entre las variantes anteriormente con I-LVD . Sin embargo, el aumento de I-LVD se demostró que se asocia con una disminución de volumen de los tumores (P
< 0,001). Ni yo ni-LVD LVD-P se correlacionó con la expresión de VEGF-A (P Hotel > 0,05). (3) se observó actividad de proliferación de vasos linfáticos del endotelio en LPT, a pesar de ITLS. (4) El aumento de P-LVD, pero no me-LVD, se indicó que era un factor de riesgo independiente para la metástasis de los ganglios linfáticos mediante análisis de regresión logística multivariante, y estaba relacionado con una peor supervivencia libre de enfermedad y la supervivencia global.
Conclusiones
LPT juegan un papel en la progresión del cáncer gástrico. El aumento de P-LVD, pero no me-LVD, se asoció significativamente con el VEGF-C sistema /D /VEGFR-3, y podría ser un factor de riesgo independiente para la metástasis de los ganglios linfáticos y un factor pronóstico en el cáncer gástrico.
Antecedentes cáncer gástrico
es la principal causa de muerte por cáncer en china. Alrededor del 80% ~ 90% de los pacientes se diagnostican en etapa avanzada con un mal resultado, comúnmente con la diseminación linfática y metástasis a distancia. Durante los últimos años, linfangiogénesis inducida por tumor impulsado por factores de crecimiento lymphangiogenic se ha establecido firmemente como un nuevo mecanismo para la progresión del cáncer. Hoy en día, un número creciente de los expertos creen que los vasos linfáticos intratumorales (ITLS, los lymphtics dentro de los tumores) y linfáticos peritumoral (LPT, lymphtics en la periferia) desempeñan papeles biológicos distintos exactamente en el comportamiento del tumor y el pronóstico en diferentes tipos de tumores. En el cáncer gástrico, varios estudios han indicado que los pacientes con mayor I-LVD tuvieron la mayor presencia de metástasis en los ganglios linfáticos en la fase inicial [1], mientras que P-LVD podría ser un factor de riesgo independiente para la metástasis de los ganglios linfáticos y el pronóstico [2]. Sin embargo, la función de la I-LVD y P-LVD y su correlación con la expresión de VEGF no se han aclarado todavía.
Un número de estudios han demostrado el papel crucial de los VEGF expresiones en la progresión tumoral y el pronóstico en el cáncer gástrico. VEGF-C y VEGF-D, dos miembros de la familia VEGF, se han definido como los factores de crecimiento lymphangiogenic y jugar un papel importante en la linfangiogénesis tumor a través de la activación de VEGFR-3, que se expresa principalmente en las células endoteliales linfáticas (LEC). VEGF-C es un regulador dominante de linfangiogénesis tanto en el cáncer gástrico precoz y avanzada [3, 4]. El aumento de la expresión de VEGF-C tenía una correlación significativa con LVD, LVI y la metástasis de los ganglios linfáticos [5], pero su valor pronóstico sigue siendo controvertido. VEGF-D participó en linfática propagación de las células de cáncer gástrico y podría ser un marcador pronóstico independiente [6]. VEGFR-3 también se indicó como factor pronóstico [6]. Otro factor de crecimiento, VEGF-A, que regula la angiogénesis, también se consideró para estimular linfangiogénesis mediante la unión a VEGFR-2 recientemente. El aumento de VEGF-A nivel de expresión de los pacientes con cáncer gástrico se había demostrado estar relacionada con la densidad microvascular (MVD), metástasis hematógena, disseminateion peritoneal y mal pronóstico. Sin embargo, aún se desconoce si los dos lymphtics intratumoral y peritumoral son estimuladas por las tres VEGF secretadas por las células tumorales, o si el juego I-LVD y P-LVD significativamente diferentes papeles biológicos en la metástasis de los ganglios linfáticos y el pronóstico en el cáncer gástrico.
Métodos pacientes y muestras
tumorales
muestras tumorales se obtienen a partir de 123 pacientes con cáncer gástrico primario que aceptaron la gastrectomía en el Departamento de Cirugía, hospital de Tongji de la Universidad Tongji de enero de 2000 a diciembre de 2003. Ninguno de ellos había recibido preoperacional quimioterapia o radioterapia. La población del estudio consistió en 80 hombres (65%) y 43 mujeres (35%). La edad promedio al momento del diagnóstico fue de 65 años (osciló de 28 a 87 años). Treinta y un casos de cáncer gástrico temprano (EGC) y 92 casos de cáncer gástrico avanzado (AGC) estaban involucrados en. Histológico etapa se basa en la clasificación TNM de la UICC. Otras características clínicas se resumen en la Tabla 1. Todos los pacientes han sido seguidos clínicamente durante al menos 5 años después de la cirugía. El tiempo medio de seguimiento fue de 56 meses (osciló de 6 a 85 meses). Se realizó un análisis de supervivencia, incluyendo la supervivencia global (SG), la supervivencia libre de enfermedad (DFS) y la supervivencia específica del cáncer (CSS). OS, DFS y CSS se calculó a partir de la fecha de la cirugía para el último contacto para los pacientes que viven, a la fecha de la última visita de seguimiento para los pacientes libres de enfermedad, y hasta la fecha de la muerte inducida por el cáncer gástrico, respectivamente. Cuatro casos de LIG y 52 casos de AGC se produjo recurrencia. Once pacientes tenían diseminación peritoneal, 26 pacientes metástasis hepáticas, y 19 casos recayeron en el estómago después de la operación. Cuarenta pacientes murieron de cáncer gástrico. El presente estudio fue aprobado por el Comité Ético de Investigación del Hospital de Tongji afiliado a la Universidad de Tongji. Los tejidos gástricos normales se recogieron como muestras de control. Todos los resultados se llevaron a cabo por dos patólogos de forma independiente, y los medios se calcularon para cada caso basado en los datos obtained.Table 1 Correlaciones de LVD con clinicopathological parámetros y los VEGF expresiones
Factores
N
I-LVD
P-LVD


