efeitos anti-inflamatórios, gastroprotective e anti-ulcerosas de algas vermelhas Gracilaria changii (Gracilariales, Rhodophyta) extract

efeitos anti-inflamatórios, gastroprotective e anti-ulcerosas de algas vermelhas Gracilaria changii
(Gracilariales, Rhodophyta) extraem da arte abstracta
Fundo
Gracilaria changii
(Xia et Abbott) Abbott, Zhang et Xia, uma alga vermelha comumente encontrados nas zonas costeiras da Malásia é tradicionalmente utilizado para os alimentos e para o tratamento de várias doenças, incluindo a inflamação e doenças gástricas . O objetivo do estudo foi investigar anti-inflamatório, gastroprotective e anti-ulcerogênico atividades de uma espectrometria de massa padronizado extrato metanólico de Gracilaria changii
.
Métodos
extrato metanólico de Gracilaria changii
(extrato MeOHGCM6 ) foi preparada e padronizada usando espectrometria de massa (MS). As actividades anti-inflamatórias do extracto de MeOHGCM6 foram examinados por tratamento de células U937 durante a sua diferenciação com 10 ug /ml de extracto MeOHGCM6. factores-α (TNF-α) nível de resposta e TNF-α e interleucina-6 (IL-6) a expressão do gene de necrose tumoral foram monitorizados e comparados com que tratado por 10 nM de betametasona, uma droga anti-inflamatória. actividades gastroprotectoras e anti-ulcerosas do extracto MeOHGCM6 foram examinados pela alimentação de ratos com extracto MeOHGCM6 que variaram de 2,5 a 500 mg /kg de peso corporal (p.c.) após a indução de lesões gástricas. A produção de muco e suco gástrico, o pH dos sulfidrilos e suco gástrico não proteicos (NP-SH) foram determinados e comparados com que alimentado por 20 mg /kg p.c. omeprazol (OMP), um conhecido medicamento anti-úlcera.

Resultados da análise por MS /MS dos extractos MeOHGCM6 revelou a presença de 10-metil hydroxyphaeophorbide um
e 10-hydroxypheophytin um
, clorofila conhecido proteínas e várias moléculas não identificados. O tratamento com 10 ug /ml de extracto MeOHGCM6 durante a diferenciação das células U937 inibiu significativamente o nível de resposta de TNF-α e TNF-α e o gene de IL-6 de expressão. O efeito inibitório foi comparável à de betametasona. Sem efeitos citotóxicos foram registados para as células tratadas com o /ml de extracto MeOHGCM6 10 ug. Os ratos alimentados com MeOHGCM6 extrair a 500 mg /kg p.c. mostraram uma redução do tamanho das lesões gástricas induzidas por etanol absoluto em > 99% (p
< 0,05). Este efeito protector era comparável à conferida pela OMP. O pH do muco gástrico diminuiu de forma dependente da dose, 5,51-3,82 e houve um aumento significativo em concentrações de NP-SH.

Conclusões Os resultados do estudo, sugerem que a espectrometria de massa padronizado extracto metanólico de Gracillaria changii
possui propriedades anti-inflamatórias, gastroprotective e anti-ulcerosas. Uma análise mais aprofundada do componente ativo do extrato e seu mecanismo de ação é garantido no futuro.
Palavras-chave
Anti-inflamatórios Anti-ulcerogênico changii gastroprotetora Gracilaria
Fundo citocinas betametasona Omeprazol Algas Úlcera
inflamação é uma característica importante de muitas doenças. É caracterizada por um complexo de interacções entre orquestradas mediadores da inflamação e células inflamatórias voltadas para remover irritantes e cura de lesões dos tecidos [1, 2]. A inflamação é um importante mecanismo de defesa do hospedeiro. A inflamação que ocorre na mucosa do tracto gastrointestinal, no entanto, provoca úlcera gastrointestinal [3]. úlcera gastrointestinal é um grave distúrbio comum do sistema digestivo que afeta milhões de americanos e muitos mais em todo o mundo [4]. A causa mais comum de doença da úlcera gastrointestinal são as infecções com Helicobacter pylori
(H. pylori
) [5], e o uso a longo prazo de drogas anti-inflamatórias não esteróides (AINEs) como aspirina e ibuprofeno [6]. O advento de controlos de antibióticos contra H. pylori
reduziu significativamente o número de casos de úlceras gastrointestinais nos países desenvolvidos [7]. A doença no entanto, continua a ser elevado e em outros países a doença causada pela utilização de NSAIDs é ainda um grande problema de saúde em países desenvolvidos [6, 7].
