Tulehdusta, gastroprotektiivista ja anti-ulserogeenisiä vaikutuksia punalevää Gracilaria changii (Gracilariales, Rhodophyta) ote

Tulehdusta, gastroprotektiivista ja anti-ulserogeenisiä vaikutuksia punalevää Gracilaria changii
(Gracilariales, Rhodophyta) ote
tiivistelmä
tausta
Gracilaria changii
(Xia et Abbott) Abbott, Zhang et Xia , punainen levä esiintyy yleisesti rannikkoalueilla Malesian on perinteisesti käytetty elintarvikkeiden ja hoitoon eri vaivoihin kuten tulehdus ja mahalaukun vaivoja. Tavoitteena oli tutkia tulehdusta, gastroprotektiivista ja anti-ulcerogenic harjoittaminen massaspektrometrian standardoitu metanoliliuosta ote Gracilaria changii
. Tool Menetelmät
metanolipitoista ote Gracilaria changii
(MeOHGCM6 ote ) valmistettiin ja standardoitu käyttäen massaspektrometriaa (MS). Anti-inflammatorinen toiminta MeOHGCM6 uute tutkittiin käsittelemällä U937-soluihin aikana erilaistumisen 10 ug /ml MeOHGCM6 uutetta. Tuumorinekroositekijä tekijät-α (TNF-α) vasteen ja TNF-α: n ja interleukiini-6 (IL-6) geenin ilmentymisen seurattiin ja verrattiin käsiteltiin 10 nM beetametasoni, anti-inflammatorinen lääkeaine. Gastroprotektiivinen ja anti-ulcerogenic toimintaa MeOHGCM6 uutetta tutkittiin syöttämällä rottia MeOHGCM6 ote välillä 2,5 ja 500 mg /kg (ruumiinpainoa) seuraava induktion mahavaurioita. Tuotanto limaa ja mahanesteessä pH mahanesteen ja ei-proteiini sulfhydryylien (NP-SH) tasot määritettiin ja verrattiin syötetty 20 mg /kg ruumiinpainoa omepratsoli (OMP), joka on tunnettu anti-mahahaava lääke.
Tulokset
MS /MS-analyysi MeOHGCM6 uutteet paljasti, että läsnä oli metyyli-10-hydroxyphaeophorbide
ja 10-hydroxypheophytin
, tunnettu klorofylli proteiineja ja useita tunnistamattomia molekyylejä. Käsittely 10 ug /ml MeOHGCM6 uutetta erilaistumisen aikana ja U937-soluissa inhiboi merkittävästi TNF-α vasteen ja TNF-α: n ja IL-6-geenin ilmentymistä. Estovaikutus oli verrattavissa beetametasoni. Ei sytotoksisia vaikutuksia kirjattiin soluja käsiteltiin 10 ug /ml MeOHGCM6 uutetta. Rotat syötetään MeOHGCM6 purkaa 500 mg /kg ruumiinpainoa oli vähentynyt absoluuttista etanolin aiheuttamia mahalaukun vammojen kokoa by > 99% (p
< 0,05). Tämä suojaava vaikutus oli verrattavissa myönnettyä OMP. PH mahan limaa laski annosriippuvaisesti 5,51-3,82 ja siellä oli merkittävä kasvu NP-SH pitoisuuksia.
Johtopäätökset
Tutkimuksen tulokset viittaavat siihen, että massaspektrometrillä standardoitu metanoliliuosta ote Gracillaria changii
hallussaan tulehdusta, gastroprotektiivista ja anti-ulcerogenic ominaisuuksia. Lisätutkimuksia aktiivisen ainesosan uutteen ja sen toimintamekanismi on perusteltua tulevaisuudessa.
Avainsanat
Tulehdus- Anti-ulcerogenic gastroprotective Gracilaria changii
Sytokiinit Beetametasoni Omepratsoli merilevät haavauma Taustaa
Tulehdus on keskeiseksi monia sairauksia. Sille on tunnusomaista monimutkainen järjestettyjä vuorovaikutukset tulehduksen välittäjiä ja tulehdussolujen suuntautuu poistamalla ärsyttävien ja kudoksen paranemisen vammoja [1, 2]. Tulehdus on tärkeä isännän puolustusmekanismi. Tulehdus, joka esiintyy limakalvon ruoansulatuskanavan kuitenkin aiheuttaa maha-suolikanavan haavauma [3]. Ruoansulatuskanavan haavauma on yleinen merkittävä häiriö ruoansulatuskanavan vaikuttavista miljoonia amerikkalaisia ​​ja paljon enemmän maailmanlaajuisesti [4]. Yleisin syy ruoansulatuskanavan haavauma taudin tartunnan Helicobacter pylori
(H. pylori
) [5] ja pitkäaikaisen käytön steroideihin kuulumattomien tulehduskipulääkkeiden (NSAID), kuten aspiriini ja ibuprofeeni [6]. Kynnyksellä antibiootin valvonnan vastaan ​​helikobakteeri
on merkittävästi vähentänyt ruoansulatuskanavan haavauma tapausten kehittyneissä maissa [7]. Tauti on kuitenkin edelleen korkea muihin maihin ja taudin aiheuttama tulehduskipulääkkeiden käyttöön on edelleen merkittävä terveysongelma kehittyneissä maissa [6, 7].
