Anti-inflammatoire, maagbeschermende en anti-ulcerogene effecten van rode algen Gracilaria changii (Gracilariales, Rhodophyta) extract

Anti-inflammatoire, maagbeschermende en anti-ulcerogene effecten van rode algen Gracilaria changii
(Gracilariales, Rhodophyta) extract
Abstracte achtergrond
Gracilaria changii
(Xia et Abbott) Abbott, Zhang et Xia , een rode algen vaak gevonden in de kustgebieden van Maleisië wordt traditioneel gebruikt voor voedingsmiddelen en voor de behandeling van verschillende kwalen met inbegrip van ontsteking en maag kwalen. Het doel van het onderzoek was om te onderzoeken anti-inflammatoire, maagbeschermende en anti-ulcerogene activiteiten van een massaspectrometrie gestandaardiseerd methanol extract van Gracilaria changii
.
Methods
Methanolische extract van Gracilaria changii
(MeOHGCM6 extract ) werd bereid en gestandaardiseerd met massaspectrometrie (MS). Anti-inflammatoire activiteiten van MeOHGCM6 extract onderzocht door behandeling U937 cellen tijdens de differentiatie met 10 ug /ml MeOHGCM6 extract. Tumor necrosis factoren-α (TNF-α) responsgraad en TNF-α en interleukine-6 ​​(IL-6) genexpressie werden gecontroleerd en vergeleken met die behandeld met 10 nM betamethason, een anti-inflammatoir geneesmiddel. Gastroprotectieve en anti-ulcerogene activiteiten van MeOHGCM6 extract werden onderzocht door het toevoeren ratten MeOHGCM6 extract van 2,5 tot 500 mg /kg lichaamsgewicht (lichaamsgewicht) na inductie van gastrische lesies. Slijmproductie en maagsap, pH van het maagsap en niet-eiwit sulfhydrylgroepen (NP-SH) werden bepaald en vergeleken met die gevoed met 20 mg /kg lichaamsgewicht omeprazol (OMP), een bekende anti-ulcus drug.
Resultaten
MS /MS analyse van de MeOHGCM6 extracten toonde de aanwezigheid van methyl-10-hydroxyphaeophorbide een Kopen en 10-hydroxypheophytin een
, bekend chlorofyl eiwitten en verscheidene geïdentificeerde moleculen. Behandeling met 10 ug /ml extract MeOHGCM6 tijdens differentiatie van U937 cellen remde significant TNF-α responsgraad en TNF-α en IL-6 genexpressie. Het remmende effect was vergelijkbaar met dat van betamethason. Geen cytotoxische effecten werden genoteerd voor cellen behandeld met 10 ug /ml MeOHGCM6 extract. Ratten gevoed met MeOHGCM6 extract bij 500 mg /kg lichaamsgewicht vertoonden verminderde absolute-ethanol geïnduceerde maag letsel maten van > 99% (p Restaurant < 0,05). Dit beschermend effect was vergelijkbaar met die welke OMP verleend. De pH van het maagslijmvlies afgenomen dosisafhankelijke wijze 5,51-3,82 en er was een significante toename van NP-SH concentraties.

Conclusies De resultaten van de studie suggereren dat de massaspectrometrie gestandaardiseerd methanolische extract van Gracillaria changii
bezit anti-inflammatoire, anti-maagbeschermende en ulcerogene eigenschappen. Verder onderzoek van het actieve bestanddeel van het extract en het werkingsmechanisme is gerechtvaardigd in de toekomst.
Trefwoorden
anti-inflammatoire anti-ulcerogene gastrobeschermende Gracilaria changii
Cytokines betamethason Omeprazol Zeewier Zweer Achtergrond
Ontsteking is een belangrijk kenmerk van vele ziekten. Het wordt gekenmerkt door een complex van georkestreerde interacties tussen ontstekingsmediatoren en ontstekingscellen gericht verwijderen prikkelende en genezing van weefselbeschadigingen [1, 2]. Ontsteking is een belangrijke gastheer afweermechanisme. Ontsteking die optreedt in het slijmvlies van het maagdarmkanaal, veroorzaakt echter maagdarmzweer [3]. Maagzweer is een gemeenschappelijke belangrijke aandoening van het spijsverteringsstelsel die miljoenen Amerikanen en veel meer wereldwijd [4]. De meest voorkomende oorzaak van maagzweer ziekte infectie met Helicobacter pylori
(H. pylori
) [5] en het gebruik van niet-steroïde anti-inflammatoire geneesmiddelen (NSAIDs) zoals aspirine en ibuprofen langdurige [6]. De komst van antibiotica controles tegen H. pylori
is aanzienlijk in de ontwikkelde landen verminderde het aantal gastro-intestinale ulcus gevallen [7]. De ziekte is echter nog steeds hoog in andere landen en de ziekte veroorzaakt door het gebruik van NSAID's is nog steeds een belangrijk gezondheidsprobleem in de ontwikkelde landen [6, 7].
