espressione dinamica di CEACAM7 nelle lesioni precursori di carcinoma gastrico e il suo valore prognostico in combinazione con CEA

espressione dinamica di CEACAM7 nelle lesioni precursori di carcinoma gastrico e il suo valore prognostico in combinazione con CEA
Abstract
sfondo
Il significato di carcinoembrionario legati molecola di adesione delle cellule 7 (CEACAM7) espressione in carcinoma gastrico e le lesioni precancerose e la sua correlazione con l'espressione del CEA è stato raramente precedentemente esaminato
. Metodi
espressione CEACAM7 e CEA è stata rilevata mediante immunoistochimica in sezioni consecutive di 345 soggetti con carcinoma gastrico e le lesioni precancerose. Laser confocale analisi è stata effettuata per determinare CEACAM7 e CEA localizzazione. Correlazione tra CEACAM7 ed espressione del CEA con i parametri clinico-patologici sono stati analizzati statisticamente
. Risultati
espressione CEACAM7 correlata con la classificazione patologica (P = 0,006), la classificazione di Lauren (P = 0.023), e l'espressione del CEA (Spearman R = 0,605, P < 0,001) nel carcinoma gastrico. CEACAM7 co-localizzato con CEA prevalentemente nella membrana citoplasmatica delle cellule cancerose. espressione CEA è stata correlata con metastasi linfonodali (p = 0,031). CEACAM7 ed espressione CEA è aumentato progressivamente da lesioni precursori a carcinomi gastrici. Una combinazione di espressione CEACAM7 e CEA è stato determinato per essere un predittore indipendente per i pazienti con carcinoma gastrico mediante l'analisi multivariata (P = 0,001)
. Conclusioni
espressione CEACAM7 correla con la differenziazione del tumore e l'espressione del CEA nel carcinoma gastrico. espressione CEACAM7 e CEA può sinergicamente promuovere la carcinogenesi gastrica. Combinato CEACAM7 e CEA analisi di espressione può essere un predittore postoperatoria utile per i pazienti con carcinoma gastrico.
Parole
CEACAM7 gastrica carcinoma precursori lesioni prognosi CEA Sfondo
approfondita conoscenza dei genotipiche e fenotipiche caratteristiche di carcinoma gastrico e lesioni precancerose è estremamente importante per prevenire il loro sviluppo, limitando la loro progressione di un tumore grado superiore volta sviluppano, e fornendo informazioni prognostiche. carcinomi gastrici sono stati generalmente suddivise in tipo intestinale e diffusa-tipo per Lauren [1]. Il cancro intestinale-tipo è stato pensato per visualizzare un fenotipo prevalentemente intestinale perché è preceduto da una fase precancerosa caratterizzato dalle fasi sequenziali di gastrite atrofica, metaplasia intestinale, neoplasia intraepiteliale (GIN) e carcinoma intramucosa [2, 3]. GIN è riconosciuto come un importante lesione precancerosa, ed è classificato come sia alta o bassa qualità in termini sia di Vienna [4] e l'OMS [5] classificazioni. E 'stato riportato che il tipo istologico predominante può variare dalla differenziato al tipo indifferenziata come tumori progrediscono [6]. Ohkura, et al ha anche riferito che la diversità istologica aumentato come i carcinomi gastrici sono cresciuti o hanno invaso la sottomucosa [7]. I recenti progressi nel campo della biologia molecolare hanno dimostrato che la diversità fenotipica dei tumori è associato ad una corrispondente diversità nell'espressione genica [8-10]. Le variazioni di espressione di biomarcatori specifici tumorali in lesioni precancerose e vari carcinomi gastrici differenziati possono aiutarci a capire la trasformazione per l'eterogeneità istologica e il meccanismo molecolare alla base.
