Les effets anti-inflammatoires, gastroprotective et anti-ulcérogène d'algues rouges Gracilaria changii (gracilariales, Rhodophyta) extract

effets anti-inflammatoires, gastroprotective et anti-ulcérogène d'algues rouges Gracilaria changii
(gracilariales, Rhodophyta) Extrait
Résumé
Contexte
Gracilaria changii
(Xia et Abbott) Abbott, Zhang et Xia, une algue rouge trouve couramment dans les zones côtières de la Malaisie est traditionnellement utilisé pour les aliments et pour le traitement de diverses affections, y compris l'inflammation et des maladies gastriques . Le but de l'étude était d'étudier anti-inflammatoire, gastroprotective et anti-ulcérogène activités d'une spectrométrie de masse standardisé extrait méthanolique de Gracilaria changii
.
Méthodes
extrait méthanolique de Gracilaria changii
(extrait MeOHGCM6 ) a été préparé et normalisé par spectrométrie de masse (MS). activité anti-inflammatoire de l'extrait MeOHGCM6 ont été examinés par le traitement de cellules U937 lors de sa différenciation avec 10 pg /ml d'extrait MeOHGCM6. les facteurs de nécrose tumorale-α (TNF-α) degré de réaction et le TNF-α et l'interleukine-6 ​​(IL-6), l'expression génique ont été surveillés et comparés à ceux traités par 10 nM de bétaméthasone, un médicament anti-inflammatoire. les activités de gastroprotection et anti-ulcérogène de l'extrait MeOHGCM6 ont été examinés par l'alimentation des rats avec des extraits MeOHGCM6 allant de 2,5 à 500 mg /kg de poids corporel (de poids corporel) après induction des lésions gastriques. La production de mucus et de suc gastrique, le pH du jus et non protéiques sulfhydryle gastriques (NP-SH) ont été déterminés et comparés à celui introduit par 20 mg /kg de poids corporel MS /MS Analyse: Résultats de l'oméprazole (OMP), un médicament anti-ulcère connu. Des extraits MeOHGCM6 a révélé la présence de méthyl-10-hydroxyphaeophorbide un
et 10-hydroxypheophytin un
, la chlorophylle connue des protéines et plusieurs molécules non identifiés. Le traitement avec 10 pg /ml d'extrait MeOHGCM6 lors de la différenciation des cellules U937 niveau de réponse de TNF-α et du TNF-α et IL-6 a inhibé significativement l'expression génique. L'effet inhibiteur était comparable à celle de bétaméthasone. Aucun effet cytotoxique ont été enregistrés pour des cellules traitées avec 10 pg /ml d'extrait de MeOHGCM6. Les rats nourris avec MeOHGCM6 extraient à 500 mg /kg de poids corporel a montré réduite absolue taille des lésions gastriques induites par l'éthanol par > 99% (p
< 0,05). Cet effet protecteur était comparable à celle conférée par OMP. Le pH du mucus gastrique a diminué de façon dose-dépendante de 5,51 à 3,82 et il y avait une augmentation significative des concentrations NP-SH.
Conclusions: Résultats de l'étude, suggèrent que la spectrométrie de masse standardisé extrait méthanolique de Gracillaria
changii possède des propriétés anti-inflammatoires, gastroprotective et anti-ulcérogène. Un examen plus approfondi du principe actif de l'extrait et son mécanisme d'action est justifiée dans le futur.