Behandeling van ontstekingen in het algemeen is gericht op ofwel het remmen activiteit van ontstekingscellen of remmen van de productie van inflammatoire mediatoren [8]. Het later kan worden uitgevoerd met geneesmiddelen zoals NSAIDs en corticosteroïden [9]. Behandeling van maagzweer in het algemeen is gericht op het elimineren of H. pylori
infectie of verminderen en remmen van de niveaus van de maagzuurproductie verantwoordelijk voor de erosie van gastrointestinale beschermlaag [10, 11]. Het later kan worden uitgevoerd met geneesmiddelen zoals histamine (H 2) blokkers, zuurpomp inhibitoren en mucosale beschermende medicijnen [9]. Echter verschillende bijwerkingen van langdurig gebruik van deze geneesmiddelen term beschreven [9]. Daarnaast worden anti-ontsteking en anti-ulcerogene geneesmiddelen voornamelijk gebruikt om de symptomen van de ziekte te verlichten zonder daadwerkelijk het behandelen of voorkomen van de ontstekings- en ulcerogene processen.
Ontwikkeling van anti-inflammatoire en anti-ulcerogene geneesmiddelen is recentelijk gericht op het ontdekken de gunstige toepassing van kruiden plantaardige extracten die krachtige en veiliger te gebruiken. Algen gevonden groeien in overvloed uit de kustgebieden van vele delen van de wereld vormen een enorme nog onbenut potentieel voor nieuwe bron van therapieën [12, 13]. De rode algen bijvoorbeeld is beschreven actieve verbindingen die kunnen helpen verbeteren ontsteking van het spijsverteringskanaal [14], preventie of behandeling van maagzweren en kanker veroorzaakt door oxidatieve stress [15, 16], remmen ontstekingsactiviteiten door het onderdrukken van de productie bevatten ontstekingsmediatoren [17-19] en induceren apoptose in kankercellen maag [20] en colon [21]. Natuurlijke verbindingen afgeleid van de eetbare algen veiliger kunnen zijn als anti-inflammatoire en anti-gastrische ulcerogene therapeutica te gebruiken als zij als voedsel genomen en gebruikt in traditionele medicijnen oudsher [13]. Ondernemingen De rode algen, Gracilaria changii
(Xia et Abbott) Abbott, Zhang et Xia gevonden groeiend uit de kustgebieden van Maleisië vertegenwoordigt een potentiële lokale bron van deze natuurlijke-afgeleide geneeswijze. Momenteel zijn de algen commercieel geëxploiteerde alleen voor zijn colloïdale agar inhoud en de lokale delicatessen. Deze algen worden wijd toegepast als volksgeneeskunde voor de behandeling van verschillende aandoeningen zoals ontsteking en gastrische aandoeningen. Deze studie is bedoeld om de potentiële anti-inflammatoire, maagbeschermende en anti-ulcerogene activiteiten van deze Maleisische rode algen te evalueren, Gracilaria changii
.
Methods
Algen halen voorbereiding
Gracilaria changii
(Xia et Abbott) Abbott, Zhang et Xia werden verzameld uit de kustwateren van Morib, Selangor, Maleisië (N2 ° 44 '908', E101 ° 26 '590') in eind februari 2003 [22-24]. De algen werden geïdentificeerd door Professor Dr. Phang Siew Moi, directeur van het Instituut van Ocean and Earth Sciences, Instituut voor Biologische Wetenschappen, Faculteit der Natuurwetenschappen, Universiteit van Malaya, waar de voucher exemplaren werden gehandhaafd (herbarium no. 6320 PSM en PSM 6321 ). De algen werden gewassen in steriel zeewater met een laatste spoeling in steriel gedestilleerd water zoals eerder beschreven [22]. De algen werden vervolgens gesonificeerd in een waterbad ultrasoonapparaat en bewaard bij -70 ° C. Methanolische extract van Gracilaria changii
(MeOHGCM6 extract) werd bereid op de Universiteit van Maleisië Terengganu (UMT) overeenkomstig de werkwijzen beschreven [25]. De MeOHGCM6 extract werd bij -20 ° C bewaard voor gebruik.
