Anti-inflammatorisk, gastroprotective og anti-ulcerogene effektene av rødalger Gracilaria changii (Gracilariales, Rhodophyta) extract

Anti-inflammatorisk, gastroprotective og anti-ulcerogene effekter av rødalger Gracilaria changii plakater (Gracilariales, Rhodophyta) utvinner
Abstract
Bakgrunn
Gracilaria changii product: (Xia et Abbott) Abbott, Zhang et Xia, en rød alger som vanligvis finnes i kystområdene i Malaysia er tradisjonelt brukt for matvarer og for behandling av ulike plager inkludert betennelse og mage plager . Målet med studien var å undersøke anti-inflammatorisk, magesekk og anti-ulcerogent aktiviteter av massespektrometri standardisert metanolholdig ekstrakt av Gracilaria changii
.
Metoder
metanolisk ekstrakt av Gracilaria changii plakater (MeOHGCM6 ekstrakt ) ble fremstilt og standardisert ved hjelp av massespektroskopi (MS). Anti-inflammatorisk aktivitet av MeOHGCM6 ekstrakt ble undersøkt ved behandling av U937-celler i løpet av dens differensiering med 10 ug /ml MeOHGCM6 ekstrakt. Tumor necrosis faktorene-α (TNF-α) responsnivå og TNF-α og interleukin-6 (IL-6) genekspresjon ble overvåket og sammenlignet med den behandlet med 10 nM betametason, en anti-inflammatorisk medikament. Gastrobeskyttende og anti-ulcerogene aktivitet av MeOHGCM6 ekstrakt ble undersøkt ved å fore rotter med MeOHGCM6 ekstrakt fra 2,5 til 500 mg /kg kroppsvekt (kroppsvekt) etter induksjon av gastriske lesjoner. Produksjon av slim og mavesaft, pH i magesaft og som ikke er protein sulfhydryler (NP-SH) nivåer ble bestemt og sammenlignet med den som føres med 20 mg /kg kroppsvekt omeprazol (OMP), en kjent anti-sår narkotika.
Resultater
MS /MS analyse av MeOHGCM6 ekstrakter avslørte tilstedeværelsen av metyl 10-hydroxyphaeophorbide en
og 10-hydroxypheophytin en
, kjent klorofyll proteiner og flere uidentifiserte molekyler. Behandling med 10 ug /ml MeOHGCM6 ekstrakt under differensiering av U937-celler i betydelig grad hemmet TNF-α responsnivå og TNF-α og IL-6-genekspresjon. Den inhiberende effekt var sammenlignbar med den av betametason. Det er ingen cytotoksiske effekter ble registrert for celler behandlet med 10 ug /ml MeOHGCM6 ekstrakt. Rotter matet med MeOHGCM6 pakke på 500 mg /kg kroppsvekt viste redusert absolutt etanol gastrisk lesjon størrelser av > 99% (p
< 0,05). Denne beskyttende virkning var sammenlignbar med den som gitt ved OMP. PH i mageslim redusert doseavhengig måte 5,51 til 3,82, og det var en betydelig økning i NP-SH konsentrasjoner.
Konklusjoner Search Results fra studien, antyder at massespektrometri standardisert metanolholdig ekstrakt av Gracillaria changii
besitter anti-inflammatorisk, gastroprotective og anti-ulcerogene egenskaper. Videre undersøkelse av den aktive bestanddel av ekstraktet og virkningsmekanismen er hjemlet i fremtiden.
Nøkkelord
Anti-inflammatoriske Anti-ulcerogent gastroprotective Gracilaria changii
Cytokiner Betamethasone Omeprazol Alge Sår Bakgrunn
Betennelse er en viktig funksjon i mange sykdommer. Det er preget av et kompleks av orkestrert interaksjoner mellom mediatorer av inflammasjon og inflammatoriske celler rettet mot å fjerne irritanter og helbredelse av vev skader [1, 2]. Betennelse er en viktig vertsforsvarsmekanisme. Inflammasjon som oppstår i slimhinne i mage-tarmkanalen, men forårsaker gastrointestinale sår [3]. Gastrointestinale sår er en vanlig stor lidelse i fordøyelsessystemet som påvirker millioner av amerikanere og mange flere over hele verden [4]. Den vanligste årsaken til magesår sykdom er infeksjon med Helicobacter pylori plakater (H. pylori
) [5] og langvarig bruk av ikke-steroide antiinflammatoriske midler (NSAIDs) som aspirin og ibuprofen [6]. Ankomsten av antibiotika kontroller mot H. pylori
har redusert antall gastrointestinale sår tilfeller i de utviklede land [7]. Sykdommen er imidlertid fremdeles høyt i andre land, og den sykdom som skyldes bruk av NSAID-er fremdeles et stort helseproblem i den industrialiserte land [6, 7].
