Priešuždegiminių, gastritas ir anti-opas poveikis raudonųjų dumblių GRACILARIA changii (Gracilariales, Rhodophyta) ekstraktas

Priešuždegiminių, gastritas ir anti-opas poveikis raudonųjų dumblių GRACILARIA changii
(Gracilariales, Rhodophyta) ekstraktas
tezės
Background
GRACILARIA changii
(Sia ir kt Abbott) Abbott, Zhang et Xia , raudona dumbliai paprastai randama pakrantėse Malaizija tradiciškai naudojamas maisto produktų ir įvairių negalavimų, įskaitant uždegimą ir skrandžio negalavimų gydymui. Tyrimo tikslas buvo ištirti priešuždegiminių, gastroprotektinio ir anti-opas veiklą su masių spektrometrija standartizuotas metanolyje ekstraktas GRACILARIA changii
.
Metodai
metanolyje ekstrakto Gracilaria changii pervežimas (MeOHGCM6 ekstraktas ) buvo parengtos ir standartizuotas naudojant masės spektrometrija (MS). Priešuždegiminės veikla MeOHGCM6 ekstrakto išnagrinėjo gydyti U937 ląsteles per savo diferenciacijos su 10 mikrogramų /ml MeOHGCM6 ekstrakto. Naviko nekrozės faktorius-α (TNF-α) reakcijos lygis ir TNF-α ir interleukino-6 (IL-6) genų ekspresijos buvo stebėti ir, palyginti su, kad gydomi 10 nM betametazono, priešuždegiminis vaistas. Gastroprotektinio ir anti-opas veikla MeOHGCM6 ekstrakto buvo ištirti šėrimo žiurkių su MeOHGCM6 ekstrakto svyruoja nuo 2,5 iki 500 mg /kg kūno svorio (sv) Po indukcinio skrandžio pažeidimų. Gamyba gleivių ir skrandžio sulčių, pH skrandžio sulčių ir nebaltymines sulfhydryls (NP-SH) koncentracija nustatoma ir, palyginti su tos, į kurias tiekiama 20 mg /kg kūno svorio sv Omeprazolas (OMP), žinomas kovos su opa narkotikais.
rezultatai
MS /analizė MeOHGCM6 ekstraktų atskleidė metilo 10-hydroxyphaeophorbide parsisiųsti ir 10-hydroxypheophytin
, žinoma chlorofilo buvimą baltymų ir keletas neatpažintų molekulių. Gydymas su 10 mikrogramų /ml MeOHGCM6 ekstrakto diferenciacijos U937 ląstelių žymiai slopinamas TNF-α reakcijos lygis ir TNF-α ir IL-6 su genų raiškos metu. Šis poveikis buvo panašus į betametazono. Nėra citotoksinis poveikis buvo įrašyti ląstelių gydomi 10 mikrogramų /ml MeOHGCM6 ekstrakto. Žiurkės šeriami MeOHGCM6 ekstraktas 500 mg /kg sv buvo mažiau absoliutaus etanolio sukeliamo skrandžio pažeidimas dydžius > 99% (p
< 0,05). Tai apsauginis poveikis buvo panašus į tą, kurią OMP suteikti. Iš skrandžio gleivių pH
sumažėjo nuo dozės priklausomu būdu iš 5.51 į 3.82 ir ten buvo labai padidėjo NP-sh koncentracijos. IŠVADOS
rezultatus iš tyrimo, rodo, kad masių spektrometrija standartizuotas Metanolinis ekstrakto Gracillaria changii
turi priešuždegiminių, gastritas ir anti-opas savybes. Tolesnis tyrimas aktyviosios sudedamosios ekstrakto ir jos veikimo mechanizmas yra pagrįstas ateityje.
Raktiniai žodžiai
Priešuždegiminiai anti-opas gastroprotektinio GRACILARIA changii
citokinai Betametazono Omeprazolas Jūriniai vandens augalai opa faktai
uždegimas pagrindinis bruožas daugelio ligų. Tai būdinga suorganizuoti sąveikų kompleksą tarp uždegimo mediatorių ir uždegimo ląstelių, nukreiptas link pašalinti dirgiklių ir gijimą audinių traumų [1, 2]. Uždegimas yra svarbus šeimininko gynybos mechanizmą. Uždegimas, kuris vyksta skrandžio ir žarnų trakto gleivinės, tačiau, sukelia virškinimo trakto opos [3]. Virškinimo opa yra bendras didelis sutrikimas virškinimo sistemos, turinčios įtakos milijonams amerikiečių ir daug daugiau visame pasaulyje [4]. Dažniausia priežastis virškinimo opaligė yra infekcija Helicobacter pylori
(H. pylori pervežimas) [5] ir ilgalaikis naudojimas nesteroidiniais priešuždegiminiais vaistais (NVNU), tokių kaip aspirinas ir ibuprofenas [6]. Antibiotikų kontrolės prieš H. pylori atėjimas
žymiai sumažino virškinimo trakto opos atvejų išsivysčiusiose šalyse [7]. Liga, tačiau vis dar daug kitų šalių, o liga, kurią sukelia NVNU vartojimu vis dar yra pagrindinė sveikatos problema išsivysčiusiose šalyse [6, 7].
