Kazuistika: familiárny karcinóm žalúdka a chordom v rovnakej rodine

Kazuistika: familiárny karcinóm žalúdka a chordom v rovnakej rodine
abstraktné
karcinómov žalúdka sú druhou najčastejšou zhubný nádor na svete a predstavujú veľkú záťaž pre všetky spoločnosti aj napriek tomu, že výskyt ochorenia klesajúci v priemyselnom svete , Etiológia ochorenia je komplexná a je veril byť primárne kvôli faktorom životného prostredia, ale malá časť prípadov sú uznané za osoby spojené s genetickými faktormi. Boli identifikované dve dedičné formy rakoviny žalúdka, ten, ktorý je spojený s familiárna clusterings rakoviny žalúdka a druhý je podskupina rodín, ktoré patria dedičné non polypózy hrubého čreva (alebo Lynch syndróm). V tejto správe predkladáme malú nukleárnu rodinu, ktorá je neobvyklá v tom, že je zhlukovaniu malignity ktorá zahŕňa rakovinu žalúdka, hrubého čreva a chordom. Genetická analýza sa nepodarilo odhaliť žiadnu kauzálny mutácie v génoch spojených s HNPCC alebo E-cadherin. Spoločne klinický obraz v tejto rodine môže znamenať, že ďalšie genetické faktory sú za zhlukovaniu tejto rodine je malignity.
Kľúčové
rakovina žalúdka HNPCC E-cadherin chordom Úvod
karcinómov žalúdka predstavujú druhou najčastejšou zhubný nádor po celom svete, hoci výskyt ochorenia sa zdá byť klesajúci v priemyselnom svete. Karcinómov žalúdka sú morfologicky heterogénne s tromi typmi; difúzna rakovinu žalúdka, pracovné žliaz (alebo črevné) typ a zmes difúzna a črevné ochorenia.
Príčiny rakoviny žalúdka sú obaja životného prostredia a genetické alebo zmes oboch. Relatívne nedávno bol identifikovaný konečnej genetická príčina rakoviny žalúdka (mutácie v géne pre E-cadherin), najprv vo veľkom Nový Zéland Maorské príbuzenstva [1] a následne v ďalších žalúdočných rodinách [2]. Pacienti nesúci mutácie v géne pre E-cadherin majú tendenciu prejavovať difúzne ochorenie vzhľadom k tomu, boli preukázané žiadne genetické faktory familiárna agregácie črevného karcinómu žalúdka.
Alternatívne genetické príčiny rakoviny žalúdka v spojení s celou radou iných epiteliálnych nádorov je dedičné rakoviny hrubého čreva non polypóza (HNPCC). Táto entita je charakteristický rýchly nástup rakoviny hrubého čreva a rady ďalších epiteliálnych malignít vrátane rakoviny endometria a rakoviny žalúdka. Genetický základ tohto stavu je zrútenie mismatch DNA opravy v dôsledku mutácie v génoch kontrolujúcich tento proces. V súčasnej dobe štyri gény boli izolované a spojené s HNPCC, hMLH1, hMSH2, hMSH6 a hPMS2. Obaja hMSH2 a hMSH6 sú umiestnené na chromozóme 2, hMLH1 je na chromozóme 3 a hPMS2 je na chromozóme 7 (pre prehľad pozri Niessen et al 2004 [3]).
Chordomas sú zriedkavé pomaly rastúce kostnej nádory, ktoré sú považované vyplývajú z Notochord zvyšky [3]. Ktoré sa objavujú na spodnej časti lebky a majú relatívne benígne histologický vzhľad. Cez ich vzhľad benígnych chordomas majú infiltratívny vlastnosti, ktoré sú ťažké kontrolovať. Dochádza k miernemu prevaha pre mužov, ktoré majú byť ovplyvnené s celkovou pomer mužov a žien od asi 1,7: 1. Prevaha mužov sa stáva výraznejšie u pacientov s sakrálnych chordomas kde pomer mužov k ženám sa blíži 3: 1. Málo je známe o molekulárnej základe chordomas, pretože sa zdá, že žiadny hrubý chromozomálne abnormality alebo akýkoľvek iný zreteľný charakteristický rys. Boli identifikované dva genetické lokusy. Prvý údaj o genetickom základe pre chordom prišiel z väzobných štúdií, ktoré odhalili génový lokus na chromozóme 1 [4]. Druhé miesto bol identifikovaný v malej sérii rodín spojené s chromozómu 7q33, čo vyvolalo rad potenciálnych kandidátnych génov [5].
