Gyulladáscsökkentő, gyomorvédő és anti-ulcerogén hatása vörös alga Gracilaria changii (Gracilariales, Rhodophyta) kivonat

Gyulladáscsökkentő, gyomorvédő és anti-ulcerogén hatása vörös alga Gracilaria changii katalógusa (Gracilariales, Rhodophyta) kivonat
Abstract
alapon
Gracilaria changii
(Xia et Abbott) Abbott, Zhang et Xia egy vörös alga gyakran megtalálható a part menti területeken a malajziai hagyományosan használják élelmiszerek és kezelésére különböző betegségek, beleértve a gyulladást és a gyomor betegség. A tanulmány célja az volt, hogy megvizsgáljuk gyulladáscsökkentő, gyomorvédő és anti-ulcerogén tevékenysége egy tömegspektrometria standardizált metanolos extraktum Gracilaria changii katalógusa.
Módszerek
metanolos extraktumot a Gracilaria changii katalógusa (MeOHGCM6 kivonat ) állítunk elő, és segítségével standardizáltuk tömegspektrometria (MS). Gyulladáscsökkentő tevékenységét MeOHGCM6 kivonat vizsgáltuk oly módon, U937 sejtek során differenciálódása 10 ug /ml-es MeOHGCM6 kivonat. A tumor nekrózis faktorok-α (TNF-α) válasz szintjét és a TNF-α és interleukin-6 (IL-6) génexpressziót követtük, és összehasonlítottuk, hogy a kezelt 10 nM betametazon, egy gyulladáscsökkentő gyógyszer. Gasztroprotektív és anti-ulcerogén tevékenységét MeOHGCM6 kivonat vizsgáltuk táplálkozó patkányok MeOHGCM6 kivonat terjedő 2,5-500 mg /testtömeg-kg (testtömeg) indukálását követően gyomor elváltozások. Előállítása nyálka és gyomornedv, pH-ja a gyomornedv és nem-fehérje szulfhidrilek (NP-SH) szinteket meghatároztuk és összehasonlítottuk által táplált 20 mg /testtömeg kg omeprazol (OMP), amely egy ismert fekélyellenes drog.
Eredmények
MS /MS analízis a MeOHGCM6 kivonatok jelenlétét mutatta metil 10-hydroxyphaeophorbide Egy fiatal és 10-hydroxypheophytin Egy fiatal, ismert klorofill fehérjék és számos azonosítatlan molekulákat. Kezelés 10 ug /ml MeOHGCM6 kivonat differenciálódás során az U937 sejtek szignifikánsan gátolta a TNF-α válasz szintje és a TNF-α és IL-6 génexpressziót. A gátló hatás hasonló volt a betametazon. Nem citotoxikus hatást nem jegyeztek fel kezelt sejtekben az 10 ng /ml MeOHGCM6 kivonat. Patkányokat etetett MeOHGCM6 kivonat 500 mg /testtömeg-kg; csökkenés mutatkozik abszolút etanol okozta gyomorfekély elváltozás méretre > 99% (p
< 0,05). Ez a védőhatás hasonló volt biztosított OMP. A pH a gyomor nyálka csökkent dózisfüggő módon 5,51-3,82 és nem volt jelentős növekedése NP-SH koncentrációt.
