Protizápalové, gastroprotektívnymi a anti-ulcerogénne účinky červené riasy Gracilaria changii (Gracilariales, červené riasy) extract

protizápalové, gastroprotektívnymi a anti-ulcerogénne účinky červené riasy Gracilaria changii
(Gracilariales, červené riasy) výpis
Abstrakt
pozadie
Gracilaria changii
(Xia et Abbott) Abbott, Zhang et Xia, červená riasa bežne vyskytujú v pobrežných oblastiach Malajzie sa tradične používa pre potraviny a na liečenie rôznych chorôb, vrátane zápalov a žalúdočných problémov , Cieľom štúdie bolo zistiť, protizápalové, žalúdočným a anti-ulcerogénne činnosti, ktoré majú hmotnostnej spektrometrie štandardizovaného methanolický extrakt z Gracilaria changii
.
Metódy
metanolového extraktu Gracilaria changii
(extrakt MeOHGCM6 ) bola pripravená a štandardizovaná pomocou hmotnostnej spektrometrie (MS). Protizápalové aktivity MeOHGCM6 extraktu boli skúmané ošetrením buniek U937 v priebehu diferenciácie s 10 ug /ml MeOHGCM6 extraktu. boli sledované a v porovnaní s liečené 10 nM betametazón, protizápalového liečivá Tumor nekrotizujúca faktory-α (TNF-α) hladina odozvy a TNF-α a interleukínu-6 (IL-6) expresie génu. Žalúdočnom a anti-ulcerogénne aktivity MeOHGCM6 extraktu boli skúmané kŕmenie krýs s MeOHGCM6 extraktom v rozmedzí od 2,5 do 500 mg /kg telesnej hmotnosti (b.w.) po indukcii žalúdočných lézií. Produkcia hlienu a žalúdočnej šťavy, pH žalúdočných štiav a non-proteín sulfhydryls (NP-SH), hladiny boli stanovené a v porovnaní s týmto kŕmený 20 mg /kg telesnej hmotnosti Omeprazol (OMP), známa Antiulcerózum.
Výsledky
MS /MS analýza extraktov MeOHGCM6 odhalili prítomnosť metyl-10-hydroxyphaeophorbide systémom stroje a 10-hydroxypheophytin systémom
, známy chlorofylu proteíny a niekoľko neidentifikované molekúl. Liečba s 10 ug /ml extraktu MeOHGCM6 počas diferenciácie buniek U937 významne inhibovala hladiny TNF-α reakcie a TNF-α a IL-6 génovej expresie. Inhibičný účinok bol porovnateľný s betametazón. Žiadne cytotoxické účinky boli zaznamenané u buniek ošetrených /ml MeOHGCM6 extraktu 10 ug. Krysy kŕmené MeOHGCM6 extrakt 500 mg /kg telesnej hmotnosti bol znížený absolútny žalúdočnej veľkosťou lézie etanolom vyvolané > 99% (p Hotel < 0,05). Tento ochranný účinok bol porovnateľný s priznané OMP. Hodnota pH žalúdočného hlienu znížená spôsobom závislým od dávky od 5.51 do 3,82, a došlo k výraznému zvýšeniu koncentrácie NP-SH.
Závery
Výsledky zo štúdie naznačujú, že hmotnostná spektrometria štandardizovaný methanolický extrakt z Gracillaria changii
má protizápalové, gastroprotektívnymi a anti-ulcerogenním vlastnosti. Ďalšie skúmanie aktívne zložky extraktu a jeho mechanizmu účinku je oprávnená v budúcnosti.
Kľúčové
Protizápalový Anti-ulcerogénne žalúdočným Gracilaria changii
cytokíny Betametazón Omeprazol Riasy vred na pozadí
Zápal je hlavným rysom mnohých chorôb. Je charakterizovaný komplexom organizovaných interakcií medzi mediátory zápalu a zápalových buniek smerujúcich k odstráneniu dráždivých a hojenie poranení tkanív [1, 2]. Zápal je dôležitou hostiteľ obranný mechanizmus. Zápal, ktorý sa vyskytuje v sliznice gastrointestinálneho traktu, ale spôsobuje vred žalúdka alebo čreva [3]. Gastrointestinálne vred je spoločný hlavný ochorení tráviaceho systému postihujúce milióny Američanov a mnoho ďalších po celom svete [4]. Najčastejšou príčinou gastrointestinálne vredovej choroby sú infekcie Helicobacter pylori
(H. pylori
) [5] a dlhodobé užívanie nesteroidných protizápalových liekov (NSAID), ako je aspirín a ibuprofén [6]. Nástup antibiotickej kontroly proti H. pylori
výrazne znížila počet prípadov, gastrointestinálnych vredov v rozvinutých krajinách [7]. Toto ochorenie je však stále vysoká v iných krajinách a ochorenie vyvolané užívaním NSAID je stále veľkým zdravotným problémom v rozvinutých krajinách [6, 7].