Gydymas uždegimas apskritai siekiama arba slopinantis veikla uždegiminių ląstelių arba slopina uždegimo mediatorių gamybą [8]. Vėliau gali būti atlikta naudojant narkotikus, pavyzdžiui, NVNU ir kortikosteroidai [9]. Gydymas virškinimo opos apskritai siekiama arba panaikinti H. pylori
infekcija arba sumažinti ir slopina skrandžio rūgšties gamybą lygį, atsakingų už virškinimo apsauginiu sluoksniu erozijos [10, 11]. Vėliau gali būti atlikta naudojant narkotikų, tokių kaip histamino (H 2) -blockers, rūgšties siurblio inhibitoriai ir gleivinės apsaugines vaistai [9]. Tačiau, įvairių šalutinis poveikis ilgalaikio gydymo šių vaistų buvo aprašyta [9]. Be to, prieš uždegimą ir anti-opas vaistai daugiausia naudojami siekiant sumažinti ligos simptomus be faktiškai gydyti arba užkirsti kelią uždegiminių ir opas procesus.
Plėtra priešuždegiminių ir anti-opas narkotikų neseniai sutelktas atranda palanki taikymas vaistažolių augalinės kilmės ekstraktų, kurie yra stiprūs ir saugiau naudoti. Dumbliai rasti auga gausa nuo pakrančių zonos Daugelio pasaulio šalių yra didžiulė dar neišnaudotas potencialas naujos šaltinis terapijos [12, 13]. Raudona dumbliai pavyzdžiui buvo pranešta, kad yra aktyvių junginių, kurie gali padėti pagerinti uždegimą virškinamojo trakto [14], užkirsti kelią ar gydyti skrandžio opos ir vėžio sukeltus oksidacinio streso [15, 16], slopina uždegiminius veiklą ir slopina gamybą uždegimo mediatorių [17-19] ir sukelti vėžinių ląstelių apoptozę skrandžio [20] ir storosios žarnos [21]. Natūralių junginių, gautų iš valgomų dumblių gali būti saugiau būti naudojamas kaip priešuždegiminė ir skrandžio Anti-opas terapija, kaip į juos buvo atsižvelgta kaip maistas ir naudojamos tradicinių vaistų nuo neatmenamų laikų [13].
Raudonųjų dumblių, GRACILARIA changii
(Sia ir kt Abbott ")" Abbott Zhang et Sia rasti auga nuo pakrančių sritis Malaizija sudarantis potencialų vietos šaltinis šio natūraliai gautų terapijos. Šiuo metu dumbliai komerciškai nuimami tik savo koloidinis agaro turinio, tiek vietos maisto gėrybių. Šie dumbliai yra plačiai taikomi kaip liaudies medicinoje įvairių negalavimų, įskaitant uždegimą ir skrandžio negalavimų gydymui. Šis tyrimas siekiama įvertinti galimą priešuždegiminių, gastroprotektinio ir anti-opas veiklą šių Malaizijos raudonųjų dumblių, GRACILARIA changii
.
Metodai
dumblių ekstraktas rengimą
Gracilaria changii
(Xia ET Abbott ")" Abbott Zhang et Sia buvo renkami iš pakrantės vandens Morib, Selangor, Malaizija (N2 ° 44 '908 ", E101 ° 26' 590") 2003 metų pabaigoje vasario [22-24]. Dumbliai buvo identifikuojama profesorius dr Phang Siew Moi direktoriumi iš vandenyno ir žemės mokslų instituto biologijos mokslų fakulteto mokslo, universiteto Mažoji institutas, kuriame buvo palaikoma kvito egzempliorius (Herbariumas nėra. PSM 6320 ir PSM 6321 ). Dumbliai praplaunami steriliame jūros vanduo, kurio galutinis skalavimo steriliame distiliuotame vandenyje kaip buvo aprašyta anksčiau [22]. tada dumbliai susmulkintos ultragarsu vandens vonioje sonicator ir saugomi -70 ° C temperatūroje. Metanolyje ekstraktas GRACILARIA changii
(MeOHGCM6 ekstraktas) rengta Malaizijos Terengganu (UMT) universitete pagal aprašytų metodų [25]. MeOHGCM6 ekstraktas laikomi -20 ° C temperatūroje prieš naudojimą.