L'antigene carcinoembrionario (CEA) famiglia di geni ha dimostrato di essere espresso in un varietà di epiteliali derivate neoplasie [11], e la loro deregolamentazione funzionale ha dimostrato di promuovere la metastasi in modelli animali [12]. Un particolare CEA membro della famiglia del gene, il CEA adesione cellulare molecola-7 (CEACAM-7), regola la differenziazione cellulare normale [11]. è stato dimostrato che la deregolamentazione del CEACAM-7 di espressione che si verifichi presto oncogenesi del colon-retto; diminuito CEACAM-7 l'espressione è stato mostrato in adenomi, polipi iperplastici, e la cripta foci aberranti [11, 13]. CEA, un altro membro della famiglia dell'antigene carcinoembrionario, rappresenta un marcatore tumorale ampiamente utilizzato nel trattamento del cancro colorettale [14-16]. L'aumento dei livelli di CEA sono stati il ​​primo indicatore identificato di recidive nel 81% [17] e il 89% [18] dei pazienti affetti da cancro del colon-retto. Sia mesenterica e livelli periferici di CEA erano più alti in neoplasie con coinvolgimento venoso, di grande diametro, e stadi avanzati di carcinoma del colon-retto [19]. sono stati riportati anche i valori di CEA aumentato per altre neoplasie epiteliali, come quelli della mammella, del polmone, del pancreas e [20].
Fino ad oggi, poche informazioni sono disponibili sul espressione CEACAM7 nelle lesioni non neoplastiche e neoplastiche gastrici. Uno studio riporta che i livelli di mRNA sono stati CEACAM7 up-regolate in cellule epiteliali gastriche cancerose [21]. Tuttavia, il significato di CEA e di espressione CEACAM7 nelle lesioni precancerose del carcinoma gastrico è poco conosciuta. Inoltre, il rapporto tra CEACAM7 e CEA non è chiara, anche se appartengono alla stessa famiglia CEACAM.
In questo studio, abbiamo studiato la correlazione tra CEACAM7 ed espressione CEA, e la loro relazione con le varie caratteristiche clinico-patologici nel carcinoma gastrico, tra cui il paziente sopravvivenza. Abbiamo confrontato i pattern di espressione di CEACAM7 e CEA sistematicamente nella mucosa normale, gastrite cronica atrofica, neoplasia intraepiteliale gastrico (GIN), e carcinomi dello stomaco con consecutiva microarray tessuto sezioni (TMA). A nostra conoscenza, questo è il primo studio immunoistochimico dell'espressione CEACAM7 nel carcinoma gastrico e lesioni precancerose.
Metodi
pazienti
Lo studio ha incluso 345 pazienti, di cui 145 pazienti con carcinoma gastrico sottoposti a resezione chirurgica primaria tra il 2006 e nel 2009 presso l'Ospedale Xijing of Forth Military Medical University (Xi'an, Cina), 100 pazienti con neoplasie intraepiteliali (55 basso grado e 45 di prima scelta), 50 pazienti con gastrite cronica atrofica, e 50 pazienti con normale mucosa gastrica . I 200 pazienti con lesioni non neoplastiche e precancerose avevano ricevuto un assegno endoscopica gastrica e la biopsia tra il 2008 e il 2010 presso l'Ospedale Xijing. Tutte le diagnosi, tra cui lo stato di differenziazione, sono state fatte sulla base della Patologia e Genetica tumori del digerente da tre patologi [22]. GIN è classificato come sia alta o bassa qualità secondo entrambi i Vienna [4] classificazioni. Il follow-up è stata eseguita su 145 pazienti con carcinoma gastrico per l'analisi di sopravvivenza. Questi pazienti sono stati sottoposti a gastrectomia subtotale con D2 dissezione linfonodale a Xijing Hospital dal 2006 al 2009. L'età media era di 56,4 anni (range: 32-74 anni). Tutti i pazienti hanno ricevuto chemioterapia postoperatoria con un regime a base di fluorouracile. Nessun pazienti hanno ricevuto la chemioterapia o la radioterapia preoperatoria sottoposti. Il follow-up è stato eseguito su pazienti a partire dalla data di chirurgia fino a quando la data del decesso o 30 marzo 2011, con conseguente periodi di follow-up che vanno da 5 a 67 mesi (media, 31 mesi). Questi casi persi al follow-up o di coloro che sono morti di una causa diversa da cancro gastrico sono stati considerati come dati censurati per l'analisi dei tassi di sopravvivenza. In tutti i casi, il consenso informato per l'uso di campioni tumorali resecati. Questo studio è stato approvato dal Comitato Etico e Morale dell'Ospedale Xijing of Forth Military Medical University.