Következtetések
Eredmények a tanulmány, azt sugallják, hogy a tömeg-spektrometria standardizált metanolos kivonatot Gracillaria changii
rendelkezik gyulladásgátló, gyomorvédő és anti-ulcerogén tulajdonságokkal. További vizsgálata az aktív összetevő a kivonat és annak hatásmechanizmusa indokolt a jövőben. Katalógusa Kulcsszavak katalógusa Gyulladáscsökkentő Anti-fekélyt Gastroprotektív Gracilaria changii katalógusa citokinek Betamethasone Omeprazol Algák fekély háttér katalógusa gyulladás a fő jellemzője a sok betegség. Ez jellemzi egy komplex vezényelt közötti kölcsönhatások mediátorok a gyulladás és a gyulladásos sejtek felé irányul eltávolításával irritáló és a gyógyulás a szöveti sérülések [1, 2]. A gyulladás egyik fontos gazda védelmi mechanizmus. Gyulladás fordul elő, hogy a nyálkahártya a gyomor-bél traktus, azonban okoz gyomor-bél fekély [3]. Emésztőrendszeri fekély gyakori súlyos betegség az emésztőrendszer millióit érinti az amerikaiak és még sokan mások világszerte. [4] A leggyakoribb oka a gyomor-bélrendszeri fekély betegség Helicobacter pylori katalógusa (H. pylori
) [5] és a hosszú távú használata a nem-szteroid gyulladásgátló gyógyszerek (NSAID-ok), mint például az aszpirin és az ibuprofen [6]. Az advent az antibiotikum ellenőrzések H. pylori ellen katalógusa jelentősen csökkentette a gastrointestinalis fekély esetekben a fejlett országokban. [7] A betegség azonban még mindig magas a más országokban, és a betegség által okozott NSAID továbbra is súlyos problémát jelent a fejlett országokban [6, 7]. Katalógusa kezelés gyulladás általában célja sem gátolja a aktivitását gyulladásos sejteket vagy termelés gátlására gyulladásos mediátorok [8]. A később végezhetjük gyógyszerek, mint a NSAID-ok és a kortikoszteroidok [9]. A kezelés a gastrointestinalis fekély általában azt célozza, vagy megszünteti a H. pylori fertőzés katalógusa vagy csökkenti, és gátolja a szintek gyomorsavtermelést felelős erózió gasztrointesztinális védőréteg [10, 11]. A később végezhetjük gyógyszerek, mint például a hisztamin (H 2) blokkolók, protonpumpa-inhibitorok és a nyálkahártya-védő szerek [9]. Azonban különböző mellékhatásokat a hosszú távú használata ezen gyógyszerek leírták [9]. Ezen túlmenően, az anti-gyulladás és az anti-ulcerogén gyógyszereket használnak főleg, hogy enyhítse a tüneteket, a betegség, anélkül, hogy kezelésére vagy megelőzésére, a gyulladásos és ulcerogen folyamatokat.
Kidolgozása gyulladásgátló és anti-ulcerogén gyógyszerek nemrég összpontosított felfedezni a kedvező alkalmazása növényi növényi eredetű kivonatok, amelyek hatásos és biztonságosabb a használata. Az algák talált növekvő bőségesen ki a part menti területek számos részén a világnak jelentenek hatalmas kiaknázatlan potenciál az új forrás terápiás [12, 13]. A vörös alga például leírták, hogy tartalmaznak aktív vegyületeket, amelyek segítségével enyhítik gyulladás a tápcsatorna [14], megelőzésére, illetve kezelésére gyomorfekély és a rák által okozott oxidatív stressz [15, 16], gátolják a gyulladásos tevékenységek által elnyomja a termelés gyulladásos mediátorok [17-19], és indukálják a rákos sejtek apoptózisának gyomorban [20] és a vastagbél [21]. Természetes vegyületek származó ehető algák lehetne biztonságosabb kell használni, mint gyulladáscsökkentő és gyomorfekély-ellenes fekélyt gyógyászatnak vették az élelmiszer és a használt hagyományos gyógyszerekkel időtlen idők óta [13].
A vörös alga, Gracilaria changii katalógusa (Xia et Abbott) Abbott, Zhang et Xia talált növekvő le a part menti területeken a malajziai jelent potenciális helyi forrásból származik természetes forrásból származó terápiás szerként. Jelenleg az algák kereskedelemben betakarítani annak kolloid agar tartalom és a helyi finomságokat. Ezek algák széles körben alkalmazzák a népi gyógyászatban kezelésére különböző betegségek, beleértve a gyulladást és a gyomor betegségek. Jelen tanulmány célja, hogy felmérjék a gyulladáscsökkentő, gyomorvédő és anti-fekélyt okozó tevékenységek e malajziai vörös alga, Gracilaria changii katalógusa.