Behandling av inflammasjon generelt, er rettet mot enten hemme aktiviteten av inflammatoriske celler eller hemme produksjonen av inflammatoriske mediatorer [8]. Den senere kan oppnås ved hjelp av stoffer som NSAIDs og kortikosteroider [9]. Behandling av gastrointestinale sår generelt er rettet mot enten å eliminere H. pylori-infeksjon
eller redusere og inhibere nivåer av magesyreproduksjonen som er ansvarlige for erosjon av gastrointestinale beskyttelsessjikt [10, 11]. Den senere kan oppnås ved hjelp av stoffer som histamin (H 2) p-blokkere, syrepumpehemmere og slimhinne beskyttende medisiner [9]. Imidlertid har ulike bivirkninger av langvarig bruk av disse stoffene blitt beskrevet [9]. I tillegg er anti-inflammasjon og anti-ulcerogene legemiddel som anvendes hovedsakelig for å lindre symptomene på sykdommen uten faktisk behandling eller forebygging av inflammatoriske og ulcerogene prosesser.
Utvikling av anti-inflammatoriske og anti-ulcerogene stoffer har nylig fokusert på å finne den gunstige anvendelse av urte plante-avledet ekstrakter som er potent og tryggere å bruke. Alger funnet voksende i overflod av kystområdene i mange deler av verden representerer et stort, men uutnyttet potensial for ny kilde av legemiddel [12, 13]. Den røde alger for eksempel er blitt rapportert å inneholde aktive forbindelser som kan bidra til å lindre inflammasjon av fordøyelseskanalen [14], forebygge eller behandle magesår og kreft forårsaket av oksidativt stress [15, 16], hemmer inflammatoriske aktiviteter ved å undertrykke produksjonen av inflammatoriske mediatorer [17-19] og indusere kreft celle apoptose i magen [20] og tykktarm [21]. Naturlige forbindelser avledet fra de spiselige alger, kan være tryggere å bli brukt som anti-inflammatorisk og gastrisk anti-ulcerogene terapeutika som de har blitt tatt som mat og som benyttes i tradisjonelle medisiner i uminnelige tider [13].
Rødalger, Gracilaria changii product: (Xia et Abbott) Abbott, Zhang et Xia funnet vokser utenfor kystområdene i Malaysia representerer en potensiell lokal kilde til dette naturlig avledet therapeutics. For tiden er de algene kommersielt høstes bare for sin kolloidalt agar innhold og som lokal mat delikatesser. Disse algene er mye brukt som folkemedisin for behandling av ulike plager, inkludert betennelse og mage plager. Denne studien tar sikte på å evaluere potensielle anti-inflammatorisk, magesekk og anti-ulcerogene aktiviteter disse Malaysian rødalger, Gracilaria changii
.
Metoder
Alger ekstrakt forberedelse
Gracilaria changii plakater (Xia et Abbott) Abbott, Zhang et Xia ble samlet inn fra kystvannet av Morib, Selangor, Malaysia (N2 ° 44 '908 ", E101 ° 26' 590") i slutten av februar 2003 [22-24]. Algene ble identifisert av professor dr Phang Siew Moi, direktør for Institute of Ocean og jordobservasjon, Institutt for biologi, Fakultet for informatikk, Universitetet i Malaya, der bilags prøvene ble opprettholdt (herbarium no. PSM 6320 og PSM 6321 ). Algene ble vasket i sterilt saltvann med et avsluttende skylling i sterilt destillert vann, som tidligere beskrevet [22]. Algene ble deretter sonikert i en sonikator vannbad og holdt ved -70 ° C. Metanolholdig ekstrakt av Gracilaria changii plakater (MeOHGCM6 ekstrakt) ble fremstilt ved Universitetet i Malaysia Terengganu (UMT) i henhold til metodene som er beskrevet [25]. Den MeOHGCM6 ekstrakt ble holdt ved -20 ° C før bruk.