MeOHGCM6 išgauti
Profilis analizę MeOHGCM6 ekstrakto buvo atliktas ant Shimadzu itin sparčiu skysčių chromatografija (UFLC) sistema įrengta photodiode masyvo ultravioletiniams (UV pda ) detektorius ir jonų gaudyklė laikas skrydžio (TOF) masės spektrometru (Shimadzu, Japonija). Atskyrimo buvo pasiekta Waters Xbridge C18 kolonėlę (50 mm x 2.1 mm, dalelių skersmuo yra 2,5 mkm) (vanduo, JAV), esant 40 ° C temperatūroje. Judančiosios fazės sudarė vandens [0.1% skruzdžių rūgšties (BDH Laboratoriniai reikmenys, Anglija)]: acetonitrilo (BDH Laboratoriniai reikmenys, Anglija) (0,1% skruzdžių rūgštis), srauto greičiui 0,50 ml /min su injekcijos tūrio 10 įxL , Elektropurkštuviniu jonizacija (EVR) režimas su teigiamas /neigiamas perjungimo ir išorės nuoroda buvo naudojamas masių spektrometrijos (MS). Iš gamtos produktų žodynas (CRC) su aukštos rezoliucijos MS spektrai ir struktūrinės informacijos buvo naudojamas analizuoti teigiamą ir neigiamą jonų spektrų kartu su MS /MS informacija identifikavimo panašiais komponentais.
Žmogaus promonocytic ląstelių linijos (U937 ląstelių)
U937 ląstelės buvo įsigytas iš Amerikos tipas kultūros kolekcija (ATTC, JAV) ir kultūringas Roswell Park Memorial Institute-1640 (RPMI-1640 terpė) (Flowlab, Australija) [papildyti su 1% 10 mM neesmines amino rūgščių (NEAA) (Flowlab, Australija) ir 1% 10 mM L-glutaminas (L-Glu) (Flowlab, Australija)], kuriame 10% šilumos, inaktyvuota vaisiaus jaučio serumo (FBS) (Flowlab, Australija). Ląstelės buvo inkubuojami 37 ° C temperatūroje drėgnoje inkubatoriuje su 5% CO 2.
Diferenciacija U937 ląstelių
U937 ląstelės buvo sėklomis 96 duobučių ląstelių kultūrų plokščių ( "Sakalas", JAV), kurio tankis 2 × 10 4 ląstelių /pat su RPMI-1640 terpėje, turinčioje 2% FBS ir saugomi 37 ° C temperatūroje drėgnoje inkubatoriuje su 5% CO 2. Kitą dieną, terpėje, turinčioje phorbol 12-miristatas 13-acetatas (PMA) (Sigma-Aldrich, JAV) koncentracijos yra intervale nuo 0-50 nM buvo pridėta į U937 monocitinę ląstelių sukelti diferenciaciją už 24 ir 48 valandų. Terpėje, turinčioje tik PMA skiedikliais [dimetilsulfoksido (DMSO) tirpalą (Sigma-Aldrich, JAV)] buvo pridėti lygiagrečiai ir naudojamas kaip transporto priemonės kontrolės. Tuo, kad nurodyti laiko taško pabaigoje, ląstelės buvo įvertinta diferenciacijos-specifinis makrofagų ląstelės paviršiaus žymeklio išraiškos ir ląstelių gyvybingumo.
Išraiška CD11b, diferenciacijos-specifinis makrofagų ląstelės paviršiaus persekiotoją buvo nustatomas dažant ląsteles kaip buvo aprašyta anksčiau [26 , 27]. Ląstelių gyvybingumas buvo nustatomas naudojant Trypan mėlyni dažai (Sigma, JAV) atskirtis tyrimas, kaip aprašyta anksčiau [28].
Citotoksiškumo tyrimas
U937 ląstelės buvo pasėjamos 96 duobučių ląstelių kultūrų lėkštelėse esant 2 × 10 tankio 4 ląstelės /duobutėje su RPMI-1640 terpėje, turinčioje 2% FBS ir saugomi 37 ° C temperatūroje drėgnoje inkubatoriuje su 5% CO 2. buvo pridėta kitą dieną, terpėje, turinčioje MeOHGCM6 ekstraktas (koncentracijos yra intervale nuo 0-100 g /ml) ir betametazono (Sigma, JAV) (koncentracijos yra intervale nuo 0-100 nM). Terpėje, turinčioje tik MeOHGCM6 išgauti ir betametazono skiedikliai [etanolis (EtOH) (BDH Laboratoriniai reikmenys, Anglija) ir DMSO, atitinkamai] buvo įtraukta lygiagrečiai ir naudojamas kaip transporto priemonių kontrolę. Diena po gydymo, The U937 ląstelių proliferaciją norma buvo nustatoma naudojant CellTiter 96® neradioaktyvaus ląstelių proliferaciją rinkinį (PROMEGA, JAV), griežtai laikantis gamintojo rekomenduojamą protokolą.
