Dynamické expresie CEACAM7 v prekurzorov lézií karcinómu žalúdka a jeho prognostický význam v kombinácii s CEA

Dynamický výraz CEACAM7 v prekurzorov lézií karcinómu žalúdka a jej prognostický význam v kombinácii s CEA
abstraktné
pozadia
význame karcinoembryonálneho bunkový adhézny molekulou antigén súvisiaci 7 (CEACAM7) expresie v karcinómu žalúdka a prekanceróznych lézií a jeho korelácia s expresiou CEA zriedka bolo predtým vyšetrovaný.
metódy
CEACAM7 a CEA expresie bola detekovaná imunohistochemicky v po sebe idúcich úsekoch 345 pacientov s karcinómom žalúdka a prekancerózne lézie. Laserová konfokálna analýza bola vykonaná na stanovenie CEACAM7 a CEA lokalizáciu. Korelácia medzi CEACAM7 a CEA prejavu s klinicko-parametrov bola štatisticky vyhodnotená.
Výsledky
CEACAM7 expresie koreluje s patologickým triedenia (p = 0,006), Lauren klasifikácia (p = 0,023), a prejavu CEA (Oštepár R = 0,605, P < 0,001) v karcinómu žalúdka. CEACAM7 ko-lokalizovaný s CEA prevažne v cytoplazmatickej membráne nádorových buniek. CEA expresia korelovala s lymfatických uzlín (p = 0,031). CEACAM7 a expresie CEA postupne zvýšil z prekurzorov lézií žalúdočné karcinómy. Kombinácia CEACAM7 a CEA vyjadrenie bola stanovená ako nezávislý prediktor u pacientov s karcinómom žalúdka pomocou viacrozmerné analýzy (p = 0,001).
Závery
CEACAM7 expresie koreluje s diferenciáciou nádoru a expresie CEA v karcinómu žalúdka. CEACAM7 a CEA výraz môže synergicky podporovať žalúdočné karcinogenéze. Kombinovaná CEACAM7 a CEA výraz analýza môže byť užitočným ukazovateľom pooperačné u pacientov s karcinómom žalúdka.
Kľúčové
CEACAM7 karcinóm žalúdka prekurzory lézie prognóza CEA pozadí
In-hlboké znalosti o genotypových a fenotypových charakteristík karcinómu žalúdka a prekanceróznych lézií je veľmi dôležité pre predchádzanie ich rozvoj tým, že obmedzuje ich progresie nádoru vyššej platovej triedy po tom, čo rozvíjať a poskytovať prognostické informácie. Žalúdočné karcinómy sú všeobecne rozdelené do črevného typu a difúzneho typu Lauren [1]. Rakovina čreva typu bola myšlienka zobrazenie prevažne črevnej fenotyp, pretože predchádza prekancerózne fáze, vyznačujúci sa tým postupné kroky atrofická gastritída, črevné metaplázia, intraepiteliálnej neoplázie (GIN), a intramucosal karcinóm [2, 3]. Gin je považovaná za dôležitý prekancerózne lézie a je zaradený do kategórie buď vysoké alebo nízke-grade ako podľa Viedni [4] a WHO [5] klasifikácie. Bolo zistené, že prevládajúcim histologický typ sa môže meniť od rozlíšené na nediferencovanej typom progresie nádoru [6]. Ohkura, et al tiež uvádzajú, že histologické rozmanitosť vzrástla žalúdočné karcinómy rástol alebo napadol Submucosa [7]. Nedávny pokrok v molekulárnej biológii sa ukázalo, že fenotypové rozmanitosť nádorov je spojená so zodpovedajúcim rozmanitosti v génovej expresie [8-10]. Zmeny expresie nádorových špecifických biomarkerov v prekanceróznych lézií a rôznych diferencovaných žalúdočné karcinómy môžu pomôcť pochopiť transformáciu na histologické rozmanitosti a základné molekulárnej mechanizmus.
Karcinoembryonální antigén (CEA), rodina génov bolo preukázané, že sa vyjadrí v rôzne epiteliálnych nádorov odvodených [11], a ich funkčné dereguláciu bolo preukázané, že podporuje metastáz vo zvieracích modeloch [12]. Jeden konkrétny gén CEA člen rodiny, CEA bunková adhézny molekula-7 (CEACAM-7), reguluje normálne bunkové diferenciácie [11]. Deregulácia CEACAM-7 expresie bolo preukázané, že dochádza v skorých štádiách kolorektálneho onkogenézy; klesla CEACAM-7 expresie bola preukázaná v adenómy, hyperplastické polypy a aberantne krypty ložísk [11, 13]. CEA, ďalší člen rodiny antigénu karcinoembryonálneho predstavuje nádorový marker široko využívané v oblasti riadenia kolorektálneho karcinómu [14-16]. Zvýšené hladiny CEA boli prvýkrát identifikovaný ukazovateľom recidívy v 81% [17] a 89% [18] u pacientov s kolorektálnym karcinómom. Ako mezenterických a periférne hladiny CEA boli vyššie u nádorov s žilovej zapojenia, veľkého priemeru, a pokročilých štádiách kolorektálneho karcinómu [19]. Zvýšené hodnoty CEA boli hlásené aj u iných epitelové malignity, ako sú prsníka, pľúc a pankreasu [20].
