Противовоспалительные, гастропротекторного и анти-ульцерогенных эффекты красных водорослей Gracilaria changii (Gracilariales, Родофита) экстракт

Противовоспалительные, гастропротекторного и анти-ульцерогенных эффекты красных водорослей Gracilaria changii
(Gracilariales, Родофита) экстракт
Аннотация
Справочная информация
Gracilaria changii
(Xia и др Abbott) Abbott, Чжан и др Ся , красные водоросли, обычно встречаются в прибрежных районах Малайзии традиционно используется для пищевых продуктов, а также для лечения различных заболеваний, включая воспаление и желудочных заболеваний. Целью исследования было изучение противовоспалительного, гастропротективное и анти-ульцерогенное деятельность масс-спектрометрии стандартизированного метанольного экстракта Gracilaria changii
.
Методы
метанольный экстракт Gracilaria changii
(MeOHGCM6 экстракт ) был подготовлен и стандартизированы с использованием масс-спектрометрии (МС). Противовоспалительные деятельность экстракта MeOHGCM6 исследовали путем обработки клеток U937 в процессе его дифференциации с 10 мкг /мл экстракта MeOHGCM6. Некроза опухоли α-фактора (TNF-α), уровень отклика и TNF-α и интерлейкина-6 экспрессию гена (IL-6), контролировались и по сравнению с тем обрабатывают 10 нМ бетаметазон, противовоспалительного препарата. Гастропротекторного и анти-ульцерогенных деятельность экстракта MeOHGCM6 исследовали путем кормления крыс с экстрактом MeOHGCM6 в диапазоне от 2,5 до 500 мг /кг массы тела (веса тела) после индукции желудочных поражений. Производство слизи и желудочного сока, рН желудочного сока и небелковых sulfhydryls (НП-SH) уровни были определены и по сравнению с тем, питаемых 20 мг /кг веса тела омепразола (OMP), известный противоязвенные наркотиков.

Результаты МС /МС анализ экстрактов MeOHGCM6 показал наличие метил 10-hydroxyphaeophorbide управлением
и 10-hydroxypheophytin управлением
, известный хлорофилл белки и несколько неопознанных молекул. Лечение с помощью 10 мкг /мл экстракта MeOHGCM6 во время дифференцировки клеток U937 значительно ингибирует уровень экспрессии ответ ФНО-α и TNF-α и гена ИЛ-6. Ингибирующий эффект был сравним с бетаметазон. Нет цитотоксических эффектов не было зарегистрировано в клетках, обработанных 10 мкг /мл экстракта MeOHGCM6. Крыс кормили MeOHGCM6 экстракта в дозе 500 мг /кг веса тела показали снижение абсолютного этанола индуцированных желудка размеров поражения от > 99% (р
&л; 0,05). Этот защитный эффект был сопоставим с предоставляемое OMP.
рН слизи желудка уменьшается в зависимости от дозы от 5,51 до 3,82 и наблюдалось значительное увеличение концентраций NP-SH. Выводы
Результаты исследования, позволяют предположить, что масс-спектрометрии стандартизированы метанольного экстракта Gracillaria changii
обладает противовоспалительным, гастрозащитных и анти-ульцерогенных свойствами. Дальнейшее изучение активного компонента экстракта и его механизма действия является оправданным в будущем.