Tratamento para a inflamação em geral, destina-se a qualquer inibição da actividade de células inflamatórias ou a inibição da produção de mediadores inflamatórios [8]. A última pode ser conseguida utilizando fármacos AINEs, tais como os corticosteróides e [9]. O tratamento para a úlcera gastrointestinal em geral, destina-se a eliminar qualquer infecção por H. pylori
ou redução e inibição dos níveis de produção de ácido gástrico responsáveis ​​pela erosão da camada protectora gastrointestinal [10, 11]. A medicação de protecção posterior pode ser realizada usando drogas, tais como a histamina ( 2 H) beta-bloqueadores, inibidores da bomba de ácido e da mucosa [9]. No entanto, têm sido descritos vários efeitos colaterais do uso a longo prazo destas drogas [9]. Além disso, anti-inflamatório e anti-ulcerosas são utilizados principalmente para aliviar os sintomas da doença sem realmente tratar ou prevenir os processos inflamatórios e ulcerosas.
Desenvolvimento de drogas anti-inflamatórias e anti-ulcerosas recentemente tem-se centrado na descoberta a aplicação favorável de extractos à base de plantas derivadas de plantas que são potentes e mais seguro de usar. Algas encontradas crescendo em abundância fora das zonas costeiras de muitas partes do mundo representam um enorme potencial ainda inexplorado para nova fonte de terapêutica [12, 13]. As algas vermelhas, por exemplo, tem sido relatado para conter compostos activos que podem ajudar a melhorar a inflamação do tracto digestivo [14], prevenir ou tratar úlceras gástricas e cancros causados ​​pelo stress oxidativo [15, 16], inibem actividades inflamatórias através da supressão da produção de mediadores inflamatórios [17-19] e induzem a apoptose de células de cancro no estômago [20] e do cólon [21]. Os compostos naturais derivados das algas comestíveis poderia ser mais seguro para ser utilizado como anti-inflamatório e gástrica terapêutica anti-ulcerosas como foram tidas como alimento e utilizadas na medicina tradicional desde tempos imemoriais [13]. A
algas vermelhas, Gracilaria changii
(Xia et Abbott) Abbott, Zhang et Xia encontrada crescendo fora das áreas costeiras da Malásia representa um potencial fonte local desta terapêutica de origem natural. Atualmente, as algas são comercialmente colhidas somente pelo seu conteúdo agar coloidal e como iguarias locais. Estas algas são amplamente aplicada na medicina popular para o tratamento de várias doenças, incluindo a inflamação e doenças gástricas. O presente estudo tem como objetivo avaliar o potencial de atividades anti-inflamatórias, gastroprotective e anti-ulcerosas destas algas vermelhas da Malásia, Gracilaria changii
.
Métodos
Algas extrair preparação
Gracilaria changii
(Xia et Abbott) Abbott, Zhang et Xia foram coletados a partir da água costeira de Morib, Selangor, Malásia (N2 ° 44 '908 ", E101 ° 26' 590") no final de Fevereiro de 2003 [22-24]. As algas foram identificadas pelo Professor Dr. Phang Siew Moi, Director do Instituto de Oceano e Ciências da Terra, Instituto de Ciências Biológicas da Faculdade de Ciências da Universidade de Malaya, onde as amostras de comprovação foram mantidas (herbário não. PSM 6320 e PSM 6321 ). As algas foram lavadas em água do mar esterilizada com uma lavagem final em água destilada estéril como anteriormente descrito [22]. As algas foram em seguida sonicada num sonicador de banho de água e mantido a -70 ° C. extrato metanólico de Gracilaria
changii (extrato MeOHGCM6) foi preparado na Universidade da Malásia Terengganu (UMT), de acordo com os métodos descritos [25]. O extracto MeOHGCM6 foi mantida a -20 ° C antes de usar.
