Expressie van multidrug-resistentie geassocieerde eiwitten en hun relatie tot postoperatieve geïndividualiseerde chemo bij maagkanker

Expressie van multidrug-resistentie geassocieerde eiwitten en hun relatie tot postoperatieve geïndividualiseerde chemo bij maagkanker
Abstracte achtergrond
adjuvante chemotherapie resterende tumorcellen kunnen verminderen en terugval te voorkomen, echter niet alle patiënten geschikt zijn voor adjuvante chemotherapie. Screening geschikte patiënten op basis van moleculaire merkers voor geïndividualiseerde adjuvante chemotherapie is noodzakelijk.
Methods
Tussen juni 2002 en juni 2004 werden 119 patiënten die een radicale gastrectomie ondergingen retrospectief geanalyseerd. Sommige patiënten hadden adjuvante chemotherapie op basis van platina en 5-FU voor vier tot zes cycli. Topoisomerase II (topo II) negatief, multidrug resistentie eiwit (MRP) positieve en glutathion S-transferase π (GST-π) positief werden beschouwd als drie risicofactoren die kunnen worden geassocieerd met chemotherapie weerstand en slechte prognose. De patiënten werden verdeeld in twee groepen: a. Hoogrisicogroep (≥2 risicofactoren) en een laag risico groep (< 2 risicofactoren), en tumor herhaling en de patiënt overlevingstijd van de twee groepen werden geanalyseerd
Results
de gemiddelde herhalingstijd van de lage-risico-groep was significant langer dan die van de hoog-risicogroep (21.29 ± 11.10 versus 15.16 ± 8.05 maanden, P Restaurant < 0,01). De 3-jaars en 5-jaarsoverleving van de hoog-risico-groep waren 57,4% en 42,6%, maar het had geen significant verschil ten opzichte van 66,2% en 58,5% van de lage-risico-groep (P Restaurant > 0,05). In de hoog-risico-groep, de 3-jaarsoverleving van de patiënten met /zonder chemotherapie waren 62,1% en 52,0% en de 5-jaarsoverleving was 44,8% en 40,0%, respectievelijk, maar het verschil was niet statistisch significant (P Restaurant > 0,05). In de lage-risico-groep, de 3-jaarsoverleving van de patiënten met /zonder chemotherapie waren 81,2% en 51,5%, en de 5-jaarsoverleving was 71,9% en 45,5%, respectievelijk, deze verschillen waren statistisch significant (p
<. 0,05)
Conclusies
gecombineerde detectie van het multidrug resistance (MDR) -gerelateerde eiwitten topo II, MRP en GST-π kan prospectief waardevol voor postoperatieve geïndividualiseerde chemotherapie en in verder het voorspellen van de resultaten van de maag worden kankerpatiënten.
Sleutelwoorden
maag gezwellen multidrug-resistentie geassocieerde eiwitten chemotherapie prognose Achtergrond
Er is nog steeds een hoog risico van herhaling en metastase na radicale maag operatie, en adjuvante chemotherapie kan postoperatieve resterende tumorcellen te verminderen en terugval te voorkomen [1, 2]. De laatste jaren nieuwe resultaten van gerandomiseerde gecontroleerde studies blijkt dat postoperatieve chemotherapie de prognose van de patiënten [3, 4] kan verbeteren. Deze resultaten zijn aanvaard in de richtsnoeren Clinical Practice NCCN maagkanker en worden aanbevolen als de basis van postoperatieve behandelprogramma's. Echter, een aantal zaken moeten nog worden aangepakt: (1) subgroep analyse geeft aan dat sommige patiënten (vrouwelijk, kliernegatieve, laat stadium, ouder, etcetera
) niet profiteren van adjuvante therapie en (2) er zich problemen voordoen met chemotherapie toxiciteit en compliance, waardoor sommige patiënten te trekken uit behandeling vanwege bijwerkingen.