Ключевые слова
Противовоспалительные Anti-ульцерогенное гастропротекторного Gracilaria changii
Цитокины Бетаметазон Омепразол Водоросли Язва фон
Воспаление главной особенностью многих заболеваний. Он характеризуется комплексом спланированных взаимодействий между медиаторов воспаления и воспалительных клеток, направленных на устранение раздражители и заживление ран тканей [1, 2]. Воспаление является важным механизмом защиты хозяина. Воспаление, что происходит в слизистой оболочке желудочно-кишечного тракта, однако, вызывает желудочно-кишечные язвы [3]. Желудочно-кишечные язвы является общим основным расстройством пищеварительной системы страдают миллионы американцев и многих других по всему миру [4]. Наиболее частой причиной желудочно-кишечного тракта язвенной болезни являются инфекции Helicobacter Pylori
(H. Pylori
) [5] и при длительном применении нестероидных противовоспалительных препаратов (НПВП), такие как аспирин и ибупрофен [6]. Появление антибиотиков контроля против H.pylori,
значительно сократили количество желудочно-кишечных случаев язвенной болезни в развитых странах [7]. Болезнь, однако, по-прежнему высок и в других странах, а заболевание, вызванное использованием НПВС по-прежнему является серьезной проблемой здравоохранения в развитых странах [6, 7].
Лечение воспаления в целом, направлено на либо ингибирования активность воспалительных клеток или ингибирования продуцирования медиаторов воспаления [8]. Последнее может быть достигнуто с помощью таких препаратов, как НПВС и кортикостероидов [9]. Лечение желудочно-кишечного тракта язвы в целом, направлено на устранение либо H. Pylori
инфекции или снижения и ингибирования уровни производства желудочной кислоты, ответственные за эрозии желудочно-кишечного защитного слоя [10, 11]. Позже может быть осуществлено с использованием препаратов, таких как гистамин (H <суб> 2) -блокаторы, ингибиторы кислотных насосов и слизистых оболочек защитные препараты [9]. Тем не менее, различные побочные эффекты длительного использования этих препаратов были описаны [9]. Кроме того, анти-воспаление и анти-ульцерогенных препараты используются в основном для облегчения симптомов заболевания без фактического лечения или профилактики воспалительных и ульцерогенного процессов.
Разработка противовоспалительных и анти-ульцерогенных препаратов в последнее время сфокусирована на открытии благоприятное применение растительных экстрактов растительного происхождения, которые являются мощными и безопасными в использовании. Водоросли нашли растет в изобилии от прибрежных районах многих частях мира представляют собой огромный еще неиспользованный потенциал для нового источника терапии [12, 13]. Красные водоросли, например, как сообщается, содержат активные вещества, которые могут помочь улучшить воспаление желудочно-кишечного тракта [14], предупреждения или лечения язвы желудка и рака, вызванных окислительным стрессом [15, 16], ингибирующие противовоспалительной активностью путем подавления продуцирования медиаторы воспаления [17-19] и индуцируют апоптоз раковых клеток в желудке [20] и толстой кишки [21]. Природные соединения, полученные из съедобных водорослей могут быть более безопасными для использования в качестве противовоспалительного и желудочный анти-ульцерогенных Therapeutics, как они были приняты в качестве продуктов питания и используется в традиционной медицине с незапамятных времен [13].
Красные водоросли, Gracilaria changii
(Xia и др Abbott) Abbott, Чжан и др Ся найти растущие покинуть прибрежные районы Малайзии представляет собой потенциальный локальный источник этого естественно-производных терапевтических средств. В настоящее время, водоросли коммерчески собирают только за его содержание коллоидного агар и как местные деликатесы пищи. Эти водоросли широко применяются в качестве народной медицине для лечения различных заболеваний, включая воспаление и желудочных заболеваний. Настоящее исследование направлено на оценку потенциальных противовоспалительными, гастропротективное и анти-ульцерогенных деятельности этих малазийского красных водорослей, Gracilaria changii
.
Методы
Водоросли экстракт препарат
Gracilaria changii
(Xia и др Abbott) Abbott, Чжан и др Xia были собраны из прибрежных вод Morib, Селангор, Малайзия (N2 ° 44 '908 ", E101 ° 26' 590") в конце февраля 2003 года [22-24]. Водоросли были определены профессор доктор Панг Сью Moi, директор Института океана и наук о Земле, Институт биологических наук, факультет естественных наук, Университет Малайи, где сохранялись образцы ваучеров (гербарий нет. PSM 6320 и PSM 6321 ). Водоросли промывают в стерильной морской воды с окончательной промывкой в ​​стерильной дистиллированной воде, как описано ранее [22]. Водоросли затем обрабатывали ультразвуком в водяной бане ультразвуковом и выдерживают при температуре -70 ° C. Метанольный экстракт Gracilaria changii
(экстракт MeOHGCM6) был подготовлен в Университете Малайзии Теренггану (UMT) в соответствии с методами, описанными [25]. Экстракт MeOHGCM6 выдерживали при -20 ° С до использования.