MeOHGCM6 extrair
análise do extracto MeOHGCM6 perfil foi realizada num Shimadzu ultra-rápida cromatografia líquida (UFLC) equipada com sistema de arranjo de fotodiodos ultravioletas (UV PDA ) e detector de tempo ion trap de espectrómetro de voo (TOF) de massa (Shimadzu, Japão). A separação foi conseguida numa coluna Waters Xbridge C18 (50 mm x 2,1 milímetros, o diâmetro da partícula de 2,5 um) (Água, EUA) a 40 ° C. A fase móvel consistiu de água [0,1% de ácido fórmico (BDH Laboratory Supplies, Inglaterra)]: acetonitrilo (BDH Laboratory Supplies, Inglaterra) (0,1% de ácido fórmico) a uma taxa de fluxo de 0,50 ml /min com um volume de injecção de 10 ul . modo de ionização por electrospray (ESI) com comutação positiva /negativa e de referência externo foi utilizado para espectrometria de massa (MS). A Dictionary of Natural Products (CRC Press) com espectros de MS de alta resolução e a informação estrutural foi utilizado para analisar os espectros de i positivo e negativo, juntamente com informação de MS /MS para a identificação de componentes semelhantes.
Linha de células promonocíticas humano (células U937)
células U937 foram adquiridos da American Type Culture Collection (ATTC, EUA) e cultivadas em Roswell Park Memorial Institute 1640 (meio RPMI-1640) (Flowlab, Austrália) [suplementado com 1% de 10 mM de aminoácido não essencial (NEAA) (Flowlab, Austrália) e 1% de 10 mM de L-glutamina (L-Glu) (Flowlab, Austrália)] contendo 10% de soro inactivado por calor de bovino fetal (FBS) (Flowlab, Austrália). As células foram incubadas a 37 ° C numa incubadora humidificada com 5% de CO 2.
Diferenciação de células U937 As células U937
foram semeadas em placas de 96 poços de cultura celular (Falcon, USA) a uma densidade de 2 × 10 4 células /cavidade com meio RPMI-1640 contendo FBS a 2% e mantida a 37 ° C numa incubadora humidificada com 5% de CO 2. No dia seguinte, o meio contendo forbol 12-miristato 13-acetato (PMA) (Sigma-Aldrich, EUA), em concentrações que variam 0-50 nM foi adicionada às células monocíticas U937 para induzir a diferenciação de 24 e 48 horas. Meio contendo apenas diluentes PMA [dimetil sulfóxido (DMSO) solução (Sigma-Aldrich, EUA)] foram adicionados em paralelo e utilizado como controlo do veículo. No final do ponto de tempo indicado, as células foram avaliadas quanto à expressão de marcadores de superfície celular de macrófagos específicos da diferenciação e a viabilidade celular.
Expressão do CD11b, marcador da superfície celular de macrófagos específicos de diferenciação foi determinada por coloração das células, como descrito anteriormente [26 , 27]. A viabilidade celular foi determinada utilizando o corante azul de tripano (Sigma, EUA) ensaio de exclusão como previamente descrito [28]. citotoxicidade células U937 ensaio
foram semeadas em placas de 96 poços de cultura de células a uma densidade de 2 × 10 4 células /poço com meio RPMI-1640 contendo FBS a 2% e mantida a 37 ° C numa incubadora humidificada com 5% de CO 2. foram adicionados No dia seguinte, o meio contendo MeOHGCM6 extrair (em concentrações que variam de 0-100 ug /ml) e de betametasona (Sigma, EUA) (em concentrações que variam de 0-100 nM). Meio contendo apenas o MeOHGCM6 extrair e diluentes betametasona [etanol (EtOH) (BDH Laboratory Supplies, Inglaterra) e DMSO, respectivamente] foram adicionados em paralelo e utilizado como controlo do veículo. Um dia após o tratamento, a taxa de proliferação de células U937 foi determinada utilizando o kit de proliferação celular CellTiter 96® não radioactivo (Promega, EUA) estritamente seguindo o protocolo recomendado do fabricante.