K dnešnému dňu málo informácií je k dispozícii na CEACAM7 prejavu v žalúdočných nonneoplastic a nádorových lézií. Jedna štúdia uvádza, že hladiny mRNA boli CEACAM7 up-regulovaný v rakovinových žalúdočných epiteliálnych buniek [21]. Avšak, význam CEA a CEACAM7 prejavu v prekancerózne lézie karcinómu žalúdka je zle pochopený. Okrem toho, že vzťah medzi CEACAM7 a CEA je nejasná, aj keď patria do rovnakej rodiny CEACAM.
V tejto štúdii sme skúmali súvislosť medzi CEACAM7 a CEA prejavu, a ich vzťahu k rôznym klinicko-funkcií v karcinómu žalúdka, vrátane pacienta prežitie. Porovnávali sme expresné vzory CEACAM7 a CEA systematicky v normálnej sliznici, chronickej atrofickej gastritídy, žalúdočných, intraepiteliálnej neoplázie (Gin) a karcinómov žalúdka sa po sebe mikroskopické sústavy tkanív (TMA) sekcií. Pokiaľ je nám známe, toto je prvý Imunohistochemické štúdie CEACAM7 expresie v karcinómu žalúdka a prekancerózne lézie.
Metódy
Pacienti
Do štúdie bolo zahrnutých 345 pacientov, zahŕňajúcich 145 pacientov s karcinómom žalúdka, ktorí podstúpili primárnu chirurgickú resekciu v rokoch 2006 a 2009 na Xijing Hospital of Forth Military Medical University (Xi'an, Čína), 100 pacientov s intraepiteliálnej novotvarov (55 s nízkym stupňom a 45 high-grade), 50 pacientov s chronickou atrofickú gastritídu a 50 pacientov s normálnou žalúdočnej sliznici , Na 200 pacientov s nonneoplastic a prekanceróznych lézií dostal žalúdočné endoskopickú kontrolu a biopsiu rokoch 2008 až 2010 v nemocnici Xijing. Všetky diagnózy, vrátane stavu diferenciácie, boli vykonané na základe patológie a genetiky nádorov tráviaceho ústrojenstva u troch patológov [22]. Gin je kvalifikovaná ako jeden vysoko alebo nízkeho stupňa podľa oboch viedenskými [4] klasifikácií. Následné opatrenia bola vykonaná na 145 pacientov s karcinómom žalúdka pre analýzu prežitie. Títo pacienti podstúpili medzisúčtu gastrektómii s D2 lymfadenektómia u Xijing nemocnici od roku 2006 do roku 2009. Priemerný vek bol 56,4 rokov (rozmedzie 32-74 rokov). Všetci pacienti dostávali pooperačné chemoterapiu s použitím režimu na fluorouracil báze. Žiadni pacienti dostali predoperačné chemoterapiu alebo rádioterapiu podstúpilo. Následné opatrenia bola vykonaná na pacientov odo dňa operáciu, kým buď ku dňu smrti alebo 30. marca 2011, čo má za následok follow-up obdobie v rozmedzí od 5 do 67 mesiacov (priemer, 31 mesiacov). Tieto prípady prehral s nadväzujúcimi alebo tých, ktorí zomreli z iných ako rakovina žalúdka príčiny boli považované za cenzorovaných dát pre analýzu prežitie. Vo všetkých prípadoch bol získaný informovaný súhlas pre použitie resekovaných nádorových vzoriek. Táto štúdia bola schválená morálne a etickou komisiou Xijing nemocnice Forth Military Medical University.
