Caso clinico: Familial cancro gastrico e Chordoma nella stessa famiglia

Case Report: Familial cancro gastrico e Chordoma nella stessa famiglia
astratti
tumori gastrici sono il secondo tumore maligno più comune nel mondo e rappresentano un grande onere per tutte le società, anche se l'incidenza della malattia è in diminuzione nel mondo industrializzato . L'eziologia della malattia è complessa e si ritiene sia dovuto principalmente a fattori ambientali, ma una piccola percentuale di casi sono riconosciuti come associati a fattori genetici. Due forme ereditarie di cancro allo stomaco sono stati identificati, uno che è associato con clustering familiari di cancro allo stomaco e l'altro è un sottogruppo di famiglie che appartengono a non poliposi del colon-retto ereditario del cancro (o sindrome di Lynch). In questo rapporto presentiamo un piccolo nucleo familiare che è insolito in quanto vi è un raggruppamento di malignità, che comprende il cancro allo stomaco, il cancro del colon e cordoma. L'analisi genetica non è riuscito a rivelare alcuna mutazione causativa in geni associati con HNPCC o in E-caderina. Insieme, il quadro clinico in questa famiglia può indicare che altri fattori genetici sono alla base di clustering di questa famiglia di malignità.
Parole
cancro allo stomaco HNPCC E-caderina cordoma Introduzione
tumori gastrici rappresentano la seconda neoplasia più comune in tutto il mondo, anche se l'incidenza della malattia sembra essere diminuendo nel mondo industrializzato. tumori gastrici sono morfologicamente eterogenei con tre tipi; diffondere il cancro gastrico, un ghiandolare (o intestinale) tipo e una miscela di diffusa e malattia intestinale.
Le cause del cancro gastrico sono sia ambientali e genetici o una miscela di entrambi. Relativamente recente una causa genetica definitiva di cancro gastrico (mutazioni nel gene E-caderina) è stato identificato, prima di una grande Nuova Zelanda Maori affini [1] e, successivamente, in altre famiglie gastrici [2]. Pazienti portatori di mutazioni nel gene E-caderina tendono a presentarsi con malattia diffusa mentre non fattori genetici sono stati implicati in aggregazioni familiari di cancro gastrico intestinale.
Una causa genetica alternativa di cancro allo stomaco in associazione con una varietà di altri tumori epiteliali è cancro ereditario non poliposi del colon-retto (HNPCC). Questa entità è caratterizzata da precoce insorgenza del cancro colorettale e una varietà di altre neoplasie epiteliali tra cui il cancro endometriale e cancro allo stomaco. La base genetica di questa condizione è una ripartizione di mismatch repair del DNA a causa di mutazioni in geni che controllano questo processo. Attualmente quattro geni sono stati isolati e associati con HNPCC, hMLH1, hMSH2, hMSH6 e hPMS2. Sia hMSH2 e hMSH6 risiedono sul cromosoma 2, hMLH1 è nel cromosoma 3 e hPMS2 è nel cromosoma 7 (per una rassegna vedi Niessen et al 2004 [3]).
Chordomas sono rari crescita lenta tumori ossei che si ritiene derivare da resti notocorda [3]. Essi tendono a verificarsi alla base del cranio e hanno un aspetto istologico relativamente benigna. Nonostante le loro chordomas aspetto benigne avere proprietà infiltrative che sono difficili da controllare. C'è una leggera preponderanza per i maschi a essere colpiti con un maschio complessiva di rapporto femmine di circa 1,7: 1. La preponderanza dei maschi diventa più evidente nei pazienti con chordomas sacrale dove il rapporto maschi-femmine si avvicina a 3: 1. Poco si sa circa le basi molecolari della chordomas, come sembra che vi sia alcuna anomalia cromosomica grave o ogni altro segno distintivo distinti. Due loci genetici sono stati identificati. La prima indicazione di una base genetica per cordoma è venuto da studi di linkage che hanno rivelato un locus genico sul cromosoma 1 [4]. Un secondo locus è stato identificato in una piccola serie di famiglie legate al cromosoma 7q33, che ha rivelato un certo numero di potenziali geni candidati [5].
