-efectos anti inflamatorios, protectores gástricos y anti-ulcerogénicos de algas rojas Gracilaria changii (Gracilariales, Rhodophyta) extraer

-efectos anti inflamatorios, protectores gástricos y anti-ulcerogénicos de algas rojas Gracilaria changii gratis (Gracilariales, Rhodophyta) extraer
Resumen Antecedentes

Gracilaria changii gratis (Xia et Abbott) Abbott, Xia Zhang et , un alga roja se encuentran comúnmente en las zonas costeras de Malasia se utiliza tradicionalmente para alimentos y para el tratamiento de diversas enfermedades incluyendo la inflamación y las enfermedades gástricas. El objetivo del estudio fue investigar antiinflamatorio, gastroprotector y anti-ulcerogénico actividades de una espectrometría de masas estandarizada de extracto metanólico de Gracilaria changii
.
Métodos
extracto metanólico de Gracilaria changii gratis (extracto de MeOHGCM6 ) se preparó y estandarizada mediante espectrometría de masas (MS). actividades antiinflamatorias del extracto MeOHGCM6 se examinaron mediante el tratamiento de células U937 durante su diferenciación con 10 g de extracto de MeOHGCM6 /ml. factores-α de necrosis tumoral (TNF-α) nivel de respuesta y TNF-α y la interleucina-6 (IL-6) la expresión de genes se monitorizaron y se compararon con la tratada por 10 betametasona nM, un fármaco anti-inflamatorio. actividades gastroprotectores y anti-ulcerogénicos de extracto MeOHGCM6 fueron examinados por la alimentación de ratas con extracto MeOHGCM6 de 2,5 a 500 mg /kg de peso corporal (peso corporal) después de la inducción de las lesiones gástricas. La producción de moco y el jugo gástrico, pH de los jugos y no proteicos sulfhidrilos gástricas (NP-SH) niveles se determina y compara con que se alimentaba por 20 mg /kg de peso corporal omeprazol (OMP), un conocido fármaco anti-úlcera.
Resultados
MS /MS análisis de los extractos MeOHGCM6 reveló la presencia de metil-10 hydroxyphaeophorbide un
y 10 hydroxypheophytin un
, clorofila conocida proteínas y varias moléculas no identificados. El tratamiento con 10 mg de extracto de MeOHGCM6 /ml durante la diferenciación de las células U937 nivel de respuesta a TNF-α y TNF-α y el gen de la IL-6 expresión significativamente inhibido. El efecto inhibidor fue comparable a la de betametasona. No se registraron efectos citotóxicos para las células tratadas con el extracto MeOHGCM6 10 mg /ml. Las ratas alimentadas con MeOHGCM6 extracto a 500 mg /kg de peso corporal demostraron una reducción de tamaños absolutos lesión gástrica inducida por etanol > 99% (p
< 0,05). Este efecto protector fue comparable a la conferida por OMP. El pH de la mucosa gástrica se redujo de manera dependiente de la dosis desde 5,51 hasta 3,82 y no hubo un aumento significativo en las concentraciones de NP-SH.
Conclusiones
Resultados del estudio, sugieren que la espectrometría de masas estandarizada extracto metanólico de Gracillaria changii
posee propiedades anti-inflamatorias, gastroprotectores y anti-ulcerogénicos. Un examen más detallado del componente activo del extracto y su mecanismo de acción se justifica en el futuro.
Palabras clave
anti-inflamatorio anti-ulcerogénico changii gastroprotectores Gracilaria
Antecedentes Las citoquinas Betametasona Omeprazol Las algas marinas Úlcera
La inflamación es una característica importante de muchas enfermedades. Se caracteriza por un complejo de interacciones entre orquestados mediadores de la inflamación y células inflamatorias dirigidas hacia la eliminación de irritantes y la curación de lesiones de tejidos [1, 2]. La inflamación es un importante mecanismo de defensa del huésped. La inflamación que se produce en la mucosa del tracto gastrointestinal, sin embargo, causa úlcera gastrointestinal [3]. úlcera gastrointestinal es un trastorno común importante del sistema digestivo que afecta a millones de estadounidenses y muchos más en todo el mundo [4]. La causa más común de la enfermedad de úlcera gastrointestinal, son la infección con Helicobacter pylori gratis (H. pylori
) [5] y el uso a largo plazo de los fármacos anti-inflamatorios no esteroideos (AINE) como la aspirina y el ibuprofeno [6]. El advenimiento de los controles a los antibióticos contra H. pylori
ha reducido significativamente el número de casos de úlcera gastrointestinal en los países desarrollados [7]. La enfermedad, sin embargo, sigue siendo alta en otros países y la enfermedad causada por el uso de AINE sigue siendo un importante problema de salud en los países desarrollados [6, 7].