Módszerek
Alga kivonat elkészítése katalógusa Gracilaria changii katalógusa (Xia et Abbott) Abbott, Zhang et Xia gyűjtöttünk a part menti vizek Morib, Selangor, Malajzia (N2 ° 44 '908 ", E101 ° 26' 590") február végén 2003-ban [22-24]. Az algák azonosítottuk Dr. Phang Siew Moi, igazgatója az Institute of Ocean és Földtudományi Intézet, Biológiai Tudományok, Természettudományi Kar, University of Malaya, ahol az utalvány mintákat fenn (herbáriumi nincs. PSM 6320 és PSM 6321 ). Az algák mostuk steril tengervízzel a végső öblítés steril desztillált vízben a korábban leírt [22]. Az algák ezután ultrahanggal kezeljük vízfürdőben szonikátor tartottuk -70 ° C-on. Metanolos extraktumot a Gracilaria changii katalógusa (MeOHGCM6 kivonat) állítottunk elő a University of Malaysia Terengganu (UMT) szerint leírt módszerek [25]. A MeOHGCM6 extraktumot -20 ° C-on felhasználás előtt.
MeOHGCM6 kivonat
Profil elemzést a MeOHGCM6 extraktumot végeztünk Shimadzu ultragyors folyadékkromatográfiás (UFLC) rendszerrel ellátott fotodiódasoros ultraibolya (PDA UV ) detektor és ion trap repülési idő (TOF) tömegspektrométer (Shimadzu, Japán). Az elválasztást értünk el Waters Xbridge C18 oszlopon (50 mm x 2,1 mm, a részecske átmérője 2,5 um) (víz, USA) 40 ° C-on. A mozgó fázis vizet [0,1% hangyasav (BDH Laboratory Supplies, England)]: acetonitril (BDH Laboratory Supplies, England) (0,1% hangyasav), áramlási sebesség 0,50 ml /perc Az injektálási térfogatot 10 ul . Elektrospray ionizációs (ESI) módban a pozitív /negatív kapcsolási és a külső referencia használtunk tömegspektrometria (MS). A Dictionary of Natural Products (CRC Press) nagyfelbontású MS-spektrumokat és a szerkezeti információt használták, hogy elemezze a pozitív és negatív ion spektrumok együtt MS /MS adatokat azonosításához hasonló komponensek.
Emberi promonocita-sejtvonal (U937 sejtek)
U937 sejteket vásárolt American Type Culture Collection (ATTC, amerikai Egyesült Államok), és tenyésztjük Roswell Park Memorial Institute-1640 (RPMI-1640 közegben) (Flowlab, Ausztrália) [kiegészített 1% 10 mM nem-esszenciális aminosav (NEAA) (Flowlab, Ausztrália) és 1% 10 mM L-glutaminnal (L-Glu) (Flowlab, Ausztrália)], amely 10% hővel inaktivált magzati borjúszérummal (FBS) (Flowlab, Ausztrália). A sejteket 37 ° C hőmérsékleten, párásított inkubátorban, 5% CO 2.
Differentiation az U937 sejtek katalógusa U937 sejteket szélesztettünk 96 lyukú sejttenyésztő lemezekre (Falcon, USA) sűrűségben 2 × 10 4 sejt /lyuk RPMI-1640 közegben, amely 2% FBS-t és tartjuk 37 ° C-on, nedvesített inkubátorban, 5% CO 2. A következő napon, közepes tartalmazó forbol-12-mirisztát-13-acetát (PMA) (Sigma-Aldrich, USA) közötti koncentrációban 0-50 nM adtunk a U937 monocita sejtek differenciálódását indukáló 24 és 48 órán át keverjük. Közepes amely csak PMA hígítószereket [dimetil-szulfoxid (DMSO) oldatban (Sigma-Aldrich, USA)] adtunk hozzá párhuzamosan, és ezt használjuk a jármű ellenőrzés. Végén a jelzett időpontban, a sejteket értékeltük differenciálódás-specifikus makrofág-sejt felületi marker expresszióját és a sejtek életképességét.
