Lebendiger Ausdruck CEACAM7 in Vorläuferläsionen des Magenkarzinoms und seiner prognostischen Wert in Kombination mit CEA

Lebendiger Ausdruck CEACAM7 in Vorläuferläsionen des Magenkarzinoms und seiner prognostischen Wert in Kombination mit CEA
Zusammenfassung
Hintergrund
Die Bedeutung von carcinoembryonic antigen-verwandte Zelladhäsionsmolekül 7 (CEACAM7) expression in Magenkarzinom und präkanzerösen Läsionen und ihre Korrelation mit CEA-Expression wurde selten zuvor untersucht.
Methods
CEACAM7 und CEA-Expression wurde in aufeinanderfolgenden Abschnitten 345 durch Immunhistochemie nachgewiesen Patienten mit Magenkarzinom und präkanzerösen Läsionen. Laser konfokale Analyse wurde durchgeführt, Lokalisierung CEACAM7 und CEA zu bestimmen. Die Korrelation zwischen CEACAM7 und CEA-Expression mit klinischen Parametern wurde statistisch ausgewertet.
Ergebnisse | CEACAM7 Ausdruck mit pathologischen Grading korreliert (p = 0,006), Lauren-Klassifikation (p = 0,023) und CEA-Expression (Spearman R = 0,605, P < 0,001) in Magenkarzinom. CEACAM7 co-lokalisiert mit CEA überwiegend in der zytoplasmatischen Membran von Krebszellen. CEA-Expression wurde mit Lymphknotenmetastasen (P = 0,031) korreliert. CEACAM7 und CEA-Expression erhöht schrittweise von Vorläuferläsionen zu Magenkarzinomen. Eine Kombination von CEACAM7 und CEA-Expression wurde bestimmt ein unabhängiger Prädiktor für Patienten mit Magenkarzinom durch multivariate Analyse (P = 0,001) sein.
Schlussfolgerungen
CEACAM7 Expression mit der Tumordifferenzierung und CEA-Expression in Magenkarzinom korreliert. CEACAM7 und CEA-Expression synergistisch Magen-Krebsentstehung fördern. Kombinierte CEACAM7 und CEA-Expressionsanalyse eine nützliche postoperativen Prädiktor für Patienten mit Magenkarzinom sein kann.
Schlüsselwörter CEACAM7 Magenkarzinom Vorläuferläsionen Prognose CEA Hintergrund
In eingehenden Kenntnis der genotypischen und phänotypischen Eigenschaften des Magenkarzinoms und präkanzerösen Läsionen ist extrem wichtig für ihre Entwicklung zu verhindern, beschneidet ihre Progression zu einem höheren Grad Tumor, wenn sie sich entwickeln, und prognostische Informationen. Magenkarzinome wurden von Lauren in Darm-Typ und diffus-Typ unterteilt [1] allgemein worden. Der Darm-Typ Krebs wurde gedacht, eine überwiegend intestinalen Phänotyp anzuzeigen, weil es durch die aufeinanderfolgenden Schritte atrophische Gastritis, intestinale Metaplasie, intraepitheliale Neoplasie (GIN) und intramuköse Karzinom [2, 3], gekennzeichnet durch eine präkanzeröse Stufe vorausgeht. GIN wird als wichtiger Präkanzerose anerkannt und wird als entweder hoch- oder minderwertiges kategorisiert sowohl nach der Wiener [4] und der WHO [5] Klassifikationen. Es wurde berichtet, dass der überwiegende histologischen Typ aus dem differenzierten zur undifferenzierten Typ ändern kann als die Tumoren Fortschritt [6]. Ohkura et al berichteten auch, dass die histologische Vielfalt erhöht als die Magenkarzinomen wuchs oder die Submukosa eingedrungen [7]. Jüngste Fortschritte in der Molekularbiologie hat gezeigt, dass die phänotypische Diversität von Tumoren mit einer entsprechenden Vielfalt der Genexpression assoziiert ist [8-10]. Veränderungen in der Expression von tumorspezifischen Biomarkern in präkanzerösen Läsionen und verschiedene differenzierte Magenkarzinomen kann uns helfen, die Transformation zu histologischen Heterogenität und der zugrunde liegenden molekularen Mechanismus.