Mots-clés
Anti-inflammatoire Anti-ulcérogène Cytokines bétaméthasone oméprazole Seaweeds Ulcère Contexte
gastroprotectrice Gracilaria changii
Inflammation est une caractéristique majeure de nombreuses maladies. Elle est caractérisée par un complexe d'interaction orchestrée entre les médiateurs de l'inflammation et des cellules inflammatoires dirigées vers l'élimination des irritants et la guérison des blessures des tissus [1, 2]. L'inflammation est un mécanisme important de défense de l'hôte. Une inflammation qui se produit dans la muqueuse du tractus gastro-intestinal, cependant, provoque un ulcère gastro-intestinal [3]. ulcère gastro-intestinale est un trouble majeur commun du système digestif qui affecte des millions d'Américains et beaucoup d'autres dans le monde entier [4]. La cause la plus fréquente de la maladie de l'ulcère gastro-intestinal sont l'infection par Helicobacter pylori
(H. pylori
) [5] et l'utilisation à long terme de médicaments anti-inflammatoires non stéroïdiens (AINS) comme l'aspirine et l'ibuprofène [6]. L'avènement des contrôles antibiotiques contre H. pylori
a considérablement réduit le nombre de cas d'ulcère gastro-intestinaux dans les pays développés [7]. Cependant, la maladie est encore élevé dans d'autres pays et la maladie causée par l'utilisation d'AINS est encore un problème de santé majeur dans les pays développés [6, 7] Le traitement de. l'inflammation en général, vise à inhiber l'une ou l'autre l'activité des cellules inflammatoires ou en inhibant la production de médiateurs inflammatoires [8]. Ce dernier peut être réalisé en utilisant des médicaments tels que les AINS et les corticoïdes [9]. Le traitement de l'ulcère gastro-intestinal en général, vise à éliminer soit l'infection de H. pylori ou en réduisant et en inhibant les niveaux de production d'acide gastrique responsables de l'érosion de la couche protectrice gastro-intestinale [10, 11]. médicaments de protection Ce dernier peut être accompli en utilisant des médicaments tels que l'histamine (H 2) bêtabloquants, inhibiteurs de la pompe d'acide et de la muqueuse [9]. Cependant, divers effets secondaires de l'utilisation à long terme de ces médicaments ont été décrits [9]. En outre, anti-inflammatoire et anti-ulcérogène sont principalement utilisés pour soulager les symptômes de la maladie, sans pour autant traiter ou à prévenir les processus inflammatoires et ulcérigènes.
Le développement de médicaments anti-inflammatoires et anti-ulcérogène a récemment mis l'accent sur la découverte l'application favorable des extraits de plantes dérivées de plantes qui sont puissants et plus sûrs à utiliser. Les algues ont trouvé de plus en plus en abondance au large des zones côtières de nombreuses régions du monde représentent un potentiel encore inexploité énorme pour une nouvelle source de produits thérapeutiques [12, 13]. Les algues rouges par exemple, a été rapporté contenir des composés actifs qui peuvent être utiles pour atténuer l'inflammation du tube digestif [14], prévenir ou traiter les ulcères gastriques et les cancers causés par le stress oxydatif [15, 16], inhibent les activités inflammatoires en supprimant la production de médiateurs inflammatoires [17-19] et induisent l'apoptose de cellules cancéreuses dans l'estomac [20] et du côlon [21]. Les composés naturels issus des algues comestibles pourrait être plus sûr à utiliser comme anti-inflammatoire et gastrique thérapeutique anti-ulcérogène comme ils ont été pris comme nourriture et utilisée en médecine traditionnelle depuis des temps immémoriaux [13].
Les algues rouges, Gracilaria
changii (Xia et Abbott) Abbott, Zhang et Xia a trouvé de plus en plus large des zones côtières de la Malaisie représente une source locale potentielle de cette thérapeutique d'origine naturelle. À l'heure actuelle, les algues sont récoltées commercialement seulement pour sa teneur en agar colloïdal et comme spécialités alimentaires locales. Ces algues sont largement appliquées comme la médecine populaire pour le traitement de diverses affections, y compris l'inflammation et des maladies gastriques. La présente étude vise à évaluer les activités potentielles anti-inflammatoires, gastroprotective et anti-ulcérogène de ces algues rouges malaisienne, Gracilaria changii
. Méthodes
Algues extraire la préparation
Gracilaria changii
(Xia et Abbott) Abbott, Zhang et Xia ont recueilli de l'eau côtière de Morib, Selangor, Malaisie (N2 ° 44 '908 ", E101 ° 26' 590") à la fin Février 2003 [22-24]. Les algues ont été identifiées par le professeur Dr. Phang Siew Moi, directeur de l'Institut des sciences océaniques et de la Terre, l'Institut des sciences biologiques, Faculté des Sciences, Université de Malaya, où les spécimens de ont été maintenus (herbarium pas. PSM 6320 et PSM 6321 ). Les algues sont lavées dans l'eau de mer stérile avec un rinçage final dans de l'eau distillée stérile comme décrit précédemment [22]. Les algues ont ensuite été soniquées dans un sonicateur de bain d'eau et conservés à -70 ° C. extrait méthanolique de Gracilaria
changii (extrait MeOHGCM6) a été préparé à l'Université de Malaisie Terengganu (UMT) conformément aux méthodes décrites [25]. L'extrait MeOHGCM6 a été maintenue à -20 ° C avant utilisation.