Expresszáltatása CD11b, differenciálódás-specifikus makrofág-sejt felületi marker határoztuk festéssel sejtek a korábban leírtak [26 , 27]. A sejtek életképességét alkalmazásával határoztuk meg a tripánkék festékkel (Sigma, USA) kizárási vizsgálatot a korábban leírtak [28].
Citotoxicitási esszé
U937 sejteket szélesztettünk 96 lyukú sejttenyésztő lemezekre sűrűségben 2 × 10 4 sejt /lyuk RPMI-1640 közegben, amely 2% FBS-t és tartjuk 37 ° C-on, nedvesített inkubátorban, 5% CO 2. A következő napon, tartalmazó közegben MeOHGCM6 kivonat (a koncentráció tartományban 0-100 ng /ml) és a betametazon (Sigma, USA) (a koncentráció tartományban 0-100 nM) adunk hozzá. Közepes, amely csak a MeOHGCM6 kivonat és a betametazon hígítószerek [etanol (EtOH) (BDH Laboratory Supplies, Anglia) és DMSO-t, illetve] adunk hozzá párhuzamosan, és ezt használjuk a jármű ellenőrzés. Egy nap kezelés utáni, az U937 sejtek proliferációs sebesség alkalmazásával határozzuk meg a CellTiter 96® nem radioaktív Cell Proliferation készlettel (Promega, USA) szigorúan követve a gyártó által ajánlott protokollt.
MeOHGCM6 kivonat kezelésére U937 sejtek katalógusa U937 sejtek oltottuk 24 lyukú sejttenyésztő lemezekre (Falcon, USA) sűrűségben 2 × 10 5 sejt /lyuk RPMI-1640 közegben, amely 2% FBS-t és inkubáljuk 37 ° C-on, nedvesített inkubátorban, 5% CO 2. A következő napon, a U937 sejteket indukált különbséget 10 nM PMA 24 órán át. A differenciálódás során, az U937 sejteket kezeltük a MeOHGCM6 extraktum vagy betametazon fiziológiás koncentráció. 0, 8, 16 és 24 órával a kezelés után, a felülúszót, és a sejteket, majd vizsgáljuk a TNF-α válasz szintje és a TNF-α és IL-6 génexpressziót.
TNF-α válasz szintje
TNF α szintet mértük a BD OptEIA ™ humán TNF (TNF-α) ELISA kit II (BD Biosciences, USA), a gyártó utasításai szerint.
a TNF-α és IL-6 génexpressziót
az összes RNS-t a sejt tenyészeteket segítségével izoláltuk a TRI Reagent® (Molecular Research Centre, Inc., USA), és kezeltük DNase (Promega, USA). Az RNS-t reverz transzkripcióval (cDNS) alkalmazásával SuperScript ™ II reverz transzkriptáz (Invitrogen, USA). A cDNS-t ezután végrehajtásához használt kvantitatív valós idejű PCR-rel SYBR® Green PCR Master Mix (Qiagen, Németország) a DNA Engine Opticon II® (MJ Research, Bio-Rad, USA), a korábban leírtak [29]. Az oligonukleotid primereket használjuk előre 5'AAGAGTTCCCCAGGGACCTC és reverz 5'GCTTGAGGGTTTGCTACAAC TNF-α; továbbítsa 5'GAAAGGAGACATGTAACAAG és reverz 5'CCAGGCAAGTCTCCTCATTG az IL-6; és továbbítja 5'GCGAGAAGATGACCCAGATC és fordított 5'GGATAGCACAGCCTGGATAG a béta-aktin (β-aktin) (belső referencia).