MeOHGCM6 извлечения Профиль анализ экстракта MeOHGCM6 проводили на хроматографе Шимадзу сверхбыстрой жидкостной хроматографии (UFLC) систему, оснащенную фотодиод массив ультрафиолетовом (УФ КПК ) детектор и время ионной ловушкой полета (TOF) масс-спектрометра (Shimadzu, Япония). Разделение было достигнуто на колонке Уотерс Xbridge С18 (50 мм × 2,1 мм, диаметр частиц 2,5 мкм) (вода, США) при 40 ° C. Подвижная фаза состоит из воды [0,1% муравьиной кислоты (BDH лабораторные принадлежности, Англия)]: ацетонитрил (BDH лабораторные принадлежности, Англия) (0,1% муравьиной кислоты) при скорости потока 0,50 мл /мин с объемом впрыска 10 мкл , Режим ионизацией электрораспылением (ESI) с положительной /отрицательной коммутации и внешнего опорного сигнала использовался для масс-спектрометрии (МС). Словарь натуральных продуктов (CRC Press) с высоким разрешением MS спектров и структурной информации была использована для анализа положительные и отрицательные спектры ионов вместе с информацией о MS /MS для идентификации подобных компонентов.
Human promonocytic линии клеток (клетки U937)
клетки U937 были приобретены у американской коллекции типовых культур (ATTC, США) и культивировали в Roswell Park Memorial Institute-1640 (среда RPMI-1640,) (Flowlab, Австралия) [с добавлением 1% 10 мМ несущественных аминокислот (NEAA) (Flowlab, Австралия) и 1% от 10 мМ L-глутамина (L-Glu) (Flowlab, Австралия)], содержащей 10% инактивированной нагреванием фетальной бычьей сыворотки (FBS) (Flowlab, Австралия). Клетки инкубировали при 37 ° С в увлажненном инкубаторе с 5% CO <югу> 2.
Дифференцирование клеток U937
U937 клетки высевали в 96-луночные планшеты для культивирования клеток (Falcon, США) при плотности 2 × 10 4 клеток /лунку с RPMI-1640, содержащей 2% FBS, и выдерживают при 37 ° с в увлажненном инкубаторе с 5% CO <югу> 2. На следующий день, среда, содержащая форбол 12-миристат 13-ацетата (РМА) (Sigma-Aldrich, США), в концентрациях от 0-50 нм добавлялись к U937 моноцитов для индукции дифференцировки в течение 24 и 48 часов. Среду, содержащую только РМА разбавителей [раствор диметилсульфоксида (ДМСО) (Sigma-Aldrich, США)] были добавлены параллельно и используется в качестве управления транспортным средством. В конце указанного момента времени, клетки оценивали по дифференциации конкретных экспрессии маркеров клеточной поверхности макрофагов и жизнеспособность клеток.
Экспрессия CD11b, дифференцировку специфических макрофаг маркера клеточной поверхности определяли путем окрашивания клеток, как описано ранее [26 , 27]. Жизнеспособность клеток определяли с использованием трипанового синего красителя (Sigma, США) исключение анализа, как было описано ранее [28].