Liečba zápalu všeobecne, je zameraný na to buď inhibujú aktivita zápalových buniek alebo inhibícia produkcie zápalových mediátorov [8]. Neskôr možno vykonať pomocou liekov, ako sú NSAID a kortikosteroidy [9]. Liečba gastrointestinálneho vredu všeobecne, je zameraný na odstránenie buď H. pylori
infekciu alebo obmedzovania a inhibíciu úrovne produkcie žalúdočnej kyseliny zodpovedné za eróziu zažívacieho ochrannú vrstvu [10, 11]. Neskôr možno vykonať pomocou liekov, ako je histamín (H 2) blokátory, inhibítory protónovej pumpy a slizničnej ochrannej liečby [9]. Avšak, boli popísané rôzne vedľajšie účinky dlhodobého užívania týchto liekov [9]. Okrem toho, anti-zápal a anti-ulcerogénne lieky sa používajú hlavne na zmiernenie symptómov ochorenia, bez toho by v skutočnosti liečenie alebo prevenciu zápalových a ulcerogénne procesov.
Vývoj protizápalových a anti-ulcerogénne liečiv sa v poslednej dobe zameraný na zistenie priaznivý použitie rastlinných extraktov rastlinného pôvodu, ktoré sú účinnými a bezpečnejšie. Riasy našiel rastie v hojnosti off pobrežnej oblasti mnohých častiach sveta predstavujú obrovský nevyužitý potenciál pre nový zdroj terapiou [12, 13]. Červené riasy napríklad bolo hlásené, že obsahuje aktívne zlúčeniny, ktoré môžu pomôcť zmierniť zápal zažívacieho traktu [14], prevenciu alebo liečbu žalúdočných vredov a rakoviny spôsobené oxidačným stresom [15, 16], inhibujú zápalové aktivity potlačením produkcie zápalové mediátory [17-19] a indukovať apoptózu buniek karcinómu žalúdka [20] a [21] hrubého čreva. Prírodné látky odvodené z jedlých rias môže byť bezpečnejšie pre použitie ako protizápalové a žalúdočné ulcerogénne anti-terapeutiká, ako boli vzaté ako jedlo a používané v tradičnej medicíne od nepamäti [13].
Červené riasy, Gracilaria changii
(Xia et Abbott) Abbott, Zhang et Xia našiel rastúce mimo pobrežné oblasti Malajzii predstavuje potenciálny miestny zdroj To prirodzene odvodených liečiv. V súčasnej dobe, riasy sú komerčne využité iba za jej obsah koloidného agar a ako miestny lahôdok. Tieto riasy sú široko používané ako ľudovej medicíne pre liečbu rôznych ochorení, vrátane zápalu a žalúdočných ťažkostí. Táto štúdia si kladie za cieľ vyhodnotiť potenciálny protizápalové, žalúdočným a anti-ulcerogenním činnosti týchto Malaysian červené riasy, Gracilaria changii
.
Metódy
riasy extrahovať prípravu
Gracilaria changii
(Xia et Abbott) Abbott, Zhang et Xia boli odobraté z pobrežných vôd Morib, Selangor, Malajzia (N2 ° 44 '908 ", E101 ° 26' 590") na konci februára 2003 [22-24]. Riasy boli identifikované Profesor Dr. Phang Siew Moi, riaditeľ Ústavu oceánu a vied o Zemi, Ústav biologických vied, Prírodovedecká fakulta Univerzity Malajska, kde boli udržiavané dokladové exempláre (herbár č. 6320 PSM a PSM 6321 ). Riasy boli premyté sterilným morskej vode s posledného plákania v sterilnej destilovanej vode, ako bolo opísané skôr [22]. Riasy sa potom pôsobí ultrazvukom vo vodnom kúpeli po a udržiava sa pri teplote -70 ° C. Methanolický extrakt z Gracilaria changii
(MeOHGCM6 extrakt) bol pripravený na univerzite Malajzia Terengganu (UMT) v súlade s metódami opísanými [25]. Extrakt MeOHGCM6 bola udržiavaná pri teplote -20 ° C pred použitím.