MeOHGCM6 išgauti gydymo U937 ląstelių
U937 ląstelių buvo pasėjamos į 24 duobučių ląstelių kultūros plokščių ( "Sakalas", JAV), esant tankiui 2 × 10 5 ląstelės /duobutėje su RPMI-1640 terpėje, turinčioje 2% FBS ir inkubuojami 37 ° C temperatūroje drėgnoje inkubatoriuje su 5% CO 2. Taip diena, U937 ląstelės buvo sukeltas diferencijuoti su 10 nM PMA 24 valandas. diferenciacijos metu, šios U937 ląstelės buvo gydomi MeOHGCM6 ekstraktą arba betametazono, esant fiziologiniam koncentraciją. 0, 8, 16 ir 24 valandų po apdorojimo, supernatantas ir Ląstelės buvo surinktos ir tiriami dėl TNF-alfa reakcijos lygis ir TNF-alfa ir IL-6 genų ekspresiją.
TNF-α reakcijos lygis
TNF- alfa lygis buvo matuojamas naudojant BD OptEIA ™ žmogaus TNF (TNF-alfa) ELISA rinkinys II (BD biomokslai, JAV) pagal gamintojo protokolą.
TNF-α ir IL-6 genų ekspresijos
RNR iš ląstelių kultūras buvo izoliuoti naudojant TRI Reagent® (molekulinė tyrimų centras, Inc., JAV) ir gydomi DNaze (Promega, JAV). RNR atvirkštinio transkripcija (kDNR), naudojant viršuje ™ II atvirkštinės transkriptazės (Invitrogen, JAV). Tada kDNR buvo atlikti kiekybinę realaus laiko PGR naudojant SYBR® Žalioji PGR pagrindinį mišinį (Qiagen, Vokietija) DNR Engine Opticon II® (MJ tyrimų, Bio-Rad, JAV), kaip aprašyta anksčiau [29]. Į oligonukleidų pradmenys buvo naudojamos priekį 5'AAGAGTTCCCCAGGGACCTC ir atvirkštinės 5'GCTTGAGGGTTTGCTACAAC už TNF-alfa; perduoti 5'GAAAGGAGACATGTAACAAG ir atvirkštinės 5'CCAGGCAAGTCTCCTCATTG IL-6; ir išankstiniai 5'GCGAGAAGATGACCCAGATC ir grįžtamosios 5'GGATAGCACAGCCTGGATAG beta-aktino (β-aktino) (vidinė nuoroda).
Gyvūnai
Suaugusiųjų moterų Sprague-Dawley žiurkės amžius nuo 7 iki 8 savaites ir sveria 160-200 g buvo naudojami tyrimo. Dėl eksperimentų su gyvūnais protokolas buvo patvirtintas pagal institucinius komiteto etikos bandymus su gyvūnais į Malajos universitetas [Patvirtinimo numeris: MP /08/06/2010 /SMH (R)]. Gyvūnai buvo gauti iš universiteto Putra Malaizija (UPM). Gyvūnai buvo laikomi atskirai narvuose su plataus tinklo vielos dugnų išvengti Koprofagija. Jie buvo laikomi kontroliuojamos temperatūros patalpą, į kurią buvo gerai vėdinamoje, su maistu ir vandeniu, ant 12 valandų šviesos /tamsos ciklo per visą tyrimo. Visi žiurkės buvo atimta maisto per 48 valandas, tačiau turėjo laisvą prieigą prie geriamo vandens, kol likus 2 valandoms iki pajungiant juos į ulcerogens.
EtOH sukelta skrandžio pažeidimai Viesbutis The žiurkės buvo atsitiktinai suskirstyti į 7 grupes kiekvienoje grupėje susidedantį iš 6 žiurkėms. 1 grupė buvo vartojamas su 10% Tween 20 (ištrauka skiediklius) (BDH Laboratoriniai reikmenys, Anglija) ir tarnavo kaip neigiamą kontrolinę grupę. 2 grupė buvo suteiktas 500 mg /kg kūno svorio sv iš MeOHGCM6 ekstrakto ekvivalento nesusiję augalų ekstraktas panašiai parengta lygiagrečiai kaip MeOHGCM6 išgauti tarnauti kaip nespecifinis augalų ekstraktas (NSPE) kontrolinės grupės. 3 grupė buvo gydomi OMP (Chemical Company Malaizijos, Malaizija), esant 20 mg /kg kūno svorio sv ir tarnavo kaip teigiamo gydymo kontroline grupe. Likusi 4 grupė, 5, 6 ir 7 gavo 4 skirtingų koncentracijų, išdėstytų MeOHGCM6 ekstrakto svyruoja nuo 2,5 - 500 mg /kg kūno svorio sv, atitinkamai. 30-ąją minutę paruošiamojo apdorojimo, visi gyvūnai buvo skiriami su absoliutaus EtOH per burną. Viena valanda po vaistinio preparato vartojimo, gyvūnai buvo paaukojo per dozavimo juos dietilo eterio (BDH Chemicals Ltd, Anglija). Rat pilvą buvo išpjaustytų ir stemplė arčiausiai Cardia ir išsipūtę skrandžio prievarčio dėl sfinkterio karto buvo susieti mazgas naudojant eilutę, kad būtų išvengta nuotėkio skrandžio turinį. Skrandis buvo greitai pašalintas ir panardintas į vandenį.
