Anti-inflammatoriske, gastroprotektive og anti-ulcerogene effekter af røde alger Gracilaria changii (Gracilariales, Rhodophyta) extract

Anti-inflammatoriske, gastroprotektive og anti-ulcerogene virkninger af røde alger Gracilaria changii
(Gracilariales, Rhodophyta) ekstrakt
Abstract
Baggrund
Gracilaria changii
(Xia et Abbott) Abbott, Zhang et Xia, en rød alger almindeligt forekommende i de kystnære områder i Malaysia er traditionelt bruges til fødevarer og til behandling af forskellige lidelser, herunder inflammation og gastriske lidelser . Formålet med undersøgelsen var at undersøge anti-inflammatorisk, gastrobeskyttende og mavesårshæmmende aktiviteter af massespektrometri standardiseret methanolisk ekstrakt af Gracilaria changii
.
Metoder
Methanolisk ekstrakt af Gracilaria changii
(MeOHGCM6 ekstrakt ) blev fremstillet og standardiseret under anvendelse af massespektrometri (MS). Anti-inflammatoriske aktiviteter MeOHGCM6 ekstrakt blev undersøgt ved at behandle U937-celler i løbet af sin differentiering med 10 ug /ml MeOHGCM6 ekstrakt. Tumor nekrose faktorer-α (TNF-α) reaktion niveau og TNF-α og interleukin-6 (IL-6) genekspression blev overvåget og sammenlignet med den behandles ved 10 nM betamethason, et anti-inflammatorisk lægemiddel. Gastrobeskyttende og anti-ulcerogene aktiviteter af MeOHGCM6 ekstrakt blev undersøgt ved at fodre rotter med MeOHGCM6 ekstrakt mellem 2,5 og til 500 mg /kg legemsvægt (legemsvægt) efter induktion af gastriske læsioner. Produktion af slim og mavesaft, pH mavesyren og ikke-protein sulfhydryler (NP-SH) niveauer blev bestemt og sammenlignet med den fodres med 20 mg /kg legemsvægt omeprazol (OMP), en kendt anti-ulcus medicin.
Resultater
MS /MS-analyse af de MeOHGCM6 ekstrakterne afslørede tilstedeværelsen af ​​methyl 10-hydroxyphaeophorbide en
og 10-hydroxypheophytin en
, kendt klorofyl proteiner og flere uidentificerede molekyler. Behandling med 10 ug /ml MeOHGCM6 ekstrakt under differentiering af U937-celler markant inhiberede TNF-α respons niveau og TNF-α og IL-6-genekspression. Den inhiberende virkning var sammenlignelig med betamethason. Ingen cytotoksiske virkninger blev registreret for celler behandlet med 10 ug /ml MeOHGCM6 ekstrakt. Rotter fodret med MeOHGCM6 ekstrakt ved 500 mg /kg legemsvægt viste reduceret absolutte ethanol-induceret gastrisk læsion størrelser af > 99% (p
< 0,05). Denne beskyttende virkning var sammenlignelig med følger af OMP. PH af den gastriske mucus faldt i dosisafhængig måde fra 5,51 til 3,82, og der var en signifikant stigning i NP-SH-koncentrationer.
Konklusioner Search Results fra undersøgelsen, tyder på, at massespektrometri standardiseret methanolisk ekstrakt af Gracillaria changii
besidder anti-inflammatoriske, gastrobeskyttende og anti-ulcerogene egenskaber. Yderligere undersøgelse af den aktive bestanddel af ekstrakt og dets virkningsmekanisme er berettiget i fremtiden.