El tratamiento para la inflamación en general, está dirigido a cualquiera de inhibición de la actividad de las células inflamatorias o la inhibición de la producción de mediadores de la inflamación [8]. Cuanto más tarde se puede lograr usando drogas tales como los AINE y corticosteroides [9]. El tratamiento de la úlcera gastrointestinal en general, está dirigido a la eliminación de cualquiera de H. pylori
infección o la reducción y la inhibición de los niveles de producción de ácido gástrico responsables de la erosión de la capa de protección gastrointestinal [10, 11]. Cuanto más tarde se puede lograr usando drogas tales como la histamina (H 2) bloqueantes, inhibidores de la bomba de ácido y de la mucosa medicamentos de protección [9]. Sin embargo, se han descrito varios efectos secundarios del uso a largo plazo de estos fármacos [9]. Además, anti-inflamación y fármacos anti-ulcerogénicos se utilizan principalmente para aliviar los síntomas de la enfermedad sin tener que tratar o prevenir los procesos inflamatorios y ulcerogénicos.
Desarrollo de fármacos anti-inflamatorios y anti-ulcerogénicos se ha centrado recientemente en el descubrimiento la aplicación favorable de extractos de hierbas derivados de plantas que son potentes y más seguro de usar. Las algas encuentra creciendo en abundancia fuera de las zonas costeras de muchas partes del mundo representan un enorme potencial aún sin explotar para la nueva fuente de la terapéutica [12, 13]. El alga roja, por ejemplo, se ha informado que contienen compuestos activos que pueden ayudar a mejorar la inflamación del tracto alimentario [14], prevenir o tratar las úlceras gástricas y los cánceres causados ​​por el estrés oxidativo [15, 16], inhibir las actividades inflamatorias mediante la supresión de la producción de mediadores de la inflamación [17-19] e inducir la apoptosis de células de cáncer en el estómago [20] y de colon [21]. compuestos naturales derivados de las algas comestibles podría ser más seguro para ser utilizado como anti-inflamatorio y anti-gástrica terapéutica ulcerogénicos ya que se han tomado como alimento y se utiliza en la medicina tradicional desde tiempos inmemoriales [13]. comentario El alga roja, Gracilaria changii gratis (Xia et Abbott) Abbott, Xia Zhang y encontrar cada vez mayor fuera de las zonas costeras de Malasia representa una fuente potencial local de este terapéuticos derivados de la naturaleza. En la actualidad, las algas se cosechan comercialmente sólo por su contenido de agar coloidal y como delicias locales de alimentos. Estas algas se aplican ampliamente como medicina popular para el tratamiento de diversas enfermedades incluyendo la inflamación y las enfermedades gástricas. El presente estudio tiene como objetivo evaluar las posibles actividades anti-inflamatorias, anti-gastroprotector y ulcerogénicos de estas algas rojas de Malasia, Gracilaria changii
.
Métodos
Extracto de algas preparación
Gracilaria changii gratis (Xia et Abbott) Abbott, Xia Zhang y se obtuvieron de las aguas costeras de Morib, Selangor, Malasia (N2 ° 44 '908 ", E101 ° 26' 590") a finales de febrero de 2003 [22-24]. Las algas fueron identificados por el Profesor Dr. Phang Siew Moi, director del Instituto de Ciencias del Mar y de la Tierra, Instituto de Ciencias Biológicas, Facultad de Ciencias, Universidad de Malasia, donde se mantuvieron las muestras de comprobación (herbario no. PSM PSM 6320 y 6321 ). Las algas se lavaron en agua de mar estéril con un enjuague final en agua destilada estéril como se describe anteriormente [22]. Las algas fueron luego se sonicaron en un sonicador de baño de agua y se mantuvieron a -70 ° C. extracto metanólico de Gracilaria changii gratis (extracto de MeOHGCM6) se preparó en la Universidad de Malasia Terengganu (UMT), de acuerdo con los métodos descritos [25]. El extracto MeOHGCM6 se mantuvo a -20 ° C antes de su uso.