MeOHGCM6 trekke
profil analyse av MeOHGCM6 ekstraktet ble utført på en Shimadzu ultra-hurtig væskekromatografi (UFLC) system utstyrt med fotodiode ultrafiolett (UV PDA ) detektor og ionefelle tiden av fly (TOF) massespektrometer (Shimadzu, Japan). Separasjonen ble oppnådd på en Waters Xbridge C18-kolonne (50 mm x 2,1 mm, partikkeldiameter på 2,5 um) (Water, USA) ved 40 ° C. Den mobile fasen besto av vann [0,1% maursyre (BDH Laboratory Supplies, England)]: acetonitril (BDH Laboratory Supplies, England) (0,1% maursyre) ved en strømningshastighet på 0,50 ml /min med et injeksjonsvolum på 10 ul . Elektrospray modus med positiv /negativ svitsje og ekstern referanse ionisering (ESI) ble anvendt for massespektrometri (MS). Dictionary of Natural Products (CRC Press) med høyoppløsnings-MS-spektra og strukturell informasjon ble anvendt for å analysere de positive og negative ion-spektra sammen med MS /MS informasjon for identifikasjon av tilsvarende komponenter.
Humant promonocytic cellelinje (U937-celler)
U937-celler ble kjøpt fra American Type Culture Collection (ATTC, USA) og dyrket i Roswell Park Memorial Institute-1640 (RPMI-1640 medium) (Flowlab, Australia) [supplementert med 1% av 10 mM ikke-essensielle aminosyrer (NEAA) (Flowlab, Australia) og 1% av 10 mM L-glutamin (L-Glu) (Flowlab, Australia)] inneholdende 10% varme-inaktivert føtalt bovint serum (FBS) (Flowlab, Australia). Celler ble inkubert ved 37 ° C i en fuktet inkubator med 5% CO 2.
Differensiering av U937-celler
U937-celler ble sådd ut i 96-brønners cellekulturplater (Falcon, USA) ved en tetthet på 2 x 10 4 celler /brønn med RPMI-1640 medium inneholdende 2% FBS og holdt ved 37 ° C i en fuktet inkubator med 5% CO 2. Den følgende dag, medium inneholdende forbol 12-myristat 13-acetat (PMA) (Sigma-Aldrich, USA) ved konsentrasjoner i området 0-50 nM ble tilsatt til U937 monocyttiske celler til å indusere differensiering i 24 og 48 timer. Medium inneholdende bare PMA fortynningsmidler [dimetylsulfoksid (DMSO) oppløsning (Sigma-Aldrich, USA)] ble tilsatt i parallell og anvendt som bærerkontroll. Ved slutten av det angitte tidspunkt ble cellene evaluert for differensieringsspesifikke makrofag-celleoverflatemarkør ekspresjon og cellelevedyktigheten.
Ekspresjon av CD11b, differensiering-spesifikk makrofag-celleoverflatemarkør, ble bestemt ved å farge cellene som tidligere beskrevet [26 , 27]. Cellelevedyktigheten ble bestemt ved anvendelse av trypan-blått fargestoff (Sigma, USA) utelukkelse assay som tidligere beskrevet [28].
Cvtotoksisitetsmålinq
U937-celler ble sådd ut i 96-brønners cellekulturplater ved en tetthet på 2 x 10 4 celler /brønn med RPMI-1640 medium inneholdende 2% FBS og holdt ved 37 ° C i en fuktet inkubator med 5% CO 2. Den følgende dag, medium inneholdende MeOHGCM6 ekstrakt (i konsentrasjoner varierende fra 0-100 ug /ml) og betametason (Sigma, USA) (i konsentrasjoner i området fra 0-100 nM) ble tilsatt. Medium som bare inneholder MeOHGCM6 trekke ut og betametason fortynningsmidler [etanol (EtOH) (BDH Laboratory Supplies, England) og DMSO, henholdsvis] ble lagt parallelt og brukes som kjøretøy kontroll. En dag etter behandling, ble U937 celler proliferasjonsrate bestemmes ved hjelp av CellTiter 96® ikke-radioaktive Cell Proliferation kit (Promega, USA) strengt følge produsentens anbefalte protokoll.