цитотоксичности
U937 клетки высевали в 96-луночные планшеты для культивирования клеток при плотности 2 × 10 4 клеток /лунку с RPMI-1640, содержащей 2% FBS, и выдерживают при 37 ° с в увлажненном инкубаторе с 5% CO <югу> 2. Были добавлены На следующий день, среда, содержащая MeOHGCM6 экстракт (при концентрациях в диапазоне от 0-100 мкг /мл) и бетаметазон (Sigma, США) (при концентрациях в диапазоне от 0-100 нМ). Среду, содержащую только MeOHGCM6 экстракт и бетаметазон разбавителей [этанол (этанол) (BDH лабораторные принадлежности, Англия) и ДМСО, соответственно] были добавлены параллельно и используется в качестве управления транспортным средством. На следующий день после лечения, то клетки U937 скорость пролиферации определяли с использованием CellTiter 96® нерадиоактивных пролиферации клеток набора (Promega, США) в строгом соответствии с протоколом, рекомендованным производителем.
MeOHGCM6 экстракт лечение клеток U937
клеток U937 высевали в 24-луночный культуральные планшеты (Falcon, США) при плотности 2 × 10 5 клеток /лунку с RPMI-1640, содержащей 2% FBS и инкубировали при 37 ° с в увлажненном инкубаторе с 5% CO <югу> 2. На следующий день, клетки U937 были индуцировать дифференцировку с 10 нМ РМА в течение 24 часов. Во время дифференцировки U937 клетки обрабатывали экстрактом MeOHGCM6 или бетаметазона при физиологическом концентрации. При 0, 8, 16 и 24 ч после обработки, супернатант и клетки собирали и анализировали на TNF-альфа уровня реакции и TNF-alpha и экспрессии гена IL-6.
ФНО-α уровень ответа
ФНО- а уровень измеряли с помощью BD OptEIA ™ человеческого TNF (TNF-a) ELISA набор II (BD Biosciences, США) в соответствии с протоколом производителя.
ФНО-α и экспрессии гена IL-6
Общую РНК из клеточные культуры выделяли с помощью TRI Reagent® (исследовательский центр молекулярной, Inc., США) и обрабатывали ДНКазы (Promega, США). РНК подвергали обратной транскрипции (кДНК) с использованием надиндексе ™ II обратной транскриптазы (Invitrogen, США). Затем кДНК использовали для последующего количественного ПЦР в реальном времени с использованием SYBR® Green Master Mix ПЦР (Qiagen, Германия) на ДНК-Engine Opticon II® (MJ Research, Bio-Rad, США), как описано ранее [29]. Олигонуклеотидные праймеры были использованы вперед 5'AAGAGTTCCCCAGGGACCTC и обратного 5'GCTTGAGGGTTTGCTACAAC для TNF-alpha; вперед и назад 5'GAAAGGAGACATGTAACAAG 5'CCAGGCAAGTCTCCTCATTG для IL-6; И вперед 5'GCGAGAAGATGACCCAGATC и обратного 5'GGATAGCACAGCCTGGATAG для бета-актина (β-актин) (внутренний источник опорного напряжения).
животных
крыс Взрослая самка Sprague-Dawley в возрасте от 7 до 8 недель и весом 160-200 г были для исследования использовали. Протокол экспериментов на животных был одобрен Institutional комитетом по этике в экспериментирования животных Университета Малайи [Номер утверждения: MP /08/06/2010 /SMH (R)]. Животные были получены из Университета Путра Малайзии (ОНД). Животных содержали индивидуально в клетках с проволочной днищ с крупными ячейками для предотвращения копрофагии. Их содержали в контролируемой температурой комнаты, которая была хорошо вентилируемом, с пищей и водой, на 12 час цикле свет /темнота в течение всего исследования. Все крысы были лишены пищи в течение 48 часов, но не имели свободный доступ к питьевой воде до тех пор, за 2 часа до подвергая их ulcerogens.