MeOHGCM6 extrair o tratamento de células U937
células U937 foram semeadas em placas de cultura celular de 24 poços (Falcon, USA) a uma densidade de 2 × 10 5 células /cavidade com meio RPMI-1640 contendo 2% de FBS e incubou-se a 37 ° C numa incubadora humidificada com 5% CO 2. No dia seguinte, as células U937 foram induzidas para se diferenciarem com 10 nM de PMA durante 24 horas. Durante a diferenciação, as células U937 foram tratadas com o extracto MeOHGCM6 betametasona ou em concentração fisiológica. A 0, 8, 16 e 24 horas pós-tratamento, o sobrenadante e as células foram colhidas e ensaiadas para TNF-α nível de resposta e TNF-α e IL-6, a expressão do gene.
Nível de resposta de TNF-α
TNF- α nível foi medido utilizando o BD OptEIA ™ TNF humano (TNF-α) II kit de ELISA (BD Biosciences, EUA) de acordo com o protocolo do fabricante.
TNF-α e IL-6, a expressão do gene
ARN total a partir da culturas de células foram isolados usando o TRI Reagent® (Centro Molecular Research, Inc., EUA) e tratado com DNase (Promega, EUA). O ARN foi transcrito reverso (ADNc) utilizando o SuperScript II ™ Transcriptase Reversa (Invitrogen, EUA). O cDNA foi então usado para executar quantitativa PCR em tempo real utilizando SYBR® verde PCR mestre mix (Qiagen, Alemanha) no ADN do motor Opticon II® (MJ Research, Bio-Rad, EUA) como previamente descrito [29]. Os iniciadores oligonucleotídicos utilizados foram a frente e reverso 5'AAGAGTTCCCCAGGGACCTC 5'GCTTGAGGGTTTGCTACAAC para o TNF-α; encaminhar 5'GAAAGGAGACATGTAACAAG e reverter 5'CCAGGCAAGTCTCCTCATTG para IL-6; e encaminhar 5'GCGAGAAGATGACCCAGATC e reverter 5'GGATAGCACAGCCTGGATAG de beta-actina (β-actina) (referência interna).
Animais
ratas adultas Sprague-Dawley com idade entre 7 a 8 semanas e pesando 160-200 g foram utilizados para o estudo. O protocolo para experiências com animais foi aprovado pelo Comitê Institucional de Ética em Experimentação Animal da Universidade da Malásia [Número de Aprovação: MP /08/06/2010 /SMH (R)]. Os animais foram obtidos da Universidade de Putra Malásia (UPM). Os animais foram alojados individualmente em gaiolas com fundo de arame de malha larga para evitar a coprofagia. Eles foram mantidos numa sala de temperatura controlada que foi bem ventilado, com comida e água, sobre um 12 horas de luz /escuro de ciclo ao longo do estudo. Todos os ratos foram privados de alimento durante 48 horas, mas tiveram livre acesso à água potável até 2 horas antes submetê-los aos ulcerogens. Lesões gástricas induzidas por EtOH
Os ratos foram divididos aleatoriamente em 7 grupos, com cada grupo compreendendo de 6 ratos. O grupo 1 foi administrado com 10% de Tween 20 (extrato diluentes) (BDH Laboratory Supplies, Inglaterra) e serviu de grupo controle negativo. Grupo 2 recebeu 500 mg /kg p.c. do extrato não relacionada extrato vegetal equivalente MeOHGCM6 preparado de forma semelhante em paralelo como MeOHGCM6 extrair para servir como grupo de controlo extrato vegetal não-específico (NSPE). Grupo 3 foi tratada com OMP (Chemical Company da Malásia, Malásia) a 20 mg /kg p.c. e serviu como grupo controle positivo do tratamento. O restante grupo 4, 5, 6 e 7 receberam 4 diferentes concentrações do extracto MeOHGCM6 que variaram de 2,5 - 500 mg /kg de peso corporal, respectivamente. Após 30 minutos de pré-tratamento, todos os animais foram administrados com EtOH absoluto através da via oral. Uma hora após a administração, os animais foram sacrificados por sobre-dosagem los com éter dietílico (BDH Chemicals Ltd., Inglaterra). abdome do rato foi dissecado e do esófago mais próximo da cárdia e do estômago distendido sobre o esfíncter do piloro foi imediatamente amarrado em um nó usando uma corda para evitar vazamento do conteúdo gástrico. O estômago foi rapidamente removidos e imersos em água.