In questa relazione abbiamo identificato una piccola famiglia che si caratterizza per il cancro dello stomaco e la presenza . di cordoma in uno dei tre fratelli i quali hanno ceduto alla malignità
pazienti e metodi
la storia familiare di malattia è la seguente: il probando presentato all'età di 56 anni con un adenocarcinoma scarsamente differenziato del cieco senza la presenza di polipi adenomatosi. Al momento della escissione del tumore era metastatizzato a tre linfonodi. Il paziente è stato trovato per avere la malattia metastatica diffusa all'età di 60 anni e morì un anno dopo. L'unica altra notevole scoperta rispetto a questo paziente era l'aplasia congenita della coscia sinistra. La storia della famiglia del probando ha rivelato una storia di cancro gastrointestinale (vedi Fig. 1). Figura 1 genealogico della famiglia. St cancro = stomaco; Ch = cordoma; CRC = cancro del colon-retto. Piazze rappresentano i maschi, femmine cerchi
Il padre del probando è stato diagnosticato un cancro allo stomaco, all'età di 67 anni. Il tumore è stato diagnosticato come carcinoma mucinoso indifferenziata con cellule ad anello con castone che avevano al momento della chirurgia già diffuso al fegato.
Il fratello maggiore del paziente è stato diagnosticato all'età di 7 anni e 1/2 con un cordoma maligna alla base del cranio e morì poco dopo. Il tumore era situato tra il clivus e ponte da cui è scaturita tipici segni neurologici. Il tumore era interferiva sul nervo ottico con conseguente grave atrofia, soprattutto sul lato destro. In aggiunta ci sono stati molteplici metastasi epatiche.
Il secondo fratello è stato diagnosticato un adenocarcinoma dello stomaco originario del cardias. Il tumore era un tipo mucinoso indifferenziata intervallati da cellule ad anello con castone, simile a quella del padre. Al momento della diagnosi è stata trovata la malattia essere diventata diffusa con metastasi alla vertebra, fegato, ghiandole surrenali e polmoni.
Analisi DHPLC
L'intero sequenze codificanti di hMSH2, hMLH1 e E-caderina, tra cui l'introne /esone i confini sono stati sottoposti a screening per le mutazioni mediante analisi DHPLC. Eventuali conformeri insoliti sono stati ulteriormente valutati dal sequenziamento del DNA diretta. Reazione a catena
della polimerasi (PCR) per l'analisi DHPLC è stata effettuata utilizzando primer specifici per hMSH2 e hMLH1 come descritto in precedenza (Holinski-Feder et al 2001). La reazione era costituito da 1,0 micron ogni primer, 1 U Platinum Taq (Gibco-BRL), 2-5 mm MgCl 2 e 200 μ
M ogni dNTP.
PCR è stato raggiunto da una denaturazione iniziale a 94 ° C per 5 min seguita da 14 cicli di 94 ° C per 1 min, 7 ° C campo di atterraggio per 1,5 min e 72 ° C per 2 min, quindi 20 cicli utilizzando una temperatura di ricottura di 0,5 ° C inferiore alla parte inferiore del gamma touchdown. La fase di ricottura è stato eseguito come un protocollo touchdown con una gamma 7 ° C, diminuendo 0.5 ° C /ciclo per 14 cicli. Questo è stato seguito da una fase di estensione finale a 72 ° C per 10 min, una fase di denaturazione finale a 95 ° C per 5 minuti e una fase di ricottura lenta da 95 ° C a 65 ° C in 30 min per promuovere la formazione heteroduplex. La PCR è stata eseguita su un (Hybaid) strumento PCR espresso dotato di un coperchio riscaldato ad evitare l'uso di olio minerale.
Analisi DHPLC è stata effettuata utilizzando un sistema Varian Helix (Varian Inc., Walnut Creek, CA). I prodotti di PCR (2-5 μ
l) sono state iniettate direttamente in un Eclipse DNA (Hewlett Packard) o colonna Helix (Varian) ed eluite dalla colonna usando un gradiente crescente di acetonitrile ed una temperatura della colonna forno adatto per ogni esone hMSH2 , hMLH1 ed e-caderina (temperature reali disponibili su richiesta). Eteroduplex formatisi durante la PCR di un campione eterozigote sono stati rilevati come eluizione ulteriore picco prima del picco homoduplex. Il rilevamento di eteroduplex stata resa più semplice con l'utilizzo della recensione DHPLC software fornito da Varian. Le temperature di fusione previsto dei doppi prodotti del DNA non recuperabili sono stati ottenuti utilizzando il programma DHPLC-MELT disponibile da http:... //Www inserimento Stanford edu /sciogliere html (per i dettagli vedere tabelle 1a e 1b. ).