dus postoperatieve adjuvante chemotherapie is gunstig voor sommige patiënten echter kan de behandeling druk verhogen en de immuniteit van andere patiënten. Daarom is het nog te vroeg om een ​​programma als standaard adjuvante chemotherapie voor maagkanker te bepalen. Er zijn nog veel zaken die hoogwaardig onderzoek moet beantwoorden voordat geïndividualiseerde adjuvante chemotherapie standaard wordt. Wat is in het bijzonder het vermelden waard is dat de ToGA studie de waarde van Herceptin heeft bevestigd in de behandeling van gevorderde maagkanker [5]. Onlangs, Deng en collega bedoeld het eerst een gedetailleerde kaart van moleculaire genomische veranderingen in maagkanker, die verscheidene veelbelovende doelwitten geopenbaard subtype-specifieke therapieën [6]. Screening geschikte patiënten op basis van moleculaire merkers een belangrijke onderzoeksrichting geïndividualiseerde chemotherapie [7].
Multidrug resistentie geassocieerde eiwitten topoisomerase II (topo II), multidrug resistentie eiwit (MRP) en glutathion S-transferase π (GST geworden π) vormen de basis van multidrug resistentie bij maligne tumoren [8, 9]. Het was bevestigd dat MRP en GST-π overexpressie en verminderde expressie van topo II zijn belangrijke mechanismen bemiddelen multidrug resistentie [10]. Daarom voerden we deze studie van multidrug resistance (MDR
)-gen geassocieerde eiwitten in postoperatieve geïndividualiseerde behandeling van maagkanker.
Methoden
Patiënten en weefselmonsters
Tussen juni 2002 en juni 2004 een in totaal 119 patiënten die een radicale gastrectomie ondergingen bij de afdeling buikoperaties, Zhejiang kanker ziekenhuis, werden retrospectief geanalyseerd. Van deze patiënten, 77 gevallen waren mannen en 42 gevallen waren vrouwen in de leeftijd van 25-78 jaar (gemiddeld 57,3 ± 6,7 jaar). Fase I /II opgenomen 39 gevallen en fase III /IV opgenomen 80 gevallen; laesies ≥5 cm werden gevonden in 76 gevallen en letsels < 5 cm werden gevonden in 43 gevallen; en patiënten met /zonder lymfeknopen metastasen gesignaleerd bij 93 gevallen en 26 de gevallen. Geen van de patiënten preoperatief chemotherapie of andere behandeling van de tumor, en sommige patiënten hadden adjuvante chemotherapie op basis van platina en 5-flurouracil (5-FU) gedurende vier tot zes cycli. Schriftelijke toestemming werd verkregen van alle deelnemers aan de studie van de. De studie werd goedgekeurd door de ethische commissie van Zhe Jiang kanker ziekenhuis.
Immunohistochemische kleuring
De antilichamen die in deze studie werden gekocht van GBI Company (Golden Bridge International, Inc., Everett, WA, USA). Immunohistochemische kleuring werd uitgevoerd op met formaline gefixeerd 4-um-dikke paraffine ingebedde weefselmonsters uitgevoerd. Pancreas, colon, eierstokken en monsters werden gebruikt als positieve controles voor Topo II, MRP en GST-π respectievelijk. De monsters werden onafhankelijk beoordeeld door twee pathologen in een blinde manier. Alleen cellen met bruin gekleurde vlekken werden beschouwd als positief. De intensiteit van expressie van MDR
gerelateerde eiwitten werd gestratificeerd in vier categorieën die als volgt gescoord: 1) negatieve (-) had geen merkbare cytomembrane, nucleaire en cytoplasmatische kleuring of kleuring was in < 10% van neoplastische cellen; 2) 1+ een merkbare kleuring in 10 tot 25% van neoplastische cellen; 3) 2+ een merkbare kleuring in 25 tot 75% van neoplastische cellen; en 4) 3+ had merkbare kleuring in >. 75% van de neoplastische cellen
Patient follow-up
Patiënten kregen routine follow-up na radicale gastrectomy eenmaal per kwartaal voor twee jaar en daarna, eens per half jaar ( patiënten die chemotherapie kregen werden gevolgd met chemotherapie cycli). Topo II negatieve, positieve en MRP GST-π positief werden beschouwd drie risicofactoren die kunnen worden geassocieerd met chemotherapie weerstand en slechte prognose. De patiënten werden verdeeld in twee groepen: de hoog-risicogroep (≥2 risicofactoren) en de lage-risico-groep (< 2 risicofactoren), en de tumor herhaling en de patiënt overlevingstijd van de twee groepen werden geanalyseerd
