Case Rapport: Familiær Gastric Cancer og chordom i samme Family

Case Rapport: Familiær Gastric Cancer og chordom i samme familie
Abstrakt
Gastric kræftformer er den anden mest almindelige malignitet i verden og udgør en væsentlig byrde for alle samfund selvom forekomsten af ​​sygdommen er faldende i den industrialiserede verden. Ætiologien af ​​sygdommen er kompleks og menes at være primært på grund af miljømæssige faktorer, men en lille del af sagerne er anerkendt som værende forbundet med genetiske faktorer. Der er identificeret to nedarvede former af mavekræft, en som er forbundet med familiær clusterings af mavekræft og den anden er en undergruppe af familier, der hører til arvelig non polypose colorectal cancer (eller Lynch syndrom). I denne rapport præsenterer vi en lille kernefamilie, som er usædvanligt i, at der er en gruppering af malignitet, som omfatter mavekræft, tyktarmskræft og chordom. Genetisk analyse undlod at afsløre eventuelle sygdomsfremkaldende mutation i gener, der er forbundet med HNPCC eller i E-cadherin. Sammen kan det kliniske billede i denne familie indikere, at andre genetiske faktorer bag denne families gruppering af malignitet.
Nøgleord
mavekræft HNPCC E-cadherin chordom Introduktion
Gastric kræftformer udgør den anden mest almindelige malignitet på verdensplan, selv forekomsten af ​​sygdommen synes at være aftagende i den industrialiserede verden. Gastric kræftformer er morfologisk heterogene med tre typer; diffus gastrisk cancer, en glandulær (eller intestinal) type og en blanding af diffus og intestinal sygdom.
Årsagerne til mavekræft er både miljømæssige og genetiske eller en blanding af begge. Relativt nylig en endelig genetisk årsag til mavekræft (mutationer i E-cadherin genet) er blevet identificeret, først i en stor New Zealand Maori slægt [1] og efterfølgende i andre gastrisk familier [2]. Patienter huser mutationer i E-cadherin gen tendens til at præsentere med diffus sygdom hvorimod ingen genetiske faktorer har været impliceret i familiær aggregeringer af tarm mavekræft.
En alternativ genetisk årsag til mavekræft i forbindelse med en række andre epitelial kræft er arvelig non polypose colorectal cancer (HNPCC). Denne enhed er kendetegnet ved tidlig begyndelse kolorektal cancer og en række andre epitelmalignanser herunder endometriecancer og mavekræft. Den genetiske basis for denne betingelse er en opdeling af DNA mismatch reparation på grund af mutationer i gener, der kontrollerer denne proces. I øjeblikket fire gener er blevet isoleret og forbundet med HNPCC, hMLH1, hMSH2, hMSH6 og hPMS2. Både hMSH2 og hMSH6 bor på kromosom 2, hMLH1 er på kromosom 3 og hPMS2 er på kromosom 7 (for oversigt se Niessen et al 2004 [3]).
Chordomas er sjældne langsomtvoksende knogletumorer, der menes at opstå ud af rygstrengen rester [3]. De har tendens til at forekomme ved basis af kraniet og har en relativt godartet histologisk udseende. Trods deres godartede udseende chordomas har infiltrative egenskaber, der er vanskelig at kontrollere. Der er en lille overvægt for mænd til at blive påvirket med en samlet mandlige og kvindelige forhold på ca. 1,7: 1. Overvægten af ​​mænd bliver mere slående hos patienter med sakrale chordomas hvor mandlige og kvindelige forholdet nærmer sig 3: 1. Der vides kun lidt om den molekylære basis for chordomas, da der synes at være nogen grov kromosomal abnormitet eller andre særskilte kendetegn. To genetiske loci er blevet identificeret. Den første indikation af en genetisk basis for chordom kom fra koblingsundersøgelser der afslørede et gen locus på kromosom 1 [4]. En anden locus blev identificeret i en lille serie af familier knyttet til kromosom 7q33, som har afsløret en række potentielle kandidatgener [5].