Tissue microarray
tessuti di lesioni precancerose o di carcinoma gastrico sono stati trasformati in tessuto micro-array da tessuto microarrayer (Beecher Instruments, Argento Spring, USA ™), secondo la tecnica di Kononen et al [23]. In breve, biopsie dei tessuti di base (2 mm di diametro) sono state prese da singoli tessuti inclusi in paraffina (blocchi donatore) e disposti in un nuovo blocco di paraffina destinatario (blocco matrice del tessuto) utilizzando un apparato di trapano. I risultati della colorazione delle diverse aree di questi blocchi di matrice di tessuto ha mostrato un eccellente accordo. Un nucleo è stato scelto ogni caso per l'analisi. Abbiamo definito un caso adeguato come un tumore che occupava il 10% della superficie di base. Gli anticorpi
primari per immunoistochimica
anticorpo CEA mouse anticorpi CEACAM7 anti-umano [BAC2] (ab26281) e coniglio anti-umano (ab-15157 ) è stato acquistato da tutti Abcam plc. (Cambridge, UK).
Immunoistochimica
immunoistochimica è stata eseguita su 4-LM-spessi, di routine trasformati, sezioni di paraffina in serie. Brevemente, dopo cottura su un pannello a 60 ° C per un'ora, la paraffina, formalina campioni di tessuto sono stati fissa deparaffinate con xilene e reidratate attraverso l'immersione etanolo gradiente. attività perossidasica endogena è raffreddata dal 3% (vol /vol) di perossido di idrogeno in metanolo per 10 minuti, seguita da tre lavaggi di 3 minuti con tampone fosfato salino (PBS). Questo è stato seguito da una fase di recupero dell'antigene. I vetrini sono stati immersi in 0,01 mol /l soluzione tampone citrato (pH 6,0) e posti in un forno a microonde per 30 min. Dopo un lavaggio in 0,01 mol /l di soluzione salina tamponata con fosfato (PBS, pH 7,4), le sezioni sono state poi bloccata con il 10% (vol /vol) siero normale di capra in PBS per 30 minuti seguita da incubazione in una camera umida a 4 notte con l'anticorpo primario CEACAM7 (1: 100, ab26281, Abcam) o CEA 1:10 ab-15157, Abcam) diluito in PBS contenente 1% (peso /volume) siero albumina bovina (BSA). I controlli negativi sono stati eseguiti sostituendo l'anticorpo primario con siero di topo pre-immune. Dopo tre lavaggi di 3 minuti con PBS, le sezioni sono state trattate con secondo anticorpo anti-topo (PV-6002, Santa Cruz) per 30 minuti a temperatura ambiente seguite da tre ulteriori lavaggi di 3 minuti con PBS. prodotto di reazione è stato visualizzato con diaminobenzidina (DAB, ZLI-9032, ZSGB. Pechino, Cina) a temperatura ambiente per 2 min. Dopo essere stato di contrasto con ematossilina di Harris (ZLI-9039, ZSGB. Pechino, Cina) per 3 minuti, e risciacquati con acqua di rubinetto, le sezioni sono state immediatamente disidratati per immersione sequenziale in etanolo gradiente e xilene, e montati con pernount e coperchio scivola. Le immagini sono state ottenute al microscopio ottico (Olympus BX51, Olympus, Giappone) equipaggiato con una fotocamera digitale DP70.