MeOHGCM6 trekke behandling av U937 celler
U937 celler ble sådd ut i 24-brønners cellekulturplater (Falcon, USA) ved en tetthet på 2 x 10 5-celler /brønn med RPMI-1640 medium inneholdende 2% FBS og inkubert ved 37 ° C i en fuktet inkubator med 5% CO 2. Den følgende dag, U937-celler som ble indusert til å differensiere med 10 nM PMA i 24 timer. Under differensiering, ble de U937-celler behandlet med den MeOHGCM6 ekstrakt eller betametason ved fysiologisk konsentrasjon. På 0, ble 8, 16 og 24 timer etter behandling, og supernatanten ble cellene høstet og analysert for TNF-α responsnivå og TNF-α og IL-6-genekspresjon.
TNF-α responsnivå
TNF α nivået ble målt ved bruk av BD OptEIA ™ humant TNF (TNF-α) ELISA kit II (BD Biosciences, USA) ifølge forhandlerens protokoll.
TNF-α og IL-6-genekspresjon
Total RNA fra cellekulturer ble isolert ved anvendelse av TRI Reagent® (Molecular Research Center, Inc., USA) og behandlet med DNase (Promega, USA). RNA ble revers-transkribert (cDNA) under anvendelse av Superscript II revers transkriptase ™ (Invitrogen, USA). CDNA ble deretter brukt til å utføre kvantitativ real-time PCR ved anvendelse av SYBR® grønn PCR masterblanding (Qiagen, Tyskland) på DNA Motor Opticon II® (MJ Research, Bio-Rad, USA) som tidligere beskrevet [29]. Oligonukleotid-primerne som ble brukt var forover og bakover 5'AAGAGTTCCCCAGGGACCTC 5'GCTTGAGGGTTTGCTACAAC for TNF-α; videre 5'GAAAGGAGACATGTAACAAG og reversere 5'CCAGGCAAGTCTCCTCATTG for IL-6; og videresende 5'GCGAGAAGATGACCCAGATC og revers 5'GGATAGCACAGCCTGGATAG for beta-aktin (β-aktin) (intern referanse).
Dyr
Voksen hunn Sprague-Dawley rotter i alderen mellom 7 til 8 uker og en vekt på 160-200 g ble benyttet ved undersøkelsen. Protokollen for dyreforsøk ble godkjent av Institutional komité for etikk i forsøk med dyr ved University of Malaya [godkjenningsnummer: MP /08/06/2010 /SMH (R)]. Dyrene ble oppnådd fra University Putra Malaysia (UPM). Dyrene ble huset individuelt i bur med bred-mesh trådbunn for å forhindre koprofagi. De ble holdt i et temperaturkontrollert rom som var godt ventilert, med mat og vann, på en 12 timers lys /mørke syklus gjennom hele studien. Alle rotter ble fratatt mat i 48 timer, men hadde fri tilgang til drikkevann inntil 2 timer før å utsette dem for de ulcerogens.
EtOH-induserte gastriske lesjoner
Rottene ble tilfeldig inndelt i 7 grupper med hver enkelt gruppe bestående av 6 rotter. Gruppe 1 ble administrert med 10% Tween 20 (ekstrakt fortynningsmidler) (BDH Laboratory Supplies, England) og tjente som negativ kontrollgruppe. Gruppe 2 ble gitt 500 mg /kg kroppsvekt av den MeOHGCM6 ekstrakt-ekvivalent urelatert plante-ekstrakt fremstilt på lignende måte som i parallell MeOHGCM6 ekstrakt for å tjene som den ikke-spesifikke planteekstrakt (NSPE) kontrollgruppe. Gruppe 3 ble behandlet med OMP (Chemical Company, Malaysia, Malaysia) ved 20 mg /kg kroppsvekt og fungerte som positiv behandling kontrollgruppen. Den gjenværende gruppe 4, 5, 6 og 7 fikk 4 forskjellige konsentrasjoner av den MeOHGCM6 ekstrakt som strekker seg 2,5 til 500 mg /kg kroppsvekt, henholdsvis. Etter 30 minutters forbehandling, ble alle dyr administrert med absolutt EtOH gjennom den orale rute. En time etter administrering ble dyrene avlivet ved over-dosering dem med dietyleter (BDH Chemicals Ltd., England). Rottens buk ble dissekert og spiserøret nærmest cardia og oppblåst mage på den pyloriske ringmuskelen ble umiddelbart knyttet i en knute ved hjelp av en snor for å unngå lekkasje av mageinnholdet. Magen ble raskt fjernet og nedsenket i vann.