Die carcinoembryonales Antigen (CEA) Familie von Genen wurde in ein gezeigt werden, ausgedrückt Vielzahl von epithelialen Tumoren abgeleitet [11], und ihre funktionelle Deregulierung hat Metastasen in Tiermodellen [12] gezeigt zu fördern. Ein besonderes CEA-Gen Familienmitglied, das CEA zelluläre Adhäsionsmolekül-7 (CEACAM-7), regelt die normale Zelldifferenzierung [11]. Deregulation von CEACAM-7-Expression wurde gezeigt, früh in kolorektalen oncogenesis auftreten; verringert CEACAM-7-Expression wurde in Adenomen, hyperplastische Polypen, und anomale Kryptenherden [11, 13] gezeigt. CEA, ein weiteres Mitglied der carcinoembryonic Antigenfamilie, stellt einen Tumormarker sind weit verbreitet in der Behandlung von Darmkrebs eingesetzt [14-16]. Erhöhte CEA-Spiegel waren die ersten identifizierten Indikator für die erneut auftretende Erkrankung wird in 81% [17] und 89% [18] von Patienten mit Darmkrebs. Sowohl mesenterialen und peripheren Ebenen CEA waren höher in Neoplasmen mit venösen Beteiligung mit großem Durchmesser und fortgeschrittenen Stadien des kolorektalen Karzinoms [19]. Erhöhte CEA-Werte wurden auch für andere epithelialen malignen Erkrankungen, wie sie von der Brust, der Lunge und der Bauchspeicheldrüse berichtet worden [20].
Bisher ist wenig Information über CEACAM7 Expression in Magen nichtneoplastische und Neoplasien zur Verfügung. Eine Studie berichtet, dass CEACAM7 mRNA-Spiegel wurden hochreguliert in kanzerösen Magenepithelzellen [21]. Jedoch ist die Bedeutung von CEA und CEACAM7 Expression in präkanzerösen Läsionen des Magenkarzinoms schlecht verstanden. Außerdem unklar die Beziehung zwischen CEACAM7 und CEA, obwohl sie derselben CEACAM Familie gehören. In dieser Studie
untersuchten wir die Korrelation zwischen CEACAM7 und CEA-Expression, und ihre Beziehung zu den verschiedenen klinisch-pathologischen Eigenschaften in Magenkarzinom, einschließlich Patienten Überleben. Wir verglichen die Expressionsmuster von CEACAM7 und CEA systematisch in normalen Schleimhaut, chronische atrophische Gastritis, Magen intraepitheliale Neoplasie (GIN), und Karzinome des Magens mit aufeinander folgenden Tissue Microarray (TMA) Abschnitte. Unseres Wissens ist dies die erste immunhistochemischen Studie von CEACAM7 Expression in Magenkarzinom und präkanzerösen Läsionen.
Methoden
Patienten
Die Studie umfasste 345 Patienten, darunter 145 Patienten mit Magenkarzinom, die primäre chirurgische Resektion zwischen 2006 unterzog und 2009 im Xijing Hospital of Forth Military Medical University (Xi'an, China), 100 Patienten mit intraepitheliale Neoplasien (55 low-grade und 45 High-grade), 50 Patienten mit chronischer atrophischer Gastritis und 50 Patienten mit normaler Magenschleimhaut . Die 200 Patienten mit nichtneoplastische und präkanzerösen Läsionen hatte eine Magen-endoskopische Kontrolle und Biopsie zwischen 2008 und 2010 im Xijing Krankenhaus aufgenommen. Alle Diagnosen, einschließlich Differenzierungsstatus, wurden auf der Grundlage der Pathologie und Genetik Tumoren des Verdauungssystems durch drei Pathologen [22] gemacht. GIN wird entweder hoch- oder minderwertiges getrennt nach den beiden Wiener [4] Klassifikationen. Follow-up wurde auf den 145 Patienten mit Magenkarzinom für das Überleben Analyse durchgeführt. Diese Patienten wurden subtotale Gastrektomie mit D2 Lymphknotendissektion bei Xijing Krankenhaus von 2006 bis 2009. Das Durchschnittsalter 56,4 Jahre war (Bereich 32-74 Jahre). Alle Patienten erhielten eine postoperativen Chemotherapie eine Fluorouracil-basierten Regime verwenden. Bei keinem der Patienten erhielten eine präoperative Chemotherapie oder Strahlentherapie unterzog. Follow-up wurde ab dem Zeitpunkt der Operation 30, bis entweder der Tag des Todes oder März 2011 über Patienten durchgeführt, was zu einer Follow-up-Perioden 5-67 Monate hin (durchschnittlich 31 Monate). Diese Fälle verloren Follow-up oder diejenigen, die von einer anderen Ursache als Magenkrebs starben, wurden als zensierte Daten für die Analyse der Überlebensraten betrachtet. In allen Fällen wurde Einverständniserklärung für die Nutzung von reseziert Tumorproben erhalten. Diese Studie wurde von der Moral und Ethikkommission der Xijing Hospital of Forth Military Medical University genehmigt.