MeOHGCM6 extraer
análisis del perfil del extracto MeOHGCM6 se llevó a cabo en un Shimadzu ultra-rápido de cromatografía líquida (UFLC) equipado con sistema de arreglo de diodos ultravioleta (UV PDA ) detector y el tiempo de trampa de iones de espectrómetro de vuelo (TOF) de masas (Shimadzu, Japón). La separación se realizó en una columna Waters XBridge C18 (50 mm x 2,1 mm, diámetro de partículas de 2,5 micras) (Agua, EE.UU.) a 40 ° C. La fase móvil consistió en agua [0,1% de ácido fórmico (BDH Laboratory Supplies, Inglaterra)]: acetonitrilo (BDH Laboratory Supplies, Inglaterra) (0,1% de ácido fórmico) a una velocidad de flujo de 0,50 ml /min con un volumen de inyección de 10 l . modo de ionización por electrospray (ESI) con conmutación positivo /negativo y la referencia externa se utiliza para la espectrometría de masas (MS). El Diccionario de Productos Naturales (CRC Press) con alta resolución MS espectros y la información estructural se utilizó para analizar los espectros de iones positivos y negativos junto con la información MS /MS para la identificación de componentes similares.
Línea celular promonocítica humana (células U937)
células U937 se adquirieron de la American Type Culture Collection (ATTC, EE.UU.) y se cultivaron en Roswell Park Memorial Institute-1640 (medio RPMI-1640) (Flowlab, Australia) [suplementado con 1% de 10 mM de aminoácidos no esenciales (NEAA) (Flowlab, Australia) y 1% de 10 mM de L-glutamina (L-Glu) (Flowlab, Australia)] que contiene 10% de suero inactivado por calor fetal bovino (FBS) (Flowlab, Australia). Las células se incubaron a 37 ° C en un incubador humidificado con 5% de CO 2.
Diferenciación de las células U937
U937 Las células se sembraron en placas de 96 pocillos de cultivo celular (Falcon, EE.UU.) a una densidad de 2 × 10 4 células /pocillo con medio RPMI-1640 que contenía FBS al 2% y se mantuvo a 37 ° C en un incubador humidificado con un 5% de CO 2. El siguiente día, que contiene medio de forbol 12-miristato 13-acetato (PMA) (Sigma-Aldrich, EE.UU.) a concentraciones que van desde 0 hasta 50 nM se añadieron a las células monocíticas U937 para inducir la diferenciación durante 24 y 48 horas. Medio que contiene sólo diluyentes PMA [dimetil sulfóxido (DMSO) solución (Sigma-Aldrich, EE.UU.)] se añadieron en paralelo y se utilizó como control del vehículo. Al final del punto de tiempo indicado, se evaluaron las células para la expresión de marcadores de superficie celular de macrófagos específicos de la diferenciación y la viabilidad celular.
Expresión de la CD11b, marcador de la superficie celular de macrófagos específicos de la diferenciación se determinó por tinción de las células como se describe anteriormente [26 , 27]. La viabilidad celular se determinó utilizando el colorante azul de tripano (Sigma, EE.UU.) ensayo de exclusión como se describe anteriormente [28]. Se sembraron
de citotoxicidad células U937 ensayo
en placas de cultivo celular de 96 pocillos a una densidad de 2 × 10 4 células /pocillo con medio RPMI-1640 que contiene 2% de FBS y se mantuvieron a 37 ° C en un incubador humidificado con 5% de CO 2. se añadieron los siguientes días, el medio que contiene extracto de MeOHGCM6 (en concentraciones que van desde 0 hasta 100 g /ml) y betametasona (Sigma, EE.UU.) (en concentraciones que van desde 0 hasta 100 nM). Medio que contiene sólo el extracto de MeOHGCM6 y diluyentes betametasona [etanol (EtOH) (BDH Laboratory Supplies, Inglaterra) y DMSO, respectivamente] se añadieron en paralelo y se utilizó como control del vehículo. Un día después del tratamiento, la tasa de proliferación de células U937 se determinó usando el kit de proliferación celular CellTiter 96® no radiactivo (Promega, EE.UU.) siguiendo estrictamente el protocolo recomendado por el fabricante.