Nøgleord
Anti-inflammatoriske mavesårshæmmende gastrobeskyttende Gracilaria changii
Cytokiner Betamethasone Omeprazol Tang ulcus Baggrund
Inflammation er et væsentligt træk ved mange sygdomme. Det er kendetegnet ved et kompleks af orkestrerede interaktioner mellem mediatorer af inflammation og inflammatoriske celler rettet mod fjernelse irriterende stoffer og heling af vævsskader [1, 2]. Inflammation er en vigtig værtsforsvarsmekanisme. Betændelse, der opstår i det mucosale af mavetarmkanalen, forårsager imidlertid gastrointestinal ulcus [3]. Mavesår er en almindelig stor lidelse i fordøjelsessystemet påvirker millioner af amerikanere og mange flere på verdensplan [4]. Den mest almindelige årsag til gastrointestinal ulcus sygdom infektion med Helicobacter pylori
(H. pylori
) [5] og lang tids brug af non-steroide antiinflammatoriske lægemidler (NSAID) såsom aspirin og ibuprofen [6]. Fremkomsten af ​​antibiotiske kontroller mod H. pylori
har reduceret antallet af gastrointestinale sår sager i de udviklede lande [7]. Sygdommen er dog stadig høj i andre lande og sygdom forårsaget af brugen af ​​NSAID stadig er et stort sundhedsproblem i de udviklede lande [6, 7].
Behandling for inflammation i almindelighed er rettet mod enten inhibere aktivitet af inflammatoriske celler eller inhibere produktionen af ​​inflammatoriske mediatorer [8]. Den senere kan gennemføres ved anvendelse lægemidler såsom NSAID'er og kortikosteroider [9]. Behandling for gastrointestinal ulcus i almindelighed, er rettet mod enten fjerne H. pylori
infektion eller reducere og hæmme niveauet af mavesyre produktion ansvarlige for udhulingen af ​​mave beskyttelseslag [10, 11]. Den senere kan opnås ved hjælp af lægemidler, såsom histamin (H 2) blokkere, syre pumpe hæmmere og slimhinder beskyttende medicin [9]. Imidlertid har forskellige bivirkninger af langvarig brug af disse lægemidler blevet beskrevet [9]. Derudover er anti-inflammation og anti-ulcerogene lægemidler anvendes hovedsagelig til at lindre symptomerne på sygdommen uden faktisk behandling eller forebyggelse af de inflammatoriske og ulcerogene processer.
Udvikling af anti-inflammatoriske og anti-ulcerogene lægemidler har for nylig fokuseret på at opdage den gunstige anvendelse af plantestoffer planteafledte ekstrakter, der er kraftigt virkende og sikrere at anvende. Alger fundet vokser i overflod fra de kystnære områder i mange dele af verden udgør en meget stor endnu uudnyttet potentiale for ny kilde til lægemidler [12, 13]. Den røde alger har for eksempel blevet rapporteret at indeholde aktive forbindelser, der kan afhjælpe inflammation i fordøjelseskanalen [14], forebygge eller behandle mavesår og kræft forårsaget af oxidativ stress [15, 16], inhiberer inflammatoriske aktiviteter ved at undertrykke produktionen af inflammatoriske mediatorer [17-19] og inducerer cancercelle apoptose i maven [20] og colon [21]. Naturlige forbindelser afledt af spiselige alger kan være sikrere til anvendelse som antiinflammatoriske og gastrisk anti-ulcerogene terapeutiske midler, da de er taget som fødevarer og anvendes i traditionel medicin i umindelige tider [13].
Rødalger, Gracilaria changii
(Xia et Abbott) Abbott, Zhang et Xia fundet voksende off de kystnære områder i Malaysia udgør en potentiel lokal kilde til dette naturligt afledte lægemidler. I øjeblikket er de alger kommercielt høstet blot for sin kolloid agar indhold og som lokale fødevarer delikatesser. Disse alger er almindeligt anvendt som folkemedicin til behandling af forskellige lidelser, herunder inflammation og gastriske lidelser. Nærværende undersøgelse har til formål at vurdere de potentielle anti-inflammatoriske, gastrobeskyttende og anti-ulcerogene aktiviteter af disse malaysiske røde alger, Gracilaria changii
.
Metoder
Alger ekstrakt forberedelse
Gracilaria changii
(Xia et Abbott) Abbott, Zhang et Xia blev indsamlet fra de kystnære vand i Morib, Selangor, Malaysia (N2 ° 44 '908 ", E101 ° 26' 590") i slutningen af ​​februar 2003 [22-24]. Algerne blev identificeret af professor Dr. Phang Siew Moi, direktør for Institut for Ocean og Geologisk Institut, Biologisk Institut, Det Naturvidenskabelige Fakultet, Universitetet i Malaya, hvor kupon prøver blev opretholdt (herbarium nr. PSM 6320 og PSM 6321 ). Algerne blev vasket i sterilt havvand med en afsluttende skylning i sterilt destilleret vand som tidligere beskrevet [22]. Algerne blev derefter sonikeret i et vandbad-sonikator og holdt ved -70 ° C. Methanolisk ekstrakt af Gracilaria changii
(MeOHGCM6 ekstrakt) blev fremstillet ved University of Malaysia Terengganu (UMT) i overensstemmelse med de beskrevne metoder [25]. Den MeOHGCM6 ekstrakt blev holdt ved -20 ° C før brug.