Этанол-индуцированную поражений желудка
Крысы были случайным образом разделены на 7 групп с каждой группой состоящий из 6 крыс. Группа 1 вводили с 10% Tween 20 (экстракт разбавителей) (BDH лабораторные принадлежности, Англия) и служил в качестве негативной контрольной группе. Группа 2 получила 500 мг /кг веса тела экстракта эквивалента экстракта несвязанный растений MeOHGCM6 подобным же образом параллельно, как MeOHGCM6 извлечь, чтобы служить в качестве контрольной группы неспецифический растительного экстракта (NSPE). Группа 3 обрабатывали OMP (Chemical Company из Малайзии, Малайзия) в дозе 20 мг /кг веса тела и служил в качестве положительного контроля лечения группы. Оставшаяся группа 4, 5, 6 и 7 получили 4 различных концентраций экстракта MeOHGCM6 в диапазоне от 2,5 - 500 мг /кг веса тела, соответственно. Через 30 минут предварительной обработки, у всех животных вводили с абсолютным этанолом через пероральном. Через один час после введения животных забивали путем передозировка их с диэтиловым эфиром (BDH Chemicals, Ltd., Англия). Живот крысы препарировали и пищевод ближайший к кардии и раздутым животом на пилорический сфинктер был немедленно завязывают в узел, используя строку, чтобы избежать утечки содержимого желудка. Желудок быстро извлекали и погружали в воду.
Измерение секреции желудка
желудочного содержимого каждого желудка крысы аспирировался и аккуратно скопированного с помощью шпателя. Желудочного сока, содержащего частицы пищи выбрасывали. Собранную слизь желудка взвешивали с помощью электронных весов (Mettler Toledo, Швейцария). Количество желудочного сока измеряли с помощью измерительного цилиндра. РН желудочного содержимого измеряли с помощью измерителя цифровой рН (Crison Instruments, SA, Испания).
Оценка грубых поражений желудка
После уборки урожая, желудок был немедленно промыть физиологическим раствором и исследуют под микроскопом рассекает (1,8 ×) с квадратной сеткой окуляра. Железистой части желудка оценивали по образованию язвы. Общая изъязвляющий область (UA) из геморрагических поражений для каждого желудка измеряли с помощью plannimetry (мм 2) и процент ингибирования вычисляли по следующей формуле: Ингибирование <ми>% <бр> <мо> =
UA
управление <мо> -
UA
лечение /
UA
управление <ССО> <мо> ×
<тп> 100 <бр> Определение производства небелковых sulfhydryls (НП-SH)
желудочную среду уровня НП-SH измеряли, как описано ранее [30] с незначительной модификацией. В кратком изложении, железистый желудок взвешивают и гомогенизируют в пробирки, содержащие ледяной 0,02 М этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) (GibcoBRL Life Technologies, USA) (рН 8,9). Аликвоты гомогената смешивали с дистиллированной водой и 50% -ной трихлоруксусной кислоты (Sigma Chemical Co., США). Смесь инкубировали при постоянном перемешивании в течение 10 мин при температуре 4 ° С, а затем центрифугировали при 3000 х г в течение 15 минут. Затем смесь анализировали на уровне НП-SH с использованием набора для анализа глутатион (Sigma Chemical Co., США) в соответствии с протоколом производителя.
Статистический анализ
Все данные были выражены как среднее значение ± стандартное отклонение (SD) или медиана (25% и 75% квартиль) из двух или трех независимых экспериментов для противовоспалительного исследований и семи независимых экспериментов для гастрозащитных и анти-ульцерогенных исследований. Дисперсионный анализ (односторонний дисперсионный анализ и двухсторонним дисперсионный анализ) использовали для сравнения между группами, и представления статистической значимости "р
" по отношению к контрольной группе. Значение р
&ЛТ; 0,05 рассматривалось как статистически значимое. Все статистические анализы проводились с использованием программного обеспечения 4.0 GraphPad Prism (США) и SPSS версия 16.0 программного обеспечения (SPSS Inc., Чикаго), соответственно.
Результаты
Стандартизированный MeOHGCM6 извлечь профиль

• Антиоксидантные и желудочные цитопротективных простагландины свойства кассии sieberiana корней экстракта коры к…
• Генетическая изменчивость в CYP3A4 и CYP3A5in первичной печени, желудка и колоректального рака patients