L'espressione delle proteine ​​associate alla resistenza multifarmaco e la loro relazione alla chemioterapia postoperatoria individualizzato in gastrica cancer

espressione delle proteine ​​associate alla resistenza multifarmaco e la loro relazione alla chemioterapia postoperatoria individualizzato nel carcinoma gastrico
Abstract
sfondo
chemioterapia adiuvante potrebbe ridurre residua cellule tumorali e prevenire le ricadute, tuttavia, non tutti i pazienti sono adatti per la chemioterapia adiuvante. Lo screening dei pazienti appropriati sulla base di marcatori molecolari per la chemioterapia adiuvante individualizzato è necessario.
Metodi
Tra giugno 2002 e giugno 2004, 119 pazienti sottoposti a gastrectomia radicale sono stati analizzati retrospettivamente. Alcuni pazienti hanno avuto la chemioterapia adiuvante a base di platino e 5-FU per quattro a sei cicli. Topoisomerasi II (TOPO II) negativo, la proteina multidrug resistance (MRP) S-transferasi π positivo e glutatione (GST-π) positivi sono stati considerati come tre fattori di rischio che possono essere associati con la resistenza alla chemioterapia e prognosi infausta. I pazienti sono stati divisi in due gruppi:. Un gruppo ad alto rischio (≥ 2 fattori di rischio) e un gruppo a basso rischio (< 2 fattori di rischio), e recidiva del tumore e il tempo di sopravvivenza dei pazienti dei due gruppi sono stati analizzati
Risultati
il tempo medio di ricorrenza del gruppo a basso rischio è risultato significativamente più lungo di quello del gruppo ad alto rischio (21,29 ± 11,10 vs 15,16 ± 8,05 mesi, P
< 0,01). I tassi di sopravvivenza a 3 anni e 5 anni del gruppo ad alto rischio erano 57,4% e 42,6%, tuttavia, non aveva alcuna differenza significativa rispetto al 66,2% e il 58,5% del gruppo a basso rischio (P
> 0.05). Nel gruppo ad alto rischio, i tassi di sopravvivenza a 3 anni dei pazienti con /senza chemioterapia erano il 62,1% e il 52,0% e il tasso di sopravvivenza a 5 anni erano 44,8% e 40,0%, rispettivamente, ma la differenza non era statisticamente significativa (P Hotel > 0,05). Nel gruppo a basso rischio, i tassi di sopravvivenza a 3 anni dei pazienti con /senza chemioterapia erano 81,2% e 51,5%, e il tasso di sopravvivenza a 5 anni erano 71,9% e 45,5%, rispettivamente, queste differenze sono risultate statisticamente significative (p
. < 0,05)
Conclusioni
combinato rilevamento della multidrug resistance (MDR) proteine ​​-related Topo II, MRP e GST-π può essere prospettico prezioso per la chemioterapia post-operatoria individualizzato e nel prevedere ulteriormente i risultati dei gastrica i malati di cancro.
Parole
stomaco neoplasie multidrug proteine ​​associate alla resistenza a chemioterapia prognosi Sfondo
C'è ancora un alto rischio di recidiva e di metastasi dopo chirurgia gastrica radicale, e la chemioterapia adiuvante può ridurre le cellule tumorali residue e prevenire le recidive post-operatorie [1, 2]. Negli ultimi anni, i nuovi risultati di studi controllati randomizzati indicano che la chemioterapia postoperatoria può migliorare la prognosi dei pazienti [3, 4]. Questi risultati sono stati accettati nelle Clinical Practice Guidelines NCCN cancro gastrico e sono raccomandati come base di programmi di trattamento post-operatorio. Tuttavia, alcune questioni devono ancora essere affrontate: (1) analisi dei sottogruppi indica che alcuni pazienti (di sesso femminile, il nodo-negativi, la fase tardiva, più vecchio, eccetera
) non beneficiano di terapia adiuvante e (2) i problemi si verificano con la chemioterapia la tossicità e la conformità, che fa sì che alcuni pazienti a ritirarsi dal trattamento a causa di eventi avversi.