Állatok
Felnőtt nőstény Sprague-Dawley-patkányokat év közötti 7-8 hetes, és a súlya 160-200 g volt, használt tanulmány. A protokoll az állatkísérletek hagyta jóvá az Intézményi Bizottság Etikai Kísérleti Egyetem Malayai [jóváhagyási szám: MP /08/06/2010 /SMH (R)]. Az állatokat nyert University Putra Malajzia (UPM). Az állatokat egyenként ketrecekben, széles hálós huzal fenékkel, hogy megakadályozzák coprophagy. Úgy tartották egy hőmérséklet-szabályozott szobában, hogy jól szellőző, élelemmel és vízzel, egy 12 órás világos /sötét ciklus egész vizsgálat alatt. Minden patkányt megvontuk az élelmet 48 órán át, de nem volt szabad hozzáférést az ivóvízhez, amíg előtt 2 órával vetjük alá őket, hogy a ulcerogens.
EtOH-indukálta gyomorléziók
A patkányokat véletlenszerűen oszlik 7 csoportok minden egyes csoport amely tartalmaz 6 patkányokban. 1. csoport adtuk 10% -os Tween 20-at (kivonat hígítók) (BDH Laboratory Supplies, Anglia) és szolgáltak negatív kontroll csoportban. 2. csoport kapott 500 mg /testtömeg kg A MeOHGCM6 kivonat vetítve nem rokon növényi kivonatot hasonlóképpen állítjuk elő párhuzamos mint MeOHGCM6 kivonat szolgál a nem-specifikus növényi kivonat (NSPE) kontroll csoportban. 3. csoport kezeltük OMP (Chemical Company Malajzia, Malajzia) 20 mg /testtömeg-kg; és szolgált a pozitív kezelési kontrollcsoportban. A csoport fennmaradó 4, 5, 6. és 7. kapott 4 különböző koncentrációjú MeOHGCM6 kivonat terjedő 2,5-500 mg /kg testtömeg volt. 30 perc eltelte után a kezelés előtti, minden állatnak beadtunk abszolút EtOH keresztül az orális beadás. Egy óra utáni beadás az állatokat leöltük, több mint adagoló őket dietil-éterrel (BDH Chemicals Ltd., Anglia). A patkány has, kivágjuk és a nyelőcső legközelebb a cardia és a kitágult gyomor pylorus záróizom azonnal kötve egy csomót egy húr, hogy ne szivárogjon a gyomortartalom. A gyomrot gyorsan eltávolítottuk, és elmerül a vízben.
Mérése gyomorsav szekréció katalógusa A gyomor tartalmát minden patkány gyomor leszívtuk, és gyengéden lekaparjuk egy spatula segítségével. A gyomor gyümölcslé tartalmú élelmiszer-részecskék eldobjuk. A betakarított gyomor nyálka lemértük az elektronikus mérleg (Mettler Toledo, Svájc). Az összeg a gyomor-lé mértük egy mérőhengerbe. A pH a gyomor tartalmát mértük digitális pH-mérő (Crison Instruments, SA, Spanyolország).
Értékelése bruttó gyomorsérülés
a betakarítást követő, a gyomor azonnal átöblítjük, sóoldattal és megvizsgálta egy boncoló mikroszkóp alatt (1,8 ×) egy négyzetrács szemlencsét. A mirigyes része a gyomor értékelték kialakulását fekély. A teljes fekélyes terület (UA) a vérzéses károsodások minden egyes gyomor mértük plannimetry (mm 2), és a százalékos gátlás kiszámítása a következő képlettel történik: gátlása %
= katalógusa UA katalógusa kontroll - www.Booked.hu UA katalógusa kezelt /katalógusa UA katalógusa kontroll × katalógusa 100
meghatározása termelés nem-fehérje szulfhidrilek (NP-SH) katalógusa gyomor nyálkahártya NP-SH szint mértük a korábban leírt [30], kisebb módosításokkal. Röviden, a mirigyes gyomorban lemértük és homogenizáltuk tartalmazó csövekbe jéghideg 0,02 mólos etilén-diamin-tetraecetsav (EDTA) (GibcoBRL Life Technologies, USA) (pH = 8,9). Aliquotjait A homogenizátumokat desztillált vízzel keverik, és 50% -os triklór-ecetsavat (Sigma Chemical Co., USA). A keveréket inkubáljuk állandó keverés mellett 10 percig 4 ° C-on, majd centrifugáltuk 3000 × g-vel 15 percig. Az elegyet ezután megvizsgáltuk NP-SH szint alkalmazásával glutation assay kit (Sigma Chemical Co., USA) alkalmazásával a gyártó protokollja.