Hoito tulehdus yleensä pyritään joko estämällä aktiivisuutta tulehdus- solujen tai estämällä inflammatoristen välittäjäaineiden [8]. Myöhemmin voidaan suorittaa käyttämällä huumeiden, kuten tulehduskipulääkkeiden ja kortikosteroidien [9]. Hoito maha haava yleensä pyritään joko poistamaan helikobakteeri
infektio tai vähentämällä ja estämällä tasoja mahahapon tuotannon vastuussa eroosio ruoansulatuskanavan suojakerroksen [10, 11]. Myöhemmin voidaan suorittaa käyttämällä lääkkeitä, kuten histamiinia (H 2) salpaajat, happopumppua estäjät ja limakalvon suojaava lääkitys [9]. Kuitenkin erilaisia ​​sivuvaikutuksia pitkäaikaiskäytössä näiden lääkkeiden on kuvattu [9]. Lisäksi, anti-tulehdus ja anti-ulcerogenic lääkkeitä käytetään pääasiassa lievittämään taudin oireita ilman että hoitoon tai ehkäisyyn tulehduksellisten ja haavaumia prosesseja.
Kehittäminen tulehdusta ja anti-ulcerogenic lääkkeet on viime aikoina keskittynyt löytää suotuisa soveltaminen kasviperäisten kasviperäisiä uutteita, jotka ovat voimakkaita ja turvallisempi käyttää. Levät löytyi kasvaa runsaasti pois rannikkoalueilla eri puolilla maailmaa ovat valtava vielä käyttämätöntä potentiaalia lähde uusien terapeuttisten [12, 13]. Punainen levät Esimerkiksi on raportoitu sisältävät aktiivisia yhdisteitä, jotka voivat auttaa parantamaan tulehdus ruoansulatuskanavan [14], ehkäistä tai hoitaa maha- ja syöpien aiheuttama oksidatiivinen stressi [15, 16], estävät inflammatorisia toimintaa estämällä tuotanto tulehdusvälittäjiä [17-19] ja aiheuttaa syöpäsolujen apoptoosin vatsassa [20] ja paksusuolen [21]. Luonnolliset yhdisteet johdettu syötävä levät voisi olla turvallisempaa käyttää tulehdusta ja mahalaukun anti-ulcerogenic terapeuttisten koska ne on otettu elintarvikkeiden ja käytetään perinteisessä lääkkeiden ikimuistoisista ajoista lähtien [13].
Punalevällä, Gracilaria changii
(Xia et Abbott) Abbott, Zhang et Xia löytyi kasvaa pois rannikkoalueilla Malesian merkitsee mahdollisuutta paikallinen lähde tämän luonnosta peräisin terapeuttisia. Tällä hetkellä levät ovat kaupallisesti korjataan vain sen kolloidisen agar sisältöä ja paikallista ruokaa herkkuja. Nämä levät ovat laajasti käytössä kuin kansanlääkinnässä hoidettaessa erilaisia ​​vaivoja kuten tulehdus ja mahalaukun vaivoja. Tässä tutkimuksessa pyritään arvioimaan mahdolliset tulehdusta, gastroprotektiivista ja anti-ulcerogenic toimintaa näiden Malesian punalevää, Gracilaria changii
. Tool Menetelmät
merileväuute valmistelu
Gracilaria changii
(Xia et Abbott) Abbott, Zhang et Xia kerättiin rannikon veden Morib, Selangor, Malesia (N2 ° 44 '908 ", E101 ° 26' 590") helmikuun lopulla 2003 [22-24]. Levät tunnistettiin Professori Phang Siew Moi, instituutin johtaja Ocean ja Earth Sciences, Institute of Biological Sciences, tiedekunta, University of Malaya, jossa tosite yksilöt pidettiin (herbarium no. PSM 6320 ja PSM 6321 ). Levät pestiin steriilissä meriveteen lopullinen huuhtelu steriilissä tislatussa vedessä, kuten aikaisemmin on kuvattu [22]. Levät sitten sonikoitiin vedessä haudesonikaattorissa ja pidettiin -70 ° C: ssa. Metanoliliuosta ote Gracilaria changii
(MeOHGCM6 uute) valmistettiin yliopistossa Malesia Terengganu (UMT) mukaisesti kuvattujen menetelmien [25]. MeOHGCM6 uute pidettiin -20 ° C: ssa ennen käyttöä.