MeOHGCM6 udtrække
Profil analyse af MeOHGCM6 ekstrakten blev udført på et Shimadzu ultrahurtig væskekromatografi (UFLC), der er udstyret med fotodiodearray ultraviolet (PDA UV ) detektor og ion trap tid søgning (TOF) massespektrometer (Shimadzu, Japan). Adskillelsen blev opnået på en Waters Xbridge C18-søjle (50 mm x 2,1 mm, partikeldiameter på 2,5 um) (Vand, USA) ved 40 ° C. Den mobile fase bestod af vand [0,1% myresyre (BDH Laboratory Supplies, England)]: acetonitril (BDH Laboratory Supplies, England) (0,1% myresyre) ved en strømningshastighed på 0,50 ml /min med et injektionsvolumen på 10 pi . Elektrosprayionisering (ESI) mode med positiv /negativ kobling og ekstern reference blev anvendt til massespektrometri (MS). Dictionary of Natural Products (CRC Press) med højopløsnings-MS-spektre og strukturel information blev anvendt til at analysere de positive og negative ion spektre sammen med MS /MS oplysninger til identifikation af lignende komponenter.
Humant promonocytiske cellelinie (U937 celler)
U937-celler blev anskaffet fra American Type Culture Collection (ATTC, USA) og dyrket i Roswell Park Memorial Institute-1640 (RPMI-1640 medium) (Flowlab, Australien) [suppleret med 1% af 10 mM ikke-essentielle aminosyrer (NEAA) (Flowlab, Australien) og 1% af 10 mM L-glutamin (L-Glu) (Flowlab, Australien)] indeholdende 10% varmeinaktiveret føtalt bovint serum (FBS) (Flowlab, Australien). Cellerne blev inkuberet ved 37 ° C i en fugtig inkubator med 5% CO 2.
Differentiering af U937 celler
U937-celler blev podet i 96-brønds celledyrkningsplader (Falcon, USA) ved en densitet på 2 × 10 4 celler /brønd med RPMI-1640-medium indeholdende 2% FBS og holdt ved 37 ° C i en fugtig inkubator med 5% CO 2. Den følgende dag medium indeholdende phorbol 12-myristat 13-acetat (PMA) (Sigma-Aldrich, USA) ved koncentrationer i området 0-50 nM blev tilsat til U937 monocytiske celler til at inducere differentiering i 24 og 48 timer. Medium indeholdende kun PMA fortyndingsmidler [dimethylsulfoxid (DMSO) opløsning (Sigma-Aldrich, USA)] blev tilsat parallelt og anvendes som vehikelkontrol. Ved afslutningen af ​​den angivne tidspunkt blev cellerne bedømt for differentiering-specifikke makrofag celleoverflademarkør ekspression og cellelevedygtighed.
Ekspression af CD11b, differentiering-specifikke makrofag celleoverflademarkør blev bestemt ved farvning af celler som beskrevet tidligere [26 , 27]. Cellelevedygtighed blev bestemt under anvendelse af trypanblåt (Sigma, USA) udelukkelse assay som tidligere beskrevet [28].
Cytotoksicitetsanalysen Salg U937-celler blev podet i 96-brønds celledyrkningsplader plader ved en densitet på 2 x 10 4-celler /brønd med RPMI-1640-medium indeholdende 2% FBS og holdt ved 37 ° C i en fugtig inkubator med 5% CO 2. Den følgende dag medium indeholdende MeOHGCM6 ekstrakt (ved koncentrationer i området fra 0-100 ug /ml) og betamethason (Sigma, USA) (ved koncentrationer i området fra 0-100 nM) blev tilsat. Medium indeholdende kun MeOHGCM6 ekstrakt og betamethason fortyndingsmidler [ethanol (EtOH) (BDH Laboratory Supplies, England) og DMSO henholdsvis] blev tilsat parallelt og anvendes som vehikelkontrol. En dag efter behandling blev U937-celler spredning sats bestemmes ved hjælp af CellTiter 96® Non-Radioactive Cell Proliferation kit (Promega, USA) strengt at følge producentens anbefalede protokol.