MeOHGCM6 extrahovať
Profil analýzu extraktu MeOHGCM6 bola vykonaná na Shimadzu ultra-rýchle kvapalinové chromatografie (UFLC) systém vybavený fotodiodového ultrafialové (UV PDA ) detektora a doba iónovej pasce letu (TOF) hmotnostného spektrometra (Shimadzu, Japonsko). Separácia bolo dosiahnuté na kolóne Waters XBridge C18 (50 mm x 2,1 mm, priemer častíc 2,5 um) (voda, USA) pri teplote 40 ° C. Mobilná fáza pozostávala z vody [0,1% kyselina mravčia (BDH laboratórne vybavenie, Anglicko)]: acetonitril (BDH Laboratórne potreby, Anglicko) (0,1% kyselina mravčia) pri prietokovej rýchlosti 0,50 ml /min s injekčným objemom 10 ul , Režim ionizácie elektrosprejová (ESI) s pozitívne /negatívne spínania a externé referencie bol použitý pre hmotnostnú spektrometriu (MS). Dictionary of Natural Products (CRC Press) s vysokým rozlíšením MS spektier a štruktúrny informácie sa použili na analýzu pozitívne a negatívne ion spektra spolu s MS /MS informácie pre identifikáciu podobných súčastí.
Human promonocytic bunkové línie (bunky U937)
U937 bunky boli získané od American Type Culture Collection (ATTC, USA) a kultivované v Roswell Park Memoriál Institute-1640 (RPMI-1640) (Flowlab, Austrália) [doplnenom 1% 10 mM neesenciálne aminokyseliny (NEAA) (Flowlab, Austrália) a 1% z 10 mM L-glutamínu (L-Glu) (Flowlab, Austrália)], ktorý obsahuje 10% teplom inaktivované fetálne hovädzie sérum (FBS) (Flowlab, Australia). Bunky boli inkubované pri 37 ° C vo zvlhčovanie inkubátora s 5% CO 2.
Diferenciácia buniek U937 boli
U937 bunky schovať na 96-jamkové dosky pre kultiváciu buniek (Falcon, USA) pri hustote 2 x 10 4 buniek /jamka s RPMI-1640 s obsahom 2% FBS a udržiava sa pri teplote 37 ° C vo zvlhčovanie inkubátora s 5% CO 2. Nasledujúci deň sa médium obsahujúce forbol 12-myristát 13-acetátu (PMA) (Sigma-Aldrich, USA) v koncentrácii v rozmedzí od 0-50 nM boli pridané k U937 monocyty indukuje diferenciáciu počas 24 a 48 hodín. Médium obsahujúce len PMA riedidiel [roztok dimetylsulfoxidu (DMSO) (Sigma-Aldrich, USA)] bolo pridané paralelne a použité ako kontrolné vehikulum. Na konci indikované časovom bode, bunky boli vyhodnotené na diferenciáciu špecifických makrofágov povrchu buniek markerovou expresné a životaschopnosť buniek.
Expresia CD11b, diferenciáciu špecifického povrchu makrofágov bunkového markeru bola stanovená farbením buniek, ako bolo opísané skôr [26 , 27]. Životaschopnosť buniek bola stanovená s použitím trypánovej modrej farbivo (Sigma, USA) vylúčenie test, ako je opísané skôr [28].
Test cytotoxicity
U937 bunky boli schovať na 96-jamkové dosky pre kultiváciu buniek pri hustote 2 x 10 4 buniek /jamka s RPMI-1640 s obsahom 2% FBS a udržiava sa pri teplote 37 ° C vo zvlhčovanie inkubátora s 5% CO 2. boli pridané nasledujúci deň sa médium obsahujúce extrakt MeOHGCM6 (v koncentrácii v rozmedzí 0-100 ug /ml) a betametazónu (Sigma, USA) (v koncentrácii v rozmedzí 0-100 nM). Médium obsahujúce iba MeOHGCM6 extrahovať a betametazón riedidlá [etanol (EtOH) (BDH laboratórne vybavenie, Anglicko) a DMSO, respektíve] boli paralelne pridané a použité ako kontroly nad vozidlom. Jeden deň po ošetrení sa bunky U937 proliferácie rýchlosť bola stanovená s použitím CellTiter 96® Non-Radioactive Cell proliferácia kit (Promega, USA) presne podľa odporúčania protokolu výrobcu.