Medição da secreção gástrica
O conteúdo gástrico de cada estômago de rato foi aspirado e raspadas suavemente com uma espátula. O suco gástrico contendo partículas de alimentos foi descartado. O muco gástrico colhido foi pesado utilizando balança eletrônica (Mettler Toledo, Suíça). A quantidade de suco gástrico foi medida usando um cilindro de medição. O pH do conteúdo gástrico foi medido utilizando um medidor de pH digital (Crison Instruments, SA, Espanha).
Avaliação de lesões gástricas brutas
Após a colheita, o estômago foi imediatamente lavada com solução salina e examinados sob um microscópio de dissecação (1,8 ×) com uma ocular de grade quadrada. A porção glandular do estômago foi avaliada para a formação de úlcera. A área total ulcerativa (UA) das lesões hemorrágicas para cada estômago foi medida por plannimetry (mm 2) e a percentagem de inibição foi calculada utilizando a seguinte fórmula: Inibição %
=
UA
controle -
UA
tratada /Tablet UA
controle ×
100
Determinação da produção de sulfidrilos não proteicos (NP-SH)
nível NP-SH da mucosa gástrica foi medida como descrito anteriormente [30], com ligeira modificação. Resumidamente, o estômago glandular foi pesado e homogeneizado em tubos contendo ácido M arrefecida com gelo de 0,02 etilenodiaminotetra-acético (EDTA) (GibcoBRL Life Technologies, EUA) (pH 8,9). Aliquotas dos homogeneizados foram misturadas com água destilada e 50% de ácido tricloroacético (Sigma Chemical Co., EUA). A mistura foi incubada com agitação constante durante 10 minutos a 4 ° C e em seguida centrifugada a 3000 × g durante 15 minutos. A mistura foi, em seguida, ensaiados quanto a nível NP-SH utilizando um kit de ensaio de glutationa (Sigma Chemical Co., EUA), de acordo com o protocolo do fabricante. A análise estatística

Todos os dados foram expressos como média ± desvio padrão (SD) ou mediana (quartil 25% e 75%) a partir de duas ou três experiências independentes para os estudos anti-inflamatórios e sete experiências independentes para estudos gastroprotectores e anti-ulcerosas. ANOVA (análise de uma via da variância e de duas vias de análise de variância) foi utilizado para a comparação entre os grupos e, por relatar a significância estatística «p
'em relação ao grupo de controlo. O valor de P <
; 0,05 foi considerado estatisticamente significativo. Todas as análises estatísticas foram realizadas utilizando o software GraphPad Prism 4.0 (EUA) e SPSS versão 16.0 (SPSS Inc, Chicago), respectivamente.