Tissue Microarrays
Gewebe des Magenkarzinoms oder präkanzerösen Läsionen in Gewebe Mikroarrays wurden von Tissue Microarrayer (Beecher Instruments, Silber Spring, USA ™), nach der Technik von Kononen et al [23]. Kurz gesagt, wurden in einem neuen Empfängerparaffinblock (Gewebearrayblock) unter Verwendung eines Trepan Vorrichtung aus einzelnen in Paraffin eingebettetem Gewebe (Donor-Blöcke) und angeordnet Kerngewebebiopsien (2 mm Durchmesser) entnommen. Die Färbungsergebnisse der einzelnen Bereiche in diesen Gewebefeldblöcken zeigte eine sehr gute Übereinstimmung. Ein Kern wurde aus jeweils für die Analyse ausgewählt. Wir definierten einen ausreichenden Fall als ein Tumor, der 10% der Kernbereich besetzt.
Primäre Antikörper für die Immunhistochemie
Maus-anti-human-Antikörper CEACAM7 [BAC2] (ab26281) und Kaninchen-Anti-Human-CEA-Antikörper (AB-15157 ) wurde alles von Abcam plc erworben. (Cambridge, UK).
Immunhistochemie
Immunhistochemie auf 4-lm dicke durchgeführt wurde, routinemäßig verarbeitet werden, Paraffinschnitte in Serie. Kurz gesagt, nach einer Stunde bei 60 ° C auf einem Panel Einbrennen die Paraffin eingebettet, mit Formalin fixierten Gewebeproben wurden mit Xylol und rehydratisiert durch Gradienten ethanol Eintauchens entparaffiniert. Endogene Peroxidaseaktivität wurde durch 3% (vol /vol) Wasserstoffperoxid in Methanol für 10 Minuten abgeschreckt, gefolgt von drei 3-minütige Waschungen mit phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS). Dies wurde durch einen Schritt des Antigen-Retrieval gefolgt. Die Objektträger wurden in 0,01 mol /l Citrat-Pufferlösung (pH 6,0) und in einem Mikrowellenofen für 30 min eingetaucht. Nach einem Waschschritt in 0,01 mol /l Phosphat-gepufferter Salzlösung (PBS, pH 7,4), durch Inkubation in einer feuchten Kammer Die Schnitte wurden dann folgte bei 4 30 min lang mit 10% (vol /vol) normalem Ziegenserum in PBS blockiert über Nacht mit dem primären Antikörper zu CEACAM7 (1: 100, ab26281, Abcam) oder CEA 1:10 ab-15157, Abcam), verdünnt in PBS 1% (wt /vol) Rinderserumalbumin (BSA) enthält. Negative Kontrollen wurden durch Ersatz des primären Antikörpers mit Präimmun-Maus-Serum durchgeführt. Nach drei 3-minütigen Waschungen mit PBS wurden die Schnitte mit einem zweiten anti-Maus-Antikörper (PV-6002, Santa Cruz) für 30 Minuten bei Raumtemperatur durch zusätzliche drei 3-minütige Waschungen mit PBS behandelt. Das Reaktionsprodukt wurde mit Diaminobenzidin (DAB, ZLI-9032, ZSGB. Peking, China) sichtbar bei Raumtemperatur für 2 min. mit Leitungswasser counterstained mit Harris Hämatoxylin (ZLI-9039, ZSGB. Peking, China) für 3 min und gespült wurden die Schnitte sofort dehydriert durch aufeinanderfolgende Eintauchen in Gradienten Ethanol und Xylol und montiert mit pernount und Abdecküberzüge Nachdem sie. Bilder wurden mit einer Digitalkamera ausgestattet DP70 unter einem Lichtmikroskop (Olympus BX51, Olympus, Japan) erhalten.