media ± SD
P
media ± SD
P
tumor diferenciación
0,802 0,739

alta diferenciado página 11
8,18 ± 2,44 12,07 ± 4,49

Mederately /mal diferenciado
tamaño de 112
8,00 ± 2,27 12,46 ± 3,60

tumor
< 0,001 Hotel < 0,001 Hotel < 3,2 cm
57
8,93 ± 2,34 11,18 ± 3,80

≥ 3,2 cm
66
7,23 ± 1,91
13.50 ± 3.21
profundidad de la invasión
0,433 0,026

pT1-2
69
8,16 ± 2,51 11,78 ± 3,52

pT3-4
54
7,83 ± 1,96 13,26 ± 3,71

metástasis de ganglios linfáticos
0,056 * Hotel < 0,001
negativo
57
8,47 ± 2,27 10,50 ± 3,42

positivo
66
7,65 ± 2,24 13,98 ± 3,10

LVI
0,700 Hotel < 0,001
negativo
83
8,08 ± 2,33
11.23 ± 3.29
positiva
40
7,91 ± 2,22 14,36 ± 3,44

VI
0,905 Hotel < 0,001
negativo
86
8,00 ± 2.38
11.65 ± 3.81
positiva
etapa 37
8,05 ± 2,67 14,24 ± 2,53

