Expressão de proteínas associadas à resistência a múltiplas drogas e sua relação com a quimioterapia individualizada pós-operatória em câncer gástrico

Expressão de proteínas associadas à resistência a múltiplas drogas e sua relação com a quimioterapia individualizada pós-operatória em câncer gástrico da arte abstracta
Fundo
A quimioterapia adjuvante poderia reduzir as células tumorais residuais e prevenir a recidiva, no entanto, nem todos os pacientes são adequados para a quimioterapia adjuvante. Triagem de pacientes apropriados com base em marcadores moleculares para quimioterapia adjuvante individualizada é necessário.
Métodos
Entre Junho de 2002 e Junho de 2004, 119 pacientes que foram submetidos a gastrectomia radical foram analisados ​​retrospectivamente. Alguns doentes tiveram quimioterapia adjuvante à base de platina e 5-FU durante quatro a seis ciclos. A topoisomerase II (topo II) negativo, proteína de resistência a múltiplas drogas (MRP) π S-transferase de glutationa e positivo (GST-π) positivo foram considerados três factores de risco que podem estar associados com a resistência à quimioterapia e de prognóstico reservado. Os pacientes foram divididos em dois grupos:. Um grupo de alto risco (≥ 2 fatores de risco) e um grupo de baixo risco (< 2 fatores de risco), e recorrência tumoral e tempo de sobrevivência de doentes dos dois grupos foram analisados ​​
Resultados
o tempo médio de recorrência do grupo de baixo risco foi significativamente maior do que a do grupo de alto risco (21.29 ± 11.10 contra 15.16 ± 8,05 meses, P
< 0,01). Os 3 anos e 5 anos as taxas de sobrevivência do grupo de alto risco foram de 57,4% e 42,6%, no entanto, não teve diferença significativa em comparação com 66,2% e 58,5% do grupo de baixo risco (P Art > 0,05). No grupo de alto risco, as taxas de sobrevivência de 3 anos de pacientes com /sem quimioterapia, foram 62,1% e 52,0% e as taxas de sobrevida em 5 anos foram 44,8% e 40,0%, respectivamente, mas a diferença não foi estatisticamente significativa (P
> 0,05). No grupo de baixo risco, as taxas de sobrevivência de 3 anos de pacientes com /sem quimioterapia, foram 81,2% e 51,5%, e as taxas de sobrevida em 5 anos foram 71,9% e 45,5%, respectivamente, essas diferenças foram estatisticamente significativa (P
. < 0,05)
Conclusões
Combinado detecção da resistência a múltiplas drogas (MDR) proteínas relacionados com topo II, MRP e GST-π pode ser prospectivamente valiosa para a quimioterapia individualizada pós-operatória e na previsão ainda mais os resultados de gástrica pacientes com câncer.
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Palavras-chave
ainda há um alto risco de recorrência e metástase após a cirurgia gástrica radical e quimioterapia adjuvante pode reduzir células tumorais residual pós-operatório e prevenir a recaída [1, 2]. Nos últimos anos, novos resultados de estudos randomizados controlados indicam que a quimioterapia pós-operatória pode melhorar o prognóstico dos pacientes [3, 4]. Estes resultados foram aceites nas diretrizes de prática clínica NCCN câncer gástrico e são recomendados como base de programas de tratamento pós-operatório. No entanto, algumas questões ainda precisam ser abordadas: (1) análise de subgrupo indica que alguns doentes (sexo feminino, linfonodos negativos, fase tardia, mais velhos, etc.
) não se beneficiar da terapia adjuvante e (2) os problemas ocorrem com quimioterapia toxicidade e a conformidade, que faz com que alguns pacientes a retirar-se o tratamento por causa de eventos adversos.