. statistische analyse
Alle experiment gegevens werden geïntegreerd in een uitgebreide dataset. Numerieke data werden direct opgenomen en meetgegevens werden beschreven als mediaan en range. Statistische analyse werd uitgevoerd met SPSS versie 16.0 (SPSS Inc. Chicago, IL) en P
<. 0,05 werd beschouwd als statistisch significant
Resultaten
De positieve kleuring van topo II erkend worden uitgedrukt in de celkern (figuur 1A), terwijl MRP en GST-π werden tot expressie gebracht in het cytoplasma van kwaadaardige cellen (figuur 1B en figuur 1C). Figuur 1 Immunohistochemische kleuring van multidrug-resistentie geassocieerde eiwitten. Een Immunohistochemische kleuring van topo II werd geïdentificeerd in de celkern (oorspronkelijke vergroting x 400). B Immunohistochemische kleuring van MRP erkend worden uitgedrukt in het cytoplasma van kwaadaardige cellen (oorspronkelijke vergroting x 400). C Immunohistochemische kleuring van GST-π erkend worden uitgedrukt in het cytoplasma van kwaadaardige cellen (oorspronkelijke vergroting x 400). Ondernemingen De expressiesnelheid van topo II in normale weefsels (75,1%) hoger dan in tumorweefsels (73,9 %) (niet significant, P Restaurant > 0,05). Bij vergelijking van de goed, matig en slecht gedifferentieerde mate van expressie, werd een significante correlatie aangetoond tussen topo II expressie en de mate van differentiatie (86,3%, 64,5% en 64,9%, respectievelijk, P
< 0,05). Als voor MRP, de positieve bedroeg 42,9% in de tumor weefsels, terwijl alle normale maag weefsels niet werden gekleurd. Geen significante verschillen in MRP expressie gevonden in relatie tot de klinische en pathologische factoren. Het percentage positieve GST-π bij patiënten met maagkanker hoger dan die van de normale weefsels (51,3% versus 23,2%, P
< 0,05). Significante verschillen in de GST-π expressie werden ook gevonden in relatie tot seks (man versus vrouw, 59,7% versus 35,7%, P Restaurant < 0,05) en differentiatie (goed, matig en slecht, 40,5%, 41,9% en 64,7 %, respectievelijk, P Restaurant < 0,05) (tabel 1) .table 1 De expressie van topo II, MRP en GST-π en hun relatie met klinisch-pathologische factoren
clinicopathologische Features
Hoesjes

topo II
MRP
GST-π
+ (%)
χ2

P
+ (%)
χ2
P
+ (%)
χ2
P
Sex
Man
77
54 (70,1%)
29 (37,7%)
46 (59,7%)
Female
42
34(81.0%)
1.65
0.198
22(52.4%)
2.40
0.121
15(35.7%)
6.27
0.012*
Age
≤50 y
33
24 (72,7%)
16 (48,5%)
14 (42,4%) Restaurant > 50 y
86
64(74.4%)
0.03
0.851
35(40.7%)
0.59
0.442
47(54.7%)
1.42
0.232
Tumor size
≥5 cm
76
59 (77,6%)
35 (46,1%)
40 (52,6%) Restaurant < 5 cm
43
29(67.4%)
1.48
0.224
16(37.2%)
0.88
0.349
21(48.8%)
0.16
0.691
Differentiation
Nou
51
44 (86,3%)
20 (39,2%)
33 (40,5%)
Matig
31
20 (64,5%)
13 ( 41,9%)
13 (41,9%)
Poorly
37
24(64.9%)
7.04
0.029*
18(48.6%)
0.79
0.672
15(64.7%)
6.47
0.039*
TNM staging
I /II
39
25 (64,1%)
17 (43,6%)
16 (41,0%)
III/IV
80
63(78.8%)
2.92
0.087
34(42.5%)
2.57
0.109
45(56.3%)
2.43
0.119
Lymph knooppunt
Positieve
93
71 (76,3%)
40 (43,0%)
47 (50,5%)
Negative
26
17(65.4%)
1.27
0.260
11(42.3%)
0.004
0.949
14(53.8%)
0.09
0.765
* P Restaurant < 0.05. Ondernemingen De 3- en 5-jaarsoverleving van de 119 patiënten waren 57,3% en 49,2% respectievelijk. Geen statistisch verschil waargenomen tussen enkel eiwit (topo II, MRP of GST-π) meningsuiting en het recidief of overleving tijd. Wanneer patiënten werden verdeeld in twee groepen: de hoog-risicogroep (≥2 risicofactoren) en de lage-risico-groep (< 2 risicofactoren), de gemiddelde herhalingstijd van de lage-risico-groep was 21,29 ± 11.10 maanden en was aanzienlijk langer dan 15.16 ± 8.05 maanden van het hoog-risico-groep (P Restaurant < 0,01). De 3-jaars en 5-jaars overleving van de hoog-risico-groep was 57,4% en 42,6%; echter, was er geen significant verschil in vergelijking met de 66,2% en 58,5% van de lage-risico-groep (P Restaurant > 0,05).