MeOHGCM6 purkaa
profiili analyysi MeOHGCM6 uute suoritettiin Shimadzu erittäin nopea nestekromatografia (UFLC) varustetussa fotodiodisarja ultravioletti (PDA UV ) ilmaisimen ja ioni ansa lentoajan (TOF) massaspektrometrillä (Shimadzu, Japani). Erotus saavutettiin Waters Xbridge C18-pylväs (50 mm x 2,1 mm, hiukkasten halkaisija on 2,5 um) (vesi, USA) 40 ° C: ssa. Liikkuva faasi koostui vedestä [0,1% muurahaishappoa (BDH Laboratory Supplies, Englanti)]: asetonitriili (BDH Laboratory Supplies, Englanti) (0,1% muurahaishappoa), virtausnopeudella 0,50 ml /min, jonka injektiotilavuus 10 ui . Sähkösumutusmassaspektrometria (ESI) tilassa positiivinen /negatiivinen kytkentä ja ulkoisten ohjeiden käytettiin massaspektrometriaa (MS). Dictionary of Natural Products (CRC Press) ja korkean erotuskyvyn MS spektrien ja rakenteellisia tietoja käytettiin analysoimaan positiivisten ja negatiivisten ionien spektrit yhdessä MS /MS tietoa tunnistamiseksi samanlaisia ​​komponentteja.
Human promonosyyttistä solulinjaa (U937-solut)
U937-solut hankittiin American Type Culture Collection (ATCC, USA) ja niitä viljeltiin Roswell Park Memorial Institute 1640 (RPMI-1640-väliaine) (Flowlab, Australia) [jota oli täydennetty 1%: lla 10 mM ei-välttämättömiä aminohappoja (NEAA) (Flowlab, Australia) ja 1% 10 mM L-glutamiinia (L-Glu) (Flowlab, Australia)], joka sisälsi 10% lämpöinaktivoitua naudan sikiön seerumia (FBS) (Flowlab, Australia). Soluja inkuboitiin 37 ° C: ssa kostutetussa inkubaattorissa 5% CO 2.
Erilaistuminen U937-soluissa
U937-solut ympättiin 96-kuoppaisille soluviljelylevyille (Falcon, USA) tiheydellä 2 x 10 4 solua /kuoppa RPMI-1640-väliaineessa, joka sisälsi 2% FBS: ää ja pidettiin 37 ° C: ssa kostutetussa inkubaattorissa 5% CO 2. Seuraavana päivänä väliaine sisälsi forboli-12-myristaatti-13-asetaatti (PMA) (Sigma-Aldrich, USA) konsentraatioilla alueella 0-50 nM lisättiin U937 monosyyttisoluilla erilaistumisen indusoimiseksi 24 ja 48 tuntia. Alustaa, joka sisälsi vain PMA laimentimia [dimetyylisulfoksidi (DMSO) liuosta (Sigma-Aldrich, USA)] lisättiin samanaikaisesti ja käytetään ajoneuvon hallinnan. Lopussa osoitetun aikapisteessä solut arvioitiin differentiaatiospesifisiä makrofaagien solupinnan ekspressio ja solujen elinkykyä.
Ilmentäminen CD11, differentiaatiospesifisiä makrofaagien solupinnan määritettiin värjäämällä solut kuten aiemmin on kuvattu [26 , 27]. Solujen elinkyky määritettiin käyttämällä trypaanisinivärin (Sigma, USA) ulkopuolelle määrityksessä, kuten aiemmin on kuvattu [28].
Sytotoksisuusmääritvs
U937-solut ympättiin 96-kuoppaisille soluviljelylevyille tiheydellä 2 x 10 4 solua /kuoppa RPMI-1640-väliaineessa, joka sisälsi 2% FBS: ää ja pidettiin 37 ° C: ssa kostutetussa inkubaattorissa 5% CO 2. Seuraavana päivänä väliaine sisälsi MeOHGCM6 purkaa (konsentraatioissa 0-100 ng /ml) ja beetametasonin (Sigma, USA) (pitoisuuksina 0-100 nM) lisättiin. Medium sisälsivät vain MeOHGCM6 poimia ja beetametasoni laimennusaineet [etanoli (EtOH) (BDH Laboratory Supplies, Englanti) ja DMSO, vastaavasti] lisättiin samanaikaisesti ja käytetään ajoneuvon hallinnan. Päivä jälkikäsittelyä, U937-solut leviämisen nopeus määritettiin käyttämällä CellTiter 96® Non-Radioactive Cell Proliferation Kit (Promega, USA) tiukasti seuraten valmistajan suosittelemaa menetelmää.