TNM
0,067 Hotel < 0,001
I - II
71
8,34 ± 2,42 11,33 ± 3,29

III - IV
52
7,58 ± 2,01 13,92 ± 3,66

VEGF-A expresión
0,527
0,091
bajo
44
7,84 ± 2,51 11,68 ± 3,54

alto
79
8,26 ± 2,21 12,84 ± 3,69

expresión de VEGF-C
0,092 0,003 *

bajo
42
7,55 ± 2,37 11,06 ± 3,26

alto
81
8,00 ± 2,34 13,13 ± 3,69

La expresión de VEGF-D
0,514 0,005

bajo
72
7,90 ± 2,47 3,44 ± 11.65

alto
51
8.18 ± 1.99 13.53
± 3,73
P
, prueba de la t; P
*, U de Mann-Whitney
prueba. Abreviatura: LVD: densidad de los vasos linfáticos; LVI: linfática invasión de vasos. VI:. Invasión venosa
inmunohistoquímica único de D2-40, VEGF-A, VEGF-C, VEGF-D y VEGFR-3
Para la tinción immunohistichemical, 4 micras de espesor diapositivas incluidos en parafina se cortaron de cada estudio bloquear. Las secciones se trataron con 0,3% H 2O 2 durante 10 minutos a temperatura ambiente. Para la recuperación de antígenos, los portaobjetos se calentaron en un horno de microondas que contiene citrato /L de sodio 0,01 mmol (pH 6,0). Los portaobjetos se incubó a 4 ° C durante la noche en una bandeja de humedad con anticuerpos primarios, VEGF-A (anticuerpo monoclonal de ratón, 1: 100, DAKO), VEGF-C (anticuerpo policlonal de cabra, 1: 100, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), VEGF-D (anticuerpo policlonal de cabra, 1: 100, Santa Cruz), VEGFR-3 (anticuerpo policlonal de cabra, 1: 100, Santa Cruz) y D2-40 (anticuerpo monoclonal de ratón, 1: 100, DAKO), respectivamente. Los portaobjetos se enjuagaron tres veces en 0,1 mmol /L de PBS durante 2 min, y se incubó durante 30 min a temperatura ambiente con rábano picante de cabra anti-conejo /ratón peroxidasa (Envision, DAKO, CA) para identificar el destino. Las secciones se desarrollaron con 3 '3-diaminobencidina. La IgG de cabra normal se sirvió como control reacción negativa para la tinción de VEGF-C, VEGF-D y VEGFR-3, y de la IgG de conejo normal se sirvió como control de reacción negativa para la tinción de VEGF-A y D2-40.
tinción inmunohistoquímica doble para D2-40 /CD34 Francia el doble tinción inmunohistoquímica para D2-40 /CD34 fue objeto de transformación para evaluar la especificidad de la expresión D2-40 en el endotelio linfático. La propuesta fue de acuerdo a las instrucciones del fabricante (nº 95-9999, Histostain DS-Kit, Zymed, CA). Embebido en parafina de 4 micras secciones se deparaffinized con xileno y rehidratada. Los portaobjetos se sumergieron en solución de temple peroxidasa durante 10 min. Después de haber sido incubadas durante la noche a 4 ° C con los anticuerpos primarios contra CD34 (anticuerpo monoclonal de ratón, 1: 100, DAKO, Carpinteria, CA), las secciones se trataron con solución de bloqueo de suero, seguido por ser incubadas con el anticuerpo secundario biotinilado (DAKO ). Posteriormente, el conjugado de fosfatasa alcalina se utiliza para cada sección de 10 min. Y luego, las secciones se trataron con la mezcla de sustrato cromógeno y el doble de potenciador de la tinción. El suero se aplica de nuevo la solución de bloqueo, los portaobjetos se incubaron con otro anticuerpo primario contra D2-40 (anticuerpo monoclonal de ratón, 1: 200, GM36190, Gene Tech Company Limited, Shanghai, China) durante 60 minutos y el segundo biotinilado anti-inmunoglobulina (Ig) (DAKO) se trató. Después de aplicar con el conjugado de enzima durante 10 minutos, los portaobjetos se incubaron con la mezcla de tampón de sustrato, solución de cromógeno y peróxido de hidrógeno 0,6% para HRP y controlados con un microscopio. El agua del grifo que contiene 0,05% de Tween-20 terminó la reacción. Para los controles negativos, las secciones se tiñeron con un suero no inmune en vez de la misma concentración de anticuerpo primario. Los vasos sanguíneos CD34 positivas mostraron la intensa mancha roja, y los D2-40 vasos linfáticos positivos mostraron la mancha de color púrpura oscuro.