Tkanivové
tkanivách karcinómu žalúdka alebo prekanceróznych lézií boli vykonané do tkanív mikro-matic tkanivovými Microarrayer (Beecher Instruments, striebro pružina, USA ™), v súlade s technikou Kononen et al [23]. Stručne povedané, základné biopsia tkaniva (2 mm v priemere) boli odobraté z jednotlivých parafínových tkanív (darca tvárnic) a usporiadané do nového príjemcu parafín bloku (array bloku tkaniva) za použitia trepanie zariadení. Výsledky farbenie v rôznych oblastiach v týchto blokoch poľa tkanív ukázala, vynikajúci súhlas. Jedným z hlavných bol vybraný z každom prípade pre analýzu. Stanovili sme zodpovedajúce prípad ako nádor, ktorý zaberal 10% z oblasti jadra.
Primárne protilátky pre imunohistochémia
myšou anti-ľudská protilátka CEACAM7 [BAC2] (ab26281) a králičie anti-ľudský CEA protilátkou (AB-15157 ) bolo všetko zakúpený od abca plc. (Cambridge, UK).
Imunohistochémia
Imunohistochémia bola vykonaná na 4-lm s hrúbkou rutinne spracovaný, parafínových rezov v sérii. Stručne povedané, po upečení na paneli pri teplote 60 ° C počas jednej hodiny, parafínu vložené, formalín vzorky pevných tkanív boli zbavené parafínu sa xylénom a rehydratované pomocou gradientu zmesi etanolu a ponorenie. Endogénnej peroxidázy aktivita bola zastavená 3% (obj /obj) peroxidu vodíka v metanole po dobu 10 minút, nasledovaný tromi 3-minútových premytím fyziologickým roztokom pufrovaným fosfátom (PBS). Toto bolo nasledované krokom získanie antigénu. Sklíčka sa ponoria do 0,01 mol /l roztoku citrátu (pH 6,0) a umiestni sa do mikrovlnnej rúre po dobu 30 minút. Po premytí v 0,01 mol /l fosfátového pufrovaného fyziologického roztoku (PBS, pH 7,4), Rezy potom boli blokované s 10% (objem /objem), normálne kozie sérum v PBS po dobu 30 minút, nasledovala inkubácia vo vlhkej komore pri teplote 4 ° cez noc s primárnou protilátkou proti CEACAM7 (1: 100, ab26281, abca) alebo CEA 1:10, aB-15157, abca) zriedený v PBS obsahujúcom 1% (hmotnosť /objem) hovädzí sérový albumín (BSA). Negatívne kontroly boli vykonané výmene primárnej protilátky s pre-imunitným myšiam sérom. Po troch 3-minútových premytá PBS boli rezy ošetrené druhú anti-myšou protilátky (PV-6002, Santa Cruz) počas 30 minút pri teplote miestnosti a následne ďalšie tri 3-minútových premytie PBS. Reakčný produkt bol vizualizovaný s Diaminobenzidine (DAB, zlí-9032, ZSGB. Peking, Čína) pri izbovej teplote po dobu 2 minút. Potom, čo bol kontrastne zafarbené hematoxylínom Harris (ZLI-9039, ZSGB. Peking, Čína), po dobu 3 minút, a opláchnu vodou z vodovodu, boli rezy okamžite dehydratovaná sekvenčné ponorenie do gradientu etanol a xylén, a montáž sa pernount a krycie sklíčka. Snímky boli získané pod svetelným mikroskopom (Olympus BX51, Olympus, Japonsko) vybavenom digitálnou kamerou DP70.
Vyhodnotenie Farbenie
Pre vyhodnotenie farbenie buniek, rezy boli skúmané dvoma nezávislými patológov bez predchádzajúcej znalosti z klinicko stav exemplárov. Expresie CEACAM7 a CEA bola hodnotená podľa pomeru pozitívnych buniek na vzorke (R) a farbiacim intenzity (I). Pomer pozitívnych buniek na vzorke bola hodnotená 0 ​​pre farbenie < 1%, 1 na farbenie od 2 do 25%, 2 pre farbenie 26 až 50%, 3 pre farbenie 51 až 75%, a 4 na farbenie a gt; 75% buniek vyšetrených. Intenzita bola hodnotená ako nasledujúce: 0, žiadny signál; 1, slabý; 2, stredné; a 3, silné farbenie. Celkom skóre (R x I) 0-12 bol nakoniec vypočítaná a označená ako negatívne (-score: 0-2). A pozitívny (+, 3-12)
Imunofluorescenčný a laserové konfokálna skenovacie
