Expresia proteínov s mnohopočetnou liekovou rezistenciou spojené a ich vzťah k pooperačnej individualizovanej chemoterapie v žalúdočnej cancer

Vyjadrenia multirezistentných proteínov súvisiacich s rezistenciou a ich vzťah k pooperačnej individualizované chemoterapie u karcinómu žalúdka
abstraktné
pozadia
adjuvantnej chemoterapie môže znížiť zvyškový nádorové bunky a prevenciu relapsu, však, nie všetci pacienti sú vhodné pre adjuvantnej chemoterapie. Screening vhodných pacientov na základe molekulárnych markerov pre individualizovanú adjuvantnej chemoterapie je nutná.
Metódy
období od júna 2002 do júna 2004, 119 pacientov, ktorí podstúpili radikálnu gastrektómii boli retrospektívne analyzované. Niektorí pacienti mali adjuvantnej chemoterapii na báze platiny a 5-FU pre štyri až šesť cyklov. Topoizomerázu II (topo II) záporná, mnohopočetné liekové rezistencie proteín (MRP), pozitívne a glutatión-S-transferáza π (GST-π) pre pozitívne, boli považované za tri rizikových faktorov, ktoré môžu byť spojené s rezistenciou chemoterapiou a zlou prognózou. Pacienti boli rozdelení do dvoch skupín :. Skupinu vysoko rizikové (≥2 rizikových faktorov) a skupiny s nízkym rizikom (menej ako 2 rizikové faktory), a boli analyzované recidívy a pacient doba prežitia obidvoch skupín
výsledky
priemerná doba recidívy skupiny s nízkym rizikom bola významne dlhší než u skupiny s vysokým rizikom (21,29 ± 11,10 v porovnaní s 15,16 ± 8,05 mesiaca, P Hotel &0,01). Miera prežitia 3 roky a 5-ročnej skupiny s vysokým rizikom boli 57,4% a 42,6%, ale nemala žiadny významný rozdiel v porovnaní s 66,2% a 58,5% v skupine s nízkym rizikom (P Hotel > 0,05). V skupine s vysokým rizikom sadzby 3-ročné prežitie u pacientov s /bez chemoterapie boli 62,1% a 52,0% a miera prežitia 5 rokov bolo 44,8% a 40,0% v uvedenom poradí, ale rozdiel nebol štatisticky významný (P Hotel &0,05). V skupine s nízkym rizikom, sadzby 3-ročné prežitie u pacientov s /bez chemoterapie boli 81,2% a 51,5% a mieru prežitia 5-roku bolo 71,9% a 45,5% v uvedenom poradí, tieto rozdiely boli štatisticky významné (p
. < 0,05)
Závery
Kombinovaná detekcie mnohopočetné liekovej rezistencie (MDR) spojené so štúdiom proteíny topo II, MRP a GST-π môže byť výhľadovo cenné pre pooperačné individualizované chemoterapie a ďalej predpovedanie výsledkov žalúdočných pacientov s rakovinou.
Kľúčové
žalúdok novotvary multirezis proteíny spojené s rezistenciou chemoterapiou prognóza pozadí
stále existuje vysoké riziko recidívy a metastáz po radikálnej operácii žalúdka a adjuvantnej chemoterapie môže znížiť pooperačné zvyškové nádorové bunky a zabrániť recidíve [1, 2]. V posledných rokoch, nové výsledky randomizovaných kontrolovaných štúdií ukazujú, že pooperačná chemoterapia môže zlepšiť prognózu pacientov [3, 4]. Tieto výsledky boli prijaté v pokynoch klinickej praxi NCCN rakovinou žalúdka a sú odporúčané ako základ pooperačných liečebných programov. Avšak, niektoré otázky ešte treba riešiť: (1) analýza podskupín ukazuje, že niektorí pacienti (ženského, s negatívnymi uzlinami, neskorom štádiu, staršieho, etcetera
) nemajú prospech z adjuvantnej liečby a (2), nastať problémy s chemoterapiou toxicita a compliance, ktorý spôsobí, že niektorí pacienti odstúpiť z liečby z dôvodu nežiaducich účinkov.