MeOHGCM6 ekstrakt behandling af U937-celler
U937 celler blev podet i 24-brønds celledyrkningsplader (Falcon, USA) ved en densitet på 2 x 10 5 celler /brønd med RPMI-1640-medium indeholdende 2% FBS og inkuberet ved 37 ° C i en fugtig inkubator med 5% CO 2. Den følgende dag blev U937-celler induceres til at differentiere med 10 nM PMA i 24 timer. Under differentiering blev U937-celler behandlet med MeOHGCM6 ekstrakt eller betamethason ved fysiologisk koncentration. Ved 0, blev 8, 16 og 24 timer efter behandling, supernatanten og cellerne høstet og analyseret for TNF-α respons niveau og TNF-α og IL-6-genekspression.
TNF-α respons niveau
TNF α-niveauet blev målt ved anvendelse af BD OptEIA ™ human TNF (TNF-α) ELISA kit II (BD Biosciences, USA) ifølge producentens protokol.
TNF-α og IL-6-genekspression
Total RNA fra cellekulturer blev isoleret under anvendelse af TRI Reagent® (Molecular Research Center, Inc., USA) og behandlet med DNase (Promega, USA). RNA blev revers-transkriberet (cDNA) ved anvendelse af SuperScript ™ II revers transkriptase (Invitrogen, USA). CDNA'et blev herefter anvendt til at udføre kvantitativ real-time PCR under anvendelse SYBR® Green PCR Master Mix (Qiagen, Tyskland) på DNA Engine Opticon II® (MJ Research, Bio-Rad, USA) som tidligere beskrevet [29]. De anvendte oligonukleotidprimere var frem 5'AAGAGTTCCCCAGGGACCTC og bak 5'GCTTGAGGGTTTGCTACAAC for TNF-α; sende 5'GAAAGGAGACATGTAACAAG og omvendt 5'CCAGGCAAGTCTCCTCATTG for IL-6; og videresende 5'GCGAGAAGATGACCCAGATC og vende 5'GGATAGCACAGCCTGGATAG for beta-actin (β-actin) (intern reference).
Dyr
Voksen kvindelige Sprague-Dawley rotter i alderen 7 til 8 uger og vejer 160-200 g var anvendes til undersøgelsen. Protokollen for dyreforsøg blev godkendt af Institutional udvalg for Etik i dyreforsøg fra University of Malaya [autorisationsnummer: MP /08/06/2010 /SMH (R)]. Dyrene blev opnået fra University Putra Malaysia (UPM). Dyrene blev opstaldet individuelt i bure med bred-mesh wire bunde for at forhindre coprophagy. De blev holdt i et temperaturreguleret rum, der var godt ventileret, med mad og vand, på en 12 timers lys /mørke-cyklus under hele undersøgelsen. Alle rotter blev frataget mad i 48 timer, men havde fri adgang til drikkevand, indtil 2 timer før underkaste dem ulcerogens. Salg EtOH-induceret gastriske læsioner
Rotterne blev tilfældigt opdelt i 7 grupper med hver gruppe bestående af 6 rotter. Gruppe 1 blev administreret med 10% Tween 20 (uddrag fortyndingsmidler) (BDH Laboratorieudstyr, England) og tjente som negativ kontrolgruppe. Gruppe 2 fik 500 mg /kg legemsvægt af MeOHGCM6 ekstrakt-ækvivalent ubeslægtet planteekstrakt fremstillet tilsvarende parallelt som MeOHGCM6 ekstrakt til at tjene som den ikke-specifikke planteekstrakt (NSPE) kontrolgruppe. Gruppe 3 blev behandlet med OMP (Chemical Company i Malaysia, Malaysia) ved 20 mg /kg legemsvægt og tjente som positiv behandling kontrolgruppen. Den resterende gruppe 4, 5, 6 og 7 modtog 4 forskellige koncentrationer af MeOHGCM6 ekstrakten mellem 2,5 og - 500 mg /kg legemsvægt, henholdsvis. Efter 30 minutters forbehandling, blev alle dyr administreret med absolut EtOH gennem den orale vej. En time efter administration blev dyrene aflivet ved over-dosering dem med diethylether (BDH Chemicals Ltd., England). Rottens mave blev dissekeret og spiserøret nærmest ved mavemunden og udspilede mave på pylorus sphincter blev straks bundet i en knude ved hjælp af en snor til at undgå lækage af maveindholdet. Maven blev hurtigt fjernet og nedsænket i vand.