Po upečení na paneli pri teplote 60 ° C počas jednej hodiny, boli rezy zbavené parafínu sa xylénom a rehydratované pomocou gradientu zmesi etanolu a ponorenie. Toto bolo nasledované krokom získanie antigénu. Sklíčka sa ponoria do 0,01 mol /l roztoku citrátu (pH 6,0) a umiestni sa do mikrovlnnej rúre po dobu 30 minút. Po premytí v 0,01 mol /l fosfátového pufrovaného fyziologického roztoku (PBS, pH 7,4) boli vzorky inkubované s blokujúcim pufrom (5% normálnym kozím sérom, 1% hovädzí sérový albumín a 0,1% Triton X-100) po dobu jednej hodiny pri izbová teplota. Vzorky boli potom inkubované s primárnymi protilátkami zriedenými v blokovacom pufri pri teplote 4 ° C cez noc, a následne 3 premytá v PBS po dobu každých 10 minút. Nakoniec boli vzorky zafarbené pomocou sekundárnej protilátky zriedenej v blokovacom pufri po dobu 30 minút a potom 3 premytí v PBS. Krycia boli namontované na sklíčka sa predĺži Antifade (Invitrogen). Protilátky použité pre imunobarvení zahŕňať myšou anti-CEACAM7 (1: 100, ab26281, abca), králičie anti-CEA (1:10, AB-15157, abca), sekundárne protilátky boli kozí anti-myší IgG Alexa 549 (1: 300 , Invitrogen), kozie anti-králičie IgG Alexa 488 (1: 300, Invitrogen), DAPI (1: 1000, Molecular Probes). Priľahlé normálne tkanivá boli použité ako negatívne kontroly (20 mm od tkaniva, rakoviny). Imunologicky tkanivá boli vizualizované a obrazy boli zachytené pomocou FluoView (FVLIOi, OLYMPUS.
Štatistická analýza
Všetky štatistické analýzy boli vykonané pomocou IBM SPSS 19.0 softvér. Namerané údaje boli analyzované pomocou Studentov alebo jednosmerný test ANOVA, pričom kategorické údaje boli študované za použitia theχ2 alebo neparametrické test. krivky prežitia boli odhadnuté použitím metódy Kaplan-Meier a log-rank test bol použitý na výpočet rozdielov medzi krivkami. analýza s mnohými premennými pomocou Cox proporcionálneho rizika regresného modelu bola vykonaná posúdiť . prognostické hodnoty expresie proteínov koeficientu korelácie medzi expresiou CEACAM7 a CEA bola odhadnutá s použitím porovnávacej metódou Spearman štatistickej významnosti bola nastavená na P < .. 0,05
Výsledky
súčasnú expresiu CEACAM7 a CEA v karcinómu žalúdka
Imunohistochémia bola vykonaná na po sebe idúcich úsekoch 145 žalúdočných karcinómov použitie buď anti-CEACAM7 alebo anti-CEA protilátky (obrázok 1). Imunohistochemické analýza ukazuje, že 100 zo 145 (69,0%) vzoriek boli kategorizované ako CEACAM7-negatívne (obrázok 1A) a 45 z 145 (31,0%) vzoriek boli kategorizované ako CEACAM7-pozitívna (obrázok 1C, 1E). CEACAM7 výraz bol v zhode s CEA expresiou v 80,0% (116 145) prípadov karcinómu žalúdka (Spearman R = 0,605, p 0,001). CEACAM7 a CEA double-pozitivita bola pozorovaná u 40 prípadov, double-negativita bola pozorovaná v 76 prípadoch, a bolo zistené, 29 prípadov buď CEACAM7-pozitívne, alebo iba CEA-pozitívne. Výraz korelačný koeficient bola odhadnutá pomocou metódy Spearman Rank korelácia. Hodnota Spearman R bol 0,605 (P 0,001), čo svedčí o úzkej korelácii medzi CEACAM7 a CEA expresie v žalúdočných karcinómov. Ako to je nepohodlné a nie je potrebné kontrolovať lokalizácii týchto dvoch antigénov imonufluoreskujúca vo všetkých 40 karcinómu, tkanív, ktoré sú pozitívne na CEACAM7 a CEA, sme skúmali ich lokalizáciu v siedmich tkanivových rezoch, ktoré boli náhodne vybraných z 40 karcinóm tkanív sekcií. Analýza laserová konfokálna mikroskopia ukázala, že čo-lokalizovaný v membráne a cytoplazme rakovinových buniek (obrázok 2A, B, C, D). Obrázok 1 Súčasná expresie CEACAM7 a CEA v žalúdočných karcinómov. Dvojica A a B, Negatívne farbenie na CEACAM7 (A) a CEA (D) v dobre diferencovaného karcinómu žalúdka. C a D, CEACAM7 (C) a CEA (D) farbenie bol negatívny v dobre diferencovanej oblasti (rakovinové bunky sú v rozmedzí vo forme upchávky podobné) a pozitívne na zle diferencované oblasti (hnedej farby), o karcinómu žalúdka. E & F, pozitívne farbenie na CEACAM7 (E) a CEA (F) v zle diferencovaného karcinómu žalúdka. Dvojica A a B, C a D, a E &. F sú priľahlé Sériové rezy, v danom poradí (DAB ako chromogén, kontrastne Harris hematoxylínom, 50X)
Obrázok 2 spoločnú lokalizáciu CEACAM7 a CEA v tkanive karcinómu žalúdka. (Laser konfokálna analýza mikroskopie v reprezentatívnej časti). Pozitívne expresie pre CEACAM7 (A, červená) alebo CEA (B, zelená) v membráne a cytoplazme rakovinových buniek (červená). C, zlúčený obraz bez jadrových škvŕn; ko-expresie CEACAM7 a CEA je pozorovaný (žltá). D, Zlúčený obraz s jadrom farbená DAPI (modrá). (200X).