MeOHGCM6 extract
Profielanalyse van de MeOHGCM6 extract werd uitgevoerd op een Shimadzu ultrasnelle vloeistofchromatografie (UFLC) systeem uitgerust met fotodiode ultraviolet (UV PDA ) detector en ion val time of flight (TOF) massaspectrometer (Shimadzu, Japan). De scheiding werd bereikt over een Waters Xbridge C18-kolom (50 mm x 2,1 mm, deeltjesdiameter van 2,5 urn) (Water, VS) bij 40 ° C. De mobiele fase bestond uit water [0,1% mierenzuur (BDH Laboratory Supplies, England)]: acetonitril (BDH Laboratory Supplies, Engeland) (0,1% mierenzuur) bij een stroomsnelheid van 0,50 ml /min met een injectievolume van 10 ul . Electrospray ionisatie (ESI) modus met positieve /negatieve schakelen en externe referentie werd gebruikt voor massaspectrometrie (MS). De Dictionary of Natural Products (CRC Press) met hoge resolutie MS spectra en structuurinformatie gebruikt om de positieve en negatieve ionen spectra geanalyseerd met MS /MS gegevens voor identificatie van soortgelijke onderdelen.
Human promonocytische cellijn (U937 cellen)
U937 cellen werden gekocht bij American Type Culture Collection (ATTC, USA) en gekweekt in Roswell Park Memorial Institute-1640 (RPMI 1640-medium) (Flowlab, Australië) [gesupplementeerd met 1% van 10 mM niet-essentiële aminozuren (NEAA) (Flowlab, Australië) en 1% van 10 mM L-glutamine (L-Glu) (Flowlab, Australië)] met 10% hitte-geïnactiveerd foetaal runderserum (FBS) (Flowlab, Australië). Cellen werden geïncubeerd bij 37 ° C in een bevochtigde incubator met 5% CO 2.
Differentiatie van U937 cellen
U937 cellen in 96-well celcultuur platen (Falcon, USA) werden geënt bij een dichtheid van 2 × 10 4 cellen /putje met RPMI-1640 medium dat 2% FBS en bewaard bij 37 ° C in een bevochtigde incubator met 5% CO 2. De volgende dag werd medium met forbol 12-myristaat 13-acetaat (PMA) (Sigma-Aldrich, USA) bij concentraties variërend 0-50 nM toegevoegd aan de monocytische U937-cellen differentiatie induceren van 24 en 48 uur. Medium met alleen PMA verdunningsmiddelen [dimethylsulfoxide (DMSO) oplossing (Sigma-Aldrich, USA)] toegevoegd parallel en gebruikt als dragercontrole. Aan het einde van het aangegeven tijdstip werden de cellen onderzocht op differentiatie-specifieke macrofaag celoppervlaktemarker expressie en cellevensvatbaarheid.
Expressie van CD11b, differentiatie-specifieke macrofaag celoppervlaktemarker werd bepaald door kleuring cellen zoals eerder beschreven [26 , 27]. Cellevensvatbaarheid werd bepaald met behulp van trypan blauw kleurstof (Sigma, USA) uitsluiting test zoals eerder beschreven [28].
Cytotoxiciteitstest
U937 cellen werden gezaaid in 96-well celcultuur platen bij een dichtheid van 2 x 10 4 cellen /putje met RPMI-1640 medium dat 2% FBS en bewaard bij 37 ° C in een bevochtigde incubator met 5% CO 2. De volgende dag werd medium dat MeOHGCM6 extract (in concentraties variërend van 0-100 ug /ml) en betamethason (Sigma, USA) (in concentraties variërend van 0-100 nM) werden toegevoegd. Medium dat alleen de MeOHGCM6 halen en betamethason verdunningsmiddelen [ethanol (EtOH) (BDH Laboratory Supplies, Engeland) en DMSO, respectievelijk] werden in parallel toegevoegd en gebruikt als controle over het voertuig. Een dag na de behandeling werd de U937 cellen proliferatiesnelheid bepaald met de CellTiter 96® Non-Radioactive Cell Proliferation Kit (Promega, USA) strikt volgens aanbevolen protocol van de fabrikant.