MeOHGCM6 extrahovať ošetrenie buniek U937
buniek U937 boli nasadené na 24-jamkové dosky pre kultiváciu buniek (Falcon, USA) pri hustote 2 x 10 5 buniek /jamka s RPMI-1640 s obsahom 2% FBS a inkubované pri 37 ° C vo zvlhčovanie inkubátora s 5% CO 2. Nasledujúci deň sa bunky U937 boli indukované k diferenciácii s 10 nM PMA počas 24 hodín. Počas diferenciácie, U937 bunky boli ošetrené extraktom MeOHGCM6 alebo betametazón pri fyziologickom koncentrácii. Pri 0 ° C, 8, 16 a 24 hodín po ošetrení, supernatant a bunky boli zozbierané a testované na TNF-a úroveň odozvy a TNF-a a IL-6 génovej expresie.
Hladina odozvy TNF-α
TNF alfa hodnota bola nameraná za použitia BD OptEIA ™ ľudského TNF (TNF-a) ELISA kit II (BD Biosciences, USA) podľa protokolu výrobcu.
TNF-α a IL-6 expresie génu
Celková RNA z bunkové kultúry boli izolované pomocou TRI Reagent® (Research Centre molekulárnej, Inc., USA) a spracuje sa DNázy (Promega, USA). RNA bola reverzne transkribovaných (cDNA) za použitia horný index ™ II reverzný transkriptasy (Invitrogen, USA). CDNA potom boli použité na vykonanie kvantitatívnej real-time PCR s použitím SYBR Green PCR Master Mix (Qiagen, Nemecko) na DNA Engine Opticon II® (MJ Research, Bio-Rad, USA), ako bolo opísané skôr [29]. Oligonukleotidové primery boli použité vpred a vzad 5'AAGAGTTCCCCAGGGACCTC 5'GCTTGAGGGTTTGCTACAAC pre TNF-alfa; vpred a vzad 5'GAAAGGAGACATGTAACAAG 5'CCAGGCAAGTCTCCTCATTG pre IL-6; a dopredu 5'GCGAGAAGATGACCCAGATC a reverzné 5'GGATAGCACAGCCTGGATAG pre beta-aktínu (β-aktínu) (vnútorná odkaz).
Animals
Dospelé samice potkanov Sprague-Dawley vo veku od 7 do 8 týždňov a s hmotnosťou 160-200 g boli použité pre štúdiu. Protokol o pokusoch na zvieratách bola schválená Institutional výbor pre etiku vo pokusov na zvieratách z University Malajska [Číslo schválenia: MP /8.6 /2010 /SMH (R)]. Zvieratá bola získaná od University Putra Malajzia (UPM). Zvieratá boli umiestnené jednotlivo v klietkach s široký-ok drôtené dno, aby sa zabránilo koprofágie. Boli uložené v miestnosti s kontrolovanou teplotou, ktorá bola dobre vetrané, s jedlom a vodou, na 12 hodín cyklu svetlo /tma po celú dobu štúdie. Boli všetky krysy bez potravy po dobu 48 hodín, ale mala voľný prístup k pitnej vode, až 2 hodiny pred vystavením je na ulcerogens.
EtOH vyvolané gastrickej lézie
Krysy boli náhodne rozdelené do 7 skupín, každá skupina obsahuje 6 krýs. Skupina 1 bola podávaná 10% Tween 20 (extrakt riedidlá) (BDH Laboratory Supplies, Anglicko) a slúžil ako negatívne kontrolnú skupinu. Skupina 2 bola daná 500 mg /kg telesnej hmotnosti extraktu ekvivalentná nesúvisiace rastlinného extraktu MeOHGCM6 pripraví podobne ako paralelne MeOHGCM6 extrakt slúžiť ako kontrolná skupina nešpecifické rastlinný extrakt (NSPE). Skupina 3 sa spracuje s OMP (Chemical Company, Malajzia, Malajzia) v dávke 20 mg /kg telesnej hmotnosti a slúžil ako pozitívna kontrolnej skupine ošetrenie. Zvyšok skupiny 4, 5, 6 a 7 obdržal 4 rôzne koncentrácie extraktu MeOHGCM6 v rozmedzí od 2,5 - 500 mg /kg telesnej hmotnosti, resp. Po 30 minútach predbežného spracovania, všetky zvieratá boli podávané spolu s absolútnym EtOH cez orálnou cestou. Jednu hodinu po podaní boli zvieratá usmrtené je cez dávkovanie dietyléterom (BDH Chemicals Ltd., Anglicko). brucha krysy bol členitý a pažerák najbližší k kardia a roztiahnuté bruchu na pyloru zvierača sa ihneď zviazané do uzla s použitím reťazec, aby sa zabránilo úniku obsahu žalúdka. Žalúdok sa rýchlo odstráni a ponorenie do vody.