Korelácia CEACAM7 a CEA expresie s klinicko-rysy karcinómu žalúdka
Vzťah medzi CEACAM7 a CEA prejavu a rôznych klinicko funkcií žalúdočných karcinómov je zhrnutá v tabuľke 1. CEACAM7 bola častejšie vyjadrený v málo diferencovaných tumorov ako v dobre a stredne diferencovaných žalúdočné karcinómy (41,3% verzus 20,0%, p = 0,006). CEACAM7 pozitivita bola v žalúdočných karcinómov difúzny typu významne vyššia ako v žalúdočných karcinómov črevnej typu (39,7% verzus 22,2%, p = 0,023). CEA expresia významne koreluje s lymfatických uzlín (p = 0,031) .Table 1 korelácia CEACAM 7 a CEA prejavu s klinicko-charakteristík karcinómu žalúdka.
Premenné
CEACAM 7
hodnota P
CEA
hodnota P

Negatívne
(n = 100)
Pozitívne
(n = 45)

negatívne
(n = 81)
Pozitívne
(n = 64)

rovnosť
Male
74(67.3%)
36(32.7%)
0.437
58(52.7%)
52(47.3%)
0.178
Female
26(74.3%)
9 (25,7%)
23 (65,7%)
12 (34,3%)
vek (roky)
(stredná hodnota ± SD)
59,8 ± 10,4
58,1 ± 13,3
0,608
60,3 ± 9,4
58,9 ± 12,9
0,512
Umiestnenie nádoru
Horní
12 (60,0%)
8 (40,0%)
0,601
9 (45,0%)
11 (55,0%)
0,544
Blízky
49 (69,0%)
22 (31,0%)
40 (56,3%)
31 ( 43,7%)
nižšia
39 (72,2%)
15 (27,8%)
32 (59,3%)
22 (40,7%)
histológia †
dobre a Moderate
56(80.0%)
14(20.0%)
0.006
43(61.4%)
27(38.6%)
0.741
Undifferentiated
44(58.7%)
31(41.3%)
38 (50,7%)
37 (49,3%)
Lauren klasifikácie
Intestinal
56(77.8%)
16(22.2%)
0.023
39(54.2%)
33(45.8%)
0.683
Diffuse
44(60.3%)
29(39.7%)
42 (57,5%)
31 (42,5%)
Hĺbka nádoru
T1-T2
28 (75,7%)
9 (24,3%)
0,307
20 ( 54,1%)
17 (45,9%)
0,797
T3, T4
72 (66,7%)
36 (33,3%)
61 (56,5%)
47 ( 43,5%)
uzlín
Negative
59(72.8%)
22(27.2%)
0.257
37(67.3%)
18(32.7%)
0.031
Positive
41(64.1%)
23(35.9%)
44 (48,9%)
46 (51,1%)
Lymfatická invázie
Negative
44(75.9%)
14(24.1%)
0.143
35(60.3%)
23(39.7%)
0.375
Positive
56(64.4%)
31(35.6%)
46 (52,9%)
41 (47,1%)
vredov invázie
Negative
52(70.3%)
22(29.7%)
0.729
43(58.1%)
31(41.9%)
0.578
Positive
48(67.6%)
23(32.4%)
38 (53,5%)
33 (46,5%)
štádiom nádoru
I-II
40 (62,5%)
24 (37,5%)
0,135
34 (53,1 %)
30 (46,9%)
0,555
III-IV
60 (74,1%)
21 (25,9%)
47 (58,0%)
34 (42,0 %)
Poznámka: Pearsonovho X2 Test bol vykonaný, aby hodnota P okrem toho, že stredovek bol porovnaný pomocou Student-T testu. † No = dobre diferencovaný karcinóm; mierne = stredne diferencovaný karcinóm; nediferencovanej = zle diferencovaný karcinóm, karcinóm pečatný krúžok buniek, mucinózní alebo karcinóm.