Statisztikai analízis
Az összes adatot átlag ± standard deviáció (SD) vagy medián (25% és 75% kvartilis) két vagy három független kísérlet gyulladásgátló tanulmányok és hét független kísérletek gyomorvédő és anti-ulcerogén vizsgálatokban. ANOVA (egyutas varianciaanalízis és kétirányú varianciaanalízis) alkalmaztunk a csoportok közötti összehasonlítás és a jelentéshez az statisztikai szignifikancia "p
'tekintetében a kontroll csoportban. P értéke katalógusa < 0,05 értéket tekintettük statisztikailag szignifikánsnak. Minden statisztikai kiértékelést végeztünk a GraphPad Prism 4.0 szoftver (USA) és az SPSS 16.0 verzió szoftver (SPSS Inc., Chicago), ill. Katalógusa Eredmények
sztenderd MeOHGCM6 kivonat profil katalógusa LC /MS analízis a különböző tételek a MeOHGCM6 kivonat végeztünk annak érdekében, reprodukálhatóság és konzisztenciáját extrakciós módszerekkel. Batch 1. és 2. MeOHGCM6 kivonat használt tanulmány kimutatta, nagyon hasonló tömegspektrum profilok és mennyisége a nagy tömegek (1A-C). Elemzés a spektrumok és összehasonlítása a Dictionary of Natural Products, CRC Press azonosította a megkülönböztető tömegek 457,405, 645,280 és 887,579. Az azonosított tömege a pozitív ion spektrum m /z 457,405 volt fragmensei 398,327 (bázis csúcs), 380,316 és 158,082. A semleges veszteség 59,077 tömeg volt esetleg jelzi elveszett trimetil. Ez arra utal, hogy a vegyület tartalmazhat egy trimetil-ammónium-csoport. A nagy felbontású MS és MS /MS adatokat nem lehetett véglegesen azonosítani semmilyen ismert vegyületek a Dictionary of Natural Products. A tömegek m /z 645 és 887, azonban azt mutatta, külön egyesület két ismert klorofillokok, metil 10 hydroxyphaeophorbide egy fiatal és 10-Hydroxypheophytin egy fiatal a megfelelő UV abszorbancia figyelhető meg a PDA elemzés (1. táblázat ). 1. ábra A profilalkotás a különböző tételek MeOHGCM6 kivonat. ESI módban a pozitív /negatív kapcsolási és a külső referencia használtuk az MS egy Shimadzu UFLC rendszert. Összesen pozitív ion spektrumok analizáltuk azonosításához hasonló komponenseknek a két különböző tételek a MeOHGCM6 kivonat a tanulmányban használt. (A) MeOHGCM6 kivonat (Batch 1; M6-1). (B) MeOHGCM6 kivonat (Batch 2; M6-2). (C) Összehasonlítás az intenzitása a legnagyobb mennyiségben előforduló tömegek a két MeOHGCM6 kivonat tételekben a tanulmányban használt.
1. táblázat szerkezete azonosításokat legjelentősebb tömeg jelen MeOHGCM6 extraktum LC /MS alkalmazásával
Tömeg (ion) Matton Talált kötegelt Matton Lehetséges ID
417,298 katalógusa 1, 2

• Antioxidáns és gyomor sejtvédő prosztaglandinok tulajdonságait Cassia sieberiana gyökerek kéreg kivonat, mint egy anti-ulcerogén agent
• Genetikai variabilitás CYP3A4 és CYP3A5in primer májrák, gyomorrák és végbélrák patients