Tinción doble para D2-40 /Ki-67
Para la detección de la actividad proliferativa de los vasos linfáticos , se llevó a cabo el método de la doble inmunotinción de D2-40 /Ki-67. El anticuerpo D2-40 se utilizó para manchar los vasos linfáticos del endotelio, junto con 67-Ki (anticuerpo de conejo monoclonal, 1: 200, Santa Cruz, EE.UU.) para teñir las células proliferativas. Ki-67 tinción (rojo) se desarrolló con anticuerpo secundario conjugado con fosfatasa alcalina, y luego D2-40 tinción (marrón) se desarrolló con anticuerpo secundario conjugado con peroxidasa. vasos linfáticos proliferativos fueron confirmados por Ki-67 núcleos con tinción positiva que también tenían concomitante tinción citoplásmica positiva en D2-40 células positivas. La tasa de buques de doble marcado se determinó contando los núcleos de los vasos D2-40-positivos asociados a tumores (100 núcleos en cada tumor) [7].
Evaluación de la LVD LVD
intratumoral (puntos calientes se encuentran en el centro del tumor) y LVD peritumoral (puntos calientes se encuentran en el tejido periferia dentro de 2 mm de tumor adyacente a la parte delantera invasivo) se evaluaron por separado [2, 7-9]. El análisis cuantitativo de la densidad de vasos linfáticos se realizó en secciones que eran para D2-40-manchado sola. Cinco zonas con la mayor parte de las regiones linfáticos ( "hot spots") fueron escogidos al 40 × magnificación con el microscopio óptico. LVD se evaluó contando todos los vasos manchados en 200 × magnificación. Se determinó la media del número de vasos linfáticos evaluados como LVD. invasión de vasos linfáticos (LVI) se detectó a estar presente si al menos un grupo de células del tumor fue en D2-40 vasos positivos [10]. Puntuación y el recuento se llevaron a cabo de forma independiente por dos investigadores que no tenían la información clínica de los pacientes. La media P-LVD y I-LVD se calcularon para cada caso.
Evaluación del VEGF y VEGFR-3 expresiones
La tinción positiva de VEGF-A, -C y -D expresión se definió como los estudios anteriores [6 , 11]. resultados de la tinción para las tres VEGFs anteriores se evaluaron semicuantitativamente por un marcador inmunohistoquímico combinado con el porcentaje de células tumorales que muestran inmunorreactividad específica. intensidad de la tinción se da con cuatro grados: ninguno (0), débil (1), moderada (2) y fuerte (3). El porcentaje de células de carcinoma positivas se dio con los grados: 0 (0%), 1 (1% ~ 10%), 2 (11% ~ 49%), 3 (50% ~ 100%), respectivamente. La puntuación total se calcula multiplicando la intensidad de la tinción y el porcentaje de células tumorales positivas. La mediana de la puntuación fue seleccionado como el nivel de corte según la cual los tumores se clasificaron en bajo (0 ~ 3) y de alta expresión (4 ~ 6) tumores [6, 11]. VEGFR-3-positivos vasos se determinaron como se describe anteriormente [12]. Los vasos de tres áreas de puntos calientes se contaron en 400 × magnificación. La tinción se considera como positiva cuando más de 5% de endotelio mostró una tinción [6]. vasos peritumoral VEGFR-3-positivos (P-VEGFR-3) vasos VEGFR-3-positivas y intratumorales (I-VEGFR-3) se evaluaron como más arriba LVD. El análisis estadístico