dynamické expresie CEACAM7 a CEA v normálnom sliznice a prekanceróznych lézií
Výsledky CEACAM7 a CEA expresie v normálnej sliznicu a prekancerózne lézie boli zhrnuté v tabuľke 2. Positivity pre CEACAM7 expresie bola nájdená v chronickej atrofickej gastritídy (12%; 6/50), low-grade GIN (29,1%; 16/55) a vysoko kvalitné GIN (28,9%, 13/45). CEACAM7 výraz nebol nájdený v normálnej sliznicu (0/50). Pozitivita pre CEACAM7 expresiu v najnižší stupeň Ginsu bola významne vyššia ako u chronickej atrofickej gastritídy, (p = 0,032), a CEACAM7 bola častejšie vyjadrený v atrofickej chronickej gastritídy, než v normálnej žalúdočnej sliznice (p = 0,012), ale nebol zistený žiadny významný rozdiel v CEACAM7 výraz medzi low-grade gin a vysoko kvalitné gIN (p = 0,982). CEA pozitivita bola nájdená v normálnej sliznici (6%; 3/50), chronickú atrofickú gastritídu (8%, 4/50), low-grade džin (57,1%; 13/55), a vysoko kvalitné GIN (60%; 20/45). CEA pozitivita pre low-grade GIN bol významne vyšší ako pri chronickej atrofickej gastritídy, (p = 0,030), ale nižšiu, než pre vysoko kvalitné GIN (p = 0,028). Nebol žiadny významný rozdiel v CEA pozitivity medzi normálnou sliznice a chronickej atrofickej gastritídy, (p = 0,500). CEACAM7 expresie bol lokalizovaný na luminální povrch chronickej atrofickej gastritídy a Ginsu (obrázok 3C, E, a 3G), nie Imunoreakce bola zistená v normálnom sliznice (obrázok 3A). CEA bol lokalizovaný na luminální povrch normálne sliznice, chronickou atrofickú gastritídu low-grade gin, a high-grade GIN (obrázok 3B, D, F a 3H), zatiaľ čo oba CEA a expresie CEACAM7 bol lokalizovaný na celom povrchu žalúdočné rakovinové bunky (Obr 3I a 3J) Tabuľka 2 Vzťah medzi CEACAM7 a CEA prejavu s rôznymi žalúdočnými tkanív
N
CEACAM7


CEA


negatívne
pozitívnu
P hodnotu
*
negatívne
pozitívnu
P hodnotu
*
normálne sliznice
50
50 (100%)
0 (0%)
0,0121
47 (94%) Sims 3 (6%)
NS4
Chronická atrofická gastritída
50
44 (88,0%)
6 (12,0%)
0,0322
46 (92%)
4 (8%)
0.0305
nízky stupeň GIN
55
39 (70,9%)
16 (29,1%)
NS3
42 (76,4%)
13 (23,6%)
0,0286
vysoko kvalitné GIN
45
32 (71,1%)
13 (28,9%)
25 (55,6%)
20 (44,4%)
* χ2 test. N-počet prípadov, gin-žalúdočné intraepiteliálna neoplázia. NS-ne významnosť (P 0,05). 1 v porovnaní s normálnou sliznicou, CEACAM7 pozitivita bola významne vyššia u chronickej atrofickej gastritídy, (p = 0,012); 2 v porovnaní s chronickou atrofickou gastritídu, CEACAM7 bola častejšie vyjadrený v low grade GIN (p = 0,032); 3 Kapacita nebol žiadny významný rozdiel CEACAM7 výrazu medzi nízkym stupňom gin s vysokým stupňom GIN (p = 0,982); 4There nebol žiadny významný rozdiel medzi normálnou expresie CEA sliznice a chronickej atrofickej gastritídy, (p = 0,500); 5Compared s chronickou atrofickou gastritídu, CEA bola častejšie vyjadrený v Low-grade GIN (p = 0,030); 6 V porovnaní s nízkym stupňom gin, CEA bola častejšie vyjadrený v High Grade GIN (p = 0,028).
Obrázok 3 iný výraz vzory CEACAM7 a CEA v žalúdočných nenádorových lézií a žalúdočných karcinómov. Po sebe idúce rezy boli použité na analýzu. Č Imunoreakce pre CEACAM7 bola detekovaná v normálnej sliznicu (A). CEACAM7 bol lokalizovaný na apikálním povrchu chronickej atrofickej gastritídy (C), nízky stupeň GIN (E) a vysoko kvalitné GIN (G). CEA bol lokalizovaný na apikálním luminální povrch normálne sliznice (B), chronická atrofická gastritída (d), low-grade GIN (F) a vysoko kvalitné GIN (H). Ako CEACAM7 (I) a CEA (J) bol lokalizovaný na celom povrchu žalúdočných rakovinových buniek. (DAB ako chromogén, kontrastne Harris hematoxylínom, 200X).