Meranie žalúdočnej sekrécie žalúdočnej
obsah každej potkana žalúdka sa odsaje a jemne poškriabaný špachtľou. Žalúdok šťava obsahujúca častice potravy bol zlikvidovaný. Pozberané žalúdočnej sliznice sa zvážil s použitím elektronického bilancie (Mettler Toledo, Švajčiarsko). Množstvo žalúdočnej šťavy bola meraná s použitím meracieho valca. Hodnota pH žalúdočného obsahu sa meria za použitia merača pH digitálne (Crison Instruments, SA, Španielsko).
Vyhodnotenie hrubých žalúdočných lézií
Po zbere, žalúdok sa okamžite premyje roztokom chloridu sodného a skúmané pod mikroskopu (1,8 x) so štvorcovým mriežky okuláru. Žľazovej časti žalúdka bola hodnotená pre tvorbu vredov. Celková ulcerující plocha (UA) z krvácavých lézií pre každú žalúdka bola meraná plannimetry (mm 2) a percento inhibícia sa vypočíta podľa tohto vzorca: Inhibícia %
=
UA
ovládanie -
ua
liečiť /
ua
ovládanie ×
100
Stanovenie produkcie nebielkovinové sulfhydryls (NP-SH)
žalúdočnej sliznice úrovni NP-SH bola meraná, ako bolo predtým popísané [30] s menšími úpravami. V stručnosti, žalúdočných žliaz sa odváži a homogenizuje v tubách obsahujúcich ľadu-studenej 0,02 M kyseliny etyléndiamíntetraoctovej (EDTA) (Gibco BRL Life Technologies, USA) (pH 8,9). Alikvótne homogenátu sa zmieša s destilovanou vodou a 50% kyseliny trichlóroctovej (Sigma Chemical Co., USA). Zmes sa inkubuje za stáleho miešania po dobu 10 minút pri 4 ° C a potom sa odstredí pri 3000 x g počas 15 minút. Zmes sa potom testuje na úroveň NP-SH za použitia glutatión testovacie súpravy (Sigma Chemical Co., USA) podľa protokolu výrobcu.
Štatistická analýza
Všetky dáta bola vyjadrená ako priemer ± štandardná odchýlka (SD) alebo medián (25% a 75% kvartil), z dvoch alebo troch nezávislých experimentov pre protizápalových štúdií a siedmich nezávislých experimentov pre gastroprotektívnymi a anti-ulcerogenním štúdií. ANOVA (jednocestná analýza rozptylu a dvojsmerné analýzy variance) bol použitý pre porovnanie medzi skupinami, a pre podávanie správ o štatistickej významnosti "p
'vzhľadom ku kontrolnej skupine. Hodnota p Hotel < 0,05 bola považovaná za štatisticky významnú. Všetky štatistické analýzy boli vykonané pomocou softvéru GraphPad Prism 4.0 (USA) a SPSS verzia 16.0 Software (SPSS Inc., Chicago), resp.