Valutazione della colorazione
Per la valutazione di colorazione delle cellule, sezioni sono state esaminate da due patologi indipendenti senza una preventiva conoscenza del clinicopatologici stato dei campioni. Espressione dei CEACAM7 e CEA è stata valutata in base al rapporto di cellule positive per esemplare (R) e intensità di colorazione (I). Il rapporto di cellule positive per esemplare è stato segnato 0 per la colorazione di < 1%, 1 per la colorazione di 2 a 25%, 2 per la colorazione del 26 al 50%, 3 per la colorazione del 51 al 75%, e 4 per la colorazione > 75% delle cellule esaminate. L'intensità è stata classificata come segue: 0, nessun segnale; 1, debole; 2, moderata; e 3, forte colorazione. Un punteggio totale (R × I) da 0 a 12 è stato finalmente calcolato e classificato come negativo (-score: 0-2). E positivo (+, 3-12)
immunofluorescenza e confocale a scansione laser
Dopo la cottura su un pannello a 60 ° C per un'ora, le sezioni sono state deparaffinate con xilene e reidratate attraverso l'immersione etanolo gradiente. Questo è stato seguito da una fase di recupero dell'antigene. I vetrini sono stati immersi in 0,01 mol /l soluzione tampone citrato (pH 6,0) e posti in un forno a microonde per 30 min. Dopo un lavaggio in 0,01 mol /l di soluzione salina tamponata con fosfato (PBS, pH 7,4), i campioni sono stati incubati con tampone di bloccaggio (siero normale 5% di capra, 1% di albumina sierica bovina e 0,1% triton X-100) per un'ora a temperatura ambiente. I campioni sono stati poi incubati con anticorpi primari diluiti in tampone bloccante a 4 ° C durante la notte, seguito da 3 lavaggi in PBS per 10 minuti ciascuno. Infine, i campioni sono stati colorati con anticorpi secondari diluiti in tampone bloccante per 30 minuti seguito da 3 lavaggi in PBS. Vetrini sono stati montati su vetrini con Prolungare Antifade (Invitrogen). Gli anticorpi utilizzati per immunostaining includono topo anti-CEACAM7 (1: 100, ab26281, Abcam), coniglio anti-CEA (1:10, ab-15157, Abcam), anticorpi secondari utilizzati erano di capra anti-topo IgG Alexa 549 (1: 300 , Invitrogen), capra anti-IgG di coniglio Alexa 488 (1: 300, Invitrogen), DAPI (1: 1000, Molecular Probes). tessuti normali adiacenti sono stati usati come controlli negativi (20 mm dal tessuto tumorale). tessuti immunostained sono stati visualizzati e le immagini sono state catturate utilizzando FlUOVIEW (FVLIOi, OLYMPUS.
Analisi statistica
Tutte le analisi statistiche sono state effettuate utilizzando IBM SPSS 19.0 del software. I dati di misurazione sono stati analizzati utilizzando T o una via di test ANOVA di Student, mentre dati categorici sono stati studiati utilizzando theχ2 o test non parametrico. le curve di sopravvivenza sono state stimate utilizzando il metodo di Kaplan-Meier e il log-rank test è stato utilizzato per calcolare le differenze tra le curve. l'analisi multivariata utilizzando il modello dei rischi proporzionali di regressione di Cox è stata effettuata per valutare la . I valori prognostici di proteine ​​espressione coefficiente di correlazione tra l'espressione di CEACAM7 e CEA è stato stimato utilizzando il metodo di correlazione di Spearman la significatività statistica è stato fissato a P <.. 0.05
Risultati
co-espressione di CEACAM7 e CEA nel carcinoma gastrico
immunoistochimica è stata eseguita su sezioni consecutive di 145 carcinomi gastrici utilizzando sia anti-CEACAM7 o anti-CEA anticorpo (Figura 1). L'analisi immunoistochimica mostra che 100 di 145 (69,0%) i campioni sono stati classificati come CEACAM7-negativi (Figura 1A), e 45 di 145 (31,0%) campioni sono stati classificati come CEACAM7-positivi (Figura 1C, 1E). espressione CEACAM7 era concorde con l'espressione del CEA a 80,0% (116 su 145) dei casi di carcinoma gastrico (Spearman R = 0.605, P < 0,001). CEACAM7 e CEA doppia positività è stata osservata in 40 casi, doppio negatività è stata osservata in 76 casi, e 29 casi sono stati trovati ad essere sia CEACAM7-positiva o CEA-solo positivo. Il coefficiente di correlazione espressione è stato stimato utilizzando il metodo di correlazione di Spearman Rank. Il valore Spearman R era 0.605 (P < 0,001), indicando una stretta correlazione tra l'espressione CEACAM7 e CEA nei carcinomi gastrici. Come è scomodo e inutile per verificare la localizzazione delle due antigeni mediante immunofluorescenza in tutti i 40 tessuti di carcinoma che sono positivi sia per CEACAM7 e CEA, abbiamo studiato la loro localizzazione in sette sezioni di tessuto che sono stati selezionati in modo casuale dai tessuti sezioni 40 di carcinoma. Analisi Laser microscopia confocale ha dimostrato che co-localizzate nella membrana e citoplasma di cellule cancerose (Figura 2A, B, C, D). Figura 1 Co-espressione di CEACAM7 e CEA nei carcinomi gastrici. A & B, colorazione negativa per CEACAM7 (A) e CEA (D) in un carcinoma gastrico ben differenziati. C & D, CEACAM7 (C) e CEA (D) La colorazione è stata negativa nella zona ben differenziate (le cellule tumorali sono variava in forma ghiandola-like) e positivo in zona scarsamente differenziato (colore marrone) di un carcinoma gastrico. E & F, colorazione positiva per CEACAM7 (E) e CEA (F), in un carcinoma gastrico scarsamente differenziato. A & B, C & D, ed E &. F sono sezioni seriali adiacenti, rispettivamente (DAB come cromogeno, di contrasto con ematossilina di Harris, 50X)
figura 2 Co-localizzazione di CEACAM7 e CEA nel tessuto di carcinoma gastrico. (laser analisi microscopia confocale in una sezione rappresentativa). espressione positiva per CEACAM7 (A, rossa) o il CEA (B, verde) nella membrana e citoplasma delle cellule cancerose (rosso). C, immagine fusa senza colorazione nucleare; co-espressione di CEACAM7 e CEA si osserva (giallo). D, immagine fusa con nucleo macchiato da DAPI (blu). (200X).