Analýza prežitie
Jednoročné a trojročné prežitie bol 92,0% a 54,1% v uvedenom poradí, pre CEACAM7 a CEA double-negatívnych pacientov, 98,3% a 45,1%, v danom poradí, pre CEACAM 7 a CEA single-pozitívna (buď pozitívne, alebo CEACAM7 CEA pozitívne) pacientov, a 64,0% a 8,5% pre CEACAM7 a CEA double-pozitívnych pacientov. Významný rozdiel bol pozorovaný medzi mierou prežitia double-negatívne a double-pozitívnych pacientov (obrázok 4, P = 0,001). Avšak, nebol nájdený žiadny významný rozdiel medzi dvojitými-negatívne a jedno-pozitívnych pacientov (obrázok 4, P = 0,391). Multivariačný analýza ukázala, že dvojité pozitivita pre CEACAM7 a CEA výrazu (p = 0,004) a štádiom nádoru (p = 0,001) boli faktory, nezávisle na sebe spojené s horšou prognózou pacienta (tabuľka 3). Obrázok 4 Kaplan-Meierove krivky pooperačné prežitie. Stredná doba prežitia pacientov s CEACAM7 a CEA double-pozitivity bolo kratšie ako u pacientov s dvojitým negativity (log-rank test: p = 0,001). Ale, nebol zistený žiadny významný rozdiel medzi strednej doby prežitia pacientov s jediným-pozitivity a dvojitého negativita (p = 0,391). Tabuľka 3
Viacrozmerná analýza založená na Coxovho modelu proporcionálneho rizika
premenná
spoločností Hazard Ratio (95% interval spoľahlivosti
)
P-hodnota
štádiom nádoru III, IV vs I, II
2.240 ( 1,501 - 3,343)
0,001
CEACAM7 (+) CEA (+) vs. CEACAM7 (-) CEA (-)
1,545 (1,153 - 2,069)
0,004
Diskusia
CEA je jeden z najužitočnejších nádorových markerov pre karcinóm [24], a jej expresie bolo zistené, že koreluje s klinicko-funkcií, ako je žilovej zapojenie, väčší priemer, a pokročilých štádiách kolorektálny karcinómy [25, 26]. V rakovine hrubého čreva, CEA je up-regulovaná, ale CEACAM7 bolo publikované, že downregulated [11], je zaujímavé, že boli obaja up-regulované v karcinómu žalúdka, a ko-exprimovaný vo väčšine tkanív. čo naznačuje, že CEACAM7 môžu hrať rôzne úlohy v rôznych druhov rakoviny. Ako sa zistilo, CEACAM7 výraz, ktorý má byť úzko koreluje s CEA expresie v karcinómu žalúdka v tejto štúdii, Overili sme si svoj vzťah s rôznymi klinicko-funkciami, a zistil, že CEACAM7 výraz bol v zle diferencovaných žalúdočných karcinómov častejšie ako u dobre a stredne diferencovaných karcinómov (P = 0,006), a bol tiež v korelácii s Lauren klasifikácie (p = 0,023). Bolo oznámené, že prevládajúci histologický typ môže zmeniť z rozlíšená do nediferencovanej typom progresie nádoru [6], Ohkura, et al [17] tiež uviedla, že sa zvyšuje histologické rôznorodosti ako žalúdočné karcinómy rast alebo inváziu Submucosa. Preto sme predpokladali, že CEACAM7 môže podporovať agresivitu a progresie karcinómu žalúdka prostredníctvom regulácie diferenciácie nádorových buniek, a to vyžaduje ďalšie skúmanie.