I denne rapport har vi identificeret en lille familie, der er præget af mavekræft og tilstedeværelsen . af chordom i en af ​​tre søskende alle har bukket under for malignitet
Patienter og metoder
familiens historie sygdommen er som følger: probanden præsenteret i en alder af 56 år med en dårligt differentieret adenocarcinom i coecum uden tilstedeværelse af adenomatøs polypper. På tidspunktet for excision tumoren havde metastaseret til tre lymfeknuder. Patienten blev fundet at have udbredt metastatisk sygdom i en alder af 60 år og døde et år senere. Den eneste anden bemærkelsesværdige fund i forhold til denne patient var medfødt aplasi af venstre lår. Familien historie probanden afslørede en historie af gastrointestinal cancer (se fig. 1). Figur 1 Anetræ af familien. St = mavekræft; Ch = chordom; CRC = kolorektal cancer. Squares repræsenterer hanner, cirkler hunner
far probanden blev diagnosticeret med mavekræft i en alder af 67 år. Tumoren blev diagnosticeret som en udifferentieret mucinøs carcinom med signetring celler, som havde på tidspunktet for operationen allerede spredt sig til leveren.
Den ældste bror til patienten blev diagnosticeret i en alder af 7 1/2 år med en ondartet chordom ved basis af kraniet og døde kort efter. Tumoren blev placeret mellem Clivus og pons, der gav anledning til typiske neurologiske tegn. Tumoren havde kollideret på synsnerven resulteret i alvorlig atrofi, især på højre side. Derudover var der flere levermetastaser.
Den anden bror blev diagnosticeret med adenocarcinom i maven med oprindelse i Cardia. Tumoren var en udifferentieret mucinøs typen spækket med signetring celler, svarende til den af ​​faderen. På tidspunktet for diagnosen blev fundet sygdommen at være blevet udbredt med metastaser til vertebra, lever, binyrer og lunger.
DHPLC analyse
hele den kodende sekvenser af hMSH2, hMLH1 og E-cadherin herunder intron /exon grænser blev screenet for mutationer ved DHPLC analyse. Usædvanlige konformere blev yderligere vurderet ved direkte DNA-sekventering.
Polymerase kædereaktion (PCR) amplifikation for DHPLC analyse blev udført under anvendelse af primere specifikke for hMSH2 og hMLH1 som tidligere beskrevet (Holinski-Feder et al 2001). Reaktionen bestod af 1,0 uM hver primer, 1 U Platinum Taq (Gibco-BRL), 2-5 mM MgCl 2 og 200 μ
M hver dNTP.
PCR-amplifikation blev opnået ved en indledende denaturering ved 94 ° C i 5 minutter efterfulgt af 14 cyklusser af 94 ° C i 1 min, 7 ° C touchdown interval i 1,5 min og 72 ° C i 2 minutter, derefter 20 cyklusser ved anvendelse af en annealing temperatur 0,5 ° C lavere end bunden af touchdown rækkevidde. Annealing blev udført som en touchdown protokol med en 7 ° C interval, faldende 0,5 ° C /cyklus over 14 cyklusser. Dette blev efterfulgt af en endelig ekstension ved 72 ° C i 10 minutter blev en endelig denatureringstrin ved 95 ° C i 5 min og en langsom udglødningstrin fra 95 ° C til 65 ° C i løbet af 30 minutter for at fremme heteroduplex formation. PCR blev udført på en PCR-express (Hybaid) instrument udstyret med et opvarmet låg for at undgå brugen af ​​mineralsk olie.
DHPLC analyse blev udført ved anvendelse af et Varian Helix-system (Varian Inc., Walnut Creek, CA). PCR-produkter (2-5 μ
l) blev injiceret direkte ind i en DNA Eclipse (Hewlett Packard) eller Helix (Varian) søjle og elueres fra søjlen under anvendelse af en stigende acetonitrilgradient og en kolonne ovntemperatur egnet til hver exon af hMSH2 , hMLH1 og E-cadherin (faktiske temperatur til rådighed på anmodning). Heteroduplexer dannet under PCR af en heterozygot prøve blev detekteret som en yderligere elueredes før homoduplex top. Påvisningen af ​​heteroduplexer blev gjort lettere med brugen af ​​DHPLC anmeldelse software leveret fra Varian. De forudsagt smeltende temperaturer af dobbeltstrengede DNA-produkter blev opnået ved hjælp af DHPLC-melt program til rådighed fra http:... //Www indsættelse stanford edu /smelte html (for detaljer se tabel 1a og 1b. ).
for hvert segment en negativ kontrol fragment (amplificeret fra DNA isoleret fra en normal sund donor, som ikke havde nogen arvelig sygdom) blev kørt gennem denaturering kolonnen ved den ikke-denaturerende temperatur på 50 ° C. 50 ° C-peak profil blev derefter sammenlignet med Stanford smeltetemperatur profil af det respektive fragment samt trin tre 1 ° C på hver side af forudsagt smeltetemperatur. Delvist blev fastsat ved et skift i retentionstid på mindst eller lig med 30 sekunder over en 1 ° C tilvækst interval blev gjort denaturerede betingelser. Den optimale smeltetemperatur blev altid taget som den højeste temperatur, under delvist denatureringsbetingelser, der ikke udviser profil nedbrydning.