Bewertung der Färbung
Zur Beurteilung der Zellfärbung, Abschnitte von zwei unabhängigen Pathologen ohne vorherige Kenntnis der clinicopathological sucht wurden Status der Proben. Expression von CEACAM7 und CEA wurde entsprechend dem Verhältnis der positiven Zellen pro Probe (R) und die Färbungsintensität (I) ausgewertet. Das Verhältnis der positiven Zellen pro Probe erzielt wurde 0 für die Färbung von < 1%, 1 für die Färbung von 2 bis 25%, 2 für die Färbung von 26 bis 50%, 3 für die Färbung von 51 bis 75%, und 4 zum Färben von > 75% der untersuchten Zellen. Die Intensität wurde abgestuft, wie folgend: 0, wenn kein Signal anliegt; 1, schwach; 2, mäßig; und 3, eine starke Färbung. Ein Gesamtscore (R × I) von 0 bis 12 wurde schließlich berechnet und benotet als negativ (-score: 0-2). Und positiv (+, 3-12)
Immunofluoreszenz und konfokale Laserscan
Nach dem Backen auf einer Platte bei 60 ° C für eine Stunde wurden die Schnitte mit Xylol und rehydratisiert durch Gradienten ethanol Eintauchens entparaffiniert. Dies wurde durch einen Schritt des Antigen-Retrieval gefolgt. Die Objektträger wurden in 0,01 mol /l Citrat-Pufferlösung (pH 6,0) und in einem Mikrowellenofen für 30 min eingetaucht. Nach einem Waschschritt in 0,01 mol /l Phosphat-gepufferter Salzlösung (PBS, pH 7,4) wurden die Proben mit Blockierungspuffer (5% normales Ziegenserum, 1% Rinderserumalbumin und 0,1% Triton X-100) eine Stunde lang bei Zimmertemperatur. Proben wurden dann durch drei Waschungen in PBS bei 4 ° C über Nacht folgte mit primären Antikörpern, verdünnt in Blockierungspuffer inkubiert, für 10 Minuten. Schließlich für 30 Minuten in Blockierungspuffer Proben wurden durch 3 Waschungen in PBS mit Sekundärantikörper verdünnt gefärbt. Die Deckgläser wurden mit Prolong Antifade (Invitrogen) auf Objektträger aufgebracht. Antikörper für Immunfärbung verwendet werden, umfassen Maus-Anti-CEACAM7 (1: 100, ab26281, Abcam), Kaninchen-Anti-CEA (1:10, ab-15157, Abcam), sekundäre Antikörper verwendet wurden Ziege-anti-Maus-IgG-Alexa 549 (1: 300 , Invitrogen), Ziege-anti-Kaninchen-IgG-Alexa 488 (1: 300, Invitrogen), DAPI (1: 1000, Molecular Probes). Angrenzenden normalen Gewebe wurden als negative Kontrollen (20 mm weg von dem Krebsgewebe) verwendet. Immungefärbte Gewebe sichtbar gemacht wurden und die Bilder wurden erfasst, indem Sie FluoView (FVLIOi, OLYMPUS.
Statistische Analyse
Alle statistischen Analysen wurden durchgeführt unter Verwendung von IBM SPSS 19.0 Software. Die Messdaten wurden mit Student analysiert t oder one-way ANOVA-Test, während kategorische Daten wurden mit theχ2 oder nichtparametrischer Test untersucht. die Überlebenskurven wurden die Kaplan-Meier-Methode geschätzt, und die Log-Rank-Test wurde verwendet, Unterschiede zwischen den Kurven zu berechnen. die multivariate Analyse der Cox-proportional-Hazards-Regressionsmodell wurde unter Verwendung der durchgeführt, um zu bewerten . prognostischen Werte der Proteinexpression Korrelationskoeffizient zwischen der Expression von CEACAM7 und CEA wurde der Spearman Korrelationsmethode geschätzt unter Verwendung statistischer Signifikanz wurde bei P <eingestellt;.. 0,05
Ergebnisse | Co-Expression von CEACAM7 und CEA in Magenkarzinom
Die Immunhistochemie wurde an aufeinanderfolgenden Abschnitten von 145 Magenkarzinomen durchgeführt unter Verwendung von entweder anti-CEACAM7 oder Anti-CEA-Antikörper (Abbildung 1). Immunohistochemische Analyse zeigt, dass 100 von 145 (69,0%) Proben als CEACAM7-negativ (1A) kategorisiert wurden, und 45 von 145 (31,0%) Proben wurden als CEACAM7-positive (1C, 1E) kategorisiert. CEACAM7 Ausdruck war konkordant mit CEA-Expression in 80,0% (116 von 145) des Magenkarzinoms Fällen (Spearman R = 0,605, P < 0,001). CEACAM7 und CEA doppelt Positivität in 40 Fällen beobachtet wurde, wurde doppelt Negativität in 76 Fällen beobachtet, und 29 Fälle wurden gefunden entweder CEACAM7-positiv oder CEA-positive nur zu sein. Der Ausdruck Korrelationskoeffizient wurde mit der Spearman Rank Correlation-Methode geschätzt. Der Spearman R-Wert war 0,605 (P < 0,001), eine enge Korrelation zwischen CEACAM7 und CEA-Expression in Magenkarzinomen anzeigt. Da es unbequem und unnötig ist, die Lokalisierung der beiden Antigene durch Immunofluoreszenz in allen 40 Karzinoms Gewebe zu überprüfen, die für beide CEACAM7 und CEA positiv sind, untersuchten wir ihre Lokalisierung in sieben Gewebeschnitten, die zufällig aus den 40 Karzinomen Geweben Abschnitte ausgewählt wurden. Laser konfokale Mikroskopie-Analyse zeigte, dass sie co-lokalisiert in der Membran und Cytoplasma von Krebszellen (2A, B, C, D). Abbildung 1 Co-Expression von CEACAM7 und CEA in Magenkarzinomen. A & B, negative Färbung für CEACAM7 (A) und CEA (D) in einem gut differenzierten Magenkarzinom. C & D, CEACAM7 (C) und CEA (D) Färbung war negativ in der gut differenzierten Bereich (Krebszellen sind in drüsenartigen Form reichte) und positiv in den schlecht differenzierten Bereich (braune Farbe) eines Magenkarzinom. E & F, Positive Färbung für CEACAM7 (E) und CEA (F) in einem schlecht differenzierten Magenkarzinom. A & B, C & D und E &. F benachbarte Serienschnitte sind jeweils (DAB als Chromogen, counterstained mit Harris Hämatoxylin, 50X)
2 Co-Lokalisation von CEACAM7 und CEA in das Gewebe des Magenkarzinoms Abbildung. (Laser konfokale Mikroskopie-Analyse in einem repräsentativen Abschnitt). Positive Ausdruck für CEACAM7 (A, rot) oder CEA (B, grün) in der Membran und Zytoplasma der Krebszellen (rot). C, zusammengefügte Bild ohne Kernfärbung; Coexpression von CEACAM7 und CEA beobachtet (gelb). D fusionierte Bild mit Kern gefärbt durch DAPI (blau). (200X).
Korrelation von CEACAM7 und CEA-Expression mit klinisch-pathologischen Eigenschaften des Magenkarzinoms
Beziehung zwischen CEACAM7 und CEA-Expression und verschiedenen klinisch-pathologischen Eigenschaften von Magenkarzinomen in der Tabelle zusammengefasst 1. CEACAM7 mehr wurde häufig ausgedrückt schlecht differenzierten Tumoren in als gut und mäßig Magenkarzinomen differenziert (41,3% vs. 20,0%; p = 0,006). CEACAM7 Positivität war signifikant höher in diffuse-type Magenkarzinomen als in Darm-Typ Magenkarzinomen (39,7% vs. 22,2%; p = 0,023). CEA-Expression signifikant mit Lymphknotenmetastasen (P = 0,031) .Tabelle 1 Korrelation von CEACAM 7 und CEA-Expression mit klinisch-pathologischen Eigenschaften des Magenkarzinoms korreliert.
Variablen
CEACAM 7
P-Wert
CEA
P-Wert

Negativ
(n = 100)
Positive
(n = 45)

Negative
(n = 81)
Positive
(n = 64)

Geschlecht
Male
74(67.3%)
36(32.7%)
0.437
58(52.7%)
52(47.3%)
0.178
Female
26(74.3%)
9 (25,7%)
23 (65,7%)
12 (34,3%)
Alter (Jahre)
(Mittelwert ± SD)
59,8 ± 10,4
58,1 ± 13,3
0.608
60,3 ± 9,4
58,9 ± 12,9
0.512
Lage des Tumors
Ober
12 (60,0%)
8 (40,0%)
0.601
9 (45,0%)
11 (55,0%)
0.544
Mitte
49 (69,0%)
22 (31,0%)
40 (56,3%)
31 ( 43,7%)
Lower
39 (72,2%)
15 (27,8%)
32 (59,3%)
22 (40,7%)
Histologie †
Well und Moderate
56(80.0%)
14(20.0%)
0.006
43(61.4%)
27(38.6%)
0.741
Undifferentiated
44(58.7%)
31(41.3%)
38 (50,7%)
37 (49,3%)
Lauren-Klassifikation
Intestinal
56(77.8%)
16(22.2%)
0.023
39(54.2%)
33(45.8%)
0.683
Diffuse
44(60.3%)
29(39.7%)
42 (57,5%)
31 (42,5%)
Tiefe der Tumor
T1-T2
28 (75,7%)
9 (24,3%)
0.307
20 ( 54,1%)
17 (45,9%)
0.797
T3-T4
72 (66,7%)
36 (33,3%)
61 (56,5%)
47 ( 43,5%)
Knoten Metastasierung
Negative
59(72.8%)
22(27.2%)
0.257
37(67.3%)
18(32.7%)
0.031
Positive
41(64.1%)
23(35.9%)
44 (48,9%)
46 (51,1%)
Lymphgefäßinvasion
Negative
44(75.9%)
14(24.1%)
0.143
35(60.3%)
23(39.7%)
0.375
Positive
56(64.4%)
31(35.6%)
46 (52.9%)
41 (47,1%)
Venöse Invasion
Negative
52(70.3%)
22(29.7%)
0.729
43(58.1%)
31(41.9%)
0.578
Positive
48(67.6%)
23(32.4%)
38 (53,5%)
33 (46,5%)
Tumorstadium
I- II 40 (62,5%) auf
24 (37,5%)
0.135
34 (53,1 %)
30 (46,9%)
0.555
III- IV
60 (74,1%)
21 (25,9%)
47 (58,0%)
34 (42,0 %)
HINWEIS: Pearson-X2-Test wurde durchgeführt, außer P-Wert zu erhalten, dass Alter durch den Student-T-Test verglichen. † Nun = gut Karzinom differenziert; mäßig = mäßig Karzinom differenziert; undifferenzierten = schlecht differenzierten Karzinom, Siegelringzellkarzinom oder muzinöse Karzinom.