MeOHGCM6 tratamiento con extracto de células U937 U937 células
se sembraron en placas de cultivo celular de 24 pocillos (Falcon, EE.UU.) a una densidad de 2 × 10 5 células /pocillo con medio RPMI-1640 que contiene 2% de FBS y se incubaron a 37 ° C en un incubador humidificado con 5% CO 2. El día siguiente, las células fueron inducidas a diferenciarse U937 con 10 nM de PMA durante 24 horas. Durante la diferenciación, las células U937 se trataron con el extracto MeOHGCM6 o betametasona a una concentración fisiológica. A 0, 8, 16 y 24 horas post-tratamiento, el sobrenadante y las células se recogieron y se ensayaron para el nivel de TNF-α respuesta y TNF-α e IL-6 expresión génica.
TNF-α nivel de respuesta
TNF- α nivel se midió usando el ™ TNF humano BD OptEIA (TNF-α) kit ELISA II (BD Biosciences, EE.UU.) de acuerdo con el protocolo del fabricante.
TNF-α e IL-6 expresión génica
ARN total de la se aislaron cultivos de células utilizando el TRI Reagent® (Molecular Research Centre, Inc., EE.UU.) y se trataron con ADNasa (Promega, EE.UU.). El ARN se transcribe inversa (ADNc) utilizando el superíndice ™ II Reverse Transcriptase (Invitrogen, EE.UU.). El cDNA se utilizó para realizar cuantitativa en tiempo real PCR utilizando SYBR Green PCR master mix (Qiagen, Alemania) en el ADN Engine Opticon II® (MJ Research, Bio-Rad, EE.UU.) como se describe anteriormente [29]. Los cebadores de oligonucleótidos utilizados fueron hacia adelante y atrás 5'AAGAGTTCCCCAGGGACCTC 5'GCTTGAGGGTTTGCTACAAC para el TNF-α; reenviar 5'GAAAGGAGACATGTAACAAG y revertir 5'CCAGGCAAGTCTCCTCATTG para la IL-6; y hacia adelante y atrás 5'GCGAGAAGATGACCCAGATC 5'GGATAGCACAGCCTGGATAG para la beta-actina (β-actina) (referencia interna).
mascotas
ratas hembra Sprague-Dawley adultas de edades comprendidas entre 7 a 8 semanas y un peso de 160-200 g fueron utilizado para el estudio. El protocolo para los experimentos con animales fue aprobado por el Comité Institucional de Ética en Experimentación Animal de la Universidad de Malasia [Número de aprobación: MP /08 /, 06/2010 /SMH (R)]. Los animales se obtuvieron de la Universidad Putra Malaysia (UPM). Los animales se alojaron individualmente en jaulas con fondo de alambre de malla ancha para prevenir coprofagia. Se mantuvieron en una habitación con temperatura controlada que estaba bien ventilada, con comida y agua, en un 12 horas de luz /oscuridad ciclo durante todo el estudio. Todas las ratas fueron privados de comida durante 48 horas, pero tuvieron libre acceso a agua potable hasta 2 horas antes de someterlos a las ulcerogens.