Måling av gastrisk sekresjon
mageinnholdet i hver rotte magen ble aspirert og forsiktig skrapt med en slikkepott. Magen juice som inneholder næringsmiddelpartikler ble kastet. Den høstet gastrisk slim ble veid ved hjelp av elektronisk balanse (Mettler Toledo, Sveits). Mengden av mavesaft ble målt ved bruk av en målesylinder. PH i det gastriske innhold ble målt ved bruk av en digital pH-meter (Crison Instruments, SA, Spania).
Evaluering av brutto gastriske lesjoner
Etter innhøstingen ble magen umiddelbart spylt med saltvann og undersøkt under et disseksjonsmikroskop (1,8 ×) med et kvadratisk rutenett okularet. Kjertel del av magesekken ble undersøkt for dannelsen av sår. Det totale ulcerating området (UA) av blødnings lesjoner for hver mage, ble målt ved plannimetry (mm 2), og den prosentvise inhibering ble beregnet ved anvendelse av følgende formel: Inhibering %
=
UA
kontroll -
UA
behandlet /
UA
kontroll ×
100
Bestemmelse av produksjon av ikke-protein sulfhydryler (NP-SH)
gastrisk mucosal NP-SH nivået ble målt som tidligere beskrevet [30] med mindre modifikasjoner. I korte trekk ble kjertelmagen veid og homogenisert i rør inneholdende iskald 0,02 M etylendiamintetraeddiksyre (EDTA) (GibcoBRL Life Technologies, USA) (pH 8,9). Alikvoter av homogenatene ble blandet med destillert vann og 50% trikloreddiksyre (Sigma Chemical Co., USA). Blandingen ble inkubert under konstant omrøring i 10 minutter ved 4 ° C og deretter sentrifugert ved 3000 x g i 15 minutter. Blandingen ble deretter analysert med hensyn på NP-SH nivå ved anvendelse av en glutation assay kit (Sigma Chemical Co., USA) i henhold til produsentens protokoll.
Statistisk analyse
Alle data ble uttrykt som gjennomsnitt ± standardavvik (SD) eller median (25% og 75% kvartil) fra to eller tre uavhengige eksperimenter for anti-inflammatorisk studier og syv uavhengige eksperimenter for gastrobeskyttende og anti-ulcerogene studier. ANOVA (enveis analyse av varians og to-veis analyse av varians) ble anvendt for sammenligning mellom gruppene og for rapportering av den statistiske signifikans "p
'i forhold til kontrollgruppen. Verdien av p
< 0,05 ble ansett som statistisk signifikant. Alle statistiske analyser ble gjort ved hjelp av GraphPad Prism 4.0 programvare (USA) og SPSS versjon 16,0 programvare (SPSS Inc, Chicago), henholdsvis.