Matavimas skrandžio sekrecijos Viesbutis The skrandžio turinys kiekvieno žiurkių skrandžio buvo įsiurbimo ir švelniai pavogta mentele. Skrandžio sultys, kurių sudėtyje yra maisto dalelės buvo išmesti. Išaugintoje skrandžio gleivių buvo sveriami elektroninę pusiausvyrą (Mettler Toledo, Šveicarija). Skrandžio sulčių suma buvo matuojamas naudojant matavimo cilindrą. Iš skrandžio turiniu, pH buvo matuojamas naudojant skaitmeninis pH-metras (Crison įrankiai, SA, Ispanija).
Vertinimas bruto skrandžio pakitimų
Po derliaus nuėmimo, skrandis buvo nedelsiant praplauti fiziologiniu tirpalu ir tiriamas mikroskopu Sekcijiniai (1,8 ×) su kvadratine tinklo okuliarą. Liaukiniame dalis skrandžio buvo tiriami dėl opa formavimas. Bendras gadinimo plotas (UA) iš hemoraginių pažeidimų kiekvieno skrandžio buvo matuojamas plannimetry (mm 2) ir slopinimo procentas buvo apskaičiuojamas pagal šią formulę: slopinimas %
=
Ukrainoje
kontrolė - CR.LT Ukrainoje
traktuojami /
Ukrainoje
kontrolė ×
100
nustatymas gamybos nebaltyminės sulfhydryls (NP-SH)
Skrandžio gleivinės NP-SH lygio buvo matuojamas kaip aprašyta anksčiau [30] su nedidelėmis pataisomis. Trumpai tariant, liaukų skrandis buvo sveriami ir homogenizuotas tūbelėse, kuriose yra ledinio 0,02 M Ethylenediaminetetraacetic rūgšties (EDTA) (GibcoBRL Life Technologies, JAV) (pH 8,9). Išpilstomi Homogenatai maišoma su distiliuotu vandeniu ir 50% trichloracto rūgšties (Sigma Chemical Co., JAV). Mišinys inkubuojamas su pastoviu maišymas vykdomas 10 minučių, esant 4 ° C ir tada centrifuguojamas 3000 × g 15 minučių. Po to mišinys buvo tirta dėl NP-SH lygiu naudojant glutationo reagentq rinkini (Sigma Chemical Co, JAV) pagal gamintojo protokolą.
statistinę analizę
Visi duomenys buvo pateikti kaip vidurkis ± standartinis nuokrypis (SD) arba mediana (25% ir 75% kvartilis) iš dviejų ar trijų nepriklausomų eksperimentų priešuždegiminių tyrimų ir septynių nepriklausomų eksperimentų gastritas ir anti-opas studijas. Dispersinė (į vieną pusę, dispersinė analizė ir dviejų krypčių dispersinė analizė) buvo naudojamas palyginti tarp grupių ir pateiktų statistinę reikšmę "p
" atžvilgiu su kontroline grupe. Iš p
<vertės; 0,05 buvo laikomas statistiškai reikšmingas. Visi statistinės analizės buvo atlikta naudojant GraphPad Prism 4.0 (JAV) ir SPSS versija 16.0 Programinė įranga (SPSS Inc, Čikaga), atitinkamai rezultatai.