MeOHGCM6 extrait
analyse du profil de l'extrait MeOHGCM6 a été réalisée sur un Shimadzu chromatographie liquide ultra-rapide (UFLC) système équipé de réseau de photodiodes ultraviolet (UV PDA ) détecteur et temps de piège à ions de vol (TOF) spectromètre de masse (Shimadzu, Japon). La séparation a été réalisée sur une colonne Waters Xbridge C18 (50 mm x 2,1 mm, diamètre des particules de 2,5 microns) (Eau, USA) à 40 ° C. La phase mobile consistait en eau [0,1% d'acide formique (BDH Laboratory Supplies, Angleterre)]: acétonitrile (BDH Laboratory Supplies, Angleterre) (acide formique à 0,1%) à un débit de 0,50 ml /min avec un volume d'injection de 10 pi . Mode ionisation (ESI) électrospray avec commutation positive /négative et référence externe a été utilisé pour la spectrométrie de masse (MS). Le Dictionnaire des produits naturels (CRC Press) avec MS spectres de haute résolution et de l'information structurelle a été utilisée pour analyser les spectres d'ions positifs et négatifs ainsi que des informations MS /MS pour l'identification des composants similaires.
Lignée cellulaire promonocytaire humain (cellules U937)
cellules U937 ont été achetés chez American type Culture Collection (CIFA, USA) et cultivées dans Roswell Park Memorial Institute-1640 (milieu RPMI-1640) (FlowLab, Australie) [additionné de 1% de 10 mM d'acides aminés non essentiels (NEAA) (FlowLab, Australie) et 1% de mM L-glutamine 10 (L-Glu) (FlowLab, Australie)] contenant 10% de sérum inactivé à la chaleur fœtal bovin (FBS) (FlowLab, Australie). Les cellules ont été incubées à 37 ° C dans un incubateur humidifié avec 5% de CO 2.
Différenciation des cellules U937 U937
cellules ont été ensemencées dans des plaques à 96 puits de culture cellulaire (Falcon, USA) à une densité de 2 × 10 4 cellules /puits avec du milieu RPMI-1640 contenant 2% de FBS et maintenu à 37 ° C dans un incubateur humidifié avec 5% de CO 2. Le jour, le milieu contenant le phorbol 12-myristate 13-acétate suivant (PMA) (Sigma-Aldrich, Etats-Unis) à des concentrations allant de 0 à 50 nm ont été ajoutés aux cellules monocytaires U937 pour induire la différenciation 24 et 48 heures. Milieu ne contenant que des diluants PMA [diméthylsulfoxyde (DMSO), la solution (Sigma-Aldrich, USA)] ont été ajoutés en parallèle et utilisé en tant que contrôle du véhicule. A la fin du point de temps indiqué, les cellules ont été évaluées pour la surface cellulaire de macrophage expression du marqueur spécifique de la différenciation et de la viabilité cellulaire. De l'expression de la CD11b, un marqueur de surface cellulaire de macrophages spécifiques de la différenciation a été déterminée par coloration des cellules comme décrit précédemment [26 27]. La viabilité cellulaire a été déterminée en utilisant le colorant bleu trypan (Sigma, USA) un dosage d'exclusion comme décrit précédemment [28].
Dosage
cellules U937 de cytotoxicité ont été ensemencées dans des plaques à 96 puits de culture de cellules à une densité de 2 x 10 4 cellules /puits avec du milieu RPMI-1640 contenant 2% de FBS et maintenus à 37 ° C dans un incubateur humidifié avec 5% de CO 2. Le jour, milieu suivant contenant MeOHGCM6 extrait (à des concentrations allant de 0-100 pg /ml) et de la bétaméthasone (Sigma, USA) (à des concentrations allant de 0-100 nM) ont été ajoutés. Le milieu contenant seulement extraire le MeOHGCM6 et diluants bétaméthasone [éthanol (EtOH) (BDH Laboratory Supplies, Angleterre) et le DMSO, respectivement] ont été ajoutés en parallèle et utilisé comme contrôle du véhicule. Un post-traitement de jour, le taux de prolifération des cellules U937 a été déterminée en utilisant le kit de prolifération cellulaire CellTiter 96® non radioactifs (Promega, USA) suivant strictement le protocole recommandé par le fabricant.