Måling af gastrisk sekretion
gastrisk indhold af hver rotte maven blev aspireret og forsigtigt skrabet med en spatel. Maven saft indeholdende madrester blev kasseret. Den høstede gastrisk slim blev vejet ved hjælp af elektronisk balance (Mettler Toledo, Schweiz). Mængden af ​​gastrisk saft blev målt ved anvendelse et måleglas. PH af maveindholdet blev målt ved anvendelse af et digitalt pH-meter (Crison Instruments, SA, Spanien).
Evaluering af grove gastriske læsioner
Efter høst blev maven straks skyllet med saltvand og undersøgt under et dissektionsmikroskop (1,8 ×) med et firkantet gitter okular. Den glandulære del af maven blev vurderet for dannelsen af ​​mavesår. Den samlede er sår areal (UA) af hæmoragiske læsioner for hver mave blev målt ved plannimetry (mm 2) og procentdelen af ​​hæmning blev beregnet ud fra følgende formel: Hæmning %
=
UA
kontrol -
UA
behandlet /
UA
kontrol ×
100
Bestemmelse af produktion af ikke-protein sulfhydryler (NP-SH) Salg maveslimhinden NP-SH-niveauet blev målt som tidligere beskrevet [30] med mindre modifikation. Kort fortalt blev glandulære mave vejes og homogeniseres i rør indeholdende iskold 0,02 M ethylendiamintetraeddikesyre (EDTA) (GibcoBRL Life Technologies, USA) (pH 8,9). Portioner af homogenaterne blev blandet med destilleret vand og 50% trichloreddikesyre (Sigma Chemical Co., USA). Blandingen blev inkuberet under konstant omrøring i 10 minutter ved 4 ° C og derefter centrifugeret ved 3000 x g i 15 minutter. Blandingen blev derefter analyseret for NP-SH niveau under anvendelse af en glutathion-assay kit (Sigma Chemical Co., USA) ifølge producentens protokol.
Statistisk analyse
Alle data blev udtrykt som gennemsnit ± standardafvigelse (SD) eller median (25% og 75% kvartil) fra to eller tre uafhængige forsøg for anti-inflammatoriske undersøgelser og syv uafhængige eksperimenter for gastrobeskyttende og anti-ulcerogene undersøgelser. ANOVA (envejs variansanalyse og to-vejs variansanalyse) blev anvendt til sammenligning mellem grupper og for at rapportere den statistiske signifikans 'p
' i forhold til kontrolgruppen. Værdien af ​​p
< 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant. Alle statistiske analyser blev udført ved hjælp af GraphPad Prism 4.0 Software (USA) og SPSS-version 16.0 Software (SPSS Inc., Chicago), hhv.