Lesiones gástricas inducidas por EtOH
Las ratas se dividieron al azar en 7 grupos con cada grupo que comprende de 6 ratas. Grupo 1 se administró con 10% de Tween 20 (diluyentes extracto) (BDH Laboratory Supplies, Inglaterra) y sirvió grupo de control negativo. se le dio Grupo 2 500 mg /kg de peso corporal del extracto equivalente extracto de la planta no relacionada MeOHGCM6 preparado de forma similar en paralelo como MeOHGCM6 extraer para servir como grupo de control extracto de la planta no específica (NSPE). Grupo 3 se trató con OMP (Chemical Company de Malasia, Malasia) a 20 mg /kg de peso corporal y sirvió como grupo de control positivo del tratamiento. El grupo restante 4, 5, 6 y 7 ha recibido 4 concentraciones diferentes del extracto MeOHGCM6 que van desde 2,5 hasta 500 mg /kg de peso corporal, respectivamente. Después de 30 minutos de pre-tratamiento, todos los animales se les administró con EtOH absoluto a través de la ruta oral. Una hora después de la administración, los animales fueron sacrificados por un exceso de dosificación con éter dietílico (BDH Chemicals Ltd., Inglaterra). El abdomen de la rata se diseccionó y el esófago más cercana al cardias y el estómago distendido en el esfínter pilórico se inmediatamente atado en un nudo usando una cadena para evitar fugas de los contenidos gástricos. El estómago se retiró rápidamente y se sumergió en agua.
Medición de la secreción gástrica
El contenido gástrico de cada estómago de rata se aspiró suavemente y raspado con una espátula. se desechó el jugo gástrico que contienen partículas de alimentos. La mucosa gástrica cosechado se pesó usando una balanza electrónica (Mettler Toledo, Suiza). La cantidad de los jugos gástricos se midió utilizando un cilindro de medición. El pH del contenido gástrico se midió utilizando un medidor de pH digital (Instrumentos Crison, SA, España).
Evaluación de lesiones gástricas brutos
Después de la cosecha, el estómago se lavó inmediatamente con solución salina y se examina bajo un microscopio de disección (1,8 ×) con un ocular de cuadrícula. La porción glandular del estómago se evaluó para la formación de úlcera. El área ulcerada totales (UA) de las lesiones hemorrágicas para cada estómago se midió mediante planimetría (mm 2) y el porcentaje de inhibición se calculó utilizando la siguiente fórmula: Inhibición %
=
UA
de control -
UA
tratada /
UA
de control ×
100
Determinación de la producción de sulfhidrilos no proteicos (NP-SH)
mucosa gástrica nivel NP-SH se midió como se describe anteriormente [30] con modificaciones menores. En pocas palabras, el estómago glandular se pesó y se homogeneizó en tubos que contenían ácido enfriada con hielo 0,02 M etilendiaminotetraacético (EDTA) (GibcoBRL Life Technologies, Estados Unidos) (pH 8,9). Las alícuotas de los homogeneizados se mezclaron con agua destilada y 50% de ácido tricloroacético (Sigma Chemical Co., EE.UU.). La mezcla se incubó con agitación constante durante 10 minutos a 4 ° C y después se centrifugó a 3.000 × g durante 15 minutos. Después, la mezcla se sometió a ensayo para el nivel de NP-SH utilizando un kit de ensayo de glutatión (Sigma Chemical Co., EE.UU.) de acuerdo con el protocolo del fabricante.
El análisis estadístico
Todos los datos se expresaron como media ± desviación estándar (SD) o mediana (25% y cuartil 75%) a partir de dos o tres experimentos independientes para los estudios de anti-inflamatorias y siete experimentos independientes para estudios gastroprotectores y anti-ulcerogénicos. ANOVA (análisis de varianza de una sola vía y de dos vías de análisis de la varianza) se utilizó para la comparación entre los grupos y para informar de la significación estadística 'p
' con respecto al grupo control. El valor de p
< 0,05 fue considerado estadísticamente significativo. Todos los análisis estadísticos se realizaron utilizando el software GraphPad Prism 4.0 (EE.UU.) y SPSS versión 16.0 (SPSS Inc., Chicago), respectivamente.