Lebendiger Ausdruck CEACAM7 und CEA in normalen Schleimhaut und präkanzerösen Läsionen, Die Ergebnisse von CEACAM7 und CEA-Expression in normalen Schleimhaut und präkanzerösen Läsionen sind in der Tabelle zusammengefasst , low-grade GIN (29,1%; 16/55), und hochwertige GIN (28,9%; 13/45), 2. Positivität für CEACAM7 Expression wurde in chronisch atrophische Gastritis (6/50 12%) gefunden. CEACAM7 Expression wurde nicht in normalen Schleimhaut (0/50) gefunden. Positivität für CEACAM7 Expression in low grade GIN war signifikant höher als für chronische atrophische Gastritis (P = 0,032) und CEACAM7 wurde häufiger in atrophische chronische Gastritis ausgedrückt als in normaler Magenschleimhaut (P = 0,012), aber es gab keinen signifikanten Unterschied in CEACAM7 Ausdruck zwischen low-grade GIN und hochwertige GIN (P = 0,982). , Chronische atrophische Gastritis (8%; 4/50), low-grade GIN (57,1%; 13/55), und hochwertige GIN (60%; CEA-Positivität wurde in normalen Schleimhaut (3/50 6%) gefunden; 20/45). Die CEA-Positivität für minderwertige GIN war signifikant höher als für chronische atrophische Gastritis (p = 0,030), war aber niedriger als die für hochgradige GIN (P = 0,028). Es gab keinen signifikanten Unterschied in der CEA-Positivität zwischen normaler Schleimhaut und chronische atrophische Gastritis (P = 0,500). CEACAM7 Expression auf die luminale Oberfläche von chronischer atrophischer Gastritis und GIN (3C, E und 3G) lokalisiert wurde, wurde keine Immunreaktion in normaler Schleimhaut (3A) detektiert. CEA wurde auf der luminalen Oberfläche von normaler Schleimhaut, chronische atrophische Gastritis, minderwertiges GIN lokalisiert und hochwertigen GIN (3B, D, F und 3H), während sowohl CEA und CEACAM7 Expression auf die gesamte Oberfläche lokalisiert war von Magenkrebszellen (Abbildung 3I und 3J) Tabelle 2 Beziehung zwischen CEACAM7 und CEA-Expression mit verschiedenen Magen-Gewebe
Tissues
N
CEACAM7


CEA


Negative
Positive
P-Wert *
Negative
Positive
P-Wert *
normale Schleimhaut
50
50 (100%)
0 (0%)
0,0121
47 (94%)
3 (6%)
Chronische atrophische Gastritis
NS4

44 (88,0%)
6 (12,0%)
0,0322
46 (92%)
4 (8%)
0,0305
Minderwertiges GIN
55
39 (70,9%)
16 (29,1%)
42 (76,4%)
NS3
13 (23,6%)
0,0286
Hochgradige GIN
45
32 (71.1%)
13 (28,9%)
25 (55,6%)
20 (44,4%)
* χ2-Test. N-Zahl der Fälle, GIN-Magen intraepitheliale Neoplasie. NS-keine Signifikanz (P > 0,05). 1 Im Vergleich mit normalen Schleimhaut, CEACAM7 Positivität war signifikant höher als bei chronischer atrophischer Gastritis (p = 0,012); 2 im Vergleich mit chronischer atrophischer Gastritis wurde CEACAM7 häufiger in Minderwertiges GIN (P = 0,032) ausgedrückt; 3Der gab keinen signifikanten Unterschied von CEACAM7 Ausdruck zwischen Minderwertiges GIN und Hochgradige GIN (P = 0,982); 4There gab keinen signifikanten Unterschied der CEA-Expression zwischen normaler Schleimhaut und chronische atrophische Gastritis (P = 0,500); 5Compared mit chronischer atrophischer Gastritis wurde CEA häufiger ausgedrückt in Low-grade GIN (P = 0,030); 6 Im Vergleich zu Low grade GIN wurde CEA häufiger in Hochgradige GIN (P = 0,028) ausgedrückt.
