Клинический случай: Семейную Рак желудка и Хордома в той же семье

Клинический случай: Семейную Рак желудка и Хордома в той же семье
Аннотация
рака желудка являются вторым наиболее распространенным злокачественным в мире и представляют собой значительное бремя для всех обществ, хотя заболеваемость именьшается в промышленно развитых странах , Этиология заболевания является сложным и, как полагают, в первую очередь из-за экологических факторов, но небольшая часть случаев признаются как связанные с генетическими факторами. Два наследственные формы рака желудка были идентифицированы, один, который связан с семейным кластеризаций рака желудка, а другой подгруппой семей, которые принадлежат к наследственным не полипоз колоректального рака (или синдром Линча). В этом отчете мы представляем небольшую ядерную семью, которая является необычным в том, что существует кластеризация злокачественности, которая включает в себя рак желудка, колоректальный рак и хордома. Генетический анализ не выявил каких-либо причинную мутацию в генах, связанных с ННКР или Е-кадгерина. Вместе, клиническая картина в этой семье может свидетельствовать о том, что другие генетические факторы находятся за кластеризация этой семьи злокачественных новообразований.
Ключевые слова
рак желудка HNPCC E-кадгерина хордомы Введение
рака желудка представляют второй наиболее распространенной злокачественной опухоли по всему миру, хотя заболеваемость по-видимому, уменьшается в промышленно развитых странах. Рака желудка морфологически гетерогенная с тремя типами; диффузного рак желудка, железистый (или кишечника) тип и смесь диффузного и кишечных заболеваний.
Причины рака желудка являются экологические и генетические или смесь обоих. Сравнительно недавно окончательный генетическая причина рака желудка (мутации в гене Е-кадгерина) был идентифицирован, сначала в большой Новой Зеландии маори родстве [1], а затем и в других желудочных семей [2]. Пациенты, несущие мутации в гене Е-кадгерина, как правило, представляют с диффузным заболеванием в то время как не генетические факторы не участвуют в семейных скоплениями кишечного рака желудка.
Альтернативным генетическую причину рака желудка в сочетании с различными другими эпителиального рака является наследственный рак ободочной и прямой кишки без полипоза (HNPCC). Эта сущность характеризуется ранним началом колоректального рака и различных других эпителиальных злокачественных опухолей, в том числе рака эндометрия и рака желудка. Генетическая основа этого состояния является пробой ремонта несоответствие ДНК из-за мутаций в генах, контролирующих этот процесс. В настоящее время четыре гена были выделены и связаны с HNPCC, hMLH1, hMSH2, hMSH6 и hPMS2. Оба hMSH2 и hMSH6 располагаются на хромосоме 2, hMLH1 находится на хромосоме 3 и hPMS2 находится на 7-й хромосомы (обзор см Нейссен и соавт 2004 [3]).
Хордом редкие медленно растущие опухоли костей, которые, как полагают, возникают из хорды остатки [3]. Они, как правило, происходит на основании черепа и имеют относительно доброкачественное гистологическое внешний вид. Несмотря на появление доброкачественных хордом имеют инфильтративные свойства, которые трудно контролировать. Существует небольшое преобладание для мужчин, чтобы быть затронуты с общим соотношение мужчин и женщин примерно 1,7: 1. Преобладание самцов становится более ярким в пациентах с сакральными хордом, где соотношение мужчин и женщин приближается к 3: 1. Мало что известно о молекулярной основе хордом, поскольку, как представляется, нет полная хромосомной аномалией или любой другой отличается отличительной чертой. Два генетических локусов были идентифицированы. Первый признак генетической основы для хордомы пришли из исследований, которые показали сцепления гена локуса на хромосоме 1 [4]. Второй локус был обнаружен в небольшой серии семей связаны с хромосомой 7q33, который выявил ряд потенциальных генов-кандидатов [5].