El análisis estadístico se realizó a través de las estadísticas el paquete de software de Ciencias sociales (versión 11.5; SPSS Inc., Chicago, IL). Las muestras se dividieron en dos categorías en función de los valores de la mediana de la I-LVD y P-LVD, respectivamente. Las correlaciones de I-LVD y P-LVD con los parámetros clínico-VEGF y expresiones se analizaron mediante t de muestras independientes
prueba o de Mann-Whitney U
prueba. Las correlaciones de VEGFR-3 de expresión con los parámetros clínicos se analizaron mediante pruebas de Pearson Chi-cuadrado. Los factores relacionados sobre metástasis en los ganglios linfáticos en el cáncer gástrico se llevaron a cabo mediante el análisis de regresión logística multivariante. Las curvas de supervivencia se obtuvieron utilizando el método Kalplan-Meier y se compararon mediante la prueba de log-rank. El análisis multivariado de la supervivencia se evaluó utilizando el método de riesgos proporcionales de Cox. Todo el análisis estadístico fue de dos lados con significación definida como P Hotel < 0.05.
Resultados
intratumoral y peritumoral características linfáticos en el cáncer gástrico
Los vasos linfáticos D2-40-positivos tenían morfología irregular y el lumen de paredes delgadas. Los vasos linfáticos en los tejidos gástricos se encuentran principalmente en la capa de submucosa (Figura 1). Los vasos linfáticos (D2-40-posición) y los vasos sanguíneos (CD34-posición) se distinguen claramente por más de doble tinción (Figura 2). vasos linfáticos intratumorales por lo general se derrumbó, pequeñas e irregulares (Figura 3), pero algunos vasos linfáticos no colapsado mostraron lumen abierto, y en ocasiones contenían la invasión de células tumorales grupos (Figura 4). Los vasos linfáticos peritumoral en la parte superficial y profundo de submucosa fueron todos ampliada con las cavidades linfáticos dilatados (Figura 5, Figura 6). Se observó la invasión de vasos linfáticos en 38 casos. No se encontró correlación significativa entre el número de LVD en el centro del tumor y en los tejidos de control (8,02 ± 2,28 vs 8,13 ± 1,04, P Restaurant > 0,05). Sin embargo, el número de P-LVD (12,15 ± 3,75) fueron significativamente más alta que en los tejidos de control y el centro de tumor (P
< 0,05). no se encontraron diferencias estadísticas entre los dos métodos de detección de vasos linfáticos (solo para la tinción D2-40 y la doble tinción para D2-40 /CD34) (I-LVD, 8,02 ± 2,28 vs 7,80 ± 2,33; P-LVD, 12,15 ± 3,75 vs. 12,42 ± 3,67, P Hotel > 0,05). Figura 1 Los lymphantics D2-40-positivo ubicados principalmente en la capa de submucosa en el tejido gástrico (flechas). IHC, la ampliación:. × 200
figura 2, la doble tinción inmunohistoquímica para CD34 D2-40 y distingue claramente los vasos linfáticos (flecha negro) de los vasos sanguíneos (flecha roja). . IHC, la ampliación: 400 ×
Figura 3 Los vasos linfáticos intratumorales en el cáncer gástrico se derrumbó (flecha); Doble tinción inmunohistoquímica, la ampliación:. × 200
Figura 4 El clúster células cancerosas invasoras estaban presentes en la invasión de vasos linfáticos (LVI). Doble tinción inmunohistoquímica para D2-40 /CD34, la ampliación:. × 400
Figura 5 Los vasos linfáticos peritumoral en el cáncer gástrico se ampliaron con el lumen dilatados localizados en la submucosa superficial. IHC, la ampliación:. × 200
Figura 6 Los vasos linfáticos peritumoral en el cáncer gástrico se ampliaron con el lumen dilatados localizados en profundidad parte de la submucosa. IHC, la ampliación:. × 200
correlaciones de I-LVD y P-LVD con parámetros clínico y los VEGF expresiones