3 unterschiedliche Expressionsmuster von CEACAM7 und CEA Abbildung im Magen nicht Neoplasien und Magenkarzinomen. Aufeinanderfolgende Schnitte wurden für die Analyse verwendet. Keine Immunreaktion für CEACAM7 wurde in normaler Schleimhaut (A) detektiert. CEACAM7 wurde auf der apikalen Oberfläche der chronischen atrophischen Gastritis (C) lokalisiert, low grade GIN (E) und hochgradige GIN (G). CEA wurde auf der apikalen luminalen Oberfläche von normalen Schleimhaut (B) lokalisiert, chronische atrophische Gastritis (D), low-grade GIN (F), und hochwertige GIN (H). Sowohl CEACAM7 (I) und CEA (J) wurde auf die gesamte Oberfläche der Magenkrebszellen lokalisiert. (DAB als Chromogen, counterstained mit Harris Hämatoxylin, 200X).
Survival Analysis
Ein Jahr und drei-Jahres-Überlebensrate betrug 92,0% und 54,1%, bzw. für CEACAM7 und CEA doppelt negativen Patienten, 98,3% und 45,1%, bzw. für CEACAM 7 und CEA Single-positiv (entweder positiv oder CEACAM7 CEA positiven) Patienten und 64,0% und 8,5% für CEACAM7 und CEA doppelt-positiven Patienten. Signifikanter Unterschied wurde zwischen der Überlebensrate von doppelsträngiger negativ und doppelt-positiven Patienten (Abbildung 4, P = 0,001) beobachtet. Es wurde jedoch kein signifikanter Unterschied zwischen den doppelt negativen und Single-positiven Patienten (Abbildung 4, P = 0,391) gefunden. Multivariate Analyse zeigte, dass doppelt Positivität für CEACAM7 und CEA-Expression (p = 0,004) und Tumorstadium (p = 0,001) wurden Faktoren unabhängig mit schlechteren Prognose der Patienten assoziiert (Tabelle 3). Abbildung 4 Kaplan-Meier-Kurven für die postoperative Überleben. Die mediane Überlebenszeit von Patienten mit CEACAM7 und CEA doppelt Positivität war kürzer als die von Patienten mit Doppel Negativität (Log-Rank-Test: p = 0,001). Aber gab es keinen signifikanten Unterschied zwischen der medianen Überlebenszeit von Patienten mit Single-Positivität und Negativität Doppel (P = 0,391).
Tabelle 3 Multivariate Analyse auf Basis von Cox Proportional-Hazards-Modell
Variable
Hazard Ratio (95%
Konfidenzintervall)
P-Wert
Tumorstadium III, IV vs I, II
2.240 ( 1,501-3,343)
0,001
CEACAM7 (+) CEA (+) vs CEACAM7 (-) CEA (-)
1,545 (1,153-2,069)
0,004
Diskussion
CEA ist eine der nützlichsten Tumormarker für Karzinome [24] und dessen Expression mit klinisch-pathologischen Eigenschaften, wie venöse Beteiligung, größeren Durchmesser und fortgeschrittenen Stadien der kolorektalen Karzinomen zu korrelierenden gefunden wurde [25, 26]. In Darmkrebs ist CEA aufreguliert, wurde aber berichtet CEACAM7 abreguliert werden [11], ist es interessant, dass sie sowohl in Magenkrebs wurden aufreguliert und coexprimiert in den meisten Geweben. was darauf hindeutet, dass CEACAM7 unterschiedliche Rollen in verschiedenen Krebsarten spielen können. Als CEACAM7 Ausdruck gefunden wurde eng mit CEA-Expression in Magenkarzinom in dieser Studie korreliert werden, überprüften wir ihre Korrelation mit verschiedenen klinisch-pathologischen Eigenschaften, und fanden heraus, dass CEACAM7 Ausdruck in schlecht differenzierten Magenkarzinomen häufiger war als in gut und mäßig differenzierten Karzinomen (P = 0,006) und wurde auch mit Lauren-Klassifikation (p = 0,023) korreliert. Es wurde berichtet, dass der überwiegende histologischen Typ aus dem differenzierten zur undifferenzierten Typ ändern kann als die Tumoren Fortschritt [6], Ohkura et al [17] berichteten auch, dass die histologische Vielfalt steigt mit Magenkarzinomen wachsen oder die Submukosa einzufallen. Daher vermutet man, dass CEACAM7 Aggressivität und das Fortschreiten des Magenkarzinoms Tumorzelldifferenzierung über Regel fördern könnte, und dies bedarf weiterer Untersuchungen.