Correlazione di CEACAM7 e CEA espressione con le caratteristiche clinico-patologici di carcinoma gastrico
Relazione tra CEACAM7 e CEA espressione e varie caratteristiche clinico-patologici di carcinomi gastrici è sintetizzata nella tabella 1. CEACAM7 è stata più frequentemente espressa nei tumori poco differenziati di carcinomi gastrici nel bene e moderatamente differenziati (41,3% vs 20,0%, p = 0,006). CEACAM7 positività era significativamente più alta nei diffusa di tipo carcinomi gastrici che in intestinale di tipo carcinomi gastrici, (39,7% vs 22,2%, p = 0,023). espressione CEA significativamente correlata con metastasi linfonodali (p = 0,031) .table 1 Correlazione di CEACAM 7 e l'espressione del CEA con caratteristiche clinico-patologici di carcinoma gastrico.
Variabili
CEACAM 7
valore P
CEA
valore di P

negativo
(n = 100)
positiva (n = 45)

negativo (n = 81)
positivo
(n = 64)

genere
Male
74(67.3%)
36(32.7%)
0.437
58(52.7%)
52(47.3%)
0.178
Female
26(74.3%)
9 (25,7%)
23 (65,7%)
12 (34,3%)
Età (anni)
(media ± SD)
59,8 ± 10,4
58,1 ± 13,3
0,608
60.3 ± 9.4
58,9 ± 12,9
0.512
sede del tumore
Alto
12 (60,0%) Pagina 8 (40,0%)
0,601
9 (45,0%)
11 (55,0%)
0,544
Medio
49 (69,0%)
22 (31,0%)
40 (56,3%)
31 ( 43,7%)
inferiore
39 (72,2%)
15 (27,8%)
32 (59,3%)
22 (40,7%)
Istologia †
Bene e Moderate
56(80.0%)
14(20.0%)
0.006
43(61.4%)
27(38.6%)
0.741
Undifferentiated
44(58.7%)
31(41.3%)
38 (50,7%)
37 (49,3%)
di Lauren classificazione
Intestinal
56(77.8%)
16(22.2%)
0.023
39(54.2%)
33(45.8%)
0.683
Diffuse
44(60.3%)
29(39.7%)
42 (57,5%)
31 (42,5%)
profondità del tumore
T1-T2
28 (75,7%)
9 (24,3%)
0,307
20 ( 54,1%)
17 (45,9%)
0,797
T3-T4
72 (66,7%)
36 (33,3%)
61 (56,5%)
47 ( 43,5%)
metastasi linfonodali
Negative
59(72.8%)
22(27.2%)
0.257
37(67.3%)
18(32.7%)
0.031
Positive
41(64.1%)
23(35.9%)
44 (48,9%)
46 (51,1%)
linfatico invasione
Negative
44(75.9%)
14(24.1%)
0.143
35(60.3%)
23(39.7%)
0.375
Positive
56(64.4%)
31(35.6%)
46 (52,9%)
41 (47,1%)
venosa invasione
Negative
52(70.3%)
22(29.7%)
0.729
43(58.1%)
31(41.9%)
0.578
Positive
48(67.6%)
23(32.4%)
38 (53,5%)
33 (46,5%)
Tumore Stadio
I- II
40 (62,5%)
24 (37,5%)
0.135
34 (53.1 %)
30 (46,9%)
0,555
III-IV
60 (74,1%)
21 (25,9%)
47 (58,0%)
34 (42.0 %)
NOTA: prova X2 di Pearson è stato fatto per ottenere il valore P tranne che risale è stato confrontato con il test t di Student. † Bene = ben differenziato carcinoma; moderatamente = moderatamente differenziato carcinoma; indifferenziata = scarsamente differenziato carcinoma, carcinoma a cellule anello con sigillo, o carcinoma mucinoso. espressione
dinamica di CEACAM7 e CEA nella mucosa normale e lesioni precancerose