Resultados
Padrão MeOHGCM6 extrair perfil
LC /MS análise dos diferentes lotes de extrato MeOHGCM6 foram realizados para garantir a reprodutibilidade e consistência dos métodos de extração. O lote 1 e 2 do extracto de MeOHGCM6 utilizado no estudo apresentaram perfis de espectrometria de massa altamente semelhantes e a quantidade das massas principais (Figura 1A-C). A análise dos espectros e comparação com o Dictionary of Natural Products, CRC Press identificadas as massas distintas como 457,405, 645,280 e 887,579. A massa identificadas no espectro de ião positivo m /z 457,405, 398,327 tinha fragmentos de (pico de base), 380,316 e 158,082. A perda neutra de 59,077 massa foi possivelmente indicativo de perda de trimetilamina. Isto sugere que o composto pode conter um radical trimetilamónio. Os dados de MS e MS /MS de alta resolução não conseguiu identificar definitivamente quaisquer compostos conhecidos a partir do dicionário de Produtos Naturais. As massas de m /z 645 e 887, no entanto, mostraram uma associação de dois distintos conhecidos clorofilas, 10-metil hydroxyphaeophorbide um
e 10-Hydroxypheophytin um
com as absorvâncias de UV apropriados observadas na análise PDA (Tabela 1 ). A Figura 1 Perfis dos diferentes lotes de extracto MeOHGCM6. modo de ESI com comutação positiva /negativa e de referência externo foi utilizado para a MS utilizando um sistema Shimadzu UFLC. Total espectros de iões positivos analisados ​​para a identificação de componentes semelhantes a partir de dois lotes diferentes de extracto MeOHGCM6 utilizado no estudo. (A) MeOHGCM6 extracto (lote 1; M6-1). (B) o extrato MeOHGCM6 (lote 2; M6-2). (C) A comparação da intensidade das massas mais abundante dos dois MeOHGCM6 extracto de lotes utilizado no estudo.
Tabela 1 identificações estrutura da massa mais significativa presente no extracto MeOHGCM6 utilizando LC /MS
de Massa (ião)
Encontrado em lote
Possível ID
417,298
1, 2
O mais provável contaminante
457,405 *
1, 2
Unidentified
461,326
1, 2
O mais provável contaminante
505,353
1, 2
O mais provável contaminante
573,256
1, 2
Unidentified
645,280
1, 2
metil 10 hydroxyphaeophorbide um
743,636
1, 2
Unidentified
887,579
1, 2
10 Hydroxypheophytin um
Dictionary of Natural Products, CRC Press com alta resolução espectros de MS foram utilizados para analisar o espectro total de iões positivos para a identificação de possíveis constituintes químicos.
* MS /MS (% intensidade relativa) 457,405 398,327 → ( 100%), 380,316 (50%), 158,082 (40%).
expressão do marcador de superfície celular de macrófagos específicos de diferenciação em células U937
células diferenciadas U937 são distinguidos pela expressão dos monócitos /macrófagos de linhagem específica CD11b , a proteína marcador da superfície [26]. No nosso estudo, a expressão do CD11b foi marcado com uma intensa marcação azul acastanhado na superfície da célula [27]. A expressão do CD11b foi grandemente aumentada quando as células U937 foram induzidas para se diferenciarem com o aumento da concentração de PMA (1, 10 e 50 nM) (Figura 2, Figura 3A). A descoberta sugere que o tratamento com 10 ou 50 nM de PMA durante 24 horas ou 1 nM de PMA durante 48 horas, as células U937 diferenciadas estava bem acima de 50% da cultura de células. Figura 2 Expressão do marcador da superfície celular específico de macrófagos-diferenciação em células monocíticas U937 diferenciadas. células monocíticas U937 foram induzidas para se diferenciarem com (A) 0 nM de PMA durante 24 horas; (B) 0 nM de PMA durante 48 horas; (C) 1 nM de PMA durante 24 horas; (D) de 1 nM PMA durante 48 horas; (E) 10 nM de PMA durante 24 horas; (F) 10 nM de PMA durante 48 horas; (G) 50 nM de PMA durante 24 horas e (H) 50 nM de PMA durante 48 horas. As células foram coradas utilizando coloração imuno-histoquímica para identificar a presença de CD11b, um marcador de superfície celular de macrófagos. células monocíticas U937 diferenciadas foram identificados pela intensa mancha azul acastanhado na superfície celular das células diferenciadas. As células foram visualizadas em 20 × ampliações sob campo claro utilizando um microscópio invertido e fotografadas usando uma câmara D70 Nikon (Nikon, Japão). Um conjunto arquetípica de fotografias de três experiências separadas são mostrados.