MeOHGCM6 extraire le traitement des cellules U937
U937 cellules ont été ensemencées dans 24 puits de plaques de culture cellulaire (Falcon, USA) à une densité de 2 x 10 5 cellules /puits avec du milieu RPMI-1640 contenant 2% de FBS et incubées à 37 ° C dans un incubateur humidifié avec 5% CO 2. Le jour suivant, les cellules U937 ont été induites à se différencier avec 10 nM de PMA pendant 24 heures. Au cours de la différenciation, les cellules U937 ont été traitées avec l'extrait ou MeOHGCM6 bétaméthasone à la concentration physiologique. 0, 8, 16 et 24 heures après le traitement, le surnageant et les cellules ont été récoltées et analysées pour le TNF-α niveau de réponse et de TNF-α et d'IL-6 'expression génique.
Niveau de réponse de TNF-α
TNF- niveau α a été mesurée en utilisant le BD OptEIA ™ Human TNF (TNF-α) trousse ELISA II (BD Biosciences, USA) selon le protocole du fabricant.
TNF-α et d'IL-6
l'expression du gène de l'ARN total cultures cellulaires ont été isolés en utilisant le TRI Reagent® (Molecular Research Centre, Inc., USA) et traité avec de la DNase (Promega, USA). L'ARN a été transcrit en inverse (ADNc) en utilisant la Superscript II Reverse Transcriptase ™ (Invitrogen, Etats-Unis). L'ADNc a ensuite été utilisé pour effectuer la PCR quantitative en temps réel en utilisant SYBR Green PCR master mix (Qiagen, Allemagne) sur l'ADN Engine Opticon II® (MJ Research, Bio-Rad, USA) comme décrit précédemment [29]. Les amorces oligonucléotidiques utilisées étaient 5'AAGAGTTCCCCAGGGACCTC avant et arrière 5'GCTTGAGGGTTTGCTACAAC pour le TNF-α; transmettre 5'GAAAGGAGACATGTAACAAG et inverser 5'CCAGGCAAGTCTCCTCATTG pour l'IL-6; Animaux
rats femelles adultes Sprague-Dawley de transmettre et de 5'GCGAGAAGATGACCCAGATC et inverse 5'GGATAGCACAGCCTGGATAG pour la bêta-actine (β-actine) (référence interne). Âgés de 7 à 8 semaines et pesant 160-200 g ont été utilisé pour l'étude. Le protocole de l'expérimentation animale a été approuvé par le Comité institutionnel pour l'éthique dans l'expérimentation animale de l'Université de Malaya [Numéro d'agrément: MP /08/06/2010 /SMH (R)]. Les animaux ont été obtenus à partir de l'Université Putra Malaysia (UPM). Les animaux ont été logés individuellement dans des cages avec des fonds de fil à larges mailles pour empêcher la coprophagie. Ils ont été gardés dans une pièce à température contrôlée qui a été bien aérée, avec de la nourriture et de l'eau, sur un 12 heures cycle lumière /obscurité pendant toute l'étude. Tous les rats ont été privés de nourriture pendant 48 heures, mais ont eu libre accès à l'eau potable jusqu'à 2 heures avant de les soumettre aux ulcerogens.