MeOHGCM6 poimia hoitoon U937-soluissa
U937-solut ympättiin 24-kuoppaisille soluviljelylevyille (Falcon, USA) tiheydellä 2 x 10 5 solua /kuoppa RPMI-1640-väliaineessa, joka sisälsi 2% FBS: ää ja inkuboitiin 37 ° C: ssa kostutetussa inkubaattorissa 5% CO 2. Seuraavana päivänä, U937-solut indusoitiin erilaistumaan 10 nM PMA: lla 24 tuntia. Erilaistumisen aikana, U937-soluja käsiteltiin MeOHGCM6 uutetta tai beetametasoni fysiologisiin pitoisuus. 0, 8, 16 ja 24 tuntia hoidon jälkeen, supernatantti ja solut kerättiin ja analysoitiin TNF-α vasteen ja TNF-α: n ja IL-6-geenin ilmentymistä.
TNF-α vasteen
TNF α taso mitattiin käyttäen BD OptEIA ™ Human TNF (TNF-α) ELISA kit II (BD Biosciences, USA) valmistajan protokollan.
TNF-α: n ja IL-6-geenin ilmentymisen
Yhteensä RNA soluviljelmät eristettiin käyttäen TRI Reagent® (Molecular Research Center, Inc., USA) ja käsiteltiin DNaasi (Promega, USA). RNA käänteistranskriboitua (cDNA) käyttäen SuperScript ™ II Reverse Transcriptase (Invitrogen, USA). CDNA käytettiin sitten suorittaa kvantitatiivisen tosiaikaisen PCR: llä käyttämällä SYBR® Green PCR master mix (Qiagen, Saksa) DNA Engine Opticon II® (MJ Research, Bio-Rad, USA) kuten aikaisemmin on kuvattu [29]. Oligonukleotidi Käytetyt alukkeet olivat eteen- 5'AAGAGTTCCCCAGGGACCTC ja kääntää 5'GCTTGAGGGTTTGCTACAAC TNF-α; eteenpäin 5'GAAAGGAGACATGTAACAAG ja kääntää 5'CCAGGCAAGTCTCCTCATTG IL-6; ja eteenpäin 5'GCGAGAAGATGACCCAGATC ja kääntää 5'GGATAGCACAGCCTGGATAG beeta-aktiini (β-aktiini) (sisäinen viite).
Eläimet
Adult Sprague-Dawley vuotiaille 7-8 viikkoa ja paino 160-200 g olivat tutkimuksessa käytetty. Protokolla eläinkokeiden hyväksyi institutionaalisten komitea Ethics eläinkokeissa yliopiston malaya [Hyväksyntänumero: MP /08/06/2010 /SMH (R)]. Eläimiä saatiin University Putra Malesia (UPM). Eläimiä pidettiin yksittäin häkeissä, joissa laaja-verkkolangoille pohjat estämiseksi coprophagy. Ne pidettiin lämpötilaohjattu huone, joka oli hyvin tuuletettu, ruoka ja vesi, 12 tunnin valo /pimeä sykli koko tutkimuksen ajan. Kaikki rotat ravinnotta 48 tuntia, mutta saivat vapaasti juomavettä, kunnes 2 tuntia ennen niiden pakottamista ulcerogens.
EtOH aiheuttama mahavaurioita
Rotat jaettiin satunnaisesti 7 ryhmään kunkin ryhmän kanssa koostuu 6 rottaa. Ryhmä 1 annettiin 10% Tween 20 (ote laimentimet) (BDH Laboratory Supplies, Englanti) ja toimi negatiivisena kontrolliryhmä. Ryhmä 2 sai 500 mg /kg ruumiinpainoa n MeOHGCM6 uutetta yhtä etuyhteydettömille kasviuutetta valmistaa samalla rinnan MeOHGCM6 poimia palvelemaan epäspesifinen kasviuutetta (NSPE) kontrolliryhmä. Ryhmä 3 käsiteltiin OMP (Chemical Company of Malaysia, Malesia) 20 mg /kg ruumiinpainoa ja toimi positiivisen hoitoa kontrolliryhmässä. Jäljelle jäävästä ryhmästä 4, 5, 6 ja 7 sai 4 eri pitoisuuksia MeOHGCM6 uutteen vaihtelevat 2,5-500 mg /kg ruumiinpainoa, vastaavasti. Kun 30 minuuttia esikäsittelyn, kaikki eläimille annettiin absoluuttiseen EtOH oraaliteitse. Tunti antamisen jälkeen eläimet tapettiin yli-annostelun niitä dietyylieetterillä (BDH Chemicals Ltd., Englanti). Rotan vatsa leikattiin ja ruokatorven lähinnä cardia ja laajentunut vatsaan mahanportin sulkijalihaksen välittömästi sidottu solmu käyttäen merkkijono voidaan välttää mahan sisällön. Vatsa poistettiin nopeasti ja upotettiin veteen.