Células monocíticas Figura 3 U937 específicos de Diferenciação expressão do marcador e viabilidade celular determinação da superfície celular de macrófagos. células monocíticas U937 foram induzidas para se diferenciarem com várias concentrações de PMA durante 24 e 48 horas. (A) As percentagens de células diferenciadas foram marcados pela presença de CD11b na superfície da célula. (B) As percentagens de células viáveis ​​foram contadas utilizando ensaio de exclusão de azul de tripano. A percentagem de células diferenciadas ou por células viáveis ​​totais é o mesmo antes da experiência utilizando diferentes concentrações de PMA e período de incubação. Os dados são apresentados como a média ± S.D. a partir de três experiências independentes com '*', P
< 0,05 representar diferença significativa em comparação com o grupo que não foram induzidas para se diferenciarem. Determinação da viabilidade celular
em células U937 diferenciadas
As células U937 diferenciadas viáveis ​​foram contadas usando o ensaio de exclusão com corante azul de tripano. As células U937 viabilidade exibiu uma redução dependente da dose significativo na percentagem de células viáveis ​​quando induzidas para se diferenciarem com 1, 10 e 50 nM de PMA (Figura 3B). A constatação sugeriu que 90% das células U937 diferenciadas foram ainda viável após o tratamento com 1 ou 10 nM de PMA durante 24 horas ou 1 nM de PMA durante 48 horas. A citotoxicidade de
MeOHGCM6 extrair em células U937
Os efeitos citotóxicos de o extracto MeOHGCM6 e betametasona sobre as células U937 foram determinados através do cálculo da taxa de proliferação celular. As células U937 tratadas com o MeOHGCM6 extrair a 0,05, 0,5, 1 e 5 ug /ml de rajadas proliferativas expostos de 117,39% (108,48%, 122,10%), 152,04% (149,36%, 154,72%) (p
< 0,05) , 145,60% (137,48%, 149,11%) (p
< 0,05) e 118,49% (112,01%, 133,28%), respectivamente (Figura 4A). O tratamento com MeOHGCM6 extrair em 10 ug /ml reduziu a taxa de proliferação de células de 87,00% (82,43%, 89,62%). As células U937 tratadas com a betametasona apresentaram redução dependente da dose significativo na sua taxa de proliferação (Figura 4B). A concentrações mais baixas de betametasona (0,1, 1, 5 e 10 nM), a taxa de proliferação de células foi 110,35% (92,20%, 115,83%), 113,75% (89,56%, 122,98%), 94,59% (85,56%, 101,93%) e 80,48% (77,78%, 110,48%), respectivamente. Figura 4 efeitos de citotoxicidade de várias concentrações de extracto MeOHGCM6 e betametasona em células monocíticas U937. A taxa de proliferação de células monocíticas U937 tratadas com concentrações crescentes de (a) extracto MeOHGCM6 e (B) betametasona foi determinada ao longo de um período de 24 horas através da realização de um ensaio MTT. A percentagem de proliferação das células é em relação ao número de células semeadas antes de administrar as diferentes doses de extracto MeOHGCM6 e betametasona. As concentrações de extracto MeOHGCM6 que causou 30% (G130), 50% (G150) e 70% (G170) de inibição da proliferação celular foram extrapoladas a partir da parcela (indicado por uma seta). Os resultados foram expressos como a mediana (25% e 75% quartil) a partir de duas experiências independentes.
Efeitos do tratamento em MeOHGCM6 extrair o nível de resposta de TNF-α durante a diferenciação das células U937
Os efeitos do tratamento sobre MeOHGCM6 extrair a regulação do nível de resposta TNF-α durante a diferenciação de células U937 foi investigado utilizando ELISA. O nível de resposta de TNF-α atingiu um nível máximo de 43,28 ± 5,15 pg /ml a 8 horas, quando as células U937 foram induzidas para se diferenciarem (Figura 5A). Na presença de extracto MeOHGCM6 10 ug /ml durante a diferenciação das células U937, o nível de resposta de TNF-α significativamente diminuída até 8 horas [0,14 ± 0,28 pg /ml (p
< 0,001)] e foi comparável à observada na presença de betametasona [0,28 ± 0,56 pg /ml (p
< 0,001)]. Figura 5 MeOHGCM6 extrair tratamento no nível de resposta de TNF-α e TNF-α e IL-6, a expressão do gene durante a diferenciação das células monocíticas U937. As células monocíticas U937 foram induzidas para se diferenciarem com 10 nM de PMA. Durante a diferenciação, as células monocíticas U937 foram tratadas com extrato MeOHGCM6. (A) O nível de resposta TNF-α foram quantificados utilizando ELISA. O (B) os níveis de expressão de genes (C) IL-6, TNF-α e foram quantificados utilizando qRT-PCR. Os resultados foram expressos como a média ± S.D. a partir de ensaios em quadruplicado.