Lésions gastriques induites par EtOH-
Les rats ont été divisés au hasard en 7 groupes, chaque groupe comprenant de 6 rats. Le groupe 1 a été administré avec 10% de Tween 20 (diluants extrait) (BDH Laboratory Supplies, Angleterre) et a servi de groupe témoin négatif. Le groupe 2 a reçu 500 mg /kg de poids corporel de l'extrait de plante sans rapport avec l'extrait équivalent MeOHGCM6 préparé de manière similaire en parallèle comme extrait MeOHGCM6 pour servir de l'extrait non spécifique plante (NSPE) groupe témoin. Groupe 3 a été traité avec OMP (Chemical Company de Malaisie, Malaisie) à 20 mg /kg de poids corporel et a servi de groupe témoin de traitement positif. Le reste du groupe 4, 5, 6 et 7 a reçu 4 concentrations différentes de l'extrait MeOHGCM6 allant de 2,5 à 500 mg /kg de poids corporel, respectivement. Après 30 minutes de pré-traitement, tous les animaux ont été administrés avec de l'EtOH absolu par voie orale. Une heure après l'administration, les animaux ont été sacrifiés par eux-dosage au-dessus de l'éther diéthylique (BDH Chemicals Ltd., Angleterre). L'abdomen du rat a été disséquée et l'œsophage le plus proche du cardia et de l'estomac distendu sur le sphincter du pylore a été immédiatement liée à un nœud en utilisant une chaîne pour éviter les fuites du contenu gastrique. L'estomac a été rapidement retiré et immergé dans l'eau.
Mesure de la sécrétion gastrique
Le contenu gastrique de chaque estomac de rat a été aspiré et doucement raclé à l'aide d'une spatule. Le suc gastrique contenant des particules de nourriture a été mis au rebut. Le mucus gastrique récolté a été pesé en utilisant une balance électronique (Mettler Toledo, Suisse). La quantité de suc gastrique a été mesurée à l'aide d'un cylindre de mesure. Le pH du contenu gastrique a été mesurée en utilisant un pH-mètre numérique (Instruments Crison, SA, Espagne). L'évaluation des lésions gastriques brutes
Après la récolte, l'estomac a été immédiatement rincé avec une solution saline et examinée sous un microscope à dissection (1,8 x) avec une grille oculaire carré. La partie glandulaire de l'estomac a été évaluée pour la formation d'ulcère. La zone ulcérée totale (UA) des lésions hémorragiques pour chaque estomac a été mesurée par plannimetry (mm 2) et le pourcentage d'inhibition a été calculé selon la formule suivante: Inhibition %
=
contrôle UA> -
traités /
UA
contrôle
UA ×
100
Détermination de la production de composés sulfhydryle non protéiques (NP-SH)
niveau de la muqueuse gastrique NP-SH a été mesuré comme décrit précédemment [30] avec des modifications mineures. En bref, l'estomac glandulaire ont été pesés et homogénéisés dans des tubes contenant de l'acide 0,02 glacée M éthylènediaminetétraacétique (EDTA) (GibcoBRL Life Technologies, Etats-Unis) (pH 8,9). Des aliquotes des homogénats ont été mélangés avec de l'eau distillée et de 50% d'acide trichloroacétique (Sigma Chemical Co., USA). Le mélange a été mis en incubation avec agitation constante pendant 10 minutes à 4 ° C, puis centrifugée à 3000 x g pendant 15 minutes. Le mélange a ensuite été analysé pour déterminer le niveau de NP-SH en utilisant un kit de dosage du glutathion (Sigma Chemical Co., USA) selon le protocole du fabricant. L'analyse statistique

Toutes les données sont exprimées en moyenne ± écart-type (SD) ou médiane (25% et 75% quartile) à partir de deux ou trois expériences indépendantes pour des études anti-inflammatoires et sept expériences indépendantes pour les études de gastroprotection et anti-ulcérogène. ANOVA (analyse unidirectionnelle de la variance à deux voies et une analyse de la variance) a été utilisée pour la comparaison entre les groupes et pour rendre compte de l'importance statistique »p
» par rapport au groupe témoin. La valeur de p
< 0,05 a été considérée comme statistiquement significative. Toutes les analyses statistiques ont été effectuées en utilisant le GraphPad Prism 4.0 Software (USA) et SPSS, version 16.0 Software (SPSS Inc, Chicago), respectivement de. Résultats
standardisées MeOHGCM6 extraire le profil
LC /MS analyse des différents lots MeOHGCM6 d'extrait ont été effectuées pour garantir la reproductibilité et l'uniformité des méthodes d'extraction. Lot n ° 1 et 2 de l'extrait MeOHGCM6 utilisé dans l'étude présentaient des profils de spectres de masse très similaires et la quantité des grandes masses (figure 1A-C). L'analyse des spectres et comparaison avec le Dictionnaire des produits naturels, CRC Press a identifié les masses distinctifs 457,405, 645,280 et 887,579. La masse identifiée dans le spectre d'ions positifs de m /z 457,405, avait des fragments de 398,327 (pic de base), 380,316 et 158,082. La perte neutre de 59,077 masse était peut-être une indication de perte de triméthylamine. Ceci suggère que le composé peut contenir un groupement triméthylammonium. Les MS et MS /MS données à haute résolution ne pouvaient pas identifier définitivement tous les composés connus du Dictionnaire des produits naturels. Les masses m /z 645 et 887, cependant, ont montré une association distincte à deux chlorophylles connus, méthyl-10 hydroxyphaeophorbide un
et 10 Hydroxypheophytin un
avec les absorbances UV appropriées observées dans l'analyse de PDA (Tableau 1 ). Figure 1 profilage des différents lots d'extrait MeOHGCM6. Mode ESI avec commutation positif /négatif et référence externe a été utilisé pour le MS en utilisant un système Shimadzu UFLC. Les spectres totale d'ions positifs analysé pour l'identification des éléments similaires des deux lots différents de l'extrait MeOHGCM6 utilisé dans l'étude. (A) MeOHGCM6 extrait (lot 1; M6-1). (B) d'extrait MeOHGCM6 (Lot 2; M6-2). (C) Comparaison de l'intensité des masses les plus abondantes des deux MeOHGCM6 extract lots utilisés dans l'étude.