V tejto správe sme identifikovali malú rodinu, ktorá sa vyznačuje tým, rakovinu žalúdka a prítomnosťou . z chordom v jednom z troch súrodencov z ktorých všetci podľahli malignity
pacientov a metódy
rodinnú anamnézu ochorenia je nasledujúci: skúšaná osoba prezentované vo veku 56 rokov sa zle diferencovaného adenokarcinómu slepého čreva bez prítomnosti adenomatóznych polypov. V čase vyrezanie nádor sa metastázovala do troch lymfatických uzlín. Bolo zistené, že pacient má rozsiahle metastázy vo veku 60 rokov a zomrel o rok neskôr. Jediný ďalšie pozoruhodné zistenie vzhľadom k tomuto pacientovi bola kongenitálna aplázia ľavom stehne. Rodina histórie probanda odhalila históriu rakoviny zažívacieho (viď obr. 1). Obrázok 1 Vývod rodiny. rakovina žalúdka = st; Ch = chordoma; CRC = kolorektálny karcinóm. Štvorce predstavujú samca, kruhy ženy
otca probanda bol diagnostikovaný s rakovinou žalúdka vo veku 67 rokov. Nádor bol diagnostikovaný ako nediferencovanej mucinózního karcinómu s uzatváracou prsteň bunky, ktoré mali v čase operácie už rozšírila do pečene.
Najstaršie brat pacienta bola diagnostikovaná vo veku 7 rokov 1/2 s malígnym chordom na spodnej časti lebky a zomrel čoskoro po. Nádor sa nachádza medzi Clivus a mosta, ktorá viedla k typickej neurologické príznaky. Nádor sa dotýkal sa zrakového nervu vedie k závažným atrofie, najmä na pravej strane. Okrem toho boli rozmanité pečeňové metastázy.
Bol druhý brat diagnózu adenokarcinóm žalúdka pochádzajúceho Kardio. Nádor bol nediferencovanej mucinózní typ striedajú s uzatváracou prsteň buniek, podobne ako u otca. V čase diagnózy bolo zistené, že ochorenie, ktoré sa šíri s metastázami do stavce, pečene, nadobličiek a pľúcach.
DHPLC analýzu
Celá kódujúce sekvencie hMSH2, hMLH1 a E-cadherinu vrátane IntronA /exónu hranice boli testované mutácie analýzou dHPLC. Nezvyčajné konformery boli ďalej hodnotené priamym sekvenovaním DNA.
Polymerázová reťazová reakcia (PCR) pre analýzu dHPLC bola vykonaná za použitia primérov špecifických pre hMSH2 a hMLH1, ako je opísané skôr (Holínské-Feder et al 2001). Reakčná zmes sa skladala z 1,0 uM každého priméru, 1 U Platinum Taq (Gibco-BRL), 2 až 5 mM MgCl 2 a 200 μ
M každého dNTP.
PCR amplifikácia bola dosiahnutá počiatočná denaturáciu pri 94 ° C po dobu 5 minút a následne 14 cyklov 94 ° C počas 1 min, 7 ° C dotykového rozsahu po dobu 1,5 minúty a 72 ° C po dobu 2 minút, potom 20 cyklov za použitia žíhacie teplota 0,5 ° C nižšia, než je dolnej časti touchdown rozsah. Chladiaci krok bol vykonaný ako pristávacie protokolu s radom 7 ° C, znižuje o 0,5 ° C /cyklus viac ako 14 cyklov. Nasledovala finálnej kroku extenzie pri 72 ° C počas 10 minút, posledný krok denaturácia pri 95 ° C počas 5 min a pomaly žíhanie od 95 ° C do 65 ° C počas 30 minút na podporu tvorby heteroduplexů. PCR bola vykonaná na PCR expresné (Hybaid) nástroje vybaveného s vyhrievaným vekom, aby sa zabránilo použitie minerálneho oleja.
DHPLC analýza bola vykonaná s použitím systému Varian Helix (Varian Inc., Walnut Creek, CA). PCR produkty (2-5 μ
l) boli injikované priamo do DNA Eclipse (Hewlett Packard) alebo stĺpci Helix (Varian), a vymýva z kolóny za použitia zvyšujúcej sa gradientom acetonitrilu a teplotu stĺpec rúry vhodný pre každú exónu hMSH2 , hMLH1 a E-cadherin (skutočné sú k dispozícii na požiadanie teploty). Heteroduplexy vytvorené počas PCR vzorke heterozygote boli detekované ako ďalší vrchol eluačného pred homoduplex vrcholu. Detekcia heteroduplexů bol jednoduchší s použitím Review dHPLC dodávané od Varian. V predpovedal topenia Teploty DNA s dvojitým reťazcom produkty boli získané pomocou programu dHPLC rozpúšťajúce k dispozícii od http: ... //Www vloženie Stanford edu /roztaviť html (podrobnosti pozri tabuľky 1a a 1b. ).