Assim, quimioterapia adjuvante pós-operatório é benéfica para alguns pacientes, no entanto, ele pode aumentar a carga de tratamento e reduzir a imunidade de outros pacientes. Portanto, é muito cedo para determinar um programa como quimioterapia adjuvante padrão para o câncer gástrico. Há ainda muitas questões que precisam de pesquisa de alta qualidade para responder antes individualizado quimioterapia adjuvante torna-se padrão. O que é particularmente digno de menção é que o estudo ToGA confirmou o valor de Herceptin no tratamento de câncer avançado gástrica [5]. Recentemente, Deng e colegas fornecidas pela primeira vez um mapa molecular detalhada de alterações genómicas no cancro gástrico, o que revelou vários alvos promissores para terapias específicas de subtipo [6]. Triagem de pacientes apropriados com base em marcadores moleculares vai se tornar uma direção de pesquisa importante para a quimioterapia individualizada [7].
Multidrogaterapia proteínas associadas a resistência a topoisomerase II (topo II), proteína de resistência a múltiplas drogas (MRP) e π glutationa S-transferase (GST π) são a base de resistência a múltiplos fármacos em tumores malignos [8, 9]. Ela tinha sido confirmado que o MRP e GST-π sobre-expressão, e a diminuição da expressão de topo II são importantes mecanismos que medeiam a resistência a múltiplas drogas [10]. Portanto, realizamos este estudo da resistência a múltiplas drogas (MDR
) proteínas associadas a genes em tratamento individualizado pós-operatória para câncer gástrico.
Métodos
Pacientes e amostras de tecido
Entre Junho de 2002 e Junho de 2004, um total de 119 pacientes submetidos a gastrectomia radical no Departamento de Cirurgia abdominal do Hospital de Câncer de Zhejiang, foram analisados ​​retrospectivamente. Desses pacientes, 77 casos eram do sexo masculino e 42 casos eram do sexo feminino, com idades entre 25 e 78 anos (média de 57,3 ± 6,7 anos). Fase I /II incluiu 39 casos e Fase III /IV incluiu 80 casos; lesões ≥5 cm foram encontrados em 76 casos e lesões < 5 cm foram encontradas em 43 pacientes; e os pacientes com /sem linfonodos metástases foram identificadas em 93 casos e 26 casos, respectivamente. Nenhum dos pacientes recebeu quimioterapia pré-operatória ou outro tratamento para o tumor, e alguns pacientes tiveram quimioterapia adjuvante à base de platina e 5-fluorouracilo (5-FU) durante quatro a seis ciclos. consentimento informado por escrito foi obtido de todos os participantes do estudo. O estudo foi aprovado pelo Comitê de Zhe Jiang Hospital do Câncer de Ética.
Coloração imuno-histoquímica
Os anticorpos utilizados neste estudo foram adquiridos da GBI Company (Golden Bridge International, Inc., Mukilteo, WA, EUA). coloração imuno-histoquímica foi levada a cabo sobre os, 4-um de espessura, as amostras de tecido embebidas em parafina e fixado em formalina. Pâncreas, cólon, ovário e as amostras foram utilizados como controlos positivos para o topo II, MRP, e GST-π, respectivamente. As amostras foram avaliadas de forma independente por dois patologistas de forma cega. Apenas as células com coloração de cor castanha foram considerados positivos. A intensidade de expressão de proteínas MDR
-relacionados foi estratificado em quatro categorias que foram pontuados como se segue: 1) negativos (-) não teve cytomembrane apreciável, coloração nuclear ou citoplásmico ou tinha de coloração em < 10% de células neoplásicas; 2) 1+ tinham coloração significativa em 10 a 25% de células neoplásicas; 3) 2+ tinham coloração significativa em 25 a 75% de células neoplásicas; e 4) 3+ tinha coloração apreciável >. 75% das células neoplásicas
Patient follow-up