Tableau 1 Structure des identifications de la masse la plus importante présente dans l'extrait MeOHGCM6 utilisant LC /MS de masse (ion)
Trouvé dans le lot
ID possible
417,298
1, 2
contaminant Très probablement
457,405 *
1, 2
Unidentified
461,326
1, 2
contaminant Très probablement
505,353
1, 2
contaminant Très probablement
573,256
1, 2
Unidentified 645,280
1, 2
Methyl 10-hydroxyphaeophorbide un
743,636
1, 2
Unidentified
887,579
1, 2
10 Hydroxypheophytin a
Dictionnaire des produits naturels, CRC Press avec MS spectres haute résolution ont été utilisés pour analyser les spectres totale d'ions positifs pour l'identification des éventuels constituants chimiques.
* MS /MS (intensités relatives%) 457,405 398,327 → ( 100%), 380,316 (50%), 158,082 (40%).
marqueur de surface cellulaire macrophage expression spécifique à la différenciation sur les cellules U937
cellules différentiées U937 se distinguent par l'expression des monocytes /macrophages lignée spécifique CD11b , une protéine marqueur de surface [26]. Dans notre étude, l'expression de la CD11b a été marquée par un marquage bleu brunâtre intense sur la surface cellulaire [27]. L'expression de la CD11b a été fortement augmentée lorsque les cellules U937 ont été induites à se différencier avec l'augmentation de la concentration de PMA (1, 10 et 50 nM) (figure 2, figure 3A). La constatation suggère que le traitement avec 10 ou 50 nM de PMA pendant 24 heures ou 1 nM de PMA pendant 48 heures, les cellules différenciées U937 était bien supérieure à 50% de la culture cellulaire. Figure 2 Expression de la surface cellulaire macrophage marqueur spécifique de la différenciation sur les cellules monocytaires U937 différenciées. des cellules monocytaires U937 ont été induites à se différencier avec (A) 0 nM de PMA pendant 24 heures; (B) 0 nM de PMA pendant 48 heures; (C), 1 nM de PMA pendant 24 heures; (D) 1 nM PMA pendant 48 heures; (E) 10 nM de PMA pendant 24 heures; (F), 10 nM de PMA pendant 48 heures; (G), 50 nM de PMA pendant 24 heures et (H), 50 nM de PMA pendant 48 heures. Les cellules ont été colorées en utilisant une coloration immunohistochimique pour déterminer la présence de CD11b, un marqueur de surface cellulaire macrophage. cellules monocytaires U937 Différenciation ont été identifiés par la coloration au bleu brunâtre intense sur la surface cellulaire des cellules différenciées. Les cellules ont été consultés à 20 × grossissements sous fond clair à l'aide d'un microscope inversé et photographié avec un appareil photo de Nikon D70 (Nikon, Japon). Un ensemble archétypal de photographies à partir de trois expériences distinctes sont présentées.