Als Darm-Typ Krebs wird angenommen, dass durch eine präkanzeröse Stufe durch die aufeinanderfolgenden Schritte atrophische gekennzeichnet vorausgehen Gastritis, intestinale Metaplasie, GIN und intramukosalen Karzinom, wäre es von großer Bedeutung sein, den dynamischen Ausdruck von CEACAM7 und CEA in normalen Magenschleimhaut, chronische atrophische Gastritis, GIN und Magenkarzinom zu klären. Wir fanden heraus, dass, im Vergleich zu normaler Schleimhaut des Magens wurde CEACAM7 Expression in chronischer atrophischer Gastritis und alle anderen Läsionen signifikant erhöht und CEA-Expression wurde in GIN und Magenkarzinom signifikant erhöht. Diese Ergebnisse zeigen, dass CEACAM7 eine Rolle bei der Magen-Krebsentstehung von einem frühen Stadium spielen können, insbesondere die chronische atrophische Gastritis Stadium. Darüber hinaus mit CEACAM7 an der GIN Stufe kooperieren CEA kann. In Übereinstimmung mit unseren Ergebnissen CEA transgenen Mäuse zeigten massiv vergrößerte Doppelpunkte eine kontinuierliche mosaic schwerer Hyperplasie, Dysplasie umfassen, und gezahnte adenomatöse Morphologie, was darauf hindeutet, dass die Hochregulierung von CEA eine instrumentale Schritt in menschlichen Krebsprogression werden [27]. Es scheint, dass die Hochregulierung der Expression CEACAM7 oder CEA kann ein frühes Ereignis in molekularen Tumorigenese und beide Proteine ​​können als Screening-Biomarkern in präkanzerösen Läsionen verwendet werden, um Patienten mit einem hohen Risiko einer malignen Umwandlung zu identifizieren. Im Gegensatz dazu verringerte Expression von CEACAM-7 wurde früh in der kolorektalen oncogenesis gezeigt auftreten, mit einer verminderten Expression in Adenomen, hyperplastischen Polypen und sogar aberranten Krypten foci.11,13 Die kontras Ausdruck CEACAM7 im Magen-und kolorektalen Karzinogenese impliziert, dass seine Funktion ist kontextabhängig.
Patienten mit Krebs im fortgeschrittenen Stadium wollen oft wissen, wie lange sie [28] zu leben verlassen haben, aber Ärzte sind sich nicht sicher auf die Prognose der Schätzung [29]. Daher Biomarker für die Prognose sind ein mögliches Instrument Kliniker mit der Patientenversorgung zu helfen. Während der letzten zehn Jahre eine große Anzahl von Proteinen, die mutmaßlich wichtig in der Karzinogenese und Krebsbiologie wurden für ihre prognostischen Wert bei Magenkrebs untersucht, aber keine haben nachgewiesen worden, ausreichend nützlich in der klinischen Vorhersage zu sein. Es ist höchst unwahrscheinlich, dass ein einzelnes Protein-Marker die Sensitivität und Spezifität für die Prognose erforderlich liefern. Somit wurde Nachdruck auf die Entdeckung von Kombinationen von Biomarkern in direktem Zusammenhang mit Krankheitsprozesse verschoben [30]. In dieser Studie wurden nur fortgeschrittenen Tumorstadium und CEACAM7 und CEA doppelt Positivität mit dem Proportional-Hazards-Modell als unabhängiger prognostischer Prädiktoren Cox identifiziert für das Überleben von Patienten mit resektablen Magenkarzinom, unabhängig von Alter, Geschlecht, Differenzierung, pathologische TNM-Stadium, Lymphe Knoten Metastasen, Lymph- und venösen Invasion der Patienten.
Schlussfolgerungen
unseres Wissens ist dies die erste vergleichende immunhistochemischen Studie von CEACAM7 und CEA-Expression in Magenkarzinom und präkanzerösen Läsionen. Die zwei Proteine ​​gemeinsam exprimiert wurden und co-lokalisiert in Magenkarzinom. wurde CEACAM7 Expression signifikant zu korrelieren mit der Differenzierung von Magenkarzinom gefunden. Die Expression von CEA CEACAM7 und wurde nach und nach während der Entwicklung von Magenkrebs zu erhöhen gefunden. CEACAM7 und CEA doppelt Positivität kann eine nützliche postoperativen prognostischen Indikator für Patienten mit Magenkarzinom sein.
Erklärungen
Danksagung
Diese Arbeit wurde von der National 973-Projekt von China unterstützt wurde (No.2010CB529300, 02, 05, 06) und der National Natural Science Foundation of China (No 81030044).
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