Quindi, post-operatorio chemioterapia adiuvante è benefico per alcuni pazienti, tuttavia, può aumentare il peso di trattamento e di ridurre l'immunità di altri pazienti. Pertanto, è troppo presto per stabilire un programma come chemioterapia adiuvante standard per il cancro gastrico. Ci sono ancora molte questioni che necessitano di ricerca di alta qualità per rispondere prima individualizzato chemioterapia adiuvante diventa standard. Ciò che è particolarmente degno di nota è che lo studio ToGA ha confermato il valore di Herceptin nel trattamento del carcinoma gastrico avanzato [5]. Recentemente, Deng e colleghi hanno fornito per la prima volta una mappa molecolare dettagliata delle alterazioni genomiche di cancro gastrico, che ha rivelato diversi obiettivi promettenti per le terapie specifici del sottotipo [6]. Lo screening dei pazienti appropriati basati su marcatori molecolari diventerà un importante direzione di ricerca per la chemioterapia individualizzata [7]
. Multifarmaco proteine ​​associate alla resistenza topoisomerasi II (Topo II), proteine ​​multidrug resistance (MRP) e glutatione S-transferasi π (GST- π) sono alla base della resistenza multifarmaco nei tumori maligni [8, 9]. E 'stato confermato che MRP e GST-π sovraespressione, e diminuita espressione di topo II sono importanti meccanismi che mediano la resistenza ai farmaci [10]. Pertanto, abbiamo condotto questo studio della multidrug resistance (MDR
) proteine ​​geni associati a trattamento individualizzato post-operatorio per il cancro gastrico.
Metodi
Pazienti e campioni di tessuto
Tra giugno 2002 e giugno 2004, una totale di 119 pazienti sottoposti a gastrectomia radicale presso il Dipartimento di Chirurgia addominale, Zhejiang Cancer Hospital, sono stati analizzati retrospettivamente. Di questi pazienti, 77 casi erano maschi e 42 casi erano di sesso femminile, età 25 e 78 anni (media 57,3 ± 6,7 anni). Fase I /II incluso 39 casi e di fase III /IV incluso 80 casi; lesioni ≥ 5 cm sono stati trovati in 76 casi e lesioni < 5 cm sono stati trovati in 43 casi; e nei pazienti con /senza linfonodi metastasi sono stati identificati per 93 casi e 26 casi rispettivamente. Nessuno dei pazienti trattati con chemioterapia preoperatoria o altro trattamento per il tumore, e alcuni pazienti avevano chemioterapia adiuvante a base di platino e 5-flurouracil (5-FU) per quattro a sei cicli. consenso informato scritto è stato ottenuto da tutti i partecipanti allo studio. Lo studio è stato approvato dal Comitato Etico di Zhe Jiang Cancer Hospital.
Colorazione immunoistochimica
Gli anticorpi utilizzati in questo studio sono stati acquistati da GBI Company (Golden Bridge International, Inc., Mukilteo, WA, USA). La colorazione immunoistochimica è stata effettuata sui, a 4 micron di spessore, campioni di tessuto inclusi in paraffina fissati in formalina. Pancreas, del colon, ovaio ed i campioni sono stati utilizzati come controlli positivi per, Topo II, MRP, e GST-π rispettivamente. I campioni sono stati valutati indipendentemente da due patologi in modo cieco. Solo le cellule con colorazione marrone di colore sono stati considerati come positivi. L'intensità di espressione delle proteine ​​MDR
-related è stata stratificata in quattro categorie che sono stati segnati come segue: 1) negativo (-) non ha avuto cytomembrane apprezzabile, colorazione nucleare o citoplasmatica o avevano colorazione con < il 10% delle cellule neoplastiche; 2) 1+ aveva apprezzabile colorazione in 10 al 25% delle cellule neoplastiche; 3) 2+ aveva apprezzabile colorazione dal 25 al 75% delle cellule neoplastiche; e 4) 3+ avuto apprezzabili colorazione a >. il 75% delle cellule neoplastiche
paziente di follow-up