Per ogni segmento di un frammento di controllo negativo (amplificato dal DNA isolato da un normale donatore sano che non ha avuto storia familiare di malattia) è stato eseguito attraverso la colonna denaturazione alla temperatura non denaturazione di 50 ° C. Il C profilo di picco 50 ° è stato confrontato con il profilo di temperatura di fusione Stanford del rispettivo frammento nonché incrementi tre 1 ° C su entrambi i lati della temperatura di fusione prevista. Parzialmente sono state stabilite le condizioni denaturati quando un cambiamento nel tempo di ritenzione di almeno o pari a 30 secondi in una vasta gamma C incremento di 1 ° è stato fatto. La temperatura ottimale di fusione è stato sempre preso come temperatura più alta, in condizioni parzialmente denaturanti che non presentano il degrado profilo.
Sequenziamento del DNA
Tutti i eteroduplex sono stati oggetto di sequenziamento del DNA per determinare la precisa cambiamento genetico su una unità semiautomatico sequenziamento ( il modello 310, Perkin-Elmer Applied Biosystems Division, Foster City, CA) con dideossi. Il sequenziamento dei prodotti di PCR è stata effettuata utilizzando la versione 1 BigDye dideossi sequenziamento kit di pronto Rxn (Perkin-Elmer, Foster City, CA). Risultati
La famiglia rappresentata in Fig. 1 è conforme ai criteri di Amsterdam II dove altre neoplasie epiteliali possono sostituire il cancro colorettale. La presenza di due tipi di cancro gastrico è insolito e potrebbe essere indicativo di cancro gastrico familiare dovuta a mutazioni in E-caderina.
Non c'era materiale a disposizione per le prove immunoistochimica o di instabilità dei microsatelliti. Un campione di DNA era disponibile dal probando che è stato sottoposto ad analisi di mutazione. Dal momento che la famiglia rispettato i criteri di Amsterdam II inizialmente hMSH2 e hMLH1 analisi di mutazione è stata intrapresa. No mutazioni sono state identificate nella sequenza codificante di una hMSH2 o hMLH1 compresi gli introni /esone.
Dato che c'erano due individui con diagnosi di cancro gastrico un'ulteriore mutazione screen è stato intrapreso nel gene E-caderina, ma non sono stati individuati i cambiamenti deleteri
. Discussione
la mancata identificazione di mutazioni in hMLH1, hMSH2 o e-caderina suggerisce che ci sono probabilmente altri fattori genetici alla base della malattia in questa famiglia. Vi è tuttavia la possibilità che una mutazione è stato mancato in uno di questi tre geni poiché delezione analisi non è stata effettuata né era possibile farlo come c'era materiale genetico insufficiente per consentire a questo scopo. Inoltre, dal momento che i pazienti ceduto alle loro malattie diversi decenni fa, è improbabile che i test immunoistochimica o microsatellite instabilità può essere eseguito per valutare la probabilità di questa famiglia che appartiene al soggetto di HNPCC. E-caderina è stato un candidato probabile in virtù della presenza di cellule ad anello con castone entro i due tipi di cancro allo stomaco.
Restano diverse possibilità per quanto riguarda ciò che può essersi verificato all'interno di questa piccola famiglia. In primo luogo, resta possibile che questa è davvero una famiglia HNPCC non solo perché ci potrebbero essere mutazioni in entrambe le hMLH1 o hMSH2, ma anche noi non ha esaminato hMSH6 o hPMS2. Il gene hPMS2 rimane un candidato probabile, come è stato associato a casi recessiva ereditato di sindrome [9] di Turcot. Inoltre, hPMS2 risiede sul cromosoma 7 ed è circondato da pseudogeni, alcuni dei quali si esprimono anche se a livelli molto più bassi rispetto tipo hPMS2 selvaggio. Dal momento che un nuovo locus per cordoma è anche stato identificato sul cromosoma 7 rimane la possibilità che in questa famiglia di questi due risultati non sono indipendenti. Purtroppo, forse non sapremo mai la risposta a questo poiché non vi è materiale residuo insufficiente per studiare dal probando ed i campioni di tumore prelevati da altri membri della famiglia non sono più disponibili. Per quanto riguarda il padre del probando non sappiamo se l'aplasia congenita della coscia sinistra era legato alla malattia in questa famiglia.
In sintesi, questa famiglia rappresenta non solo una sfida per quanto riguarda l'individuazione di una predisposizione genetica ma anche, se i membri della famiglia fossero vivi oggi, per la consulenza genetica.

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