In de hoog-risico-groep, de 3-jaarsoverleving van patiënten met chemotherapie en patiënten zonder chemotherapie waren 62,1% en 52,0%, en de 5-jaarsoverleving was 44,8% en 40,0%, maar het verschil was niet statistisch significant (P Restaurant > 0,05) (figuur 2). In de lage-risico-groep, de 3-jaarsoverleving van patiënten met chemotherapie en patiënten zonder chemotherapie waren 81,2% en 51,5%, de 5-jaarsoverleving was 71,9% en 45,5%, en het verschil was statistisch significant (p
< 0,05) (figuur 3). Figuur 2 Algemene overleving van patiënten met of zonder chemotherapie in de hoog-risico-groep.
Figuur 3 Totale overleving van patiënten met of zonder chemotherapie in de lage-risico-groep.
Discussie
adjuvante chemotherapie na de operatie is noodzakelijk om systeemrisico micrometastasen en overblijfsel kwaadaardige cellen om zoveel mogelijk te elimineren beschouwd, uiteindelijk het verbeteren van de overleving [11, 12]. Helaas, tot nu toe, dit soort adjuvante behandelingsstrategie teleurstellend als gevolg van multidrug resistentie (MDR) van maligne cellen aan verschillende chemotherapeutische middelen [13, 14] is. Daarom kan de detectie en evaluatie van MDR
genen of eiwitten leidraad adjuvante chemotherapie bij maagkanker en bepalen de prognose van patiënten.
MRP, een van de meest bestudeerde mechanismen van MDR, werkt als een ATP-afhankelijke passieve transport pomp en verlaagt intracellulaire accumulatie van geneesmiddelen doordat het co-transportmechanisme glutathion [15]. Verscheidene eerdere studies hebben ook aangetoond dat overexpressie van MRP meest voorspelt MDR. MRP resistentie tegen alkyleringsmiddelen, cyclofosfamide en andere middelen [16]. GST-π is een multifunctioneel enzym dat een belangrijke rol speelt bij cellulaire detoxificatie door katalyseren de conjugatie van gereduceerd glutathion en hydrofobe elektrofiele verbindingen [17]. GST-π wordt geacht te zijn geassocieerd met de efflux van cis-diaminodichloroplatin (CDDP), flurouracil en doxorubicine (DOX) door middel van ATP-bindende cassette transporters [18]. Topo II is het doelwit van verschillende antikankermiddelen, zoals doxorubicine, VM26, VP16 en mitoxantron [19]. De verminderde expressie van topo II en veranderingen in enzymactiviteit resulteren in de dissociatie van kliefbare complexen en verminderde DNA schade veroorzaken en uiteindelijk de resistentie [20].