MeOHGCM6 extract behandeling van U937 cellen
U937 cellen werden gezaaid in 24-well celcultuur platen (Falcon, VS) bij een dichtheid van 2 x 10 5 cellen /putje met RPMI-1640 medium dat 2% FBS en geïncubeerd bij 37 ° C in een bevochtigde incubator met 5% CO 2. De volgende dag, de U937 cellen werden geïnduceerd om te differentiëren met 10 nM PMA gedurende 24 uur. Tijdens differentiatie werden de U937 cellen behandeld met de MeOHGCM6 extract of betamethason bij fysiologische concentraties. Bij 0, 8, 16 en 24 uur na de behandeling, supernatant en cellen werden geoogst en getest op TNF-α responsgraad en TNF-α en IL-6 genexpressie.
TNF-α responseniveau
TNF- α niveau werd gemeten met de BD ™ OptEIA Human TNF (TNF-α) ELISA kit II (BD Biosciences, USA) volgens het protocol van de fabrikant.
TNF-α en IL-6 genexpressie
Totaal RNA uit de celkweken werden geïsoleerd met behulp van de TRI Reagent® (Molecular Research Center, Inc., USA) en behandeld met DNase (Promega, USA). RNA werd aan omgekeerde transcriptie (cDNA) onder toepassing van het SuperScript ™ II reverse transcriptase (Invitrogen, USA). Het cDNA werd vervolgens gebruikt uitvoeren van kwantitatieve real-time PCR met SYBR Green PCR Master Mix (Qiagen, Duitsland) op DNA Engine Opticon II® (MJ Research, Bio-Rad, USA) zoals eerder beschreven [29]. De oligonucleotide primers waren voorwaarts 5'AAGAGTTCCCCAGGGACCTC en achteruit 5'GCTTGAGGGTTTGCTACAAC voor TNF-α; vooruit en achteruit 5'GAAAGGAGACATGTAACAAG 5'CCAGGCAAGTCTCCTCATTG voor IL-6; en vooruit en achteruit 5'GCGAGAAGATGACCCAGATC 5'GGATAGCACAGCCTGGATAG voor beta-actine (β-actine) (interne standaard).
Dieren
Volwassen vrouwelijke Sprague-Dawley ratten leeftijd van 7-8 weken en een gewicht van 160-200 g werden gebruikt voor de studie. Het protocol voor dierproeven werd goedgekeurd door de Institutional Comité voor Ethiek in de Dierproeven van de Universiteit van Malaya [erkenningsnummer: MP /08/06/2010 /SMH (R)]. De dieren werden verkregen van de Universiteit Putra Malaysia (UPM). De dieren werden individueel gehuisvest in kooien met brede-gaas bodems coprofagie te voorkomen. Ze werden in een temperatuur-gecontroleerde ruimte die goed werd geventileerd onderhouden, met voedsel en water, op een 12 uur licht /donker-cyclus in de gehele studie. Alle ratten werden beroofd van voedsel voor 48 uur, maar hadden vrije toegang tot drinkwater tot 2 uur voor hen te onderwerpen aan de ulcerogens.