Standartizuotas MeOHGCM6 išgauti aprašymą
LC /MS analizuoja iš skirtingų partijų iš MeOHGCM6 ekstrakto buvo atliekama siekiant užtikrinti, atgaminimas bei nuoseklumą gavybos metodus. Serija 1 ir 2 MeOHGCM6 ekstrakto, naudojami tyrimas parodė labai panašūs masinių spektro profilių ir kiekis didžiųjų masių (pav 1A-C). Analizė spektrų ir lyginant su gamtinių produktų žodynas, CRC identifikuoti skiriamuosius mases kaip 457.405, 645.280 ir 887.579. Nustatyta masė teigiamo jono spektro m /z 457.405, turėjo fragmentus 398.327 (bazinės smailės), 380.316 ir 158.082. Neutrali nuostolis 59.077 masė buvo galbūt rodo neteko trimetilamin. Tai rodo, kad junginys gali būti trimetilamonio fragmentą. Didelės raiškos MS ir MS /MS duomenys negalėjo galutinai nustatyti visus žinomus junginius iš gamtinių produktų žodynas. Dėl m /z 645 ir 887 masės, tačiau parodė ryškų asociaciją dviejų žinomų chlorofilų, metilo 10-hydroxyphaeophorbide parsisiųsti ir 10-Hydroxypheophytin
su atitinkamais UV absorbcijos pastebėtas PDA analizės (1 lentelė ). 1 pav profiliavimo iš skirtingų partijų MeOHGCM6 ekstrakto. "ESI režimas su teigiamas /neigiamas perjungimo ir išorės nuoroda buvo panaudota MS naudojant Shimadzu UFLC sistemą. Viso teigiamų jonų spektrų analizuojami identifikuoti panašiais komponentais iš dviejų skirtingų partijų dėl MeOHGCM6 ekstrakto, naudojami tyrime. (A), MeOHGCM6 ekstraktas (Serija 1; M6-1). (B), MeOHGCM6 ekstraktas (Serija 2; M6-2). (C) Palyginimas gausiausių mases dviejų MeOHGCM6 intensyvumo ekstraktas partijos tyrime naudotas.
1 lentelės struktūra identifikavimais iš svarbiausių masinės esančių MeOHGCM6 ekstrakto naudojant LC /MS
Masė (jonų)
Rasta į partijos
Galimas ID

417.298
1, 2
greičiausiai teršalo
457.405 *
1, 2 pervežimas Neatpažintas
461,326
1, 2
greičiausiai teršalų
505,353 greičiausiai teršalų
1, 2
573.256
1, 2
neidentifikuotų
645,280
1, 2
metilo 10-hydroxyphaeophorbide
743,636
1, 2
Neatpažintas
887.579
1, 2 pervežimas 10-Hydroxypheophytin A

žodynas gamtinių produktų, CRC aukštos rezoliucijos MS spektrai buvo naudojami analizuoti viso teigiamų jonų spektrų dėl galimų cheminių sudedamųjų dalių identifikavimas.
* MS /(santykinis intensyvumas%) 457,405 → 398.327 ( 100%), 380,316 (50%), 158,082 (40%).
diferencijavimas konkrečių makrofagų ląstelės paviršiaus žymeklis išraiška U937 ląstelių
Diferencijuotas U937 ląstelės išsiskiria iš monocitų /makrofagų lineage konkrečių CD11b išraiškos Paviršinės žymeklis baltymų [26]. Mūsų tyrimo duomenimis, iš CD11b išraiška buvo pažymėta su intensyvaus rusvos mėlyna ženklinimo ant ląstelės paviršiaus [27]. Iš CD11b išraiška buvo labai padidėjo, kai U937 ląstelės buvo sukeltas atskirti didėjant koncentracijai PMA (1, 10 ir 50 Nm) (2 pav, 3a pav.) Šis atradimas rodo, kad gydymas 10 arba 50 nm PMA 24 valandą arba 1 nM PMA 48 valandą, diferencijuoti U937 ląstelės buvo gerokai didesnis nei 50% ląstelių kultūros. 2 pav išraiška diferenciacijos konkrečių makrofagų ląstelės paviršiaus žymeklis diferencijuoti U937 monocitine ląsteles. U937 monocitine ląstelės buvo sukeltas diferencijuoti su (A) 0 nM PMA 24 valandas; (B) 0 nM PMA 48 valandas; (C) 1 nM PMA už 24 valandų; (D) 1 nM PMA 48 valandas; (E) 10 nM PMA už 24 valandų; (F) 10 nM PMA 48 valandas; (G) 50 nM PMA už 24 valandų ir (H) 50 nM PMA 48 valandas. Ląstelės buvo dažomi imunohistocheminis dažymas identifikuoti CD11b A makrofagų ląstelės paviršiaus persekiotoją buvimą. Diferencijuotas U937 monocitine ląstelės buvo identifikuojama intensyvaus rusvos mėlynės ant ląstelių paviršiaus diferencijuotų ląstelių. Ląstelės buvo žiūrima ne 20 × didinimui pagal brightfield naudojant apverstą mikroskopą ir fotografavo naudojant Nikon D70 fotoaparatu (Nikon, Japonija). Vienas archetipinių rinkinys nuotraukomis iš trijų atskirų eksperimentų rodomi.