Efeitos de MeOHGCM6 extrair o tratamento na produção de TNF-α e IL-6, a expressão do gene durante a diferenciação das células U937
A regulação de TNF-α e IL-6 por tratamento durante MeOHGCM6 extrair as células U937 diferenciação foi adicionalmente investigado ao nível da expressão génica utilizando qRT-PCR. O nível de expressão do gene de TNF-α pico após 6 horas (3,16 ± 0,48 cópias /actina) das células U937 diferenciação (Figura 5B). TNF-α nível de expressão de genes diminuiu durante os primeiros 6 horas [0.52 ± 0.28 cópias /actina (p
< 0,001)] diferenciação de células U937, na presença de 10 ug /ml de extracto MeOHGCM6. A diminuição no nível de expressão do gene de TNF-α de células U937 durante a diferenciação quando tratado com 10 ug /ml MeOHGCM6 foi comparável ou melhor do que os resultados do tratamento com 10 nM de betametasona [0,55 ± 0,42 cópias /actina (p
< 0,001)]. O nível de expressão do gene da IL-6 mostraram um aumento significativo e atingiu um máximo de 0,68 ± 0,09 cópias /actina após 12 horas das células U937 diferenciação (Figura 5C). Diminuição do nível de expressão do gene de IL-6 foi observado para ser 0,10 ± 0,01 cópias /actina, 0,23 ± 0,02 cópias /actina (p
< 0,01), 0,37 ± 0,04 cópias /actina (p
< 0,001 ) e 0,45 ± 0,05 cópias /actina (p
< 0,001) aos 3, 6, 9 e 12 horas, respectivamente, quando as células U937 durante a diferenciação foram tratadas com 10 ug /ml de extracto MeOHGCM6. A inibição dos níveis de IL-6 de expressão de genes na presença do extracto MeOHGCM6 era comparável à de betametasona.
Efeitos do tratamento profilático de MeOHGCM6 extracto obtido no conteúdo gástrico ratos após lesão aguda da mucosa gástrica induzida por EtOH
muco gástrico secreção, volume de suco gástrico e o pH do muco gástrico foram determinadas a partir do conteúdo gástrico do estômago de ratos pré-tratados com extracto MeOHGCM6 seguinte alimentação de EtOH. 2,45 ± 0,25 gm de muco gástrico e 1,75 ± 0,20 ml de suco gástrico foram recuperados a partir do estômago de ratos alimentados com apenas o diluente extracto (Tabela 2). 1,54 ± 0,31 gm de muco gástrico e 0,96 ± 0,25 ml de suco gástrico e 1,68 ± 0,19 g de muco gástrico e 0,96 ± 0,16 ml de suco gástrico foram recuperados a partir de ratos pré-tratados com 250 e 500 mg /kg p.c. MeOHGCM6 de extrair, respectivamente. Em comparação, 2,31 ± 0,42 g de muco gástrico e 1,15 ± 0,36 ml de suco gástrico foi recuperado a partir de ratos pré-tratados com 20 mg /kg b.w OMP. 2,75 ± 0,49 gm de muco gástrico e 1,75 ± 0,28 ml de suco gástrico foram recuperados a partir de ratos alimentados com extracto de planta preparado de modo semelhante não relacionada que serviu como o controlo NSPE. Todos os autores leram e aprovaram o manuscrito final.

• Antioxidantes e gástricas prostaglandinas propriedades citoprotetores de Cassia extrato de raízes sieberiana casca como um agente anti-ulcerogênico
• Variabilidade genética em CYP3A4 e CYP3A5in primário do fígado, estômago e pacientes com câncer colorretal