I pazienti hanno ricevuto routine di follow-up dopo gastrectomia radicale una volta ogni tre mesi per due anni e, successivamente, una volta ogni sei mesi ( pazienti sottoposti a chemioterapia sono stati seguiti con cicli di chemioterapia). Topo II negativo, MRP positivo e GST-π positivi sono stati considerati come tre fattori di rischio che possono essere associati con la resistenza alla chemioterapia e prognosi infausta. I pazienti sono stati divisi in due gruppi: il gruppo ad alto rischio (≥ 2 fattori di rischio) e il gruppo a basso rischio (< 2 fattori di rischio), e la recidiva del tumore e il tempo di sopravvivenza dei pazienti dei due gruppi sono stati analizzati
. analisi statistica
Tutti i dati sperimentali sono stati integrati in un insieme di dati completo. I dati numerici sono stati registrati direttamente e dati di misura sono stati descritti come mediana e range. L'analisi statistica è stata effettuata su SPSS versione del software 16.0 (SPSS Inc. Chicago, IL), e P
. < 0.05 è stato considerato statisticamente significativo
Risultati
La colorazione positiva di topo II è stato riconosciuto da esprimere nel nucleo cellulare (Figura 1A), considerando MRP e GST-π sono stati espressi nel citoplasma delle cellule maligne (Figura 1B e Figura 1C). Figura 1 immunoistochimica colorazione delle proteine ​​associate alla resistenza multiresistenti. Una colorazione immunoistochimica di topo II è stato identificato nel nucleo della cellula (ingrandimento originale × 400). B La colorazione immunoistochimica di MRP è stato riconosciuto di essere espresso nel citoplasma delle cellule maligne (ingrandimento originale × 400). C colorazione immunoistochimica di GST-π è stato riconosciuto di essere espresso nel citoplasma delle cellule maligne (ingrandimento originale × 400).
Il tasso espressione di topo II nei tessuti normali (75,1%) è stata superiore a quella nei tessuti tumorali (73,9 %) (non significativo, P
> 0,05). Quando si confrontano le ben, moderatamente e grado scarsamente differenziato di espressione, una correlazione significativa è stata mostrata tra TOPO II espressione e il livello di differenziazione (86,3%, 64,5% e 64,9%, rispettivamente, P
< 0,05). Per quanto riguarda MRP, il tasso di positivo è stato del 42,9% nei tessuti tumorali, mentre tutti i tessuti gastrici normali non erano macchiati. Nessuna differenza significativa nell'espressione MRP stati trovati in relazione ai fattori clinicopatologiche. Il tasso positivo di GST-π nei pazienti con cancro gastrico è stato superiore a quello dei tessuti normali (51,3% contro 23,2%, P
< 0,05). Differenze significative nell'espressione GST-π sono stati trovati anche in relazione al sesso (maschio contro femmina, 59,7% contro 35,7%, P
< 0,05) e la differenziazione (bene, moderatamente e scarsamente, 40,5%, 41,9% e 64,7 %, rispettivamente, P
< 0,05) (Tabella 1) .table 1 L'espressione di topo II, MRP, e GST-π e il loro rapporto con i fattori clinico-patologici
Caratteristiche clinicopathologic
Casi
TOPO II
MRP
GST-π
+ (%)
χ2

P
+ (%)
χ2
P
+ (%)
χ2
P
sesso maschile

77
54 (70,1%)
29 (37,7%)
46 (59,7%)
Female
42
34(81.0%)
1.65
0.198
22(52.4%)
2.40
0.121
15(35.7%)
6.27
0.012*
Age
≤50 y
33
24 (72,7%)
16 (48,5%)
14 (42,4%)
> 50 y
86
64(74.4%)
0.03
0.851
35(40.7%)
0.59
0.442
47(54.7%)
1.42
0.232
Tumor dimensione
≥5 cm
76
59 (77,6%)
35 (46,1%)
40 (52,6%)
< 5 cm
43
29(67.4%)
1.48
0.224
16(37.2%)
0.88
0.349
21(48.8%)
0.16
0.691
Differentiation
Bene
51
44 (86,3%)
20 (39,2%)
33 (40,5%)
moderatamente
31
20 (64,5%)
13 ( 41,9%)
13 (41,9%
) Poorly
37
24(64.9%)
7.04
0.029*
18(48.6%)
0.79
0.672
15(64.7%)
6.47
0.039*
TNM messa in scena
I /II
39
25 (64,1%)
17 (43,6%)
16 (41,0%)
III/IV
80
63(78.8%)
2.92
0.087
34(42.5%)
2.57
0.109
45(56.3%)
2.43
0.119
Lymph nodo
positivo
93
71 (76,3%)
40 (43,0%)
47 (50,5%)
Negative
26
17(65.4%)
1.27
0.260
11(42.3%)
0.004
0.949
14(53.8%)
0.09
0.765
* P
< 0.05.