3 pav diferencijavimas konkrečių U937 monocitine ląsteles makrofagų ląstelės paviršiaus žymeklis išraiška ir ląstelių gyvybingumas nustatymas. U937 monocitinę ląstelės buvo sukeltas diferencijuoti su įvairios koncentracijos PMA už 24 ir 48 valandų. (A), diferencijuotų ląstelių procentinės buvo įmušė iš CD11b buvimą ląstelės paviršiaus. (B) gyvybingų ląstelių procentinės pelnė naudojant Trypan mėlyna atskirties tyrimą. Diferencijuotų arba gyvybingų ląstelių viename visų ląstelių procentas yra tas pats prieš eksperimento, naudojant skirtingus koncentracijos PMA ir inkubacinį laikotarpį. Duomenys pateikiami kaip vidurkis ± Š.D. iš trijų nepriklausomų eksperimentų su "*", p
< 0,05 atstovauti reikšmingumo skirtumas, palyginti su grupe, kurioje nebuvo sukeltas diferencijuoti.
Ląstelių gyvybingumas nustatymą diferencijuotų U937 ląstelių Viesbutis The perspektyvių diferencijuotos U937 ląstelės pelnė naudojant Trypan mėlyni dažai atskirties tyrimą. U937 ląstelių gyvybingumas eksponuojami didelės dozės dydžio priklausomas gyvybingų ląstelių dalį, jeigu sukeltas atskirti 1, 10 ir 50 nm PMA (3b pav.) Šis atradimas rodo, kad 90% iš diferencijuotų U937 ląstelių dar buvo gyvybinga po gydymo 1 ar 10 Nm PMA 24 valandą arba 1 nM PMA 48 valandą.
Citotoksiškumo MeOHGCM6 išgauti ant U937 ląstelių
citotoksinis poveikis MeOHGCM6 ekstraktas ir betametazono dėl U937 ląstelių buvo nustatytas apskaičiuojant ląstelių proliferacijos normą. Apdoroti U937 ląstelės su MeOHGCM6 išspaudžiama ne 0,05, 0,5, 1 ir 5 g /ml eksponuojamų proliferacinių eilių 117.39% (108.48%, 122,10%), 152,04% (149,36%, 154,72%) (p
< 0,05) , 145,60% (137,48%, 149.11%) (p
< 0,05) ir 118,49% (112.01%, 133,28%), atitinkamai (4A pav). Gydymas MeOHGCM6 išgauti bent 10 mikrogramų /ml sumažino ląstelių proliferaciją norma 87.00% (82,43%, 89,62%). Apdoroti U937 ląstelės su betametazono eksponuojami didelės dozės dydžio priklausomas jų platinimo norma (4b paveikslas). Mažesnėmis koncentracijomis betametazono (0,1, 1, 5 ir 10 Nm), ląstelių proliferacija norma buvo 110,35% (92,20% 115,83%), 113,75% (89,56% 122,98%), 94,59% (85,56% 101,93%) ir 80.48% (77,78%, 110,48%), atitinkamai. 4 pav citotoksiškumo poveikis įvairių koncentracijų MeOHGCM6 ekstraktu ir betametazono apie U937 monocitine ląsteles. Proliferacijos norma U937 monocitinę ląstelių, gydytų Didinamos koncentracijos (A) MeOHGCM6 ekstrakto ir (B) betametazono buvo nustatomas per 24 valandas atliekant MTT. Dėl ląstelių proliferacijos procentas yra santykinis prie ląstelių sėklomis prieš administravimo skirtingus dozes MeOHGCM6 ekstrakto ir betametazono skaičius. Į MeOHGCM6 ekstrakto koncentracija, kad sukelia 30% (G130), 50% (G150) ir 70% (G170) ląstelių proliferacijos slopinimui buvo ekstrapoliuoti iš sklypo (rodykle nurodyta). Rezultatai buvo išreikštas kaip vidutinė (25% ir 75% kvartiliui) nuo dviejų nepriklausomų eksperimentų.
Poveikis MeOHGCM6 išgauti režimu reagavimo TNF-alfa lygio diferenciacija iš U937 ląstelių metu Viesbutis The iš MeOHGCM6 poveikis išgauti gydymą TNF-alfa reakcijos lygis reglamentas U937 ląstelių diferenciacijos metu buvo tiriamas naudojant ELISA. Atsakas TNF-α lygis pasiekė maksimalų lygį 43.28 ± 5.15 pg /ml per 8 valandas po kai U937 ląstelės buvo sukeltas diferencijuoti (5a pav). Nuo 10 g /ml MeOHGCM6 ekstrakto akivaizdoje diferenciacijos U937 ląstelių metu, TNF-α reakcijos lygis žymiai sumažėjo iki 8 val [0,14 ± 0,28 pg /ml (p
< 0,001)] ir buvo panašus į stebėtą į betametazono akivaizdoje [0,28 ± 0,56 pg /ml (p
< 0,001)]. 5 pav MeOHGCM6 išgauti režimu TNF-alfa reakcijos lygis ir TNF-alfa ir IL-6 genų ekspresijos diferenciacijos U937 monocitinę ląstelių metu. Į U937 monocitine ląstelės buvo sukeltas diferencijuoti su 10 nm PMA. diferenciacijos metu U937 monocitine ląstelės buvo gydomi MeOHGCM6 ekstrakto. (A) TNF-α reakcijos lygis buvo įvertinami naudojant ELISA. (B) TNF-α ir (C), IL-6 genų ekspresijos lygiai buvo skaičiais, naudojant KRL-PGR. Rezultatai buvo pateikti kaip vidurkis ± Š.D. nuo egzemplioriais tyrimus.