-EtOH geïnduceerde maaglesies Ondernemingen De ratten werden willekeurig verdeeld in 7 groepen met elke groep bestaande uit 6 ratten. Groep 1 werd toegediend met 10% Tween 20 (extract verdunners) (BDH Laboratory Supplies, Engeland) en dienden als negatieve controle groep. Groep 2 kreeg 500 mg /kg lichaamsgewicht van de MeOHGCM6 extract-equivalente ongerelateerde plantenextract op soortgelijke wijze bereid in parallel MeOHGCM6 halen om te dienen als de niet-specifieke plantenextract (NSPE) controlegroep. Groep 3 werd bij 20 mg /kg lichaamsgewicht behandeld met OMP (Chemical Company uit Maleisië, Maleisië) en diende als de positieve behandeling controlegroep. De resterende groep 4, 5, 6 en 7 ontvingen 4 verschillende concentraties van het extract MeOHGCM6 bereik 2,5-500 mg /kg lichaamsgewicht, respectievelijk. Na 30 minuten pre-behandeling werden alle dieren toegediend met absolute EtOH langs orale weg. Eén uur na toediening werden de dieren gedood door ze overdosering met diethylether (BDH Chemicals Ltd., Engeland). buik van de rat werd ontleed en de slokdarm dichtst bij de cardia en de opgezwollen buik op de pylorus sluitspier werd onmiddellijk in de knoop met een reeks lekkage van de maaginhoud te voorkomen. De maag werd snel verwijderd en ondergedompeld in water. Meet- van maag secretie
de maag inhoud van elke maag rat werd afgezogen en voorzichtig geschraapt met een spatel. De maag sap met etensresten werd weggegooid. De geoogste maagslijmvlies werd gewogen op elektronische balans (Mettler Toledo, Zwitserland). De hoeveelheid maag-sap werd gemeten met een maatcilinder. De pH van de maaginhoud werd gemeten met een digitale pH meter (Crison Instruments, SA, Spanje).
Evaluatie van grove maaglesies
Na het oogsten werd de maag onmiddellijk gespoeld met zoutoplossing en onderzocht onder een stereomicroscoop (1,8 x) met een vierkant rooster oculair. De glandulaire gedeelte van de maag werd beoordeeld op de vorming van maagzweren. De totale zwerende gebied (UA) van de hemorragische lesies voor elke maag werd gemeten door plannimetry (mm 2) en het percentage remming werd berekend met de volgende formule: Remming %
=
UA de kwaliteitscontrole -
UA
behandeld /
UA de kwaliteitscontrole ×
100
Bepaling van de productie van niet-eiwit sulfhydrylgroepen (NP-SH)
Maagslijmvlies NP-SH niveau werd gemeten zoals eerder beschreven [30] met een geringe modificatie. In het kort werd de glandulaire maag gewogen en gehomogeniseerd in buizen met ijskoude 0,02 M ethyleendiaminetetra-azijnzuur (EDTA) (Gibco BRL Life Technologies, USA) (pH 8,9). Porties van de homogenaten werden gemengd met gedestilleerd water en 50% trichloorazijnzuur (Sigma Chemical Co., USA). Het mengsel werd geïncubeerd onder constant roeren gedurende 10 minuten bij 4 ° C en daarna gecentrifugeerd bij 3000 x g gedurende 15 minuten. Het mengsel werd daarna getest op NP-SH is via een glutathion testkit (Sigma Chemical Co., USA) volgens het protocol van de fabrikant.

Statistische analyse Alle gegevens werden uitgedrukt als gemiddelde ± standaarddeviatie (SD) of mediaan (25% en 75% kwartiel) van twee of drie onafhankelijke experimenten voor anti-inflammatoire studies en zeven onafhankelijke experimenten gastroprotectieve en anti-ulcerogene studies. ANOVA (one-way analyse van variantie en tweeweg variantieanalyse) werd gebruikt voor de vergelijking tussen groepen en voor het melden van statistische significantie 'p
' ten opzichte van de controlegroep. De waarde van p
< 0,05 werd beschouwd als statistisch significant. Alle statistische analyses werden uitgevoerd met behulp van de GraphPad Prism 4.0 Software (USA) en SPSS versie 16.0 Software (SPSS Inc., Chicago), respectievelijk.