tak, pooperačné adjuvantnej chemoterapie je u niektorých pacientov prospešné, však môže zvýšiť liečebný zaťaženia a zníženie imunity iných pacientov. Preto je príliš skoro na to určiť program ako štandardný adjuvantnej chemoterapii rakoviny žalúdka. Existuje ešte veľa otázok, ktoré vyžadujú vysoko kvalitný výskum s cieľom odpovedať, než individualizované adjuvantnej chemoterapie sa stáva štandardom. To, čo je obzvlášť stojí za zmienku, je skutočnosť, že Toga štúdia potvrdila hodnotu Herceptin pri liečbe pokročilého karcinómu žalúdka [5]. V poslednej dobe, Deng a jeho kolegovia stanovené prvýkrát detailné molekulárnej mapa genómových zmien v karcinómu žalúdka, ktorá odhalila niekoľko sľubných cieľov pre podtypu špecifickej liečby [6]. Screening príslušné pacientov na základe molekulárnych markerov sa stal hlavnou smer výskumu individualizované chemoterapia [7].
Multidrug spojené s rezistenciou proteínmi topoizomerázu II (topo II), proteín mnohopočetné liekové rezistencie (MRP) a glutatión-S-transferáza π (GST π) sú základom multirezistencii v zhubných nádorov [8, 9]. Bolo potvrdené, že MRP a GST-π nadmernej expresie a znížená expresia topo II sú dôležité mechanizmy sprostredkovania mnohých liekom rezistenciu [10]. Z tohto dôvodu sme vykonali túto štúdiu mnohopočetné liekovej rezistencie (MDR)
génov asociovaných proteínov v pooperačnom individualizovanú liečbu rakoviny žalúdka.
Metódy
Pacienti a vzorky tkaniva
období od júna 2002 do júna 2004, čo je celkom 119 pacientov, ktorí podstúpili radikálnu gastrektómii na oddelení brušnej chirurgie, nemocnice Zhejiang rakoviny, boli retrospektívne analyzované. Z týchto pacientov, 77 prípadov boli muži a 42 prípadoch išlo o ženy, vo veku 25 až 78 rokov (priemer 57,3 ± 6,7 rokov). Fáza I /II zahrnuté 39 prípadov a fázy III /IV zahrnuté v 80 prípadoch; lézie ≥ 5 cm boli zistené v 76 prípadoch a lézií < 5 cm boli zistené v 43 prípadoch; a pacienti s /bez lymfatických uzlín metastázami boli identifikované pre 93 prípadov a 26 prípadov, v uvedenom poradí. Žiadny z pacientov bola predoperačnej chemoterapii alebo inú liečbu nádoru, a niektorí pacienti mali adjuvantnej chemoterapii na báze platiny a 5-fluóruracilu sú (5-FU) pre štyri až šesť cyklov. Písomný informovaný súhlas bol získaný od všetkých účastníkov štúdie. Štúdia bola schválená etickou komisiou o Zhe Jiang nemocnice rakoviny.
Imunohistochemické farbenie
Protilátky použité v tejto štúdii boli zakúpené od GBI Company (Golden Bridge International, Inc., Everett, WA, USA). Imunohistochemické farbenie bolo vykonané na formalínom fixovaných, 4-um hrubé, vzorky parafínových tkanív. Pankreasu, hrubého čreva, vaječníkov a vzorky boli použité ako pozitívne kontroly pre Topo II, MRP, a GST-π, v danom poradí. Vzorky boli hodnotené nezávisle na sebe dvomi patológmi v slepom spôsobom. Bunky s hnedo sfarbené farbenie boli považované iba za pozitívne. Intenzita expresie MDR
spojené so štúdiom proteínov bola stratifikovaná do štyroch skupín, ktoré boli hodnotené nasledovne: 1) negatívna (-) nemá žiadny významný cytomembrány, nukleárna alebo cytoplazmatickú zafarbenie alebo sa farbením v < 10% nádorových buniek; 2) 1+ mal znateľný farbením v 10 až 25% nádorových buniek; 3) 2+ mal znateľný farbením v 25 až 75% nádorových buniek; a 4) 3+ mal znateľný farbením v >. 75% nádorových buniek
sledovanie pacienta