poveikio MeOHGCM6 išgauti režimu TNF-alfa ir IL-6 genų ekspresijos diferencijuoti U937 ląstelių Viesbutis The TNF-alfa ir IL-6 reguliavimas MeOHGCM6 išgauti gydymo metu per U937 ląstelių diferenciacija buvo toliau tiriami genų ekspresijos lygį naudodami KRL PGR. TNF-α geno ekspresijos lygis pasiekė aukščiausią tašką po 6 valandų (3.16 ± 0,48 kopijų /aktino) iš U937 ląstelių diferenciacijos (5b pav.) TNF-α geno ekspresijos lygis sumažėjo per pirmąsias 6 valandas [0,52 ± 0,28 kopijų /aktino (psl
< 0,001)] nuo U937 ląstelių diferenciacijos 10 mikrogramų /ml, MeOHGCM6 ekstrakto buvimą. Sumažėjo į diferenciacijos metu TNF-alfa genų ekspresijos lygį U937 ląstelių, gydomi 10 mikrogramų /ml, MeOHGCM6 buvo panašus arba geresnis nei išvadų iš gydymo 10 nm betametazono [0,55 ± 0,42 kopijų /aktino (psl pervežimas < 0,001)]. IL-6 genų ekspresijos lygis žymiai išaugo ir pasiekė 0,68 ± 0,09 kopijų /aktino po 12 valandų nuo U937 ląstelių diferenciacijos (5c pav.) Sumažėjimas IL-6 genų ekspresijos lygio buvo pastebėta, kad 0,10 ± 0,01 kopijų /Aktinis, 0,23 ± 0,02 kopijų /aktino (psl
< 0,01), 0,37 ± 0,04 kopijų /aktino (psl
< 0,001 ) ir 0,45 ± 0,05 kopijų /aktino (p
< 0,001) ne 3, 6, 9 ir 12 valandų, atitinkamai, kai U937 ląstelės diferenciacijos metu buvo gydomi 10 g /ml MeOHGCM6 ekstrakto. Slopinimas IL-6 genų ekspresijos lygį nuo MeOHGCM6 ekstrakto akivaizdoje buvo panašus į betametazono.
Profilaktinis gydymas pasekmės MeOHGCM6 išgauti ant žiurkių skrandžio turinys šie EtOH sukelta ūmine skrandžio gleivinės traumos
Skrandžio gleivinės sekrecija, skrandžio sulčių kiekį ir skrandžio gleivinės pH buvo nustatomas iš skrandžio turiniu žiurkės skrandžio anksto apdorotą MeOHGCM6 ekstrakto po EtOH maitinti. 2,45 ± 0,25 gm skrandžio gleivių ir 1,75 ± 0,20 ml skrandžio sulčių buvo išskirti iš žiurkių maitinami tik ekstrakto skiediklio (2 lentelė) skrandį. 1.54 ± 0,31 gm skrandžio gleivių ir 0,96 ± 0,25 ml skrandžio sulčių ir 1,68 ± 0,19 gm skrandžio gleivių ir 0,96 ± 0,16 ml skrandžio sulčių buvo susigrąžinta iš žiurkių anksto paveiktų 250 ir 500 mg /kg, sv iš MeOHGCM6 ekstraktas, atitinkamai. Palyginimui, 2,31 ± 0,42 gm skrandžio gleivių ir 1,15 ± 0,36 ml skrandžio sultys buvo susigrąžintos iš žiurkių anksto gydomi 20 mg /kg b.w OMP. 2,75 ± 0,49 gm skrandžio gleivių ir 1,75 ± 0,28 ml skrandžio sulčių buvo susigrąžinta iš žiurkių šeriami panašiai parengtą nesusijusiam augalų ekstraktas, kad tarnavo kaip NSPE kontrolę. Visi autoriai skaityti ir patvirtino galutinį rankraštį.

• Antioksidantai ir skrandžio apsaugančių prostaglandinai savybės Cassia sieberiana šaknys žievės ekstraktas kaip anti-opas agent
• Genetinis kintamumas CYP3A4 ir CYP3A5in pirminis kepenų, skrandžio ir storosios žarnos vėžys patients