I tassi di sopravvivenza a 3 e 5 anni dei 119 pazienti erano 57,3% e 49,2%, rispettivamente. è stata osservata alcuna differenza statistica tra singola proteina (Topo II, MRP o GST-π) espressione e il tempo di ricorrenza o di sopravvivenza. Quando i pazienti sono stati divisi in due gruppi: il gruppo ad alto rischio (≥ 2 fattori di rischio) e il gruppo a basso rischio (< 2 fattori di rischio), il tempo medio di ricorrenza del gruppo a basso rischio era 21.29 ± 11.10 mesi ed è stato significativamente più lungo di 15.16 ± 8.05 mesi del gruppo ad alto rischio (P
< 0,01). Il tasso di sopravvivenza a 3 anni e 5 anni del gruppo ad alto rischio è stata del 57,4% e del 42,6%; Tuttavia, non vi era alcuna differenza significativa rispetto al 66,2% e il 58,5% del gruppo a basso rischio (P
> 0,05).
Nel gruppo ad alto rischio, i tassi di sopravvivenza a 3 anni dei pazienti con chemioterapia e pazienti senza chemioterapia erano 62,1% e 52,0%, e il tasso di sopravvivenza a 5 anni erano il 44,8% e il 40,0%, ma la differenza non era statisticamente significativa (P
> 0,05) (Figura 2). Nel gruppo a basso rischio, i tassi di sopravvivenza a 3 anni dei pazienti con chemioterapia e pazienti senza la chemioterapia erano 81,2% e il 51,5%, i tassi di sopravvivenza a 5 anni erano 71,9% e 45,5%, e la differenza era statisticamente significativa (P
< 0,05) (Figura 3). Figura 2 La sopravvivenza globale dei pazienti con o senza chemioterapia nel gruppo ad alto rischio.
Figura 3 sopravvivenza complessiva dei pazienti con o senza chemioterapia nel gruppo a basso rischio.
Discussione
chemioterapia adiuvante dopo l'operazione è stata considerata come necessaria per eliminare micrometastasi sistemici e le cellule maligne residue nella misura più ampia possibile, in ultima analisi, migliorare la sopravvivenza [11, 12]. Purtroppo, finora, questo tipo di strategia di trattamento adiuvante è stata deludente a causa della resistenza multifarmaco (MDR) di cellule maligne a diversi agenti chemioterapici [13, 14]. Pertanto, il rilevamento e la valutazione di MDR
geni o proteine ​​possono aiutare a guidare chemioterapia adiuvante nel cancro gastrico e determinare la prognosi di pazienti.
MRP, uno dei meccanismi più studiati di MDR, agisce come un trasporto passivo ATP-dipendente pompa e diminuisce l'accumulo intracellulare di farmaci riducendo il meccanismo di co-trasporto di glutatione [15]. Diversi studi precedenti hanno inoltre indicato che la sovraespressione di MRP prevede più frequentemente MDR. MRP conferisce resistenza agli agenti alchilanti, ciclofosfamide e altri farmaci [16]. GST-π è un enzima multifunzionale che svolge un ruolo critico nella disintossicazione cellulare catalizzando la coniugazione del glutatione ridotto a composti idrofobici e elettrofili [17]. GST-π è considerata associata con l'efflusso di cis-diaminodichloroplatin (CDDP), flurouracil e doxorubicina (DOX) attraverso trasportatori ATP-binding cassette [18]. Topo II è il bersaglio di diversi agenti antitumorali, come la doxorubicina, VM26, VP16 e mitoxantrone [19]. La diminuita espressione di topo II e le variazioni delle enzima risultato attività nel dissociazione dei complessi scindibili e ridotto il danno al DNA, e, infine, causare la resistenza ai farmaci [20].