: Resultados de la Normalizada MeOHGCM6 extraer perfil de análisis LC /MS de los diferentes lotes de extracto MeOHGCM6 se llevaron a cabo para asegurar la reproducibilidad y consistencia de los métodos de extracción. Lotes 1 y 2 de extracto MeOHGCM6 utilizado en el estudio mostraron perfiles espectrales de masas muy similares y la cantidad de los principales masas (Figura 1A-C). El análisis de los espectros y la comparación con el Diccionario de Productos Naturales, CRC Press identificó las masas distintivos, 457.405, 645.280 y 887.579. La masa identificados en el espectro de ion positivo de m /z 457.405, tenía fragmentos de 398.327 (pico base), 380.316 y 158.082. La pérdida neutra de 59.077 masa era posiblemente indicativo de perdida de trimetilamina. Esto sugiere que el compuesto puede contener un resto de trimetilamonio. Los datos de MS y MS /MS de alta resolución no podían identificar definitivamente los compuestos conocidos por el Diccionario de los productos naturales. Las masas de m /z 645 y 887, sin embargo, mostraron una asociación distinta a dos conocidos clorofilas, metil-10 hydroxyphaeophorbide un
y 10 Hydroxypheophytin un
con las absorbancias UV adecuados observados en el análisis PDA (Tabla 1 ). Figura 1 Perfiles de los diferentes lotes de extracto de MeOHGCM6. Se utilizó el modo ESI con conmutación positivo /negativo y externo de referencia para la MS utilizando un sistema Shimadzu UFLC. los espectros de iones positivos total analizada para la identificación de componentes similares de los dos lotes diferentes de extracto MeOHGCM6 utilizado en el estudio. (A) MeOHGCM6 extracto (lote 1; M6-1). (B) Extracto MeOHGCM6 (Lote 2; M6-2). (C) La comparación de la intensidad de las masas más abundantes de los dos MeOHGCM6 extracto de lotes utilizados en el estudio.
Tabla 1 identificaciones estructura de la masa más importante presente en el extracto MeOHGCM6 utilizando LC /MS
de masas (ion)
encontrado en el lote
Posible ID
417.298
1, 2
Lo más probable es contaminante
457.405 *
1, 2
no identificada
461.326
1, 2
Lo más probable es contaminante
505.353
1, 2
Lo más probable es contaminante
573.256
1, 2
no identificada
645.280
1, 2
metil-10 hydroxyphaeophorbide un
743.636
1, 2
no identificado
887.579
1, 2
10 Hydroxypheophytin un
Diccionario de Productos Naturales, CRC Press con alta resolución MS espectros se utiliza para analizar los espectros de iones totales positivo para la identificación de posibles componentes químicos.
* MS /MS (intensidades relativas%) 457.405 → 398.327 ( 100%), 380,316 (50%), 158,082 (40%).
expresión marcador de superficie celular de macrófagos específicos de la diferenciación en células U937
células diferenciadas U937 se distinguen por la expresión de los monocitos /macrófagos linaje específico CD11b , proteína de marcador de superficie [26]. En nuestro estudio, la expresión del CD11b fue marcado con un intenso color azul parduzco etiquetado en la superficie celular [27]. La expresión de la CD11b se aumentó en gran medida cuando se indujeron las células U937 para diferenciar al aumentar la concentración de PMA (1, 10 y 50 nM) (Figura 2, Figura 3A). El hallazgo sugiere que el tratamiento con 10 o 50 nM de PMA para 24 horas o 1 nM PMA para 48 horas, las células U937 diferenciadas era muy por encima de 50% del cultivo celular. Figura 2 La expresión del marcador de superficie celular de macrófagos específicos de la diferenciación en células monocíticas U937 diferenciadas. Se indujeron células monocíticas U937 a diferenciar con (A) 0 nM PMA durante 24 horas; (B) 0 nM PMA durante 48 horas; (C) 1 nM de PMA durante 24 horas; (D) 1 nM PMA durante 48 horas; (E) 10 nM de PMA durante 24 horas; (F) 10 nM de PMA durante 48 horas; (G) 50 nM de PMA durante 24 horas y (H) 50 nM de PMA durante 48 horas. Las células se tiñeron utilizando la tinción inmunohistoquímica para identificar la presencia de CD11b, un marcador de superficie celular de macrófagos. células monocíticas U937 diferenciadas fueron identificados por la intensa tinción de azul de color marrón en la superficie celular de las células diferenciadas. Las células fueron vistos a 20 × aumentos bajo campo claro utilizando un microscopio invertido y se fotografiaron usando una cámara Nikon D70 (Nikon, Japón). se muestra un conjunto arquetípico de fotografías de tres experimentos separados.