Výsledky
štandardizovaný extrakt MeOHGCM6 profil
LC /MS analýz z rôznych šarží z MeOHGCM6 extraktu boli vykonané s cieľom zabezpečiť reprodukovateľnosť a konzistenciu metódy extrakcie. Batch 1 a 2 MeOHGCM6 extraktu bola použitá v štúdii ukázal veľmi podobné hmotnostnej spektroskopie, profily a množstvo veľkých más (1A-C). Analýza spektier a porovnanie s Dictionary of Natural Products, CRC Press identifikoval charakteristické masy ako 457.405, 645.280 a 887.579. Zistená hmotnosť v pozitívnom iontovom spektrum m /z 457.405, mal fragmenty 398.327 (základný pík), 380.316 a 158.082. Neutrálne strata hmotnosti 59.077 bola možná svedčí o stratenej trimetylamín. To naznačuje, že táto zlúčenina môže obsahovať trimethylamonium skupinu. Na MS s vysokým rozlíšením a MS /MS dát nemôže s konečnou platnosťou identifikovať známych zlúčenín zo Slovníku prírodných produktov. Masy m /z 645 a 887, sa však ukázalo zreteľný vzťah k dvom známymi chlorofylu, metyl-10 hydroxyphaeophorbide systémom stroje a 10 Hydroxypheophytin systémom
s príslušnými UV absorbancia pri analýze PDA (Tabuľka 1 ). Obrázok 1 Profilovanie z rôznych šarží MeOHGCM6 extraktu. Režim ESI pozitívny /negatívny spínania a externé referencie bol použitý pre MS za použitia systému Shimadzu UFLC. Celkový pozitívny ion spektra analyzovaný pre identifikáciu podobných súčastí z dvoch rôznych šarží extraktu MeOHGCM6 použité v štúdii. (A) MeOHGCM6 extrakt (Batch 1, M6-1). (B) MeOHGCM6 extrakt (Batch 2; M6-2). (C) Porovnanie intenzity najčastejších masy oboch MeOHGCM6 výpisu šarže použitej v štúdii.
Tabuľka 1 Štruktúra identifikáciou najvýznamnejšie masové prítomné v MeOHGCM6 extrakte pomocou LC /MS
Hmotnosť (ion)
Nájdené v dávke
Možno ID
417.298
1, 2
s najväčšou pravdepodobnosťou cudzorodej
457.405 *
1, 2
unidentified
461,326
1, 2
S najväčšou pravdepodobnosťou kontaminant
505,353
1, 2
S najväčšou pravdepodobnosťou kontaminant
573.256
1, 2
unidentified
645,280
1, 2
metyl-10 hydroxyphaeophorbide
743,636
1, 2
Unidentified
887.579
1, 2
10-Hydroxypheophytin a
Dictionary of Natural Products, CRC Press s vysokým rozlíšením MS spektier sa použili na analýzu celkovej kladných iónov spektra pre identifikáciu možných chemických zložiek.
* MS /MS (relatívna intenzita%) 457,405 → 398.327 ( 100%), 380,316 (50%), 158,082 (40%).
diferenciácie-špecifický povrch makrofágov buniek markerovou expresné na U937 bunkách
Diferencované bunky U937 sa vyznačujú expresiou monocyty /makrofágy línie špecifické pre CD11b , povrch markerovou proteín [26]. V našej štúdii expresie CD11b bola označená intenzívna nahnedlý modré značenie na povrchu bunky [27]. Expresie CD11b sa značne zvyšuje, ak boli bunky U937 navodiť diferenciáciu sa zvyšujúcou sa koncentráciou PMA (1, 10 a 50 nM) (obrázok 2, obrázok 3a). Zistenia naznačujú, že liečba s 10 alebo 50 nM PMA počas 24 hodín alebo 1 nM PMA počas 48 hodín, diferencované bunky U937 bol výrazne nad 50% z bunkovej kultúry. Obrázok 2 Expresia diferenciáciu špecifického povrchu makrofágov bunkového markeru na diferencované U937 monocytárních bunkách. U937 monocytární bunky boli indukované k diferenciácii s (A) 0 nM PMA počas 24 hodín; (B) 0 nM PMA počas 48 hodín; (C) 1 nM PMA počas 24 hodín; (D) 1 nM PMA počas 48 hodín; (E) 10 nM PMA počas 24 hodín; (F), 10 nM PMA počas 48 hodín; (G), 50 nM PMA počas 24 hodín a (H), 50 nM PMA počas 48 hodín. Bunky boli zafarbené pomocou imunohistochemického farbenia na identifikáciu prítomnosti CD11b, makrofágov bunkového povrchu značky. Diferencované bunky U937 monocytární boli identifikované intenzívnej hnedasté modrú škvrnu na povrchu bunky diferencované bunky. Bunky boli videné na 20 × zväčšenie pod svetlom poli za použitia inverzného mikroskopu a fotografoval pomocou Nikon D70 fotoaparát (Nikon, Japonsko). sú zobrazené jeden typický súbor fotografií z troch samostatných experimentov.