In ons onderzoek statistische analyse geeft aan dat geen van de drie eiwitten werden significant gecorreleerd met de herhaling overlevingskansen, zodat de vaststelling van een indicator van de effectiviteit van adjuvante chemotherapie moeilijk. Omdat topo II negatief, positief en MRP GST-π positief werden beschouwd drie risicofactoren die kunnen worden geassocieerd met chemotherapie weerstand en een slechte prognose, deze patiënten werden verdeeld in twee groepen: de hoog-risicogroep (≥2 risicofactoren) en laag-risico-groep (< 2 risicofactoren). De herhalingstijd van de lage-risico-groep was significant langer dan die van de hoog-risico groep, wat erop wijst dat de verminderde expressie van topo II en hoge expressie van MRP en GST-π werd geassocieerd met tumor invasie, herhaling en een slechte prognose, en deze conclusie werd bevestigd eierstokkanker [21]. In de lage-risico-groep, de 3-jarige en 5-jaars overleving van patiënten met chemotherapie was hoger dan die van de patiënten zonder chemotherapie. Dit resultaat gaf aan dat 5-Fu en platina gebaseerde chemotherapie postoperatieve overleving voordelen voor patiënten in de laag risico groep kan verhogen. Chemotherapie verzet zeldzaam in deze patiënten, en in theorie kan postoperatieve chemotherapie gebeuren volledig fit, en de prognose van de patiënt aanzienlijk verbeterd. In de risicogroep, het 3-jaar en 5-jaars overleving van patiënten met chemotherapie was hoger dan die van de patiënten zonder chemotherapie, maar het verschil was niet statistisch significant. Daarom is de 5-Fu en platina gebaseerde adjuvante chemotherapie niet het verbeteren van de prognose van de hoog-risico groep, en voor deze patiënten, postoperatieve chemotherapie moet zorgvuldig worden besproken en gekozen. Deze conclusies zijn gebaseerd op een klein aantal gevallen en kunnen enkele beperkingen hebben. Een grote steekproef van patiënten wordt opgevolgd in ons centrum, en de gedetailleerde resultaten, met inbegrip van de subgroep analyse (geslacht, lymfeklier metastase, enscenering, etcetera
.), Zal worden gerapporteerd in de nabije toekomst.
Conclusies
Daarom gecombineerde bepaling van MDR
gerelateerde eiwitten topo II, MRP en GST-π kan prospectief waardevol voor het optimaliseren van chemotherapie regimes en verder het voorspellen van de resultaten van patiënten. Nader onderzoek moet zich richten op het gecombineerde detectie van moleculaire markers (zoals HER-2, MDR
gerelateerde eiwitten, RTK /RAS signaalmoleculen, etcetera
.) Voor de geïndividualiseerde chemotherapie en uit te voeren multicenter klinische proeven, de resultaten . kan worden spannend
toestemming
schriftelijke toestemming is verkregen van de patiënt voor de publicatie van dit verslag en eventuele begeleidende beelden
Afkortingen
CDDP.
CIS-diaminodichloroplatin

DOX:
doxorubicine
GST-π:
glutathion S-transferase π
MDR:
multidrug resistance
MRP:
multidrug resistance eiwit
topo II:
topoisomerase II

5-FU:.
5-flurouracil
verklaringen
Dankwoord Inloggen Deze studie werd ondersteund door Natural Science Foundation van de provincie Zhejiang China (No.LY14H160007).
Authors 'originele ingediende dossiers voor afbeeldingen
Hieronder staan ​​de links naar de auteurs oorspronkelijke ingediende dossiers voor afbeeldingen. 'Originele bestand voor figuur 1 12957_2014_1778_MOESM2_ESM.pdf Authors' 12957_2014_1778_MOESM1_ESM.tiff Auteurs originele bestand voor figuur 2 originele bestand 12957_2014_1778_MOESM3_ESM.pdf Authors 'voor figuur 3 Competing belangen verhuur No voordelen, in welke vorm zijn ontvangen of zal worden ontvangen vanuit een commercieel gerelateerde partij die direct of indirect met het onderwerp van dit artikel. De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende belangen.
Auteurs bijdragen
Yu PF, Du YA, Cheng XD, Yu QM, Huang L, Dong RZ ontworpen en de studie uitgevoerd, de gegevens geanalyseerd, en hielp om te schrijven het manuscript. Yu PF is de belangrijkste onderzoeker, en herzien en bewerkt het manuscript. Alle auteurs gelezen en goedgekeurd het definitieve manuscript.

• Verschillen in de risicofactoren tussen de patronen van recidief bij patiënten na curatieve resectie voor geavanceerde maag carcinoma
• Genomische veranderingen en moleculaire subtypes van maagkanker in Asians