Las correlaciones de I-LVD y P-LVD con parámetros clínico se muestran en la Tabla 1. Aumento de la I- LVD se asoció significativamente con menor tamaño del tumor (P Hotel < 0,001). No hay correlaciones se encontró entre la I-LVD y los VEGF expresiones, mientras que P-LVD se correlacionó significativamente con el mayor tamaño del tumor (P Hotel < 0,001), la profundidad de la invasión (P = 0,026
), metástasis de ganglios linfáticos (P
< 0,001), LVI (P
< 0,001), invasión venosa (VI) (P
< 0,001), el estadio TNM (P
< 0,001), VEGF-C ( P
= 0,003) y la expresión de VEGF-D (P = 0,005
).
la expresión de los tres VEGF mostraron una tinción citoplásmica positiva en células de cáncer gástrico. Alto nivel de expresión de VEGF-A (Figura 7), VEGF-C (Figura 8) y VEGF-D (Figura 9) se observaron en 64,2% (79/123), 65,9% (81/123) y 41,5% (51 /123) de las muestras, respectivamente. Ni yo ni-LVD LVD-P se encontró una relación significativa con la expresión de VEGF-A (P Hotel > 0,05). Figura 7 VEGF-A expresión en el citoplasma en el cáncer gástrico. IHC, la ampliación:. × 400
expresión figura 8 VEGF-C en el citoplasma en el cáncer gástrico. IHC, la ampliación:. × 400
expresión figura 9 VEGF-D en el citoplasma en el cáncer gástrico. IHC, la ampliación:. × 200
actividades proliferativas en los vasos linfáticos intra y peritumoral
vasos linfáticos proliferativas se encuentran en la periferia del tumor, (Figura 10). La tasa de los núcleos de los vasos linfáticos Ki-67-positivas en la periferia del tumor fue de (0,81 ± 0,13)%. No vaso linfático proliferativa se encuentra en el centro del tumor (Figura 11). Linfáticos invasión se pudo observar en los tejidos peritumorales (Figura 12). se detectaron Figura núcleos de los vasos linfáticos 10 Ki-67-positivas (flechas) en la periferia del tumor. Doble tinción para D2-40 /Ki-67, la ampliación:. × 400
Figura 11 No Ki-67 expresión positiva en los núcleos linfáticos intratumorales. Se detectó × 400
Figura 12 vasos linfático invasión en el tejido peritumoral (flechas): Doble tinción para D2-40 /Ki-67, ampliación.. Doble tinción para D2-40 /Ki-67, la ampliación:. × 400
VEGFR-3 en los vasos linfáticos México La expresión de VEGFR-3-positivo en la periferia del tumor (P-VEGFR-3) se encontró en el 55 de los 123 casos, de vez en cuando con los racimos de células de cáncer invasoras (Figura 13). Sin embargo, sólo 34 de 123 casos tenían una expresión de VEGFR-3-positiva en el centro del tumor (I-VEGFR-3) (Figura 14). Estas embarcaciones eran en su mayoría paredes delgadas, de forma irregular y no contenían ninguna o pocas glóbulos rojos. Figura 13 La expresión de VEGFR-3-positiva en las células endoteliales citoplasma en la periferia del tumor (P-VEGFR-3), de vez en cuando con los racimos de células de cáncer invasor (flechas). IHC, la ampliación:. × 400
Figura 14 Las expresiones VEGFR-3-positivos se encuentra en el centro del tumor (flechas). . IHC, la ampliación: 200 × Hoteles en los tejidos tumorales periféricas, VEGFR-3 expresiones se correlacionaron significativamente más bien con VEGF-C de alta expresión (P Hotel < 0,000), VEGF-D de alta expresión (P =
0,043), el aumento de P-LVD (P
< 0,001) y la presencia de LVI (P
= 0,003), que con VEGF-A expresión, el aumento de I-LVD, invasión venosa y linfática metástasis en los ganglios (P Hotel > 0,05). No se observaron correlaciones entre la I-VEGFR-3 de expresión y los parámetros clínicos (P Restaurant > 0,05). (Tabla 2) Tabla 2 Correlaciones de VEGFR-3 de expresión en la localización del tumor differenr con parámetros clínicos
Factores
N