Resultater
Standardisert MeOHGCM6 trekke profil
LC /MS analyser av de ulike partier av MeOHGCM6 ekstrakt ble utført for å sikre reproduserbarhet og konsistens av utvinningsmetoder. Batch 1 og 2 av MeOHGCM6 ekstrakt brukt i studien viste svært lignende massespektrale profiler og mengde av de store massene (figur 1A-C). Analyse av spektra og sammenligning av Dictionary of Natural Products, CRC Press identifisert de karakteristiske massene som 457,405, 645,280 og 887,579. Den identifiserte massen i den positive ion spektrum m /z 457,405, hadde fragmenter av 398,327 (basetopp), 380,316 og 158,082. Den nøytrale tap av 59,077 masse var muligens et tegn på tapt av trimetylamin. Dette tyder på at forbindelsen kan inneholde et trimetylammonium del. De høyoppløselige MS og MS /MS-data kan ikke definitivt identifisere noen kjente forbindelser fra Dictionary of Natural Products. Massene av m /z 645 og 887, men viste en tydelig assosiasjon til to kjente klorofyll, metyl 10-hydroxyphaeophorbide en
og 10-Hydroxypheophytin en
med riktige UV-absorbansen observert i PDA-analyse (tabell 1 ). Figur 1 Profilering av de forskjellige satser av MeOHGCM6 ekstrakt. ESI-modus med positiv /negativ svitsje og ekstern referanse ble anvendt for MS ved bruk av et Shimadzu UFLC system. Total positiv ion-spektra analysert for identifikasjon av tilsvarende komponenter fra de to forskjellige grupper av MeOHGCM6 ekstrakt ble brukt i studien. (A) MeOHGCM6 ekstrakt (Batch 1; M6-1). (B) MeOHGCM6 ekstrakt (Batch 2; M6-2). (C) sammenligning av intensiteten av de mest tallrike masser av de to MeOHGCM6 ekstrakt batcher anvendt i studien.
Tabell 1 Struktur identifikasjoner av den mest betydningsfulle massen til stede i MeOHGCM6 ekstrakt ved hjelp av LC /MS
Masse (ion)
funnet i batch
Mulig ID
417,298
1, 2
Mest sannsynlig forurensning
457,405 *
1, 2
uidentifisert
461,326
1, 2
Mest sannsynlig forurensning
505,353
1, 2
Mest sannsynlig forurensning
573,256
1, 2
uidentifisert
645,280
1, 2
Methyl 10-hydroxyphaeophorbide en
743,636
1, 2
Uidentifisert
887,579
1, 2
10-Hydroxypheophytin en <.no> Dictionary of Natural Products, CRC Press med høyoppløsnings-MS-spektra ble brukt for å analysere den totale positive ion spektra for identifisering av mulige kjemiske bestanddeler. product: * MS /MS (relativ intensitet%) 457,405 398,327 → ( 100%), 380,316 (50%), 158,082 (40%).
Differensiering-spesifikk markør makrofag celleoverflate-ekspresjon på U937-celler U937-celler
Differensiert utmerker seg ved ekspresjon av monocytter /makrofager slektslinje-spesifikk CD11b , men da overflateprotein [26]. I vår studie, ble uttrykket av CD11b merket med en intens brunaktig blå merking på celleoverflaten [27]. Ekspresjonen av CD11b ble sterkt øket når U937-celler ble indusert til å differensiere med økende konsentrasjon av PMA (1, 10 og 50 nM) (figur 2, figur 3A). Påvisningen foreslått at behandling med 10 eller 50 nM PMA i 24 timer eller 1 nM PMA i 48 timer, differensierte U937-celler var godt over 50% av cellekulturen. Figur 2 Ekspresjon av differensieringsspesifikke makrofag-celleoverflatemarkør på differensierte U937 monocyttiske celler. U937 monocyttiske celler ble indusert til å differensiere med (A) 0 nM PMA i 24 timer; (B) 0 nM PMA i 48 timer; (C) 1 nM PMA i 24 timer; (D) 1 nM PMA i 48 timer; (E) 10 nM PMA i 24 timer; (F) 10 nM PMA i 48 timer; (G) 50 nM PMA i 24 timer og (H) 50 nM PMA i 48 timer. Celler ble farget ved hjelp av immunhistokjemisk farging for å identifisere tilstedeværelsen av CD11b, en makrofag celleoverflatemarkør. Differensierte U937 monocyttiske celler ble identifisert ved intens brunaktig blå flekk på celleoverflaten av de differensierte cellene. Celler ble vist på 20 × forstørrelse i henhold lysfelt ved hjelp av en invertert mikroskop og fotografert med et Nikon D70 kamera (Nikon, Japan). En arketypisk sett fotografier fra tre separate forsøk er vist.