Figure 3 U937 spécifiques Différenciation cellules monocytes macrophages surface cellulaire expression du marqueur et la viabilité cellulaire détermination. des cellules monocytaires U937 ont été induites à se différencier avec différentes concentrations de PMA pendant 24 heures et 48 heures. (A) Les pourcentages de cellules différenciées ont été marqués par la présence de CD11b sur la surface cellulaire. (B) Les pourcentages de cellules viables ont été marqués en utilisant un dosage d'exclusion au bleu trypan. Le pourcentage de cellules différenciées ou des cellules viables par le total est le même avant l'expérience en utilisant différentes concentrations de PMA et de la période d'incubation. Les données sont présentées sous forme de moyenne ± E.T. à partir de trois expériences indépendantes avec '*', p
< 0,05 représentent différence significative par rapport au groupe qui ne sont pas induites à se différencier.
Détermination de la viabilité cellulaire sur des cellules U937 Les cellules différenciées
U937 différentiées viables ont été évaluées en utilisant le test d'exclusion du colorant bleu trypan. la viabilité des cellules U937 ont montré une réduction dose-dépendante significative du pourcentage de cellules viables lorsqu'elles sont induites à se différencier avec 1, 10 et 50 nM de PMA (figure 3B). La constatation suggère que 90% des cellules U937 différentiées étaient toujours viables suite au traitement avec 1 ou 10 nM de PMA pendant 24 heures ou 1 nM de PMA pendant 48 heures de. Cytotoxicité de MeOHGCM6 extrait sur les cellules U937
Les effets cytotoxiques de l'extrait MeOHGCM6 bétaméthasone et sur les cellules U937 ont été déterminées en calculant le taux de prolifération cellulaire. cellules U937 traitées avec le MeOHGCM6 extrait à 0,05, 0,5, 1 et 5 ug /salves prolifératives ml exposées de 117.39% (108,48%, 122,10%), 152.04% (149,36%, 154,72%) (p
< 0,05) , 145,60% (137,48% 149,11%) (p
< 0,05) et 118,49% (112,01% 133,28%), respectivement (figure 4A). Le traitement avec l'extrait MeOHGCM6 à 10 pg /ml a réduit le taux de prolifération des cellules à 87,00% (82,43%, 89,62%). les cellules U937 traitées avec la betamethasone présentent une réduction dose-dépendante significative de leur taux de prolifération (figure 4B). A des concentrations plus faibles de bétaméthasone (0,1, 1, 5 et 10 nm), le taux de prolifération des cellules a été 110,35% (92,20% 115,83%) 113,75% (89,56% 122,98%), 94,59% (85,56% 101,93%) et 80,48% (77,78% 110,48%), respectivement. Figure 4 Effets de la cytotoxicité des différentes concentrations d'extrait MeOHGCM6 et bêtaméthasone sur les cellules monocytaires U937. Le taux de cellules monocytaires U937 traitées avec des concentrations de (A) extrait MeOHGCM6 et (B) augmenter la prolifération de bétaméthasone a été déterminée sur une période de 24 heures en effectuant un test MTT. Le pourcentage de la prolifération cellulaire est relatif au nombre de cellules ensemencées avant l'administration de différentes doses d'extrait MeOHGCM6 et bêtaméthasone. Les concentrations d'extrait MeOHGCM6 qui ont provoqué 30% (G130), 50% (G150) et 70% (G170), l'inhibition de la prolifération cellulaire ont été extrapolées à partir de la courbe (indiquée par une flèche). Effets des résultats ont été exprimés comme la moyenne (25% et 75% quartile) à partir de deux expériences indépendantes. MeOHGCM6 extrait de traitement au niveau de la réponse du TNF-α lors de la différenciation des cellules U937
Les effets des traitements sur extraient MeOHGCM6 la régulation du niveau de réponse de TNF-α au cours de la différenciation des cellules U937 a été étudiée en utilisant ELISA. Le niveau de réponse du TNF-α a atteint un niveau maximal de 43,28 ± 5,15 pg /ml, 8 heures, lorsque les cellules U937 ont été induites à se différencier (figure 5A). En présence de 10 pg /ml d'extrait MeOHGCM6 lors de la différenciation des cellules U937, le taux de réponse de TNF-α significativement diminué jusqu'à 8 heures [0,14 ± 0,28 pg /ml (p
< 0,001)] et a été comparable à celle observée en présence de betamethasone [0,28 ± 0,56 pg /ml (p
< 0,001)]. La figure 5 MeOHGCM6 extrait de traitement au niveau de la réponse du TNF-α et du TNF-α et d'IL-6 'expression génique lors de la différenciation des cellules monocytaires U937. Les cellules monocytes U937 ont été induites à se différencier avec 10 nM PMA. Au cours de la différenciation, les cellules monocytes U937 ont été traités avec l'extrait MeOHGCM6. (A) Le niveau de réponse de TNF-α ont été quantifiés en utilisant ELISA. (B) les niveaux d'expression (C), l'IL-6 gene de TNF-α et ont été quantifiés en utilisant la qRT-PCR. Les résultats ont été exprimés par la moyenne ± E.T. à partir d'essais en quadruple.