I-VEGFR-3
P-VEGFR-3


N (%)
P

N (%)
P
VEGF-A expresión
0,107 0,067

bajo
44
16 (36.36)
15 (34.09)
alto
79
18 (22.78)
40 (50.63): perfil de expresión de VEGF-C
0,795 Hotel < 0,001
bajo
42 página 11 (26.19) página 9 (21.43)
alto
81
23 (28.40): perfil 46 (56.79)
VEGF D expresión
0,968 0,043

bajo
72
20 (27.78)
27 (37.50)
alto
51 página 14 (27.45)
28 (54.90)
P-LVD
0,813 Hotel < 0,001 Hotel < 14
60
16 (26.67)
10 (16,67)
≥ 14
63
18 (28.57)
45 (71.43)
I-LVD
0,412 0,153
Hotel < 8
58 página 14 (24.14)
22 (37,93)
≥ 8
65
20 (30,77)
33 (50.77)
metástasis de ganglios linfáticos
0,934 0,190

negativo 55
página 19 (34.55)
21 (38.18)
positiva
68
15 (22.06)
34 (50.00)
LVI
0,681 0,003

negativo
76
22 (28.95)
26 (34.21)
positiva
47 página 12 (25.53)
29 (61.70)
VI
0,387
0,448
negativo
87
26 (29.89)
37 (42.53)
positiva
36 página 8 (22,22)
18 (50.00)
Abreviatura: LVD: densidad de los vasos linfáticos; LVI: linfática invasión de vasos; VI: la invasión venosa; I-VEGFR-3: VEGFR-3 expresión positiva en el centro del tumor; P-VEGFR-3: VEGFR-3 expresión positiva en la periferia del tumor
Valor predictivo de LVD para la metástasis de los ganglios linfáticos
Como resultado del análisis multivariante de regresión logística en la Tabla 3, la expresión de VEGF-C y P-LVD. asscoiated fueron significativamente con metástasis en los ganglios linfáticos (P = 0,024
, P = 0,045
, respectivamente). I-LVD, VEGF-A, VEGF-D y P-VEGFR-3 de expresión no mostraron el valor predictivo de metástasis en los ganglios linfáticos en el cáncer gástrico. (Tabla 3) Tabla 3 Análisis multivariado de regresión logística para la metástasis de los ganglios linfáticos
Factores
odds ratio
95% IC