células monocíticas U937 Figura 3-diferenciación específica la expresión del marcador y la viabilidad celular determinación de la superficie celular de los macrófagos. Se indujeron células monocíticas U937 a diferenciar con varias concentraciones de PMA durante 24 y 48 horas. (A) Los porcentajes de células diferenciadas fueron marcados por la presencia de CD11b sobre la superficie celular. (B) Los porcentajes de células viables fue evaluado utilizando el ensayo de exclusión de azul de tripano. El porcentaje de células diferenciadas o viables por células totales es la misma antes del experimento usando las diferentes concentraciones de PMA y período de incubación. Los datos se presentan como media ± S.D. a partir de tres experimentos independientes con '*', p Hotel < 0.05 representan diferencia significativa en comparación con el grupo que no fueron inducidas a diferenciarse.
Determinación de la viabilidad celular en células U937 diferenciadas Francia El U937 células diferenciadas viables fue evaluado utilizando el ensayo de exclusión del colorante azul de tripano. células U937 viabilidad mostraron una reducción significativa dependiente de la dosis en el porcentaje de células viables cuando inducidas a diferenciarse con 1, 10 y 50 nM PMA (Figura 3B). El hallazgo sugiere que 90% de las células U937 diferenciadas eran todavía viables después del tratamiento con 1 o 10 nM de PMA para 24 horas o 1 nM PMA para 48 horas.
Citotoxicidad de MeOHGCM6 extracto sobre células U937
Los efectos citotóxicos de el extracto MeOHGCM6 y betametasona en las células U937 se determinaron mediante el cálculo de la tasa de proliferación celular. células U937 tratadas con el MeOHGCM6 extracto a 0,05, 0,5, 1 y 5 mg /ml ráfagas proliferativas expuestas de 117,39% (108,48%, 122,10%), 152,04% (149,36%, 154,72%) (p
< 0,05) , 145,60% (137,48%, 149,11%) (p
< 0,05) y 118,49% (112,01%, 133,28%), respectivamente (Figura 4A). El tratamiento con extracto de MeOHGCM6 a los 10 g /ml redujo la tasa de proliferación celular a 87,00% (82,43%, 89,62%). Las células U937 tratadas con la betametasona mostraron una reducción significativa dosis-dependiente en su tasa de proliferación (Figura 4B). A concentraciones más bajas de betametasona (0,1, 1, 5 y 10 nM), la tasa de proliferación de las células era 110,35% (92,20%, 115,83%), 113,75% (89,56%, 122,98%), 94,59% (85,56%, 101,93%) y 80,48% (77,78%, 110,48%), respectivamente. efectos Figura 4 citotoxicidad de las diversas concentraciones de extracto de MeOHGCM6 y betametasona en células monocíticas U937. La tasa de proliferación de células monocíticas U937 tratadas con concentraciones crecientes de (A) extracto MeOHGCM6 y betametasona (B) se determinó en un período de 24 horas mediante la realización de ensayo de MTT. El porcentaje de la proliferación celular es relativo al número de células sembradas antes de la administración de las diferentes dosis de extracto de MeOHGCM6 y betametasona. Las concentraciones de extracto de MeOHGCM6 que causaron 30% (G130), 50% (G150) y 70% (G170) de la inhibición de la proliferación celular se extrapolaron a partir de la trama (indicada por una flecha). Los resultados se expresaron como la media (25% y 75% cuartil) a partir de dos experimentos independientes.
Efectos de MeOHGCM6 extraer tratamiento en el nivel de respuesta de TNF-α durante la diferenciación de las células U937
Los efectos de MeOHGCM6 extraen tratamiento en la regulación del nivel de respuesta a TNF-α durante la diferenciación de las células U937 se investigó mediante ELISA. El nivel de respuesta de TNF-α alcanzó un nivel máximo de 43,28 ± 5,15 pg /ml a las 8 horas cuando se indujeron las células U937 para diferenciar (Figura 5A). En presencia de extracto de MeOHGCM6 10 mg /ml durante la diferenciación de las células U937, el nivel de respuesta de TNF-α disminuyó significativamente hasta 8 horas [0,14 ± 0,28 pg /ml (p
< 0.001)] y fue comparable a la observada en presencia de betametasona [0,28 ± 0,56 pg /ml (p
y lt; 0.001)]. Figura 5 MeOHGCM6 extracto de tratamiento en el nivel de respuesta de TNF-α y TNF-α e IL-6 de la expresión génica durante la diferenciación de las células monocíticas U937. Las células fueron inducidas monocíticas U937 para diferenciar con 10 PMA nM. Durante la diferenciación, las células monocíticas U937 fueron tratadas con extracto de MeOHGCM6. (A) El nivel de respuesta a TNF-α se cuantificaron mediante ELISA. El (B) TNF-α y los niveles de expresión (C) IL-6 de genes se cuantificaron utilizando QRT-PCR. Los resultados se expresaron como la media ± S.D. a partir de ensayos por cuadruplicado.