Figur 3 Differensiering spesifikke U937 monocyttiske celler makrofag celleoverflaten markør uttrykk og celleviabilitet besluttsomhet. U937 monocyttiske celler ble indusert til å differensiere med forskjellige konsentrasjoner av PMA i 24 og 48 timer. (A) Prosentandelene av differensierte celler ble bedømt ved nærværet av CD11b på celleoverflaten. (B) Prosentandelene av levedyktige celler ble bedømt ved hjelp av trypanblått-utelukkelse assay. Prosentandelen av differensierte eller levedyktige celler pr totale celler er den samme før forsøket ved å bruke forskjellige konsentrasjoner av PMA og inkubasjonsperioden. Data er presentert som gjennomsnitt ± S.D. fra tre uavhengige eksperimenter med '*', p
< 0,05 representere betydning forskjell sammenlignet med den gruppen som ikke ble indusert til å differensiere.
Celleviabilitet bestemmelse på differensierte U937-celler
Den levedyktige differensierte U937-celler ble bedømt ved bruk av trypan-blått fargestoff utelukkelse assay. U937-celler levedyktighet, viste en betydelig reduksjon doseavhengig i prosent av levedyktige celler når de induseres til å differensiere med 1, 10 og 50 nM PMA (figur 3B). Oppdagelsen antydet at 90% av de differensierte U937-celler var fremdeles levedyktige etter behandling med en eller 10 nM PMA i 24 timer eller 1 nM PMA i 48 timer.
Cytotoksisitet av MeOHGCM6 ekstrakt på U937-celler
De cytotoksiske virkninger av den MeOHGCM6 ekstrakt og betametason på U937 celler ble bestemt ved å beregne celleproliferasjon rate. Behandlet U937 celler med MeOHGCM6 trekke på 0,05, 0,5, 1 og 5 mikrogram /ml utstilt proliferativ bursts av 117,39% (108,48%, 122,10%), 152,04% (149,36%, 154,72%) (p
< 0,05) , 145,60% (137,48% 149,11%) (p
< 0,05) og 118,49% (112,01% 133,28%), henholdsvis (figur 4A). Behandling med MeOHGCM6 ekstrakt på 10 ug /ml reduserte celleformeringshastigheten til 87,00% (82,43%, 89,62%). Behandlede U937 celler med betametason oppviste signifikant doseavhengig reduksjon i deres formeringshastigheten (figur 4B). Ved lavere konsentrasjoner av betametason (0,1, 1, 5 og 10 nM), celleformeringshastigheten var 110,35% (92,20% 115,83%), 113,75% (89,56% 122,98%), 94,59% (85,56% 101,93%) og 80,48% (77,78% 110,48%), henholdsvis. Figur 4 Cytotoksisitetsdata virkningene av de forskjellige konsentrasjoner av MeOHGCM6 ekstrakt og betametason på U937 monocyttiske celler. Formeringshastigheten av U937 monocyttiske celler behandlet med økende konsentrasjoner av (A) MeOHGCM6 ekstrakt og (B) betamethasone ble bestemt over en periode på 24 timer ved å utføre MTT-analyse. Prosentandelen av celleproliferasjon er i forhold til antallet celler sådd før administrasjon av forskjellige doser av MeOHGCM6 ekstrakt og betametason. Konsentrasjonene av MeOHGCM6 ekstrakt som forårsaket 30% (G130), 50% (G150) og 70% (G170) for inhibering celleproliferasjon ble ekstrapolert fra plottet (indikert ved en pil). Resultater ble uttrykt som median (25% og 75% kvartil) fra to uavhengige eksperimenter.
Effekter av MeOHGCM6 trekke behandling av TNF-α responsnivå i løpet av differensiering av U937-cellene
Virkningene av MeOHGCM6 ekstrakt behandling videre regulering av TNF-α responsnivå i løpet av U937-celler differensiering ble undersøkt ved hjelp av ELISA. TNF-α responsnivået nådde et maksimalt nivå på 43,28 ± 5,15 pg /ml ved 8 timer når U937-celler ble indusert til å differensiere (figur 5A). I nærvær av 10 ug /ml MeOHGCM6 ekstrakt under differensiering av U937-celler, TNF-α responsnivå signifikant redusert til 8 timer [0,14 ± 0,28 pg /ml (p
< 0,001)] og er sammenlignbar med det som observeres i nærvær av betametason [0,28 ± 0,56 pg /ml (p
< 0,001)]. Figur 5 MeOHGCM6 trekke behandling med TNF-α responsnivå og TNF-α og IL-6-genekspresjon i løpet av differensiering av U937 monocyttiske celler. U937 monocyttiske celler ble overtalt til å differensiere med 10 nM PMA. Under differensiering, ble U937 monocyttiske celler behandlet med MeOHGCM6 ekstrakt. (A) TNF-α responsnivå ble kvantifisert ved hjelp av ELISA. Den (B) TNF-α og (C) IL-6 gen-ekspresjonsnivåer ble kvantifisert ved anvendelse av QRT-PCR. Resultatene ble uttrykt som gjennomsnitt ± S.D. fra kvadruplikat-analyser.