Effets de MeOHGCM6 extrait de traitement sur le TNF-α et d'IL-6 l'expression du gène au cours de la différenciation des cellules U937 The régulation du TNF-α et d'IL-6 par MeOHGCM6 Extrait de traitement dans les cellules U937 la différenciation a été étudiée plus au niveau de l'expression des gènes en utilisant qRT-PCR. Le niveau d'expression du gène de TNF-α a atteint un pic au bout de 6 heures (3,16 ± 0,48 copies /actine) de la différenciation des cellules U937 (figure 5B). TNF-α niveau d'expression du gène a diminué au cours des 6 premières heures [± 0.52 0.28 copies /actine (p
< 0,001)] de la différenciation des cellules U937, en présence de 10 pg /ml d'extrait MeOHGCM6. La diminution du niveau d'expression du gène de TNF-α de cellules U937 lors de la différenciation lorsqu'ils sont traités avec 10 pg /ml MeOHGCM6 était comparable ou supérieure à celle des résultats de traitement avec 10 nM de bétaméthasone [0,55 ± 0,42 copies /actine (p
< 0,001)]. Le niveau d'expression du gène IL-6 a montré une augmentation significative et a atteint un pic à 0,68 ± 0,09 copies /actine après 12 heures de la différenciation des cellules U937 (Figure 5C). Diminution du gène niveau d'expression de l'IL-6 a été observée pour être de 0,10 ± 0,01 copies /actine, 0,23 ± 0,02 copies /actine (p
< 0,01), 0,37 ± 0,04 copies /actine (p
< 0,001 ) et 0,45 ± 0,05 copies /actine (p
< 0,001), à 3, 6, 9 et 12 heures, respectivement, lorsque les cellules U937 ont été traitées au cours de différenciation avec 10 ug /ml d'extrait MeOHGCM6. L'inhibition de l'IL-6 niveaux d'expression des gènes en présence de l'extrait MeOHGCM6 était comparable à celle de bétaméthasone.
Les effets du traitement prophylactique de MeOHGCM6 extrait sur le contenu gastrique des rats après une lésion induite par EtOH muqueuse gastrique aiguë
mucus gastrique la sécrétion, le volume de suc gastrique et le mucus gastrique de pH ont été déterminés à partir du contenu gastrique de l'estomac du rat prétraité avec un extrait MeOHGCM6 suivant EtOH alimentation. 2,45 ± 0,25 g de mucus gastrique et 1,75 ± 0,20 ml de suc gastrique ont été récupérés à partir de l'estomac de rats nourris avec seulement le diluant à base d'extrait (Tableau 2). 1,54 ± 0,31 g de muqueuse gastrique et de 0,96 ± 0,25 ml de suc gastrique et de 1,68 ± 0,19 g de muqueuse gastrique et de 0,96 ± 0,16 ml de suc gastrique ont été récupérés à partir de rats prétraités avec 250 et 500 mg /kg de poids corporel de MeOHGCM6 extraire, respectivement. En comparaison, 2,31 ± 0,42 g de mucus gastrique et 1,15 ± 0,36 ml suc gastrique a été récupéré à partir de rats pré-traités avec 20 mg /kg b.w OMP. 2,75 ± 0,49 g de mucus gastrique et 1,75 ± 0,28 ml de suc gastrique ont été récupérés à partir de rats nourris avec des extraits de plantes sans rapport préparé de manière similaire qui a servi de contrôle NSPE. Tous les auteurs ont lu et approuvé le manuscrit final.

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