Resultater
Standardiseret MeOHGCM6 ekstrakt profil
LC /MS-analyser af de forskellige partier af MeOHGCM6 ekstrakt blev udført for at sikre reproducerbarhed og sammenhæng i de udvindingsmetoder. Batch 1 og 2 i MeOHGCM6 ekstrakt anvendt i undersøgelsen viste særdeles lignende massespektrale profiler og mængde af de store masser (Figur 1A-C). Analyse af spektre og sammenligning med Dictionary of Natural Products, CRC Press identificeret de karakteristiske masserne som 457,405, 645,280 og 887,579. Den identificerede masse i positiv ion spektrum af m /z 457,405, havde fragmenter af 398,327 (base peak), 380,316 og 158,082. Den neutrale tab af 59,077 masse var muligvis indikerer tabt trimethylamin. Dette antyder, at forbindelsen kan indeholde en trimethylammonium-del. Den høje opløsning MS og MS /MS-data kunne ikke endeligt identificere kendte forbindelser fra Dictionary of Natural Products. Masserne af m /z 645 og 887, men viste en tydelig sammenhæng til to kendte klorofyler, methyl 10-hydroxyphaeophorbide en
og 10-Hydroxypheophytin en
med de relevante UV absorbanser observeret i PDA analyse (tabel 1 ). Figur 1 profilering af forskellige batches af MeOHGCM6 ekstrakt. ESI-tilstand med positiv /negativ kobling og ekstern reference blev anvendt til MS under anvendelse af et Shimadzu UFLC system. Total positiv ion spektra analyseret for identifikation af tilsvarende komponenter fra de to forskellige batches af den MeOHGCM6 ekstrakt anvendt i undersøgelsen. (A) MeOHGCM6 ekstrakt (Batch 1, M6-1). (B) MeOHGCM6 ekstrakt (Batch 2; M6-2). (C) Sammenligning af intensiteten af ​​de mest udbredte masserne af de to MeOHGCM6 ekstrakt batches anvendt i undersøgelsen. Salg Tabel 1 Struktur identifikationer af de mest betydelig masse til stede i MeOHGCM6 ekstrakt ved hjælp af LC /MS
Masse (ion)
Fundet i batch
Mulig ID
417,298
1, 2
Mest sandsynligt forurenende
457,405 *
1, 2
Uidentificeret
461,326
1, 2
Mest sandsynligt forurenende
505,353
1, 2
Mest sandsynligt forurenende
573,256
1, 2
Uidentificeret
645,280
1, 2
Methyl 10 hydroxyphaeophorbide en
743,636
1, 2
uidentificeret
887,579
1, 2
10-Hydroxypheophytin a

Dictionary of Natural Products, blev CRC Press med høj opløsning MS spektre bruges til at analysere den samlede positive ion spektre til identifikation af mulige kemiske bestanddele.
* MS /MS (relative intensiteter%) 457,405 → 398,327 ( 100%), 380,316 (50%), 158,082 (40%).
differentieringsspecifikke makrofag celleoverflademarkør ekspression på U937-celler
Differentieret U937-celler er kendetegnet ved ekspressionen af ​​monocyt /makrofager afstamning-specifikke CD11b , overflademarkør protein [26]. I vores undersøgelse, blev ekspressionen af ​​CD11b markeret med en intens brunlig blå mærkning på celleoverfladen [27]. Ekspressionen af ​​CD11b blev stærkt forøget, når U937 celler blev induceret til at differentiere med stigende koncentration af PMA (1, 10 og 50 nM) (figur 2, figur 3A). Konstateringen foreslået, at behandling med 10 eller 50 nM PMA i 24 time eller 1 nM PMA i 48 time blev differentierede U937-celler godt stykke over 50% af cellekulturen. Figur 2 Ekspression af differentieringen-specifikke makrofag celleoverflademarkør på differentierede U937 monocytiske celler. U937 monocytiske celler blev induceret til at differentiere med (A) 0 nM PMA i 24 timer; (B) 0 nM PMA i 48 timer; (C) 1 nM PMA i 24 timer; (D) 1 nM PMA i 48 timer; (E) 10 nM PMA i 24 timer; (F) 10 nM PMA i 48 timer; (G) 50 nM PMA i 24 timer og (H) 50 nM PMA i 48 timer. Celler blev farvet ved anvendelse immunhistokemisk farvning for at identificere tilstedeværelsen af ​​CD11, en makrofag celleoverflademarkør. Differentieret U937 monocytiske celler blev identificeret ved den intense brunlig blåsplint på celleoverfladen af ​​de differentierede celler. Celler blev set ved 20 × forstørrelser under brightfield ved anvendelse af et omvendt mikroskop og fotograferet under anvendelse af et Nikon D70 kamera (Nikon, Japan). En arketypiske sæt af fotografier fra tre separate forsøg er vist. Salg Figur 3 Differentiering-specifik U937 monocytiske celler makrofag celleoverflademarkør ekspression og cellernes levedygtighed bestemmelse. U937 monocytiske celler blev induceret til at differentiere med forskellige koncentrationer af PMA i 24 og 48 timer. (A) Procentdelen af ​​differentierede celler blev scoret af tilstedeværelsen af ​​CD11b på celleoverfladen. (B) De procentdele af levedygtige celler blev scoret med trypan blå-udelukkelse assay. Procentdelen af ​​differentierede eller levedygtige celler pr totale celler er den samme før forsøget under anvendelse af de forskellige koncentrationer af PMA og inkubationstid. Data er præsenteret som gennemsnit ± S.D. fra tre uafhængige forsøg med '*', p
< 0,05 repræsenterer signifikans forskel i forhold til gruppen, som ikke blev induceret til at differentiere.