Effekter av MeOHGCM6 trekke behandling av TNF-α og IL-6-genekspresjon i løpet av differensiering av U937-cellene
regulering av TNF-α og IL-6 ved MeOHGCM6 ekstrakt behandling i løpet av U937-cellene differensiering ble videre undersøkt på genuttrykk nivå ved QRT-PCR. TNF-α genekspresjon nivå nådde etter 6 timer (3.16 ± 0.48 kopier /aktin) av U937-celler differensiering (figur 5B). TNF-α genekspresjon nivå ble redusert i løpet av de første 6 timene [0,52 ± 0,28 kopier /aktin (p
< 0,001)] av U937-celler differensiering i nærvær av 10 ug /ml MeOHGCM6 ekstrakt. Den redusert i den TNF-α genekspresjon nivå av U937-celler i løpet av differensiering når de ble behandlet med 10 ug /ml MeOHGCM6 er sammenlignbar med eller bedre enn resultatene fra behandling med 10 nM betametason [0,55 ± 0,42 kopier /aktin (p
< 0,001)]. IL-6-genekspresjon nivå viste en signifikant økning, og nådde en topp på 0,68 ± 0,09 kopier /aktin etter 12 timer av U937-celler differensiering (figur 5C). Reduksjon i IL-6-genekspresjon nivået ble observert å være 0,10 ± 0,01 kopier /aktin, 0,23 ± 0,02 kopier /aktin (p
< 0,01), 0,37 ± 0,04 kopier /aktin (p
< 0,001 ) og 0,45 ± 0,05 kopier /aktin (p
< 0,001) ved 3, 6, 9 og 12 timer, henholdsvis når U937-celler under differensiering ble behandlet med 10 ug /ml MeOHGCM6 ekstrakt. Inhibering av IL-6 genet ekspresjonsnivåene i nærvær av MeOHGCM6 ekstraktet var sammenlignbar med den av betametason.
Profylaktisk behandling virkninger av MeOHGCM6 pakke på rottene mageinnholdet følgende EtOH-indusert akutt gastrisk mukosal skade
Gastrisk slim sekresjon, magesaft volum og gastrisk slim pH-verdien ble bestemt fra maveinnholdet i rottemage forbehandlet med MeOHGCM6 ekstrakt følgende EtOH foring. 2,45 ± 0,25 g gastrisk slim og 1,75 ± 0,20 ml av magesyren ble utvunnet fra magen hos rotter matet med bare ekstraktet fortynningsmiddel (tabell 2). 1,54 ± 0,31 g av gastrisk slim og 0,96 ± 0,25 ml av magesaft og 1,68 ± 0,19 g av gastrisk slim og 0,96 ± 0,16 ml av magesyren ble utvunnet fra rotter som på forhånd er behandlet med 250 og 500 mg /kg kroppsvekt av MeOHGCM6 ekstrakt, henholdsvis. Til sammenligning ble 2,31 ± 0,42 g gastrisk slim og 1,15 ± 0,36 ml magesyren utvinnes fra rotter forbehandlet med 20 mg /kg b.w OMP. 2,75 ± 0,49 g av mage slim og 1,75 ± 0,28 ml av magesyren ble utvunnet fra rotter som ble matet med tilsvarende måte som ikke er relatert planteekstrakt som tjente som NSPE kontroll. Alle forfattere lese og godkjent den endelige manuskriptet.

• Antioksidant og mage cellebeskyttende prostaglandiner egenskaper Cassia sieberiana røtter bark ekstrakt som en anti-ulcerogent Agenten
• Genetisk variasjon i CYP3A4 og CYP3A5in primær lever, mage og pasienter med kolorektal kreft