Resultaten
Gestandaardiseerde MeOHGCM6 extraheren profiel
LC /MS analyses van de verschillende batches van MeOHGCM6 extract werden uitgevoerd om de reproduceerbaarheid en consistentie van de extractie methodes te verzekeren. Batch 1 en 2 van MeOHGCM6 extract gebruikt in de studie toonde zeer vergelijkbaar massaspectrum profielen en hoeveelheid van de grote massa (Figuur 1 A-C). Analyse van de spectra en vergelijking met de Dictionary of Natural Products, CRC Press identificeerde de karakteristieke massa's als 457,405, 645,280 en 887,579. De geïdentificeerde massa in de positieve ionen spectrum van m /z 457,405, had fragmenten van 398,327 (basis piek), 380,316 en 158,082. De neutrale verlies van 59,077 massa was misschien wel een indicatie van de verloren van trimethylamine. Dit suggereert dat de verbinding een trimethylammonium groep kan bevatten. De hoge resolutie MS en MS /MS-gegevens konden niet definitief geen bekende verbindingen te identificeren uit het Woordenboek van Natural Products. De massa van m /z 645 en 887, toonde echter een duidelijke associatie met twee bekende chlorofyl, methyl 10-hydroxyphaeophorbide een Kopen en 10-a Hydroxypheophytin hotels met de juiste UV absorpties waargenomen in de PDA-analyse (Tabel 1 ). Figuur 1 Profileren van de verschillende partijen MeOHGCM6 extract. ESI mode met positieve /negatieve schakelen en externe referentie werd gebruikt voor het MS met een Shimadzu UFLC systeem. Totale positieve ionenspectra geanalyseerd voor het identificeren van soortgelijke elementen uit de twee verschillende charges van MeOHGCM6 extract gebruikt in de studie. (A) MeOHGCM6 extract (Batch 1; M6-1). (B) MeOHGCM6 extract (Batch 2; M6-2). (C) Vergelijking van de intensiteit van de meest overvloedige massa van de twee MeOHGCM6 extract batches gebruikt in het onderzoek.
Tabel 1 Structuur identificaties van de belangrijkste aanwezige massa in MeOHGCM6 extract middels LC /MS
Massa (ion)
Gevonden in batch
Mogelijke ID
417,298
1, 2
waarschijnlijk verontreiniging
457,405 *
1, 2
Unidentified
461,326
1, 2
waarschijnlijk verontreiniging
505,353
1, 2
waarschijnlijk verontreiniging
573,256
1, 2
Unidentified
645,280
1, 2
Methyl 10-hydroxyphaeophorbide een
743,636
1, 2
Unidentified
887,579
1, 2
10-Hydroxypheophytin a

Dictionary of Natural Products, CRC Press met een hoge resolutie MS-spectra werden gebruikt om de totale positieve ionen spectra voor de identificatie van mogelijke chemische bestanddelen te analyseren.
* MS /MS (relatieve intensiteiten%) 457,405 398,327 → ( 100%), 380,316 (50%), 158,082 (40%).
differentiatie-specifieke macrofaag celoppervlak merkerexpressie op U937 cellen
gedifferentieerde U937-cellen worden gekenmerkt door de expressie van de monocyt /macrofagen lijn-specifieke CD11b , oppervlaktemerker eiwit [26]. In onze studie was de expressie van CD11b werd gemarkeerd met een intens blauwe bruinachtige kenmerking op het celoppervlak [27]. De expressie van het CD11b werd sterk verhoogd wanneer de U937 cellen werden geïnduceerd om te differentiëren met toenemende concentratie van PMA (1, 10 en 50 nM) (figuur 2, figuur 3A). De bevinding suggereerde dat behandeling met 10 of 50 nM PMA gedurende 24 uur of 1 nM PMA gedurende 48 uur, gedifferentieerde U937 cellen ruim boven 50% van de celkweek. Figuur 2 Expressie van de differentiatie-specifieke macrofaag celoppervlak marker op gedifferentieerde U937 monocytische cellen. Monocytische U937-cellen werden geïnduceerd om te differentiëren met (A) 0 nM PMA gedurende 24 uur; (B) 0 nM PMA gedurende 48 uur; (C) 1 nM PMA gedurende 24 uur; (D) 1 nM PMA gedurende 48 uur; (E) 10 nM PMA gedurende 24 uur; (F) 10 nM PMA gedurende 48 uur; (G) 50 nM PMA gedurende 24 uur en (H) 50 nM PMA gedurende 48 uur. Cellen werden gekleurd met behulp van immunohistochemische kleuring de aanwezigheid van CD11b, een macrofaag celoppervlaktemarker identificeren. Gedifferentieerde monocytische U937-cellen werden geïdentificeerd door de intense bruine blauwe vlek op het celoppervlak van de gedifferentieerde cellen. De cellen werden bekeken bij 20 × vergrotingen onder helderveld met behulp van een omgekeerde microscoop en gefotografeerd met een Nikon D70 camera (Nikon, Japan). Een archetypische set van foto's uit drie afzonderlijke experimenten worden getoond.