Os pacientes receberam acompanhamento de rotina após a gastrectomia radical uma vez por trimestre durante dois anos e, posteriormente, uma vez a cada semestre ( pacientes que receberam quimioterapia foram acompanhados com ciclos de quimioterapia). Topo II negativo, MRP positiva e GST-π positivo foram considerados três factores de risco que podem estar associados com a resistência à quimioterapia e de prognóstico reservado. Os pacientes foram divididos em dois grupos: o grupo de alto risco (≥ 2 fatores de risco) e do grupo de baixo risco (< 2 fatores de risco), ea recorrência do tumor e o tempo de sobrevivência de doentes dos dois grupos foram analisados ​​
. a análise estatística
Todos os dados experimentais foram integrados em um conjunto de dados abrangente. Os dados numéricos foram registrados diretamente e dados de medição foram descritas como mediana e amplitude. A análise estatística foi realizada no SPSS versão de software 16.0 (SPSS Inc. Chicago, IL) e P
. < 0,05 foi considerado estatisticamente significante
Resultados
A coloração positiva de topo II foi reconhecida a ser expressa no núcleo das células (Figura 1A), ao passo que o MRP e GST-π foram expressas no citoplasma de células malignas (Figura 1B e Figura 1C). Figura 1 imuno coloração das proteínas associadas à multirresistência. A coloração imuno-histoquímica de topo II foi identificado no núcleo da célula (ampliação original x 400). B coloração imuno-histoquímica de MRP foi reconhecida a ser expresso no citoplasma de células malignas (ampliação original x 400). C coloração imuno-histoquímica de GST-π foi reconhecida a ser expresso no citoplasma de células malignas (ampliação original x 400).
A taxa de expressão de topo II em tecidos normais (75,1%) foi mais elevada do que em tecidos de tumor (73,9 %) (não significativo, P
> 0,05). Ao comparar o bem, moderadamente e pouco diferenciados grau de expressão, uma correlação significativa foi demonstrada entre topo II expressão e do nível de diferenciação (86,3%, 64,5% e 64,9%, respectivamente, P Art < 0,05). Como para MRP, a taxa positiva foi de 42,9% em tecidos tumorais enquanto todos os tecidos gástricos normais não foram coradas. Não houve diferenças significativas na expressão MRP foram encontrados em relação aos fatores clínico-patológicos. A taxa positiva de GST-π em doentes com cancro gástrico foi maior do que a dos tecidos normais (51,3% versus 23,2%, P
< 0,05). diferenças significativas na expressão de GST-π também foram encontrados em relação ao sexo (masculino contra o sexo feminino, 59,7% versus 35,7%, P Art < 0,05) e diferenciação (bem, moderadamente e mal, 40,5%, 41,9% e 64,7 %, respectivamente, P Art < 0,05) (Tabela 1) .table 1 A expressão de topo II, MRP, e GST-π e sua relação com fatores clínico-patológicos
Características clínico-patológicas
Cases
topo II
MRP
GST-π
+ (%)
χ2

P
+ (%)
χ2
P
+ (%)
χ2
P
Sexo Masculino

77
54 (70,1%)
29 (37,7%)
46 (59,7%)
Female
42
34(81.0%)
1.65
0.198
22(52.4%)
2.40
0.121
15(35.7%)
6.27
0.012*
Age
≤50 y
33
24 (72,7%)
16 (48,5%)
14 (42,4%) Art > 50 y
86
64(74.4%)
0.03
0.851
35(40.7%)
0.59
0.442
47(54.7%)
1.42
0.232
Tumor tamanho
≥5 cm
76
59 (77,6%)
35 (46,1%)
40 (52,6%) Art < 5 cm
43
29(67.4%)
1.48
0.224
16(37.2%)
0.88
0.349
21(48.8%)
0.16
0.691
Differentiation
Bem
51
44 (86,3%)
20 (39,2%)
33 (40,5%)
Moderadamente
31
20 (64,5%)
13 ( 41,9%)
13 (41,9%)
Poorly
37
24(64.9%)
7.04
0.029*
18(48.6%)
0.79
0.672
15(64.7%)
6.47
0.039*
TNM encenar
I /II
39
25 (64,1%)
17 (43,6%)
16 (41,0%)
III/IV
80
63(78.8%)
2.92
0.087
34(42.5%)
2.57
0.109
45(56.3%)
2.43
0.119
Lymph nó
positiva
93
71 (76,3%)
40 (43,0%)
47 (50,5%)
Negative
26
17(65.4%)
1.27
0.260
11(42.3%)
0.004
0.949
14(53.8%)
0.09
0.765
* P Art < 0.05.