I risultati di espressione CEACAM7 e CEA in mucosa normale e lesioni precancerose sono stati riassunti nella Tabella 2. positività per l'espressione CEACAM7 è stato trovato nella gastrite cronica atrofica (12%, 6/50), a basso grado di GIN (29,1%, 16/55), e di alta qualità GIN (28,9%; 13/45). espressione CEACAM7 non è stata trovata nella mucosa normale (0/50). La positività per l'espressione CEACAM7 in gin basso grado è stata significativamente superiore a quello per la gastrite cronica atrofica (P = 0,032), e CEACAM7 è stata più frequentemente espressa in gastrite cronica atrofica che nella normale mucosa gastrica (P = 0,012), ma non vi era alcuna differenza significativa nella espressione CEACAM7 tra basso grado gin e di alta qualità GIN (P = 0.982). CEA positività è stato trovato nella mucosa normale (6%; 3/50), gastrite cronica atrofica (8%, 4/50), a basso grado di GIN (57,1%, 13/55), e di alta qualità GIN (60%; 20/45). La positività CEA per basso grado GIN è stata significativamente superiore a quello per la gastrite cronica atrofica (P = 0.030), ma è stato inferiore a quello alto grado GIN (P = 0,028). Non vi era alcuna differenza significativa nella CEA positività tra mucosa normale e la gastrite cronica atrofica (P = 0,500). espressione CEACAM7 era localizzata sulla superficie luminale di gastrite atrofica cronica e gin (Figura 3C, E, e 3G), nessuna reazione immunologica è stata rilevata nel mucosa normale (Figura 3A). CEA era localizzata sulla superficie luminale della mucosa normale, gastrite atrofica cronica, basso grado GIN, e di qualità GIN (Figura 3B, D, F, e 3H), mentre sia CEA e l'espressione CEACAM7 stato localizzato a tutta la superficie le cellule cancerose gastriche (figura 3i e 3J) Tabella 2 relazioni tra espressione CEACAM7 e CEA con diversi tessuti gastrici
tessuti
N
CEACAM7


CEA



negativo positivo

valore P *
negativo positivo

valore P *
mucosa normale
50 | 50 (100%)
0 (0%)
0,0121
47 (94%)
3 (6%)
NS4
cronica gastrite atrofica
50 | 44 (88,0%)
6 (12,0%)
0,0322
46 (92%)
4 (8%)
0,0305
basso grado GIN
55
39 (70,9%)
16 (29,1%)
NS3
42 (76,4%)
13 (23,6%)
0,0286
alta qualità GIN
45
32 (71,1%)
13 (28,9%)
25 (55,6%)
20 (44,4%)
* Test χ2. N-numero di casi, Gin-gastrico neoplasia intraepiteliale. NS-alcun significato (P > 0,05). 1 Rispetto alle mucosa normale, CEACAM7 positività era significativamente più alto nella gastrite cronica atrofica (P = 0,012); 2 rispetto a gastrite cronica atrofica, CEACAM7 è stata più frequentemente espresso in GIN basso grado (P = 0,032); 3Ci era alcuna differenza significativa di CEACAM7 espressione tra GIN basso grado e alto grado GIN (P = 0,982); 4Ci era alcuna differenza significativa di CEA espressione tra mucosa normale e la gastrite cronica atrofica (P = 0,500); 5Compared con gastrite cronica atrofica, CEA è stata più frequentemente espressa in basso grado GIN (P = 0,030); 6 Rispetto GIN di basso grado, CEA è stato più frequentemente espresso in GIN alto grado (P = 0,028).