Cellelevedygtighed bestemmelse på differentierede U937-celler
Den levedygtige differentierede U937-celler blev scoret med den trypanblåt udelukkelse assay. U937 celler levedygtighed udviste en signifikant dosisafhængig reduktion i procentdelen af ​​levedygtige celler, når induceres til at differentiere med 1, 10 og 50 nM PMA (figur 3B). Konstateringen foreslået, at 90% af de differentierede U937-celler stadig var levedygtige efter behandling med 1 eller 10 nM PMA i 24 time eller 1 nM PMA i 48 h.
Cytotoksicitet af MeOHGCM6 ekstrakt på U937-celler
De cytotoksiske virkninger af den MeOHGCM6 ekstrakt og betamethason på U937-celler blev bestemt ved at beregne celleproliferation sats. Behandlede U937-celler med MeOHGCM6 ekstrakt 0.05, 0.5, 1 og 5 mg /ml udstillet proliferative byger af 117,39% (108,48%, 122,10%), 152,04% (149,36%, 154,72%) (p
< 0,05) , 145,60% (137,48%, 149,11%) (p
< 0,05) og 118,49% (112,01%, 133,28%), henholdsvis (figur 4A). Behandling med MeOHGCM6 ekstrakt ved 10 ug /ml reducerede celleproliferationen sats til 87.00% (82,43%, 89,62%). Behandlede U937 celler med betamethason udviste signifikant reduktion dosisafhængig i deres proliferationshastighed (figur 4B). Ved lavere koncentrationer af betamethason (0,1, 1, 5 og 10 nM), celleproliferationen sats var 110,35% (92,20%, 115,83%), 113,75% (89,56%, 122,98%), 94,59% (85.56%, 101,93%) og 80,48% (77,78%, 110,48%), henholdsvis. Figur 4 Cytotoksicitet virkninger af de forskellige koncentrationer af MeOHGCM6 ekstrakt og betamethason på U937 monocytiske celler. Proliferationshastigheden af ​​U937 monocytiske celler behandlet med stigende koncentrationer af (A) MeOHGCM6 ekstrakt og (B) betamethason blev bestemt over en periode på 24 timer ved at udføre MTT assay. Procentdelen af ​​celleproliferation er i forhold til antallet af celler podet før administration af forskellige doser af MeOHGCM6 ekstrakt og betamethason. Koncentrationerne af MeOHGCM6 ekstrakt, som forårsagede 30% (G130), 50% (G150) og 70% (G170) af celleproliferation inhibering blev ekstrapoleret fra grunden (angivet med en pil). Resultaterne blev udtrykt som median (25% og 75% kvartil) fra to uafhængige forsøg.
Virkninger af MeOHGCM6 ekstrakt behandling på TNF-α respons niveau under differentiering af U937-celler
Virkningerne af MeOHGCM6 ekstrakt behandling på regulering af TNF-α reaktion niveau i løbet af differentieringen U937-celler blev undersøgt ved anvendelse af ELISA. TNF-α reaktion niveau nåede et maksimum niveau på 43,28 ± 5,15 pg /ml ved 8 timer, når de U937-celler blev induceret til at differentiere (figur 5A). I nærvær af 10 pg /ml MeOHGCM6 ekstrakt under differentiering af U937-celler, TNF-α respons niveau faldt betydeligt indtil 8 timer [0,14 ± 0,28 pg /ml (p
< 0,001)] og blev sammenlignelig med det observerede i nærvær af betamethason [0,28 ± 0,56 pg /ml (p Salg < 0,001)]. Figur 5 MeOHGCM6 ekstrakt behandling på TNF-α respons niveau og TNF-α og IL-6-genekspression under differentiering af U937 monocytiske celler. U937 monocytiske celler blev induceret til at differentiere med 10 nM PMA. Under differentiering, blev U937 monocytiske celler behandlet med MeOHGCM6 ekstrakt. (A) TNF-α respons niveau blev kvantificeret ved anvendelse af ELISA. Den (B) TNF-α og (C) IL-6-gen-ekspressionsniveauer blev kvantificeret under anvendelse QRT-PCR. Resultaterne blev udtrykt som middelværdi ± S.D. fra firdobbelte analyser.