Mittaaminen mahahapon eritystä
mahalaukun sisällön kunkin rotan mahan aspiroitiin ja raaputettiin hellävaraisesti lastalla. Vatsa mehua sisältäviä elintarvikkeita hiukkasia heitettiin pois. Kerätty mahan limaa punnittiin käyttää elektronisia tasapaino (Mettler Toledo, Sveitsi). Määrä mahalaukun mehua mitattiin käyttäen mittalasiin. PH mahalaukun sisällön mitattiin käyttämällä digitaalista pH-mittaria (Crison Instruments, SA, Espanja).
Arviointi brutto mahavaurioita
jälkeen sato, maha heti huuhdottiin suolaliuoksella ja tutkitaan preparointimikroskooppia (1,8 x), jossa neliö verkkoon okulaari. Rauhas osa mahan arvioitiin muodostumista haava. Yhteenlaskettu ulcerating ala (UA) on verenvuototaudin vauriot jokaisen mahan mitattiin plannimetry (mm 2) ja inhibitioprosentti laskettiin käyttäen seuraavaa kaavaa: esto %
=
UA
ohjaus -
UA
käsitelty /
UA
ohjaus x
100
määritys tuotetaan ei-proteiini sulfhydryylien (NP-SH) B Mahalaukun limakalvon NP-SH tason mitattiin aikaisemmin kuvatulla [30] pienin muutoksin. Lyhyesti, rauhasten mahan punnittiin ja homogenoitiin putkiin, jotka sisälsivät jääkylmää 0,02 M etyleenidiamiinitetraetikkahappoa (EDTA) (GibcoBRL Life Technologies, USA) (pH 8,9). Alikvootit Homogenaatteja sekoitettiin tislattua vettä ja 50% trikloorietikkahappoa (Sigma Chemical Co., USA). Seosta inkuboitiin jatkuvasti sekoittaen 10 minuutin ajan 4 ° C: ssa ja sitten sentrifugoitiin 3000 x g 15 minuutin ajan. Sen jälkeen seos analysoitiin NP-SH tasolla käyttäen glutationi määrityskittiä (Sigma Chemical Co., USA) valmistajan protokollan.
Tilastollinen analyysi
Kaikki tiedot ilmaistiin keskiarvona ± keskihajonta (SD) tai mediaani (25% ja 75% kvartiili) kahden tai kolmen erillisen kokeen varten tulehdusta tutkimuksia ja seitsemän riippumatonta koetta varten gastroprotektiivista ja anti-ulcerogenic tutkimuksia. ANOVA (yksisuuntainen varianssianalyysi ja kaksisuuntainen varianssianalyysi) käytettiin vertailussa ryhmissä ja raportointiin tilastollisen merkitsevyyden "p
" suhteessa kontrolliryhmään. Arvo p
< 0,05 pidettiin tilastollisesti merkittävänä. Kaikki tilastolliset analyysit tehtiin käyttäen GraphPad Prism 4.0 Software (USA) ja SPSS versio 16.0 Software (SPSS Inc., Chicago), tässä järjestyksessä.