As taxas de sobrevivência de 3 e 5 anos de 119 pacientes foram 57,3% e 49,2%, respectivamente. Não foi observada diferença estatística entre a proteína única (topo II, MRP ou GST-π) expressão e a recorrência ou a sobrevivência tempo. Quando os pacientes foram divididos em dois grupos: o grupo de alto risco (≥ 2 fatores de risco) e do grupo de baixo risco (< 2 fatores de risco), o tempo médio de recorrência do grupo de baixo risco foi 21,29 ± 11,10 meses e foi significativamente maior do que 15.16 ± 8,05 meses do grupo de alto risco (P Art < 0,01). A taxa de sobrevivência de 3 anos e 5 anos do grupo de alto risco foi de 57,4% e 42,6%; no entanto, não houve diferença significativa em relação ao 66,2% e 58,5% do grupo de baixo risco (P Art > 0,05).
No grupo de alto risco, as taxas de sobrevivência de 3 anos de pacientes com quimioterapia e pacientes sem quimioterapia, foram 62,1% e 52,0%, e as taxas de sobrevida em 5 anos foram 44,8% e 40,0%, mas a diferença não foi estatisticamente significativa (P Art > 0,05) (Figura 2). No grupo de baixo risco, as taxas de sobrevivência de 3 anos de pacientes com quimioterapia e pacientes sem quimioterapia, foram 81,2% e 51,5%, as taxas de sobrevida em 5 anos foram 71,9% e 45,5%, ea diferença foi estatisticamente significativa (P
< 0,05) (Figura 3). Figura 2 a sobrevivência global dos doentes com ou sem quimioterapia no grupo de alto risco.
Figura 3 sobrevida global de pacientes com ou sem quimioterapia no grupo de baixo risco.
Discussão
A quimioterapia adjuvante após a operação tem sido considerada como necessária para eliminar micrometástases sistêmicas e células malignas remanescentes em toda a extensão possível, melhorando em última análise, a sobrevivência [11, 12]. Infelizmente, até à data, este tipo de estratégia de tratamento adjuvante tem sido decepcionante como um resultado de resistência a múltiplas drogas (MDR) das células malignas para os agentes quimioterapêuticos diferentes [13, 14]. Portanto, a detecção e avaliação de MDR
genes ou proteínas pode ajudar a orientar quimioterapia adjuvante no câncer gástrico e determinar o prognóstico dos pacientes.
MRP, um dos mecanismos mais estudados de MDR, atua como um transporte de ida dependente de ATP bomba e diminui a acumulação intracelular de droga, reduzindo o mecanismo de co-transporte de glutationa [15]. Vários estudos anteriores indicaram também que a sobre-expressão de MRP mais frequentemente prevê MDR. MRP confere resistência aos agentes alquilantes, ciclofosfamida e outras drogas [16]. GST-π é uma enzima multifuncional que desempenha um papel crítico na desintoxicação celular por catalisar a conjugação de glutationa reduzida para compostos hidrófobos e electrof [17]. GST-π é considerado para ser associado com o efluxo de cis-diaminodichloroplatin (CDDP), fluorouracilo e doxorrubicina (DOX) através de transportadores cassete de ligação a ATP [18]. Topo II é o alvo de vários agentes anti-cancro, tais como doxorrubicina, VM26, VP16 e mitoxantrona [19]. A expressão diminuída de topo II e mudanças em resultado da actividade da enzima a dissociação de complexos cliváveis ​​e danos no ADN reduzida, e finalmente fazer com que a resistência a drogas [20].