Obrázok 3 Diferenciácia špecifické U937 monocyty makrofágov povrchu buniek markerovou expresné a životaschopnosť buniek stanovenie. U937 monocytární bunky boli indukované k diferenciácii s rôznymi koncentráciami PMA počas 24 a 48 hodín. (A) Percentá diferencovaných buniek bola hodnotená prítomnosť CD11b na povrchu bunky. (B) Percento živých buniek boli hodnotené za použitia trypánovej modrej testu. Percento diferencovaných alebo životaschopných buniek na celkových buniek je rovnaký pred experimentom za použitia rôznych koncentrácií PMA a inkubačnej doby. Dáta sú uvedené ako priemer ± S.D. z troch nezávislých experimentov s "*", str Hotel < 0,05 predstavujú rozdiel významnosti v porovnaní so skupinou, ktoré neboli indukované k diferenciácii. Stanovenie životaschopnosti buniek na
diferencovaných buniek U937
Životaschopné diferencované Bunky U937 boli hodnotené s použitím trypánovej modrej pre vylúčenie testu farbivá. U937 bunky životaschopnosť vykazovali významné zníženie v závislosti na dávke percenta životaschopných buniek pri navodiť diferenciácii s 1, 10 a 50 nM PMA (obrázok 3B). Zistenia naznačujú, že 90% z diferencovaných buniek U937 boli stále životaschopné po liečbe s 1 alebo 10 nM PMA počas 24 hodín alebo 1 nM PMA počas 48 hodiny.
Cytotoxicita MeOHGCM6 extraktu na U937 bunkách
Cytotoxické účinky extrakt MeOHGCM6 a betametazón na U937 bunkách bola stanovená výpočtom rýchlosti bunkovej proliferácie. Ošetrené bunky U937 sa MeOHGCM6 extrakciu 0,05, 0,5, 1 a 5 pg /ml vystavovaných proliferatívnych výbuchy 117.39% (108.48%, 122,10%), 152,04% (149,36%, 154,72%) (p
menšie ako 0,05) , 145,60% (137,48% 149,11%) (p
menšie ako 0,05) a 118,49% (112,01% 133,28%), v danom poradí (obrázok 4A). Liečba MeOHGCM6 extrakcii 10 ug /ml znižuje rýchlosť proliferácie buniek na 87,00% (82,43%, 89,62%). Ošetrené bunky U937 sa betametazón vykazovali významné zníženie v závislosti na dávke v ich proliferačnej rýchlosti (obrázok 4B). Pri nižších koncentráciách betametazónom (0,1, 1, 5 a 10 nm), miera bunkovej proliferácie bolo 110,35% (92,20% 115,83%), 113,75% (89,56% 122,98%), 94,59% (85,56% 101,93%) a 80,48% (77,78%, 110,48%), v danom poradí. Obrázok 4 cytotoxicity účinky rôznych koncentrácií extraktu MeOHGCM6 a betametazónu na U937 monocyty. Rýchlosť proliferácie U937 monocytárních buniek ošetrených zvyšujúcimi sa koncentráciami (A) MeOHGCM6 extraktu a (B) betametazónu bol stanovený na 24 hodín prevedením MTT testu. Percento bunkovej proliferácie je relatívna vzhľadom k počtu buniek nasadených pred administráciu rôzne dávky MeOHGCM6 extraktu a betametazónu. Koncentrácia MeOHGCM6 extraktu, ktoré spôsobili 30% (G130), 50% (G150), a 70% (G170) inhibícia proliferácie buniek sa odvodili z grafu (označené šípkou). Výsledky boli vyjadrené ako medián (25% a 75% kvartilu) z dvoch nezávislých pokusov.
Účinky MeOHGCM6 extrahovať zaobchádzanie na úroveň odozvy TNF-a počas diferenciácie buniek U937
Účinky extraktu MeOHGCM6 zaobchádzanie na regulácia úrovne odozvy TNF-alfa v priebehu diferenciácie buniek U937 bola skúmaná za použitia ELISA. Hladina TNF-α reakcie dosiahla maximálnu úroveň 43,28 ± 5,15 pg /ml po dobu 8 hodín, kedy boli bunky U937 navodiť diferenciáciu (obrázok 5A). V prítomnosti 10 ug /ml extraktu MeOHGCM6 počas diferenciácie buniek U937, hladina odozvy TNF-α významne znížil až 8 hodín, [0,14 ± 0,28 pg /ml (p stroje a 0,001)] a bola porovnateľná s v prítomnosti betametazónu [0,28 ± 0,56 pg /ml (p Hotel &0,001)]. Obrázok 5 MeOHGCM6 extrahovať liečby na úrovni odozvy TNF-a a TNF-a a IL-6 génovej expresie v priebehu diferenciácie U937 monocytárních bunkách. Tieto monocytární bunky U937 boli indukované k diferenciácii s 10 nM PMA. Počas diferenciácie, U937 monocytární bunky boli ošetrené s MeOHGCM6 extraktu. (A) Hladina TNF-α reakcie boli kvantifikované za použitia ELISA. The (B) TNF-α a expresné hladiny (C) IL-6 gén boli kvantifikované pomocou QRT-PCR. Výsledky boli vyjadrené ako stredná hodnota ± S.D. zo štyroch testoch.