P
P-LVD
3.548
1.030 -12.226 0.045

I-LVD
1.300
0,964-1,754 0,085

VEGF-A
0.510
0,138-1,884 0,313

VEGF-C
4.069
1.198 - 13.820 0.024

VEGF-D
3.162
0,834 a 11,992 0,091

P-VEGFR-3
2.919
0,747 a 11,403 0,123

Abreviatura: LVD: densidad de los vasos linfáticos; P-VEGFR-3:. VEGFR-3 expresión positiva en la periferia del tumor
Significado pronóstico de la I-LVD y P-LVD
En el análisis de supervivencia univariante, P-LVD se asoció con la supervivencia global pobre (Figura 15, P Hotel < 0,001), la supervivencia libre de enfermedad (Figura 16, P Hotel < 0,001) y la supervivencia específica del cáncer (Figura 17, P Hotel < 0,001). Sin embargo, I-LVD se correlacionó con una tendencia no significativa hacia todos los (supervivencia global por encima, respectivamente, P = 0,5835
, Figura 18; la supervivencia libre de enfermedad, P = 0,2844
, Figura 19; la supervivencia específica del cáncer, P = 0,6246
, Figura 20). Figura 15 Relación entre P-LVD con la supervivencia global (P < 0,001).
Figura 16 Relación entre P-LVD con la supervivencia libre de enfermedad (P < 0,001).
Figura 17 Relación entre P-LVD con específica por cáncer de supervivencia (P < 0,001)..
Figura 18 Relación entre la I-LVD con la supervivencia global (p = 0,5825) guía Figura 19 Relación entre la I-LVD con la supervivencia libre de enfermedad (p = 0,2844) .
Figura 20 Relación entre la I-LVD con la supervivencia específica del cáncer (p = 0,6246).
análisis de regresión multivariante indicateded que P-LVD podría ser un factor pronóstico independiente de la supervivencia global (p = 0,045
) y la supervivencia libre de enfermedad (P = 0,031
), a pesar de la supervivencia específica del cáncer. Por otra parte, la presencia de LVI y el estadio TNM podría servir como los predictores independientes de los tres supervivientes (LVI, P = 0,040
, 0.043, 0.039, estadio TNM, P = 0,048
, 0,001, 0,001, Tabla 4) . VEGF-A expresión era el predictor pronóstico independiente sólo para la supervivencia global (p = 0,033
). No se observaron correlaciones significativas para I-LVD, VEGF-C, VEGF-D y P-VEGFR-3 con cualquiera de las supervivencias. (Tabla 4) Tabla 4 Cox análisis de regresión de los factores independientes que afectan a la supervivencia libre de enfermedad, la supervivencia específica del cáncer y la supervivencia global
Factores
supervivencia cáncer específica
Supervivencia sin Enfermedad
supervivencia global

OR (95% IC)

P
OR (95% IC)
P
OR (IC del 95%)
P

P-LVD
2.099 (0,91-4,87)
0,084
2.418 (1,08-5,40)
0,031
2.895 (01/02 a 08/19) 0.045

I-LVD
1.205 (0,56-2,63)
0,639
1.325 (0,62-2,85)
0.472 1.959
(0.90-4.24)
0.088
VEGF-A
1.386(0.50-3.83)
0.528
1.364(0.67-2.78)
0.391
2.437(1.10-5.45)
0.030
VEGF-C
2.423(0.89-6.63)
0.085
1.630(0.77-3.47)
0.205
1.562 (0,79-3,34)
0,182
VEGF-D
0,511 (0,19 a 1,36)
0,178
1.916 (0,90-4,10)
0,094
1.621 (0,81 a 3,98)
0.190
LVI
2.716 (1.5 a 7.4)
0.040
2.477 (1,03-5,97)
0,043
2.578 (1,05-6,34)
0.039
MNV
2.115 (0,68-6,60)
0.197
2.428 (01.18 a 05.02)
0,017 3,426
(1.66-7.06)
0.001
VI
2.943(0.89-9.77)
0.078
1.697(0.75-3.87)
0.208
1.477(0.63-3.48)
0.373
P-VEGFR-3
1. 499 (0,98-2,31)
0,067
1.099 (0,53-2,28)
0.800
1.402 (0,68-2,90)
0,361
estadio TNM
1.523 (1,00 a 2,31)
0,048
1.674 (01/25 a 02/25) 0.001

1.656 (01/23 a 02/23) 0.001

Abreviatura: P-LVD: peritumoral densidad de los vasos linfáticos; I-LVD: intratumoral densidad de los vasos linfáticos; LVI: linfática invasión de vasos; LNM: metástasis a los ganglios linfáticos; VI: la invasión venosa; P-VEGFR-3:. VEGFR-3 expresión positiva en la periferia del tumor
Discusión
Recientemente, el anticuerpo D2-40, un nuevo marcador para el endotelio linfático, fue identificado como el anticuerpo específico contra podoplanin humano [13] . Muchos estudios han indicado la inmunotinción de D2-40 es específico para la evaluación de la invasión linfática y la densidad de microvasos linfáticos en los cánceres humanos, incluyendo en el cáncer gástrico [14-17]. En este estudio, LVD y la invasión de los vasos linfáticos se identificaron mediante tinción D2-40, y se confirmaron mediante doble tinción para D2-40 y CD34, lo que claramente discriminada vasos linfáticos de los vasos sanguíneos más.

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