Pacienti dostávali rutinné sledovanie po radikálnej gastrektómii raz za štvrť roka po dobu dvoch rokov a potom raz za pol roka ( pacientov, ktorí dostávali chemoterapiu boli nadviazala cyklov chemoterapie). Topo II záporná, MRP pozitívne a GST-π pozitívne boli považované za tri rizikové faktory, ktoré môžu byť spojené s odporom chemoterapiou a zlou prognózou. Pacienti boli rozdelení do dvoch skupín: do skupiny vysoko rizikovej (≥2 rizikových faktorov) a skupina s nízkym rizikom (menej ako 2 rizikové faktory), a boli analyzované nádor recidíva a pacient doba prežitia obidvoch skupín
. štatistická analýza
všetky dáta experimentu boli integrované do uceleného súboru dát. Číselné údaje boli zaznamenané priamo a nameraných dát boli opísané ako medián a rozsah. Štatistická analýza bola vykonaná na SPSS verzie softvéru 16.0 (SPSS Inc. Chicago, IL), a P Hotel <. 0,05 bola považovaná za štatisticky významnú
Výsledky
Pozitívne farbenie topo II bolo známe, že sa vyjadril v bunkovom jadre (1A), vzhľadom k tomu, MRP a GST-π boli vyjadrené v cytoplazme malígnych buniek (Obrázok 1B a 1C). Obrázok 1 Imunohistochemické farbenie s mnohopočetnou liekovou proteínov súvisiacich s rezistenciou. Imunohistochemické farbenie topo II bola zistená v bunkovom jadre (pôvodné zväčšenie x 400). B Imunohistochemické farbenie MRP bol uznaný byť vyjadrený v cytoplazme malígnych buniek (pôvodná zväčšenie x 400). C Imunohistochemické farbenie GST-π bol uznaný byť vyjadrený v cytoplazme malígnych buniek (pôvodná zväčšenie x 400).
Výrazu rýchlosť topo II v normálnych tkanivách (75,1%) bola vyššia ako v nádorovom tkanive (73,9 %) (nie je významný, P Hotel &0,05). Ak porovnáme dobre, stredne a zle diferencované miera expresie, významná korelácia bola preukázaná medzi expresiou topo II a úroveň diferenciácie (86,3%, 64,5% a 64,9% v uvedenom poradí, P Hotel &0,05). Pokiaľ ide o MRP, pozitívne predstavovala v nádorových tkanivách, 42,9%, zatiaľ čo všetky normálne žalúdočnej tkanivá neboli zafarbené. Žiadne významné rozdiely v expresii MRP boli nájdené vo vzťahu k klinicko-faktory. Pozitívne Miera GST-π u pacientov s rakovinou žalúdka bola vyššia ako u normálnych tkanív (51,3% oproti 23,2%, P Hotel &0,05). Významné rozdiely v expresiu GST-π boli nájdené tiež vo vzťahu k pohlavia (muž proti žena, 59,7% oproti 35,7%, P Hotel &0,05) a diferenciácie (dobre, stredne a zle, 40,5%, 41,9%, a 64,7 %, v uvedenom poradí, P Hotel < 0,05) (tabuľka 1) .Table 1 expresie topo II, MRP, a GST-π a ich vzťah s klinicko-patologickým faktorov
rysy
Cases
topo II
MRP
GST-π
+ (%)
χ2

P
+ (%)
χ2
P
+ (%)
χ2
P
sex
Muž
77
54 (70,1%)
29 (37,7%)
46 (59,7%)
Female
42
34(81.0%)
1.65
0.198
22(52.4%)
2.40
0.121
15(35.7%)
6.27
0.012*
Age
≤50 y
33
24 (72,7%)
16 (48,5%)
14 (42,4%), Hotel > 50 y
86
64(74.4%)
0.03
0.851
35(40.7%)
0.59
0.442
47(54.7%)
1.42
0.232
Tumor Veľkosť
≥5 cm
76
59 (77,6%)
35 (46,1%)
40 (52,6%), Hotel < 5 cm
43
29(67.4%)
1.48
0.224
16(37.2%)
0.88
0.349
21(48.8%)
0.16
0.691
Differentiation
No
51
44 (86,3%)
20 (39,2%)
33 (40,5%)
Stredne
31.
20 (64,5%)
13 ( 41,9%)
13 (41,9%)
Poorly
37
24(64.9%)
7.04
0.029*
18(48.6%)
0.79
0.672
15(64.7%)
6.47
0.039*
TNM staging
I /II
39
25 (64,1%)
17 (43,6%)
16 (41,0%)
III/IV
80
63(78.8%)
2.92
0.087
34(42.5%)
2.57
0.109
45(56.3%)
2.43
0.119
Lymph Uzol
Pozitívne
93
71 (76,3%)
40 (43,0%)
47 (50,5%)
Negative
26
17(65.4%)
1.27
0.260
11(42.3%)
0.004
0.949
14(53.8%)
0.09
0.765
* P Hotel < 0.05.