Tulokset
vakioitu MeOHGCM6 poimia profiili
LC /MS-analyysit eri erien of MeOHGCM6 uutetta varmistamiseksi suoritetusta toistettavuus ja johdonmukaisuuden louhintamenetelmiä. Erä 1 ja 2 MeOHGCM6 uutetta käytettiin tutkimuksessa osoitti hyvin samanlaisia ​​massaspektridatan profiileja ja määrä suurten massojen (kuvio 1A-C). Analyysi spektrien ja verrattuna Dictionary of Natural Products, CRC Press tunnistaa erottuva massojen kuin 457,405, 645,280 ja 887,579. Tunnistettu massa positiivinen ioni-spektri m /z 457,405, oli fragmentit 398,327 (emäs-piikki), 380,316 ja 158,082. Neutraalit menetys 59,077 massa oli mahdollisesti osoitus menetetty trimetyyliamiini. Tämä viittaa siihen, että yhdiste voi sisältää trimetyyliammonium-osa. Korkean erotuskyvyn MS ja MS /MS-tiedot eivät voi lopullisesti tunnistamaan tunnettujen yhdisteiden päässä Dictionary of Natural Products. Massat m /z 645 ja 887, mutta tulos oli selvästi yhdistyksen kaksi tunnettua klorofyllejä, metyyli 10-hydroxyphaeophorbide
ja 10-Hydroxypheophytin
sopivan UV-absorbanssit havaittu PDA analyysissä (taulukko 1 ). Kuvio 1 profilointi eri erien MeOHGCM6 uutetta. ESI tilassa positiivinen /negatiivinen kytkentä ja ulkoisten ohjeiden käytettiin MS käyttäen Shimadzu UFLC järjestelmä. Yhteensä positiivinen ioni-spektrit analysoitiin tunnistamiseksi samanlaisia ​​komponentteja kahdesta eri erissä MeOHGCM6 uutetta käytetään tutkimuksessa. (A) MeOHGCM6 uutetta (erä 1, M6-1). (B) MeOHGCM6 uutetta (erä 2; M6-2). (C) Vertailu intensiteetti runsain massat kaksi MeOHGCM6 ote erää käytetään tutkimuksessa.
Taulukko 1 rakenne tunnistettujen merkittävin massa läsnä MeOHGCM6 Uute LC /MS
Massa (ioni)
Löytyy erässä
Mahdollinen ID
417,298
1, 2
todennäköisesti epäpuhtauksien
457,405 *
1, 2
tunnistamaton
461,326
1, 2
todennäköisesti epäpuhtauksien
505,353
1, 2
todennäköisesti epäpuhtauksien
573,256
1, 2
tunnistamaton
645,280
1, 2
metyyli 10-hydroxyphaeophorbide
743,636
1, 2
Tunnistamaton
887,579
1, 2
10-Hydroxypheophytin

Dictionary of Natural Products, CRC Press korkean erotuskyvyn MS -spektrit käytettiin analysoimaan koko positiivinen ioni-spektri mahdollisten kemiallisten ainesosien.
* MS /MS (suhteellinen intensiteetti%) 457,405 → 398,327 ( 100%), 380,316 (50%), 158,082 (40%).
Differentiation-spesifinen makrofaagien solupinnan ekspression U937-solut
Differentiated U937-solut erotetaan ilmentymisen monosyyttien /makrofagien linjan-spesifinen CD11b , pinta markkeriproteiinina [26]. Tutkimuksessamme ilmaus CD11b oli merkitty voimakas ruskehtavan sininen merkintöjä solun pinnalla [27]. Ilmaus CD11b on huomattavasti lisääntynyt, kun U937-solut indusoitiin erilaistumaan konsentraation kasvaessa PMA (1, 10 ja 50 nM) (kuvio 2, kuvio 3A). Havainto ehdotti, että käsittely 10 tai 50 nM PMA 24 tuntia tai 1 nM PMA 48 tunnin, eriytetään U937-solut oli selvästi yli 50% soluviljelmästä. Kuvio 2 ilmentäminen differentiaatiospesifisiä makrofagi solunpintamarkkeria Jaksotettuihin U937 monosyyttisoluilla. U937 monosyyttiset solut indusoitiin erilaistumaan (A) 0 nM PMA: ssa 24 tuntia; (B) 0 nM PMA 48 tunnin ajan; (C) 1 nM PMA 24 tuntia; (D) 1 nM PMA 48 tuntia; (E) 10 nM PMA 24 tuntia; (F) 10 nM PMA 48 tuntia; (G) 50 nM PMA 24 tuntia ja (H) 50 nM PMA 48 tuntia. Solut värjättiin käyttäen immunohistokemiallista värjäystä tunnistaa läsnäolon CD11, makrofagi solun pinnan merkkiaine. Eriytetyn U937 monosyyttisoluilla tunnistettiin voimakas ruskehtava sinistymisen- solun pinnalla erilaisia ​​soluja. Soluja tarkasteltiin 20 x suurennoksilla alle brightfield käyttämällä käännettyä mikroskooppia ja valokuvattiin käyttäen Nikon D70 kameran (Nikon, Japani). Yksi arkkityyppistä sarja valokuvia kolmesta erillisestä kokeesta esitetään.