Figuur 3 Differentiatie-specifieke U937 monocytische cellen macrofaag celoppervlak marker expressie en levensvatbaarheid van de cellen bepalen. Monocytische U937-cellen werden geïnduceerd om te differentiëren met verschillende concentraties PMA gedurende 24 en 48 uur. (A) De percentages van gedifferentieerde cellen werden gescoord door de aanwezigheid van CD11b op het celoppervlak. (B) De percentages levensvatbare cellen werden gescoord met behulp trypan blauw exclusietest. Het percentage gedifferentieerde of levensvatbare cellen per totale cellen hetzelfde voorafgaand aan het experiment met de verschillende concentraties van PMA en incubatietijd. Gegevens zijn weergegeven als gemiddelde ± S.D. van drie onafhankelijke experimenten met '*', blz Restaurant < 0,05 belang vertegenwoordigen verschil met de groep die niet geïnduceerd te differentiëren.
Cellevensvatbaarheid bepaling uit gedifferentieerde U937 cellen Ondernemingen De levensvatbare gedifferentieerde U937 cellen werden gescoord met behulp van de trypan blauwe kleurstof uitsluiting assay. U937 cellen levensvatbaarheid vertoonden een significante dosis-afhankelijke verlaging van het percentage levensvatbare cellen als geïnduceerd om te differentiëren met 1, 10 en 50 nM PMA (figuur 3B). De bevinding suggereerde dat 90% van de gedifferentieerde U937 cellen na behandeling met 1 of 10 nM PMA gedurende 24 uur of 1 nM PMA gedurende 48 uur.
Cytotoxiciteit van MeOHGCM6 uittreksel aan U937 cellen nog levensvatbaar
de cytotoxische effecten van de MeOHGCM6 extract en betamethason op de U937-cellen werden bepaald door de celproliferatiesnelheid. Behandelde U937 cellen met de MeOHGCM6 extract bij 0,05, 0,5, 1 en 5 ug /ml vertoonde proliferatieve uitbarstingen van 117,39% (108,48% 122,10%), 152,04% (149,36% 154,72%) (p
< 0,05) , 145,60% (137,48%, 149,11%) (p Restaurant < 0,05) en 118,49% (112,01%, 133,28%), respectievelijk (Figuur 4A). Behandeling met MeOHGCM6 extract bij 10 ug /ml verminderde het percentage celproliferatie tot 87,00% (82,43%, 89,62%). Behandelde U937 cellen met de betamethason vertoonden significante dosis-afhankelijke verlaging van hun proliferatie tarief (Figuur 4B). Bij lagere concentraties van betamethason (0,1, 1, 5 en 10 nM), de celproliferatie bedroeg 110,35% (92,20%, 115,83%), 113,75% (89,56%, 122,98%), 94,59% (85,56%, 101,93%) en 80,48% (77,78%, 110,48%), respectievelijk. Figuur 4 Cytotoxiciteit effecten van de verschillende concentraties MeOHGCM6 extract en betamethason op monocytische U937-cellen. De proliferatiesnelheid van monocytische U937-cellen behandeld met toenemende concentraties (A) MeOHGCM6 extract en (B) betamethason werd bepaald over een periode van 24 uur door het uitvoeren MTT assay. Het percentage celproliferatie in verhouding tot het aantal cellen uitgezet vóór het toedienen van de dosering MeOHGCM6 extract en betamethason. De concentraties van MeOHGCM6 extract dat veroorzaakt 30% (G130), 50% (G150) en 70% (G170) of remming van celproliferatie werd geëxtrapoleerd uit de grafiek (aangeduid met een pijl). Resultaten werden uitgedrukt als de mediaan (25% en 75% kwartiel) van twee onafhankelijke experimenten.
Effecten van MeOHGCM6 extraheren behandeling op de TNF-α responsgraad tijdens differentiatie van de U937 cellen Ondernemingen De effecten van behandeling op MeOHGCM6 extraheren de regulatie van TNF-α responsniveau tijdens de U937 cellen differentiatie werd onderzocht met behulp van ELISA. De TNF-α responsgraad bereikte een maximum van 43,28 ± 5,15 pg /ml op 8 uur wanneer de U937 cellen werden geïnduceerd om te differentiëren (Figuur 5A). In de aanwezigheid van 10 ug /ml extract MeOHGCM6 tijdens differentiatie van U937 cellen, de TNF-α respons daalde aanzienlijk tot 8 uur [0,14 ± 0,28 pg /ml (p
< 0,001)] en is vergelijkbaar met die in aanwezigheid van betamethason [0,28 ± 0,56 pg /ml (p
< 0,001)]. Figuur 5 MeOHGCM6 extraheren behandeling op TNF-α responsgraad en TNF-α en IL-6 genexpressie tijdens differentiatie van de monocytische U937-cellen. De monocytische U937-cellen werden geïnduceerd om te differentiëren met 10 nM PMA. Tijdens differentiatie werden monocytische U937-cellen behandeld met MeOHGCM6 extract. (A) De TNF-α responsgraad werden gekwantificeerd met behulp van ELISA. De (B) TNF-α en (C) IL-6 genexpressie niveaus werden gekwantificeerd met qRT-PCR. Resultaten werden uitgedrukt als het gemiddelde ± S.D. viervoud van assays.