В этом докладе мы определили небольшую семью, которая характеризуется раком желудка и наличием . хордомы в одном из трех братьев и сестер все из которых поддались злокачественности
Пациенты и методы
семейной истории болезни выглядит следующим образом: пробанда представлены в возрасте 56 лет с плохо дифференцированной аденокарциномы слепой кишки без наличия аденоматозных полипов. В то время иссечения опухоль метастазы в трех лимфатических узлов. Было обнаружено, что пациент имеет широкое метастазами в возрасте 60 лет и умер один год спустя. Единственный замечательный вывод относительно этого пациента была врожденная аплазия левого бедра. История семьи пробанда показала история рака желудочно-кишечного тракта (см. 1). Рисунок 1 Родословная семьи. рак желудка = St; Ch = хордома; CRC = колоректальный рак. Квадраты представляют мужчины, круги женщин
Отец пробанда был диагностирован рак желудка в возрасте 67 лет. Опухоль была диагностирована как недифференцированной коллоидный рак с перстнем клетками, которые были во время операции уже распространилась на печень.
Старший брат больного был диагностирован в возрасте до 7 лет 1/2 со злокачественной хордомы у основания черепа и умер вскоре после этого. Опухоль была расположена между ската и мосте, который породил типичных неврологических симптомов. Опухоль нагружается на зрительный нерв, что приводит к тяжелой атрофии, особенно с правой стороны. Кроме того были множественные метастазы в печень.
Второй брат был поставлен диагноз аденокарциномы желудка, происходящих в кардии. Опухоль была недифференцированных муцинозная типа чередовались с перстнем клетками, подобно тому, что отца. На момент постановки диагноза была обнаружена болезнь, стала широко распространенной с метастазами к позвонку, печени, надпочечниках и легких.
Анализ DHPLC
The целых последовательностей hMSH2, hMLH1 и Е-кадгерина кодирования, включая интрон /экзон границы были обследованы на наличие мутаций с помощью анализа DHPLC. Любые необычные конформеров были дополнительно оценены с помощью прямого секвенирования ДНК.
Полимеразной цепной реакции (ПЦР) для анализа DHPLC проводили с использованием праймеров, специфичных для hMSH2 и hMLH1 как описано ранее (Holinski-Федер и соавт 2001). Реакция состояла из 1,0 мкМ каждого праймера, 1 U Платиновый Taq (Gibco-BRL), 2-5 мМ MgCl <суб> 2 и 200 μ
М каждый дНТФ.
ПЦР-амплификации был достигнут путем первоначальной денатурации при 94 ° с в течение 5 мин с последующими 14 циклами при 94 ° с в течение 1 мин, 7 ° диапазон с приземление в течение 1,5 мин и 72 ° с в течение 2 мин, затем 20 циклов с использованием температуры отжига 0,5 ° с ниже, чем дно приземление диапазон. Стадию отжиг проводят в качестве протокола приземлении с диапазоном 7 ° C, уменьшая 0,5 ° C /цикл в течение 14 циклов. За этим последовала конечная стадия удлинения при 72 ° С в течение 10 мин, конечной стадии денатурации при 95 ° С в течение 5 мин и медленной стадии отжига от 95 ° С до 65 ° С в течение 30 мин, чтобы способствовать образованию гетеродуплексной. ПЦР проводили на ПЦР-экспресс (Hybaid) прибора, оснащенного нагретой крышкой, чтобы избежать использования минерального масла.
Анализ DHPLC проводили с использованием системы Varian Helix (Varian Inc., Walnut Creek, CA). ПЦР-продукты (2-5 μ
л) вводили непосредственно в ДНК Eclipse (Hewlett Packard) или колонки Helix (Varian) и элюировали с колонки с использованием градиента ацетонитрила все более и температуру термостата колонки, подходящую для каждого экзона hMSH2 , hMLH1 и Е-кадгерина (фактические температуры по запросу). Гетеродуплексы, образующиеся в процессе ПЦР образца гетерозиготного были обнаружены в качестве дополнительного пика элюировавшей до homoduplex пика. Обнаружение гетеродуплексов было сделано проще с использованием обзора DHPLC поставляемого программного обеспечения от компании Varian. Предсказанной температуры плавления продуктов двухцепочечной ДНК, были получены с помощью программы DHPLC-расплавить в по адресу... //WWW вставки Стэнфорд Edu /расплавить HTML (подробнее см Таблицы 1a и 1b. ).