Kuva 3 differentiaatiospesifisiä U937 monosyyttisoluilla makrofagien solunpintamarkkeria ilmaisun ja solujen elinkelpoisuuden määritys. U937 monosyyttiset solut indusoitiin erilaistumaan eri pitoisuuksilla PMA 24 ja 48 tuntia. (A) prosenttiosuudet erilaistuneita soluja tekee läsnäolon CD11 solujen pinnalla. (B) prosenttiosuudet elävät solut pisteytetty trypaanisiniekskluusiolla määrityksessä. Prosenttiosuus Vaihtelevan tai elävien solujen kohti solua yhteensä on sama ennen koetta käyttäen eri pitoisuuksia PMA ja itämisaika. Tiedot esitetään keskiarvona ± S.D. kolmesta itsenäisestä kokeesta, jossa "*", s
< 0,05 edustaa merkitys ero verrattuna ryhmään, joita ei indusoida erilaistumaan.
Solujen elävyys määritys eriytetään U937-solut
elinkelpoisten eriytetty U937-solut sijoitettiin käyttämällä trypaanisinivärin syrjäytymistä määrityksessä. U937-solut elinkelpoisuuden osoittivat merkittävää annos-riippuvainen väheneminen elinkelpoisten solujen prosentuaalinen kun indusoida erilaistumaan 1, 10 ja 50 nM PMA (kuvio 3B). Havainto ehdotti, että 90% Vaihtelevan U937 solut olivat edelleen elinkelpoisia käsittelyn jälkeen 1 tai 10 nM PMA 24 tuntia tai 1 nM PMA 48 tunnin ajan.
Sytotoksisuus MeOHGCM6 otteen U937-solut
sytotoksisille vaikutuksille MeOHGCM6 ote ja beetametasonin on U937-solut määritettiin laskemalla solujen lisääntymisen korko. Käsiteltiin U937-solut kanssa MeOHGCM6 purkaa 0,05, 0,5, 1 ja 5 ug /ml näytteillä proliferatiivinen murtuu 117,39% (108,48%, 122,10%), 152,04% (149,36%, 154,72%) (p
< 0,05) , 145,60% (137,48%, 149,11%) (p
< 0,05) ja 118,49% (112,01%, 133,28%), vastaavasti (kuvio 4A). Hoidon MeOHGCM6 purkaa 10 ug /ml vähensi solujen lisääntymisen määrä on 87,00% (82,43%, 89,62%). Käsitelty U937 solut beetametasoni osoittivat merkittävää annoksesta riippuvaa vähenemistä niiden leviäminen korko (kuvio 4B). Alemmilla pitoisuuksilla beetametasoni (0,1, 1, 5 ja 10 nM), soluproliferaatioon oli 110,35% (92,20%, 115,83%), 113,75% (89,56%, 122,98%), 94,59% (85,56%, 101,93%) ja 80,48% (77,78%, 110,48%), vastaavasti. Kuva 4 Sytotoksisuus vaikutuksia eri pitoisuuksia MeOHGCM6 uutetta ja beetametasoni U937 monosyyttisoluilla. Leviämisen määrä U937 monosyyttisoluilla käsiteltiin kasvavilla pitoisuuksilla (A) MeOHGCM6 uutetta ja (B) beetametasoni määritettiin yli 24 tunnin ajan suorittamalla MTT-määrityksellä. Prosenttiosuus solujen proliferaatio on suhteessa solujen määrä ympättiin ennen annettaessa eri annoksilla MeOHGCM6 uutetta ja beetametasoni. Pitoisuudet MeOHGCM6 uutetta, joka aiheutti 30% (G130), 50% (G150) ja 70% (G170) soluproliferaation inhibition ekstrapoloitiin juoni (osoitettu nuolella). Tulokset ilmaistiin mediaani (25% ja 75% kvartiilin) ​​kahdesta itsenäisestä kokeesta.
Vaikutukset MeOHGCM6 ote hoidon TNF-α vasteen aikana erilaistumista U937-soluissa
vaikutukset MeOHGCM6 poimia hoidon sääntely TNF-α vastetasosta aikana U937 solujen erilaistumista tutkittiin käyttämällä ELISA. TNF-α vastetasosta saavutti enimmäismäärä 43,28 ± 5,15 pg /ml 8 tuntia, kun U937 solut indusoitiin erilaistumaan (kuvio 5A). Kun läsnä on 10 ug /ml MeOHGCM6 uutetta erilaistumisen aikana ja U937-soluissa, TNF-α vasteen merkittävästi vähentynyt asti 8 tuntia [0,14 ± 0,28 pg /ml (p
< 0,001)], ja on verrattavissa niihin, kun läsnä on beetametasonin [0,28 ± 0,56 pg /ml (p
< 0,001)]. Kuvio 5 MeOHGCM6 poimia käsittely TNF-α vasteen ja TNF-α: n ja IL-6-geenin ilmentyminen erilaistumisen aikana ja U937 monosyyttisoluilla. U937 monosyyttiset solut indusoitiin erilaistumaan 10 nM PMA: lla. Erilaistumisen aikana, U937 monosyyttiset solut käsiteltiin MeOHGCM6 uutetta. (A) TNF-α vastetasosta kvantitoitiin käyttämällä ELISA. (B) TNF-α ja (C) IL-6-geenin ilmentyminen kvantitoitiin käyttäen qRT-PCR: ää. Tulokset ilmaistaan ​​keskiarvona ± S.D. alkaen neljän rinnakkaismäärityksen.