Figura 3 diversi modelli di espressione di CEACAM7 e CEA nelle lesioni non neoplastiche gastriche e carcinomi gastrici. sezioni consecutive sono stati utilizzati per l'analisi. Nessuna reazione immunologica per CEACAM7 stato rilevato nella mucosa normale (A). CEACAM7 era localizzata sulla superficie apicale di gastrite cronica atrofica (C), bassa GIN grado (E) e alto grado GIN (G). CEA è stato localizzato sulla superficie luminale apicale della mucosa normale (B), cronica gastrite atrofica (D), a basso grado di GIN (F), e di alta qualità GIN (H). Entrambi CEACAM7 (I) e CEA (J) è stato localizzato su tutta la superficie delle cellule tumorali gastriche. (DAB come cromogeno, di contrasto con ematossilina di Harris, 200X).
Analisi di sopravvivenza
di un anno e tre anni i tassi di sopravvivenza erano 92,0% e 54,1%, rispettivamente, per CEACAM7 e CEA pazienti doppia negativi, 98,3% e 45,1%, rispettivamente, per CEACAM 7 e CEA single-positive (sia positivi CEA CEACAM7 positivo o) pazienti, e 64,0% e 8,5% per i pazienti double-positivi CEACAM7 e CEA. è stata osservata differenza significativa tra il tasso di sopravvivenza dei pazienti con doppia negativi e doppio-positivi (Figura 4, p = 0,001). Tuttavia, nessuna differenza significativa è stata trovata tra i pazienti con doppi negativi e singole-positivi (Figura 4, p = 0,391). L'analisi multivariata ha dimostrato che due positività per CEACAM7 e l'espressione del CEA (P = 0.004) e lo stadio del tumore (P = 0.001) sono stati fattori associati in maniera indipendente con più povera prognosi del paziente (Tabella 3). Figura 4 curve di Kaplan-Meier per la sopravvivenza postoperatoria. Il tempo mediano di sopravvivenza dei pazienti affetti da CEACAM7 e CEA doppia positività era più breve di quella dei pazienti con doppia negatività (log-rank test: P = 0.001). Ma, non vi era alcuna differenza significativa tra il tempo medio di sopravvivenza dei pazienti affetti da sola positività e negatività doppio (P = 0,391).
Tabella 3 L'analisi multivariata basata su modello di rischio proporzionale di Cox
variabile
Hazard ratio (95%
Intervallo di confidenza)
P-valore
Tumore Stadio III, IV vs I, II
2.240 ( 1,501-3,343)
0.001
CEACAM7 (+) CEA (+) vs CEACAM7 (-) CEA (-)
1.545 (1,153-2,069)
0,004
Discussione
CEA è uno dei marcatori tumorali più utili per il carcinoma [24], e la sua espressione è risultato essere correlato con le caratteristiche clinico-patologiche, come ad esempio il coinvolgimento venoso, diametro maggiore, e stadi avanzati di carcinomi del colon-retto [25, 26]. Nel cancro del colon, il CEA è upregulated, ma CEACAM7 è stato segnalato per essere downregulated [11], è interessante notare che erano entrambi upregulated nel carcinoma gastrico, e co-espressi nella maggior parte dei tessuti. suggerendo che CEACAM7 può svolgere ruoli diversi in diversi tipi di cancro. Come espressione CEACAM7 è stata trovata per essere strettamente correlato con l'espressione del CEA nel carcinoma gastrico in questo studio, abbiamo controllato la sua correlazione con varie caratteristiche clinico-patologici, e abbiamo scoperto che l'espressione CEACAM7 era più frequente nei scarsamente carcinomi gastrici differenziati di carcinomi in bene e moderatamente differenziato (P = 0.006), ed è stata anche correlata con la classificazione di Lauren (P = 0,023). E 'stato riportato che il tipo istologico predominante può variare dalla differenziato al tipo indifferenziata come tumori progrediscono [6], Ohkura, et al [17] hanno riportato anche che istologiche diversità aumenta come carcinomi gastrici crescono o invadono la sottomucosa. Così, abbiamo ipotizzato che CEACAM7 potrebbe promuovere l'aggressività e la progressione del carcinoma gastrico tramite regolazione della differenziazione delle cellule tumorali, e questo necessita di ulteriori indagini.