Efectos de MeOHGCM6 extraer tratamiento en el TNF-α y la IL-6 de la expresión génica durante la diferenciación de las células U937
La regulación de TNF-α y la IL-6 por MeOHGCM6 extracto de tratamiento durante las células U937 la diferenciación se investigó más a nivel de la expresión génica mediante qRT-PCR. El nivel de expresión del gen TNF-α alcanzó su punto máximo después de 6 horas (3,16 ± 0,48 copias /actina) de la diferenciación de las células U937 (Figura 5B). TNF-α nivel de expresión génica se redujo durante las primeras 6 horas [0,52 ± 0,28 copias /actina (p
< 0,001)] de células U937 diferenciación en presencia de 10 mg /ml de extracto de MeOHGCM6. La disminución en el nivel de expresión del gen TNF-α de las células U937 durante la diferenciación cuando se tratan con 10 mg /ml MeOHGCM6 fue comparable o mejor que los resultados de el tratamiento con 10 nM de betametasona [0,55 ± 0,42 copias /actina (p
< 0.001)]. El nivel de expresión del gen IL-6 mostró un aumento significativo y alcanzó un máximo de 0,68 ± 0,09 copias /actina después de 12 horas de la diferenciación de células U937 (Figura 5C). se observó disminución en el nivel de expresión génica de IL-6 para ser 0,10 ± 0,01 copias /actina, 0,23 ± 0,02 copias /actina (p
< 0,01), 0,37 ± 0,04 copias /actina (p
< 0,001 ) y 0,45 ± 0,05 copias /actina (p
< 0,001) a los 3, 6, 9 y 12 horas, respectivamente, cuando las células U937 durante la diferenciación se trataron con 10 mg /ml de extracto de MeOHGCM6. La inhibición de las IL-6 niveles de expresión génica en presencia del extracto MeOHGCM6 era comparable a la de betametasona.
Efectos del tratamiento profiláctico de MeOHGCM6 extraen en las ratas contenido gástrico después de la lesión de la mucosa gástrica aguda inducida por EtOH
moco gástrico secreción, el volumen de jugo gástrico y el pH gástrico moco se determinaron a partir del contenido gástrico del estómago de ratas pre-tratadas con extracto de MeOHGCM6 después de la alimentación EtOH. 2,45 ± 0,25 gm de moco gástrico y 1,75 ± 0,20 ml de jugo gástrico se recuperaron del estómago de ratas alimentadas con sólo el diluyente extracto (Tabla 2). 1,54 ± 0,31 gm de moco gástrico y 0,96 ± 0,25 ml de jugo gástrico y 1,68 ± 0,19 gm de moco gástrico y 0,96 ± 0,16 ml de jugo gástrico fueron recuperados de las ratas tratadas previamente con 250 y 500 mg /kg de peso corporal de MeOHGCM6 extraer, respectivamente. En comparación, 2,31 ± 0,42 gm de moco gástrico y 1,15 ± 0,36 ml jugo gástrico fue recuperado de las ratas tratadas previamente con 20 mg /kg b.w OMP. 2.75 ± 0.49 g de moco gástrico y 1,75 ± 0,28 ml de jugo gástrico fueron recuperados de las ratas alimentadas con extracto de la planta no relacionada preparado de forma similar que sirvió de control NSPE. Este grupo de control de produce gran cantidad de mucosa gástrica y el jugo gástrico significativamente en comparación con las ratas tratadas con el extracto MeOHGCM6. Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.

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