Virkninger af MeOHGCM6 ekstrakt behandling på TNF-α og IL-6-genekspression under differentiering af U937-celler
regulering af TNF-α og IL-6 ved MeOHGCM6 udtrække behandling i løbet af U937-celler differentiering blev yderligere undersøgt på genekspression niveau ved hjælp QRT-PCR. TNF-α-genekspression niveau toppede efter 6 timer (3,16 ± 0,48 kopier /actin) af U937-celler differentiering (figur 5B). TNF-α-genekspression niveau faldt i løbet af de første 6 timer [0,52 ± 0,28 kopier /actin (p Salg < 0,001)] af U937-celler differentiering i nærvær af 10 pg /ml MeOHGCM6 ekstrakt. Den faldt i TNF-α-genekspression niveau af U937-celler under differentiering, når de behandles med 10 ug /ml MeOHGCM6 var sammenlignelig med eller bedre end resultaterne fra behandling med 10 nM betamethason [0,55 ± 0,42 kopier /actin (p
< 0,001)]. IL-6-genekspression niveau viste en betydelig stigning og toppede ved 0,68 ± 0,09 kopier /actin efter 12 timer af U937-celler differentiering (figur 5C). Fald i IL-6-genekspression niveau blev observeret at være 0,10 ± 0,01 kopier /actin, 0,23 ± 0,02 kopier /actin (p Salg < 0,01), 0,37 ± 0,04 kopier /actin (p
< 0,001 ) og 0,45 ± 0,05 kopier /actin (p
< 0,001) ved 3, 6, 9 og 12 timer, henholdsvis når U937 celler under differentiering blev behandlet med 10 ug /ml MeOHGCM6 ekstrakt. Inhibering af IL-6 genekspressionsniveauer i nærvær af MeOHGCM6 ekstrakten var sammenlignelig med betamethason.
Profylaktisk behandling virkninger MeOHGCM6 ekstrakt på rotterne maveindholdet følgende EtOH-induceret akut gastrisk mucosal skade
Gastrisk slim sekretion, mavesaft volumen og gastrisk slim pH blev bestemt ud fra maveindholdet af rottens mave forbehandlet med MeOHGCM6 ekstrakt efter EtOH fodring. 2,45 ± 0,25 g gastrisk slim og 1,75 ± 0,20 ml mavesaft blev udvundet fra maven af ​​rotter fodret med kun ekstrakten fortyndingsmiddel (tabel 2). 1,54 ± 0,31 g gastriske slim og 0,96 ± 0,25 ml mavesaft og 1,68 ± 0,19 g gastriske slim og 0,96 ± 0,16 ml mavesaft blev udvundet fra rotter forbehandlet med 250 og 500 mg /kg legemsvægt af MeOHGCM6 ekstrakt hhv. Til sammenligning blev 2,31 ± 0,42 g gastrisk slim og 1,15 ± 0,36 ml mavesaft udvundet fra rotter forbehandlet med 20 mg /kg legemsvægt OMP. 2,75 ± 0,49 g af gastrisk slim og 1,75 ± 0,28 ml mavesaft blev udvundet fra rotter fodret med tilsvarende fremstillet relateret plante ekstrakt, der tjente som NSPE kontrol. Alle forfattere læst og godkendt den endelige manuskript.

• Antioxidant og gastriske cytobeskyttende prostaglandiner egenskaber Cassia sieberiana rødder bark ekstrakt som en mavesårshæmmende middel
• Genetisk variation i CYP3A4 og CYP3A5in primære lever, mave og kolorektal cancer patienter