Nel nostro studio, l'analisi statistica indica che nessuna delle tre proteine ​​erano significativamente correlata con i tassi di recidiva e di sopravvivenza, quindi la determinazione di un unico indicatore dell'efficacia della chemioterapia adiuvante è difficile. Perché Topo II negativo, MRP positivo e GST-π positivi sono stati considerati come fattori di rischio tre che possono essere associati con la resistenza alla chemioterapia e prognosi infausta, questi pazienti sono stati divisi in due gruppi: il gruppo ad alto rischio (≥ 2 fattori di rischio) e la gruppo a basso rischio (< 2 fattori di rischio). Il tempo di ricorrenza del gruppo a basso rischio è risultato significativamente più lungo di quello del gruppo ad alto rischio, suggerendo che la ridotta espressione di topo II e l'alta espressione di MRP e GST-π è stata associata con l'invasione del tumore, recidiva e prognosi infausta, e questa conclusione era stata confermata nel carcinoma ovarico [21]. Nel gruppo a basso rischio, il tasso di sopravvivenza a 3 anni e 5 anni dei pazienti sottoposti a chemioterapia era superiore a quella dei pazienti senza chemioterapia. Questo risultato ha indicato che 5-Fu e chemioterapia postoperatoria a base di platino possono aumentare i benefici di sopravvivenza per i pazienti nel gruppo a basso rischio. resistenza alla chemioterapia era raro in questi pazienti, e in teoria, la chemioterapia postoperatoria può essere fatto in piena forma, e la prognosi del paziente sarà notevolmente migliorata. Nel gruppo ad alto rischio, il tasso di sopravvivenza a 3 anni e 5 anni dei pazienti con la chemioterapia è stato superiore a quello dei pazienti senza chemioterapia, ma la differenza non era statisticamente significativa. Pertanto, il 5-FU e a base di platino chemioterapia adiuvante non ha migliorato la prognosi del gruppo ad alto rischio, e per tali pazienti, la chemioterapia post-operatoria deve essere attentamente discusso e selezionato. Queste conclusioni erano basate su un piccolo numero di casi e possono avere alcune limitazioni. Un grande campione di pazienti è stato seguito nel nostro centro, e risultati dettagliati, tra cui l'analisi dei sottogruppi (sesso, metastasi linfonodali, messa in scena, eccetera
.), Sarà segnalato in un prossimo futuro.
Conclusioni
conseguenza, la determinazione di MDR
proteine ​​-related Topo II, MRP e GST-π può essere prospettico prezioso per ottimizzare i regimi chemioterapici e prevedere ulteriormente i risultati dei pazienti. Ulteriori ricerche dovrebbero concentrarsi sulla rilevazione combinato di marcatori molecolari (come HER-2, MDR
proteine ​​-related, RTK /RAS molecole di segnalazione, eccetera
.) Per la chemioterapia individualizzato e di effettuare studi multicentrici clinici, i risultati . può essere eccitante
consenso
consenso informato scritto è stato ottenuto dal paziente per la pubblicazione di questo rapporto e le eventuali immagini allegate
Abbreviazioni
CDDP:.
CIS-diaminodichloroplatin

DOX:
doxorubicina
GST-π:
glutatione S-transferasi π
MDR:
multidrug resistance
MRP:
proteine ​​multidrug resistance
TOPO II:
topoisomerasi II

5-fU:.
5 flurouracil
Dichiarazioni
Ringraziamenti
Questo studio è stato sostenuto da Natural Science Foundation della provincia di Zhejiang della Cina (No.LY14H160007).
degli autori originali presentate file per le immagini
di seguito sono riportati i link ai file degli autori originali inviati per le immagini. 'file originale per la figura 1 12957_2014_1778_MOESM2_ESM.pdf Autori 12957_2014_1778_MOESM1_ESM.tiff autori file originale per la figura 2 file originale 12957_2014_1778_MOESM3_ESM.pdf degli autori per la figura 3 interessi concorrenti
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Autori contributi
Yu PF, Du YA, Cheng XD, Yu QM, Huang L, Dong RZ progettato e condotto lo studio, hanno analizzato i dati, e ha contribuito a scrivere manoscritto. Yu PF è il ricercatore principale, e rivisto e modificato il manoscritto. Tutti gli autori hanno letto e approvato il manoscritto finale.

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