No nosso estudo, a análise estatística indica que nenhuma das três proteínas estavam significativamente correlacionada com as taxas de recorrência e sobrevivência, de modo que a determinação de um único indicador da eficácia da quimioterapia adjuvante é difícil. Porque, topo II negativo MRP positivo e GST-π positiva foram considerados como fatores de risco de três que podem estar associados com a resistência à quimioterapia e mau prognóstico, estes pacientes foram divididos em dois grupos: o grupo de alto risco (≥ 2 fatores de risco) eo grupo de baixo risco (< 2 fatores de risco). O tempo de recorrência do grupo de baixo risco foi significativamente mais longa do que a do grupo de alto risco, o que sugere que a diminuição da expressão de topo II e alta expressão de MRP e GST-π foi associada com a invasão do tumor, recorrência e de prognóstico reservado, e esta conclusão foi confirmada em cancro do ovário [21]. No grupo de baixo risco, a taxa de sobrevivência de 3 anos e cinco anos de doentes com quimioterapia foi maior do que a dos pacientes sem quimioterapia. Este resultado indicou que o 5-FU e quimioterapia pós-operatória à base de platina pode aumentar benefícios de sobrevivência para pacientes no grupo de baixo risco. resistência à quimioterapia era raro nestes pacientes, e em teoria, a quimioterapia pós-operatória pode ser feito totalmente em forma, e o prognóstico do paciente irá ser significativamente melhorada. No grupo de alto risco, a taxa de sobrevivência de 3 anos e cinco anos de doentes com quimioterapia foi maior do que a dos pacientes sem quimioterapia, mas a diferença não foi estatisticamente significativa. Por conseguinte, o 5-FU e quimioterapia adjuvante à base de platina não melhorar o prognóstico do grupo de alto risco, e para tais pacientes, a quimioterapia pós-operatória deve ser cuidadosamente seleccionada e discutido. Estas conclusões foram baseadas em um pequeno número de casos e pode ter algumas limitações. Uma grande amostra de pacientes está a ser acompanhada em nosso centro, e os resultados detalhados, incluindo a análise de subgrupo (gênero, metástase linfonodal, estadiamento, etc.
.), Será relatado em um futuro próximo.
Conclusões
por isso, a determinação combinada de MDR
proteínas relacionados com topo II, MRP e GST-π pode ser prospectivamente valioso para otimizar regimes de quimioterapia e prevendo ainda mais os resultados dos pacientes. Mais pesquisas devem se concentrar na detecção combinada de marcadores moleculares (como HER-2, MDR
proteínas relacionados com, moléculas de sinalização RTK /RAS, etc.
.) Para a quimioterapia individualizada e realizar estudos clínicos multicêntricos, os resultados . pode ser emocionante
consentimento
consentimento informado escrito foi obtido a partir do paciente para a publicação deste relatório e quaisquer imagens que acompanham
abreviações
CDDP:.
CIS-diaminodichloroplatin

DOX:
doxorrubicina
GST-π:
glutationa S-transferase π
MDR:
multirresistência
MRP:
proteína de resistência a múltiplas drogas
topo II:
topoisomerase II

5-FU:.
5-fluorouracilo
Declarações
Agradecimentos
Este estudo foi apoiado por Natural Science Foundation da província de Zhejiang da China (No.LY14H160007).
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Nenhum benefício de qualquer forma, ter sido recebida ou será recebida de um comercial parte relacionada direta ou indiretamente com o assunto deste artigo. Os autores declaram que não têm interesses conflitantes. Contribuições
dos autores
Yu PF, Du YA, Cheng XD, Yu QM, Huang L, Dong RZ concebido e realizado o estudo, analisou os dados, e ajudou a escrever o manuscrito. Yu PF é o investigador principal, e revisto e editado o manuscrito. Todos os autores leram e aprovaram o manuscrito final.

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