Je napríklad rakovina čreva typu sa predpokladá, že sa pred začatím prekancerózne fáze, vyznačujúci sa tým postupné kroky atrofickú gastritída, črevné metaplázia, Ginsu a karcinóm intramucosal, bolo by to mať veľký význam pre objasnenie dynamický výraz CEACAM7 a CEA v normálnej žalúdočnej sliznici, chronickou atrofickou gastritídu, Ginsu a karcinómu žalúdka. Zistili sme, že v porovnaní s normálnou žalúdočnou sliznicou, CEACAM7 expresia bola významne zvýšená v chronickej atrofickej gastritídy, a všetky ostatné lézií, a CEA expresia bola významne zvýšená v Ginsu a karcinómu žalúdka. Tieto výsledky ukazujú, že CEACAM7 môže hrať úlohu v žalúdku karcinogenéze od ranej fázy, konkrétne chronickej atrofickú gastritídou fáze. Okrem toho, môžu spolupracovať s CEA CEACAM7 vo fáze Ginsu. V súlade s našimi výsledkami, CEA transgénne myši vykazovali masívne zväčšených dvojbodky obsahujúce spojitú mozaiku ťažké hyperplázia, dysplázia, a ryhovanou adenomatóznej morfológiu, čo naznačuje, že up-regulácia CEA môže byť pomocný krok v progresii ľudského karcinómu [27]. Zdá sa, že up-regulácia expresie CEA CEACAM7 alebo môže byť čoskoro molekulovú udalosť v vzniku nádorov, a obaja proteíny môžu byť použité ako detekčný biomarkerov v prekanceróznych lézií na identifikáciu pacientov s vysokým rizikom malígny konverzie. Naproti tomu, znížená expresia CEACAM-7 bolo preukázané, že dochádza v skorých štádiách kolorektálneho onkogenézy sa znížená expresia v adenómy, hyperplastické polypy, a to aj aberantne krypty foci.11,13 kontrastné expresiu CEACAM7 v žalúdku a kolorektálny karcinogenézy vyplýva, že jeho funkcia závisí od kontextu.
Pacienti s pokročilou rakovinou často chcú vedieť, ako dlho im zostáva k životu [28], ale klinickí lekári nie sú istí, pri odhadovaní prognózu [29]. Preto biomarkery pre prognózu predstavujú potenciálne nástroj, ktorý pomôže lekárom pri starostlivosti o pacienta. V priebehu posledných desiatich rokov, veľké množstvo proteínov, ktoré sú dôležité v putatively karcinogenézy a biológiu rakoviny boli študované pre ich prognostický význam u karcinómu žalúdka, ale žiadny z nich bolo preukázané, že sú dostatočne užitočné v klinickej predpovede. Je vysoko nepravdepodobné, že by jeden proteín markéra poskytne senzitivitu a špecificitu požadovanú pre prognózu. Tak, dôraz presunul k objavu kombináciou biomarkerov priamo spojené s chorobným procesom [30]. V tejto štúdii, len pokročilom štádiu nádoru a CEACAM7 a CEA double-pozitivity boli identifikované pomocou Coxovho modelu proporcionálneho rizika ako nezávislé prognostické prediktory prežitia pacientov s operabilným karcinómu žalúdka, nezávisle od veku, pohlavia, diferenciácie, patologické TNM štádiu, lymfatické uzlín, lymfatické a žilovej inváziu pacientov.
Závery
Pokiaľ je nám známe, toto je prvá porovnávacia imunohistochemická štúdia CEACAM7 a CEA expresiu v karcinómu žalúdka a prekancerózne lézie. Tieto dva proteíny boli spoločne vyjadrené a ko-lokalizované v karcinómu žalúdka. Bolo zistené, CEACAM7 expresie sa významne koreluje s diferenciáciou karcinómu žalúdka. Bolo zistené, že expresia CEACAM7 a CEA, aby v priebehu vývoja karcinómu žalúdka postupne zvyšovať. CEACAM7 a CEA double-pozitivita môže byť užitočným pooperačnej prognostickým ukazovateľom u pacientov s karcinómom žalúdka.
Deklarácia
Poďakovanie
Táto práca bola podporovaná Národným 973 Projektu Číny (No.2010CB529300, 02, 05, 06) a Národná prírodná Science Foundation of China (Nie 81030044).
Autori ďalej len "pôvodné predložený súbory obrazov
Nižšie sú uvedené odkazy na autorov pôvodných predložených súborov pre obrázky. "Pôvodný súbor obrázku 1 12957_2011_914_MOESM2_ESM.tiff autorov 12957_2011_914_MOESM1_ESM.tiff Autori pôvodnej súbor Obrázok 2 12957_2011_914_MOESM3_ESM.tiff autorského pôvodného súboru pre obrázok 3 12957_2011_914_MOESM4_ESM.pdf autorov pôvodný súbor na obrázku 4 Konflikt záujmov
autori vyhlasujú, že nemajú žiadne protichodné záujmy.

• Sú inhibítory protónovej pumpy prvou voľbou pre akútnu liečbu žalúdočných vredov? Metaanalýza randomizovaných klinických trials
• Súčasné kompozitný nadobličiek feochromocytóm, viac žalúdka stromálne nádory a pseudohermaphrodism u pacientov s von Recklinghausens disease