Для каждого сегмента фрагмент отрицательный контроль (амплифицируют из ДНК, выделенной из нормального здорового донора, который не имел семейной истории болезни) пропускали через колонку денатурации при неденатурирующих температуре 50 ° C. 50 ° С пик Затем профиль по сравнению с Стэнфордского профилем температуры плавления соответствующего фрагмента, а также с шагом три 1 ° С по обе стороны от предсказанной температуры плавления. Частично денатурированные условия были созданы, когда был сделан сдвиг во времени удерживания, по меньшей мере, или равный 30 секунд через диапазон приращения C 1 °. Оптимальная температура плавления всегда была взята в качестве более высокой температуры, при частично денатурирующих условиях, которые не демонстрируют деградацию профиля.
Секвенирование ДНК
Все гетеродуплексов были подвергнуты секвенирования ДНК, чтобы определить точную генетическую изменения на единицу полуавтоматический секвенирования ( модель 310, Perkin-Elmer Applied Biosystems Division, Foster City, CA) с использованием дидезокси. Секвенирование продуктов ПЦР проводили с использованием версии 1 BigDye дидезокси секвенирования Готовые Rxn комплект (Perkin-Elmer, Foster City, CA).
Результаты
Семейство изображенной на рис. 1 соответствует критериям Амстердам II, где другие эпителиальные злокачественные опухоли могут заменить колоректальный рак. Наличие двух рака желудка является необычным и может быть наводит на мысль о семейной рака желудка из-за мутаций в Е-кадгерина. Не
Был не материал, доступный для тестирования иммуногистохимии или микроспутника неустойчивости. Образец ДНК была доступна от пробанда, который был подвергнут мутации анализа. Поскольку семья придерживается критериев Амстердам II первоначально hMSH2 и hMLH1 мутационный анализ был проведен. Нет мутации не были идентифицированы в кодирующей последовательности либо hMSH2 или hMLH1 включая границы интрон /экзон.
Так как было два человека с диагнозом рака желудка еще один экран мутации была проведена в гене Е-кадгерина, но не было выявлено ни одного пагубных изменений .
Обсуждение
неспособность идентифицировать мутации в hMLH1, hMSH2 или Е-кадгерина предполагает, что, вероятно, будут другие генетические факторы, лежащие в основе этого заболевания в этой семье. Существует, тем не менее, вероятность того, что мутация была пропущена в одном из этих трех генов, так как анализ удаления не было предпринято ни было возможно сделать так, как было недостаточно генетический материал, чтобы позволить этому произойти. Кроме того, поскольку пациенты скончались от болезней, еще несколько десятилетий назад, маловероятно, что тестирование иммуногистохимии или микросателлитная нестабильность может быть выполнена, чтобы оценить вероятность этого семейства, принадлежащего ННКР субъекта. Е-кадгерин был вероятным кандидатом в силу наличия перстневидно клеток в пределах двух видов рака желудка.
Там остаются несколько возможностей в отношении того, что может произойти в этой маленькой семье. Во-первых, по-прежнему возможно, что это действительно HNPCC семья не только потому, что могут быть мутации в любом hMLH1 или hMSH2, но и мы не рассматривали hMSH6 или hPMS2. Ген hPMS2 остается вероятным кандидатом, как это было связано с рецессивно наследуемых случаев синдрома Turcot [9]. Кроме того, hPMS2 находится на хромосоме 7 и окружен псевдогенами, некоторые из которых выражены хотя и на гораздо более низких уровнях, чем дикого типа hPMS2. Так как новый локус хордомы также была определена на хромосоме 7, остается вероятность того, что в этой семье эти две находки не связаны. К сожалению, мы никогда не узнаем ответ на этот вопрос, так как недостаточно оставшийся материал для изучения из пробанд и образцы опухоли, взятые из других членов семьи больше не доступны. Что касается отца пробанда мы не знаем, если врожденная аплазия левого бедра была связана с болезнью в этой семье.
В целом, эта семья представляет собой не только вызов по отношению к идентификации генетической предрасположенностью но и, если члены семьи были живы сегодня, для генетического консультирования.

• Промывание желудка в пестицидам отравления Острое фосфорорганических (GLAOP) - рандомизированное контролируем…
• Внутригрудная дренаж перфорированной prepyloric язвы желудка с типом II paraoesophageal hernia