účinkov MeOHGCM6 extrahovať zaobchádzanie na TNF-a a IL-6 génovej expresie počas diferenciácie buniek U937
regulácia TNF-a a IL-6 podľa MeOHGCM6 extrakciu postup počas bunkami U937 diferenciácia bola ďalej skúmaná na úrovni génovej expresie pomocou QRT-PCR. TNF-α na úrovni génovej expresie dosiahla vrchol po 6 hodinách (3,16 ± 0,48 kópií /aktinových) U937 diferenciácie buniek (obrázok 5B). TNF-α na úrovni génovej expresie klesla počas prvých 6 hodín [0,52 ± 0,28 kópií /aktínu (p Hotel &0,001)] U937 diferenciácie buniek v prítomnosti 10 ug /ml MeOHGCM6 extraktu. Znížená v TNF-a génovej expresie úrovni buniek U937 v priebehu diferenciácie, keď boli ošetrené 10 ug /ml MeOHGCM6 bol porovnateľný alebo lepší ako zistenie z liečenia s 10 nM betametazón [0,55 ± 0,42 kópií /aktínu (p
< 0,001)]. IL-6 génovej expresie na úrovni ukázala významné zvýšenie a dosiahol vrchol v 0,68 ± 0,09 kópií /aktínu po 12 hodinách U937 diferenciácie buniek (obrázok 5C). Pokles v géne IL-6 úrovne expresie bolo pozorované, že je 0,10 ± 0,01 kópií /aktínu, 0,23 ± 0,02 kópií /aktínu (p stroje a 0,01), 0,37 ± 0,04 kópií /aktínu (p
< 0.001 ) a 0,45 ± 0,05 kópií /aktínu (p Hotel &0,001) v 3, 6, 9 a 12 hodinách, v danom poradí, keď boli bunky U937 v priebehu diferenciácie spracuje s 10 ug /ml MeOHGCM6 extraktu. Inhibícia IL-6 úrovní génovej expresie v prítomnosti extrakte MeOHGCM6 bola porovnateľná s betametazón.
Profylaktické liečbe účinky MeOHGCM6 extraktu na potkany Žalúdočné obsah nasledujúce EtOH-indukovanej akútne poranenie žalúdočnej sliznice
žalúdočnej sliznice sekrécie, žalúdočné šťavy a objem žalúdočného hlienu pH boli stanovené zo žalúdočného obsahu žalúdka krysy liečeným MeOHGCM6 extraktom po etanole kŕmení. 2,45 ± 0,25 g žalúdočného hlienu a 1,75 ± 0,20 ml žalúdočnej šťavy boli z žalúdka krýs kŕmených iba s riedidlom extraktu (tabuľka 2). 1,54 ± 0,31 g žalúdočného hlienu a 0,96 ± 0,25 ml žalúdočnej šťavy a 1,68 ± 0,19 g žalúdočného hlienu a 0,96 ± 0,16 ml žalúdočnej šťavy boli získané z potkanov, vopred ošetrených 250 a 500 mg /kg telesnej hmotnosti z MeOHGCM6 extrakt, v danom poradí. V porovnaní s 2,31 ± 0,42 g žalúdočného hlienu a 1,15 ± 0,36 ml žalúdočnej šťavy sa získa z potkanov vopred ošetrené 20 mg /kg b.w OMP. 2,75 ± 0,49 g žalúdočného hlienu a 1,75 ± 0,28 ml žalúdočnej šťavy boli získané z potkanov kŕmených Podobne sa pripraví nesúvisiace rastlinného extraktu, ktorý slúžil ako kontrola NSPE. Všetci autori čítať a schválená konečná rukopis.

• Antioxidačné a žalúdočné cytoprotektívny prostaglandíny vlastnosti Cassia sieberiana korene extrakt z kôry ako anti-ulcerogénne činidlo
• Genetická variabilita v CYP3A4 a CYP3A5in primárne pečene, žalúdka a pacientov s kolorektálnym karcinómom