Effecten van MeOHGCM6 extraheren behandeling op de TNF-α en IL-6 genexpressie tijdens differentiatie van de U937 cellen
regulatie van TNF-α en IL-6 door MeOHGCM6 extraheren behandeling tijdens de U937 cellen differentiatie werd verder onderzocht op het niveau van genexpressie met behulp qRT-PCR. De TNF-α genexpressieniveau piekte na 6 uur (3,16 ± 0,48 kopieën /actine) van de U937 cellen differentiatie (Figuur 5B). TNF-α genexpressieniveau daalde in de eerste 6 uur [0,52 ± 0,28 kopieën /actine (p
< 0,001)] van U937 cellen differentiatie in de aanwezigheid van 10 ug /ml MeOHGCM6 extract. De afname in de TNF-α genexpressieniveau van U937 cellen tijdens de differentiatie bij behandeling met 10 ug /ml MeOHGCM6 was vergelijkbaar met of beter dan de resultaten van de behandeling met 10 nM betamethason [0,55 ± 0,42 kopieën /actine (p
< 0,001)]. De IL-6 genexpressie niveau vertoonden een significante toename en piekte op 0,68 ± 0,09 kopieën /actine na 12 uur van de U937 cellen differentiatie (figuur 5C). Afname van de IL-6 genexpressie niveau werd waargenomen tot 0,10 ± 0,01 kopieën /actine, 0,23 ± 0,02 kopieën /actine (p Restaurant < 0,01) zijn, 0,37 ± 0,04 kopieën /actine (p Restaurant < 0,001 ) en 0,45 ± 0,05 kopieën /actine (p
< 0,001) en 3, 6, 9 en 12 uur, respectievelijk wanneer de U937 cellen tijdens de differentiatie werden behandeld met 10 ug /ml MeOHGCM6 extract. Remming van IL-6 genexpressie in aanwezigheid van de MeOHGCM6 extract was vergelijkbaar met die van betamethason.
Profylactische effecten van behandeling MeOHGCM6 uittreksel aan de ratten maaginhoud volgende EtOH-geïnduceerde acute maagslijmvlies
maagslijmvlies secretie maagsap volume en maagslijmvlies pH werden bepaald uit de maaginhoud maag ratten voorbehandeld met MeOHGCM6 extract volgende EtOH voeden. 2,45 ± 0,25 g maagslijmvlies en 1,75 ± 0,20 ml maagsap werden uit de maag van ratten gevoed met alleen het extract oplosmiddel (tabel 2). 1,54 ± 0,31 g maagslijmvlies en 0,96 ± 0,25 ml maagsap en 1,68 ± 0,19 g maagslijmvlies en 0,96 ± 0,16 ml maagsap werden uit ratten voorbehandeld met 250 en 500 mg /kg lichaamsgewicht van MeOHGCM6 extract, respectievelijk. Ter vergelijking werd 2,31 ± 0,42 g maagslijmvlies en 1,15 ± 0,36 ml maagsap van ratten teruggewonnen voorbehandeld met 20 mg /kg b.w OMP. 2,75 ± 0,49 g maag slijm en 1,75 ± 0,28 ml maagsap werden hersteld van ratten gevoed met soortgelijke wijze bereid ongerelateerde plantenextract dat diende als de NSPE controle. Alle auteurs gelezen en goedgekeurd het definitieve manuscript.

• Antioxidant en maag cytoprotectieve prostaglandines eigenschappen van Cassia sieberiana wortels bast extract als een anti-ulcerogene agent
• Genetische variatie in CYP3A4 en CYP3A5in primaire lever-, maag- en darmkanker patients