Miera prežitia 3 a 5-Year of the 119 pacientov bolo 57,3% a 49,2%, resp. Žiadny štatisticky významný rozdiel nebol pozorovaný tiež medzi jedného proteínu (topo II, MRP alebo GST-π) prejavu a recidívy alebo prežitie času. Keď boli pacienti rozdelení do dvoch skupín: skupina vysoko rizikovej (≥2 rizikových faktorov) a skupina s nízkym rizikom (menej ako 2 rizikové faktory), priemerná doba opakovania v skupine s nízkym rizikom bol 21,29 ± 11,10 mesiacov a bol výrazne dlhšia ako ± 8,05 15.16 mesiacov skupine s vysokým rizikom (P Hotel < 0,01). 3 roky a 5-ročné prežitie v skupine s vysokým rizikom bol 57,4% a 42,6%; však, tam bol žiadny významný rozdiel v porovnaní s 66,2% a 58,5% v skupine s nízkym rizikom (P Hotel > 0,05).
V skupine s vysokým rizikom, sadzby u pacientov 3-ročné prežitie sa chemoterapiu a pacienti bez chemoterapie bola 62,1% a 52,0%, a miera prežitia 5 rokov bolo 44,8% a 40,0%, ale rozdiel nebol štatisticky významný (P Hotel &0,05) (Obrázok 2). V skupine s nízkym rizikom, sadzby 3-ročné prežitie u pacientov s chemoterapiou a pacientov bez chemoterapie boli 81,2% a 51,5%, miera prežitia 5 rokov bolo 71,9% a 45,5%, a rozdiel bol štatisticky významný (P
< 0,05) (obrázok 3). Obrázok 2 Celkové prežívanie pacientov s alebo bez chemoterapie v skupine s vysokým rizikom.
Obrázok 3 Celkové prežívanie pacientov s alebo bez chemoterapie v skupine s nízkym rizikom.
diskusie
Adjuvantná chemoterapia po operácii bolo považované za nevyhnutné odstrániť systémové mikrometastatické aj pozostatky malígnych buniek v čo najväčšej možnej miere, v konečnom dôsledku zlepšenie prežitia [11, 12]. Bohužiaľ, tak ďaleko, tento druh stratégie adjuvantnej liečby bol neuspokojivý v dôsledku mnohopočetné liekovej rezistencie (MDR) malígnych buniek do rôznych chemoterapeutických činidiel [13, 14]. Z tohto dôvodu, detekcia a vyhodnotenie MDR
génov alebo proteínov môže pomôcť vodítko adjuvantnej chemoterapii u karcinómu žalúdka a stanoviť prognózu pacientov.
MRP, jeden z najviac študovaných mechanizmov MDR, pôsobí ako ATP-dependentný vonkajšej doprave čerpadlá a znižuje akumuláciu intracelulárneho liekov znížením ko-transportný mechanizmus glutatiónu [15]. Niektoré predchádzajúce štúdie tiež ukázali, že nadmerná expresia MRP najčastejšie predpovedá MDR. MRP prepožičiava rezistenciu na alkylačné činidlá, cyklofosfamid a iných drog [16]. GST-π je multifunkčný enzým, ktorý hrá rozhodujúcu úlohu v bunkovej detoxikácii katalýzou konjugácii redukovaného glutatiónu na hydrofóbne a elektrofilní zlúčeniny [17]. GST-π sa považuje za spojené s eflux cis-diaminodichloroplatin (CDDP), fluóruracilu sú a doxorubicínu (DOX) prostredníctvom ATP viažuci kazeta transportéry [18]. Topo II je cieľom niekoľkých protirakovinových činidiel, ako je napríklad doxorubicín, VM26, VP16 a mitoxantrónu [19]. Znížená expresia Topo II a zmeny v dôsledku aktivity enzýmu v disociáciu štiepiteľné komplexy a znižuje poškodenie DNA, a nakoniec spôsobí, že liekovú rezistenciu [20].