Come il cancro intestinale-tipo è pensato per essere preceduto da una fase precancerosa caratterizzato dalle fasi sequenziali di atrofica gastrite, metaplasia intestinale, gin, e il carcinoma intramucoso, sarebbe di grande importanza per chiarire l'espressione dinamica di CEACAM7 e CEA nel normale mucosa gastrica, gastrite cronica atrofica, gin, e carcinoma gastrico. Abbiamo scoperto che, rispetto ai gastrica mucosa normale, espressione CEACAM7 è risultato significativamente aumentato nel gastrite cronica atrofica e tutte le altre lesioni, e l'espressione del CEA è risultato significativamente aumentato nel gin e carcinoma gastrico. Questi risultati indicano che CEACAM7 può giocare un ruolo nella carcinogenesi gastrica da una fase iniziale, in particolare la fase cronica gastrite atrofica. Inoltre, CEA può cooperare con CEACAM7 in fase di gin. Coerentemente con i nostri risultati, CEA topi transgenici hanno dimostrato in maniera massiccia i due punti allargata che comprende un mosaico continuo di grave iperplasia, displasia, e seghettato morfologia adenomatosa, suggerendo che up-regulation di CEA potrebbe essere un passo fondamentale nella progressione del cancro umano [27]. Sembra che up-regolazione dell'espressione CEACAM7 o CEA può essere un evento molecolare precoce nella tumorigenesi, e entrambe le proteine ​​potrebbe essere utilizzato come screening di biomarcatori in lesioni precancerose per identificare i pazienti ad alto rischio di conversione maligna. Al contrario, diminuita espressione di CEACAM-7 ha dimostrato di verificarsi nelle prime fasi oncogenesi del colon-retto, con diminuita espressione in adenomi, polipi iperplastici, e anche la cripta aberrante foci.11,13 L'espressione contrastante di CEACAM7 nella carcinogenesi gastrica e del colon-retto implica che la sua funzione è dipendente dal contesto.
pazienti con cancro avanzato spesso vogliono sapere quanto tempo hanno lasciato per vivere [28], ma i medici non sono sicuri a stimare la prognosi [29]. Pertanto, biomarcatori per la prognosi sono un potenziale strumento per aiutare i medici con la cura del paziente. Negli ultimi dieci anni, un gran numero di proteine ​​che sono putativamente importante nella carcinogenesi e biologia del cancro sono stati studiati per il loro valore prognostico nel carcinoma gastrico, ma nessuno è stato dimostrato di essere sufficientemente utile in previsione clinica. È altamente improbabile che una singola proteina marker fornirà la sensibilità e la specificità richieste per la prognosi. Così, l'enfasi si è spostata alla scoperta di combinazioni di biomarcatori direttamente connesse con i processi di malattia [30]. In questo studio, solo stadio tumorale avanzato e CEACAM7 e CEA doppia positività sono stati identificati utilizzando il modello dei rischi proporzionali di Cox come predittori prognostici indipendenti per la sopravvivenza dei pazienti con carcinoma gastrico operabile, indipendentemente dall'età, dal sesso, la differenziazione, lo stadio TNM patologico, linfa metastasi linfonodali, linfatici, e l'invasione venosa dei pazienti.
Conclusioni
a nostra conoscenza, questo è il primo studio comparativo immunoistochimica di espressione CEACAM7 e CEA nel carcinoma gastrico e lesioni precancerose. Le due proteine ​​sono state co-espressi e co-localizzate nel carcinoma gastrico. espressione CEACAM7 è risultato essere significativamente correlata con la differenziazione del carcinoma gastrico. L'espressione di CEACAM7 e CEA è stato trovato per aumentare gradualmente durante lo sviluppo del carcinoma gastrico. CEACAM7 e CEA doppia positività può essere un utile predittore prognostico post-operatoria per i pazienti con carcinoma gastrico.
Dichiarazioni
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto dal National 973 Progetto della Cina (No.2010CB529300, 02, 05, 06) e la National Science Foundation naturale della Cina (No 81.030.044).
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