DNA-sekventering
Alle heteroduplexer var underlagt DNA-sekventering at fastlægge den nøjagtige genetiske ændring på en semiautomatiseret sekventering enhed ( model 310, Perkin-Elmer Applied Biosystems Division, Foster City, CA) under anvendelse af dideoxy. Sekventering af PCR-produkterne blev udført ved anvendelse version 1 BigDye dideoxysekventering Ready Rxn kit (Perkin-Elmer, Foster City, CA).
Resultater
familien afbildet i fig. 1 overensstemmelse med Amsterdam II-kriterier, hvor andre epitelial maligniteter kan erstatte tarmkræft. Tilstedeværelsen af ​​to gastriske cancere er usædvanligt og kunne være tegn på familiær gastrisk cancer skyldes mutationer i E-cadherin.
Der var ingen materiale til rådighed for immunhistokemi eller mikrosatellit ustabilitet testning. En DNA-prøve var tilgængelig fra probanden, som blev underkastet mutationsanalyse. Da familien levet op til de Amsterdam II kriterier blev gennemført i begyndelsen hMSH2 og hMLH1 mutation analyse. Ingen mutationer blev identificeret i den kodende sekvens af enten hMSH2 eller hMLH1 herunder intron /exon grænser.
Da der var to personer diagnosticeret med mavekræft en yderligere mutation skærm blev foretaget i E-cadherin genet, men blev identificeret ingen skadelige ændringer .
diskussion
manglende identifikation af mutationer i hMLH1, hMSH2 eller E-cadherin tyder på, at der sandsynligvis vil være andre genetiske faktorer ligger til grund for sygdommen i denne familie. Der er ikke desto mindre, den mulighed, at en mutation blev savnet i en af ​​disse tre gener, da sletning analyse ikke blev foretaget heller ikke var det muligt at gøre det, da der ikke var tilstrækkelig genetisk materiale til at lade dette ske. Da patienterne bukkede under for deres sygdom flere årtier siden, er det usandsynligt, at immunhistokemi eller mikrosatellit ustabilitet testning kunne udføres for at vurdere sandsynligheden for denne familie tilhører den enhed af HNPCC. E-cadherin var en sandsynlig kandidat i kraft af tilstedeværelsen af ​​signetring celler inden for de to mavekræft.
Der er stadig flere muligheder med hensyn til, hvad der kan være sket inden for denne lille familie. Først er det stadig muligt, at dette faktisk er en HNPCC familie, ikke kun fordi der kan være mutationer i enten hMLH1 eller hMSH2 men også vi ikke undersøge hMSH6 eller hPMS2. Den hPMS2 genet forbliver en sandsynlig kandidat, da det har været forbundet med recessivt nedarvede tilfælde af Turcot syndrom [9]. Desuden hPMS2 placeret på kromosom 7 og er omgivet af pseudogener, hvoraf nogle er udtrykt omend ved meget lavere niveauer end vildtype hPMS2. Da en ny locus for chordom også er blevet identificeret på kromosom 7 er der stadig mulighed for, at disse to fund i denne familie er ikke uafhængige. Desværre kan vi aldrig vide svaret på dette, da der ikke er tilstrækkelig resterende materiale til at studere fra probanden og tumor prøver fra de andre familiemedlemmer er ikke længere tilgængelig. Med hensyn til faderen til probanden vi ved ikke, om det medfødt aplasi af venstre lår var relateret til sygdom i denne familie.
Sammenfattende denne familie er ikke kun en udfordring med hensyn til identifikation af en genetisk disposition men også, hvis familiemedlemmerne var i live i dag, for genetisk rådgivning.

• Maveskylning i Akut organiske fosforforbindelser Pesticid forgiftning (GLAOP) - et randomiseret kontrolleret forsøg af flere vs. enkelt ventrikelskylning i uselekterede akutte organophosphor pesticid…
• Intrathorakal dræning af en perforeret prepyloric mavesår med en type II paraoesophageal brok