V našej štúdii, Štatistická analýza ukazuje, že žiadny z troch proteínov, boli významne korelovalo s mierou recidívy a prežitie, takže určenie jediného ukazovateľa účinnosti adjuvantnej chemoterapie je ťažké. Vzhľadom k tomu, topo II negatívne, pozitívne, MRP a GST-π pozitívne, boli považované za tri rizikových faktorov, ktoré môžu byť spojené s odporom chemoterapiou a zlou prognózou, títo pacienti boli rozdelení do dvoch skupín: skupina s vysokým rizikom (≥2 rizikové faktory) a skupina s nízkym rizikom (< 2 rizikové faktory). Doba opakovania skupiny s nízkym rizikom bola významne dlhší než u skupiny s vysokým rizikom, čo naznačuje, že znížená expresia topo II a vysokou expresiou MRP a GST-π bolo spojené s invázie nádoru, recidívy a zlou prognózou, a tento záver bol potvrdený v rakoviny vaječníkov [21]. V skupine s nízkym rizikom, 3 roky a 5-ročné prežitie u pacientov s chemoterapiou bola vyššia ako u pacientov bez chemoterapie. Tento výsledok je uvedené, že 5-Fu a na báze platiny pooperačné chemoterapia môže zvýšiť prežitie výhody pre pacientov v skupine s nízkym rizikom. Odolnosť proti chemoterapie bol vzácny u týchto pacientov, a teoreticky, pooperačné chemoterapia môže byť vykonané úplne fit, a prognóza pacienta sa výrazne zlepší. V skupine s vysokým rizikom, 3 roky a 5-ročné prežitie u pacientov s chemoterapiou bola vyššia ako u pacientov bez chemoterapie, ale rozdiel nebol štatisticky významný. Preto je 5-Fu a na báze platiny adjuvantnej chemoterapie nezlepšila prognózu skupine s vysokým rizikom, a pre týchto pacientov, musí pooperačné chemoterapia byť starostlivo prerokované a vybrané. Tieto závery boli založené na malom počte prípadov a môže mať určité obmedzenia. Veľký vzorka pacientov je sledované v našom centre a podrobné výsledky, vrátane analýzy podskupín (pohlavie, lymfatických uzlín, fázovanie a tak ďalej
.), Budú oznámené v blízkej budúcnosti.
Závery
z tohto dôvodu kombinovaný stanovenie MDR
by preto proteíny topo II, MRP a GST-π môže byť výhľadovo cenné pre optimalizáciu chemoterapeutickej režimy a ďalej predpovedanie výsledkov pacientov. Ďalší výskum by sa mal zamerať na kombinovanej detekciu molekulárnych markerov (ako HER-2, MDR
by preto bielkoviny, RTK /RAS signálnych molekúl a tak ďalej
.) Personalizované chemoterapia a vykonať multicentrickej klinické testy, ktorých výsledky . môže byť vzrušujúce
súhlas
písomný informovaný súhlas bol získaný od pacienta k zverejnenie tejto správy a sprievodné obrázky
Skratky
CDDP :.
CIS-diaminodichloroplatin

DOX: doxorubicín
GST-π:
glutatión S-transferáza π
MDR:
multidrug rezistencie
MRP:
multirezistencii proteín
topo II:
topoizomerázy II

5-FU :.
5-fluóruracilu sú
deklarácia
Poďakovanie
Táto štúdia bola podporená Natural Science Foundation provincie Zhejiang číny (No.LY14H160007).
Autori ďalej len "pôvodné predložený súbory obrazov
Nižšie sú uvedené odkazy na autorov pôvodnej predložených súborov pre obrázky. "Pôvodný súbor pre Obrázok 1 12957_2014_1778_MOESM2_ESM.pdf autorského 12957_2014_1778_MOESM1_ESM.tiff autorov pôvodného súboru na obrázku 2 pôvodného súboru 12957_2014_1778_MOESM3_ESM.pdf autorského na obrázok 3 Konflikt záujmov
v akejkoľvek forme žiadne výhody boli prijaté alebo budú prijaté z obchodného večierok súvisiace priamo alebo nepriamo s predmetom tohto článku. Autori vyhlasujú, že nemajú žiadne protichodné záujmy. Príspevky
autorov
Yu PF, Du YA, Cheng XD, Yu QM, Huang L, Dong RZ navrhnutá a uskutočnená štúdia analyzovali dáta a pomáhal písať rukopis. Yu PF je hlavný vyšetrovateľ, a revidoval a editoval rukopis. Všetci autori čítať a schválená konečná rukopis.

• Rozdiely v rizikové faktory medzi vzormi recidívy u pacientov po kuratívny resekcii pre pokročilých karcinómu žalúdka
• Genomické zmeny a molekulárnej subtypy žalúdočné rakoviny v Ázijcov