vaikutukset MeOHGCM6 ote hoidon TNF-α: n ja IL-6-geenin ilmentyminen erilaistumisen aikana ja U937-soluissa
sääntely TNF-α: n ja IL-6: MeOHGCM6 poimimaan hoitotuloksia aikana U937-solut erilaistumista tutkittiin tarkemmin geeni- ilmentymisen tasolla käyttäen qRT-PCR. TNF-α-geenin ilmentymisen taso oli huipussaan 6 tunnin kuluttua (3,16 ± 0,48: sta /aktiini) ja U937-soluissa erilaistumisen (kuvio 5B). TNF-α-geenin ilmentymisen taso laski ensimmäisten 6 tunnin kohdalla [0,52 ± 0,28: sta /aktiini (p
< 0,001)], U937-solujen erilaistumista, kun läsnä oli 10 ug /ml MeOHGCM6 uutetta. Vähentyneeseen TNF-α-geenin ilmentymisen tasoa U937-solujen erilaistumisen aikana, kun käsiteltiin 10 ug /ml MeOHGCM6 oli verrattavissa tai parempi kuin havainnot hoidon 10 nM beetametasoni [0,55 ± 0,42 kopiota /aktiini (p
< 0,001)]. IL-6-geenin ilmentymisen taso kasvoi merkittävästi ja saavutti 0,68 ± 0,09 kopiota /aktiini kuluttua 12 tunnin U937 solujen erilaistumista (kuvio 5C). Lasku IL-6-geenin ilmentymisen taso havaittiin olevan 0,10 ± 0,01 kopiota /aktiini, 0,23 ± 0,02 kopiota /aktiini (p
< 0,01), 0,37 ± 0,04 kopiota /aktiini (p
< 0,001 ) ja 0,45 ± 0,05: sta /aktiini (p
< 0,001) 3, 6, 9 ja 12 tuntia, vastaavasti, kun U937-solujen erilaistumisen aikana käsiteltiin 10 ug /ml MeOHGCM6 uutetta. Estämällä IL-6-geenin ilmentymisen tasoa läsnä ollessa MeOHGCM6 uute verrattavissa beetametasoni.
Ennaltaehkäisevä hoito vaikutuksia MeOHGCM6 otteen rottien mahalaukun sisällön seuraavasti EtOH aiheuttama akuutti mahalaukun limakalvon vauriota
Mahalaukun limaa eritystä, mahalaukun mehu volyymi ja mahan limaa pH määritettiin mahalaukun sisällön rotan mahan esikäsitellä MeOHGCM6 uutteen seuraavien EtOH ruokinta. 2,45 ± 0,25 g mahan limaa ja 1,75 ± 0,20 ml mahanestettä otettiin talteen mahasta rottien syötetään vain uutetta laimennusaine (taulukko 2). 1,54 ± 0,31 g mahan limaa ja 0,96 ± 0,25 ml mahanesteen ja 1,68 ± 0,19 g mahan limaa ja 0,96 ± 0,16 ml mahanestettä otettiin talteen esikäsitellyt rotat 250 ja 500 mg /kg ruumiinpainoa of MeOHGCM6 ote vastaavasti. Vertailun vuoksi, 2,31 ± 0,42 g mahan liman ja 1,15 ± 0,36 ml mahanestettä otettiin talteen esikäsitellyt rotat 20 mg /kg b.w OMP. 2,75 ± 0,49 g mahan limaa ja 1,75 ± 0,28 ml mahanestettä otettiin talteen rotista ruokittu valmistaa samalla etuyhteydettömien kasvin uutetta, joka toimi NSPE ohjaus. Kaikki kirjoittajat luettu ja hyväksytty lopullinen käsikirjoitus.

• Antioksidantit ja mahalaukun cytoprotective prostaglandiinien ominaisuudet Cassia sieberiana juurista riuute anti-ulcerogenic agent
• Geneettinen vaihtelu CYP3A4 ja CYP3A5in ensisijainen maksan, mahalaukun ja paksusuolen ja peräsuolen syövän patients