Pre každý segment negatívna kontrola fragment (amplifikovaný z DNA izolovanej z normálneho zdravého darcu, ktorý nemal rodinnej anamnéze ochorenie) bol spustený kolónou denaturáciu pri nedenaturující teplote 50 ° C. 50 ° C profil pík sa potom v porovnaní s profilom Stanford teplotou topenia príslušného fragmentu, rovnako ako tri krokoch po 1 ° C na každej strane predpokladané teploty topenia. Čiastočne denaturované boli stanovené podmienky, kedy bola vykonaná zmena v retenčným časom aspoň alebo rovno 30 sekúnd po 1 ° C prírastok rozsahu. Optimálna teplota topenia bola vždy vykonaná vyššej teplote, za čiastočne denaturačných podmienok, ktoré nevykazujú degradáciu profilu.
DNA sekvenovanie
Všetky heteroduplexů boli podrobené sekvenovania DNA určiť presnú genetickú zmenu na poloautomaticky sekvenčné jednotky ( model 310, Perkin-Elmer Applied Biosystems Division, Foster City, CA) za použitia dideoxy. Sekvenovanie PCR produktov bola vykonaná za použitia verzia 1 BigDye dideoxy sekvenovaním Ready rxn kit (Perkin-Elmer, Foster City, CA). Výsledky
Rodina je znázornené na Obr. 1 je v súlade s kritériami Amsterdam II, kde iné epiteliálne malignít môžu nahradiť kolorektálneho karcinómu. Prítomnosť dvoch karcinómov žalúdka je nezvyčajné a môže byť pripomínajúce familiárna karcinómu žalúdka v dôsledku mutácií v E-cadherinu.
Tu bola k dispozícii pre testovanie imunohistochémia alebo mikrosatelitních nestabilita žiadny materiál. Vzorka DNA bola k dispozícii od probanda, ktorá bola podrobená analýze mutácií. Pretože rodina držal kritériu Amsterdam II bola vykonaná na začiatku hMSH2 a hMLH1 analýza mutácií. Žiadne mutácie boli zistené v kódujúci sekvenciu buď hMSH2 alebo hMLH1 vrátane IntronA /exon hraníc.
Vzhľadom na to, že dve osoby s diagnózou karcinómu žalúdka ďalšej obrazovke mutácie bola vykonaná v géne E-cadherinu, ale neboli zistené žiadne škodlivé zmeny .
Diskusia
neúspechu zistenia mutácie v hMLH1, hMSH2 alebo E-cadherin naznačuje, že by mohli byť ďalšie genetické faktory spôsobujúce túto chorobu v tejto rodine. Existuje však možnosť, že mutácia bola premárnená v jednom z týchto troch génov, pretože deleční analýza nebola vykonaná ani nebolo možné tak urobiť ako tam bol nedostatočný genetický materiál, aby k tomu došlo. Okrem toho, pretože pacienti podľahlo svojim chorobám niekoľko desiatok rokov, je nepravdepodobné, že testovanie imunohistochémia alebo mikrosatelitních nestabilita by sa mohli vykonať pre hodnotenie pravdepodobnosť tejto rodiny, ktoré patria do subjektu HNPCC. E-cadherin bol pravdepodobným kandidátom na základe prítomnosti pečatný prsteň buniek v priebehu dvoch karcinóm žalúdka.
Zostáva niekoľko možností, pokiaľ ide o to, čo môže dôjsť v tejto malej rodiny. Po prvé, je aj naďalej možné, že sa skutočne jedná o rodinné HNPCC a to nielen preto, že tam môže byť mutácie v oboch hMLH1 alebo hMSH2, ale tiež sme neskúmal hMSH6 alebo hPMS2. Gen hPMS2 zostáva pravdepodobný kandidát, ako to bolo spojené s recesívne dedičná prípadmi Turcot syndrómu [9]. Okrem toho, hPMS2 je umiestnený na chromozóme 7 a je obklopený pseudogenů, z ktorých niektoré sú vyjadrené aj keď na oveľa nižšej úrovni, než divokého typu hPMS2. Vzhľadom k tomu, nové miesto pre chordom tiež boli identifikované na chromozóme 7 zostáva možnosť, že v tejto rodine sa tieto dva výsledky nie sú nesúvisí. Bohužiaľ, my môžeme nikdy poznať odpoveď na túto otázku, pretože nie je dostatok zostávajúci materiál na štúdium od probanda a vzorky nádorové prevzaté z ostatných členov rodiny už nie sú k dispozícii. S ohľadom na otca probanda nevieme, ak je vrodená aplázia ľavom stehne bol spojený s ochorením v tejto rodine.
Stručne povedané, táto rodina predstavuje nielen výzvu, pokiaľ ide o identifikáciu genetickej predispozície ale aj v prípade, že rodinní príslušníci boli dnes nažive, pre genetické poradenstvo.

• Výplach žalúdka pri otrave akútnej organophosphorus Pesticide (GLAOP) - randomizovanej kontrolovanej štúdii mnohopočetného vs. jediný výplach žalúdka v nevybranej akútnej Organofosforové…
• Vnútrohrudný drenáže z perforovaného prepyloric žalúdočného vredu s typom II paraoesophageal hernia