Informe de caso: Familiar cáncer gástrico y cordoma en la misma familia

Caso clínico: Familiar cáncer gástrico y cordoma en la misma familia
Abstract
cánceres gástricos son la segunda neoplasia maligna más común en el mundo y representan una carga importante para todas las sociedades a pesar de que la incidencia de la enfermedad está disminuyendo en el mundo industrializado . La etiología de la enfermedad es compleja y se cree que es debido principalmente a factores ambientales, pero una pequeña proporción de casos se reconocen como asociadas con factores genéticos. Dos formas heredadas de cáncer de estómago han sido identificados, uno que está asociado con clusterings familiares de cáncer de estómago y el otro es un subgrupo de familias que pertenecen a cáncer hereditario no asociado a poliposis colorrectal (o síndrome de Lynch). En este informe se presenta una pequeña familia nuclear, que es inusual, ya que hay un agrupamiento de malignidad que incluye el cáncer de estómago, cáncer colorrectal y cordoma. El análisis genético no mostró ninguna mutación causal en los genes asociados con el HNPCC o en la E-cadherina. En conjunto, el cuadro clínico de esta familia puede indicar que otros factores genéticos están detrás de la agrupación de malignidad de esta familia.
Palabras clave
cáncer de estómago HNPCC E-cadherina cordoma Introducción
cánceres gástricos representan la segunda neoplasia maligna más común en todo el mundo, aunque la incidencia de la enfermedad parece estar disminuyendo en el mundo industrializado. Los cánceres gástricos son morfológicamente heterogénea con tres tipos; cáncer gástrico difuso, un glandular (o intestinal) tipo y una mezcla de difusa y la enfermedad intestinal.
Las causas del cáncer gástrico son tanto ambientales como genéticas o una mezcla de ambos. Hace relativamente poco tiempo una causa genética definitiva de cáncer gástrico (mutaciones en el gen de la E-cadherina) ha sido identificado, por primera vez en un gran Nueva Zelanda Maorí parentela [1] y posteriormente en otras familias gástricas [2]. Los pacientes portadores de mutaciones en el gen E-cadherina tienden a presentar con enfermedad difusa, mientras que no hay factores genéticos han sido implicados en agregaciones familiares de cáncer gástrico intestinal.
Una causa genética alternativa de cáncer de estómago en asociación con una variedad de otros tipos de cáncer epitelial es el cáncer colorrectal hereditario no asociado a poliposis (HNPCC). Esta entidad se caracteriza por cáncer colorrectal aparición temprana y una variedad de otros tumores malignos epiteliales incluyendo el cáncer de endometrio y cáncer de estómago. La base genética de esta enfermedad es un desglose de desajuste de reparación del ADN debido a mutaciones en los genes que controlan este proceso. Actualmente cuatro genes se han aislado y asociado con HNPCC, hMLH1, hMSH2, hMSH6 y hPMS2. Tanto hMSH2 y hMSH6 residen en el cromosoma 2, es hMLH1 en el cromosoma 3 y hPMS2 está en el cromosoma 7 (para una revisión ver Niessen et al 2004 [3]).
Cordomas son tumores óseos raros de crecimiento lento que se cree que surgen de restos notocorda [3]. Ellos tienden a ocurrir en la base del cráneo y tienen un aspecto histológico relativamente benigna. A pesar de sus cordomas apariencia benignas tienen propiedades infiltrantes que son difíciles de controlar. Hay un ligero predominio de los varones que se verán afectados con un macho en general a la proporción femenina de aproximadamente 1,7: 1. La preponderancia de machos se hace más notable en pacientes con cordomas sacros, donde la relación hombre-mujer se aproxima a 3: 1. Poco se sabe sobre las bases moleculares de los cordomas, ya que no parece haber ninguna anomalía cromosómica grave o cualquier otra característica distintiva distinta. Dos loci genéticos se han identificado. La primera indicación de una base genética para cordoma vino de estudios de ligamiento que revelaron un locus del gen en el cromosoma 1 [4]. Un segundo locus fue identificado en una pequeña serie de familias ligada al cromosoma 7q33, que ha revelado una serie de posibles genes candidatos [5].
En este informe hemos identificado una pequeña familia que se caracteriza por el cáncer de estómago y la presencia . de cordoma en uno de los tres hermanos todos los cuales han sucumbido a la malignidad
pacientes y métodos comentario el historial familiar de la enfermedad es el siguiente: el caso índice presentado a la edad de 56 años con un adenocarcinoma pobremente diferenciado del ciego sin la presencia de pólipos adenomatosos. En el momento de la extirpación del tumor se había metastatizado a tres ganglios linfáticos. El paciente se encontró que tienen enfermedad metastásica generalizada a la edad de 60 años y murió un año después. El único otro hallazgo notable con respecto a este paciente fue la aplasia congénita del muslo izquierdo. La historia de la familia del probando reveló un historial de cáncer gastrointestinal (ver Fig. 1). Figura 1 Genealogía de la familia. cáncer de estómago = St; Ch = cordoma; CRC = cáncer colorrectal. Los cuadrados representan los machos, círculos, mujeres Francia El padre del probando fue diagnosticado con cáncer de estómago a la edad de 67 años. El tumor fue diagnosticado como un carcinoma indiferenciado mucinoso con células en anillo de sello que tenían en el momento de la cirugía ya extendido al hígado.
El hermano mayor de la paciente fue diagnosticada a la edad de 7 años con una media cordoma maligna en la base de su cráneo y murió poco después. El tumor se encuentra entre el clivus y la protuberancia que dio lugar a signos neurológicos típicos. El tumor había incidido sobre el nervio óptico que resulta en una atrofia severa, especialmente en el lado derecho. Además hubo múltiples metástasis hepáticas. Francia El segundo hermano fue diagnosticado con adenocarcinoma del estómago se origina en el cardias. El tumor era un tipo mucinoso indiferenciada intercaladas con células en anillo de sello, de forma similar a la del padre. En el momento del diagnóstico se encontró que la enfermedad se han extendido con metástasis en la vértebra, el hígado, las glándulas suprarrenales y los pulmones.
DHPLC análisis
las secuencias completas de codificación de hMSH2, hMLH1 y E-cadherina, incluyendo el intrón /exón límites fueron examinados en busca de mutaciones por DHPLC análisis. Cualquier confórmeros inusuales se evaluaron adicionalmente por secuenciación directa del ADN. Se realizó la reacción en cadena de la polimerasa
(PCR) para el análisis de DHPLC usando cebadores específicos para hMSH2 y hMLH1 como se ha descrito previamente (Holinski-Feder et al 2001). La reacción consistió en 1,0 M de cada cebador, 1 U Platinum Taq (Gibco-BRL), MgCl 2-5 mM 2 y 200 μ
M de cada dNTP.
Amplificación por PCR se consigue mediante una desnaturalización inicial a 94 ° C durante 5 min seguido de 14 ciclos de 94 ° C durante 1 min, 7 ° gama C de toma de contacto para 1,5 min y 72 ° C durante 2 min, luego 20 ciclos utilizando una temperatura 0,5 ° C más baja que la parte inferior de la gama de touchdown. La etapa de hibridación se realizó como un protocolo de toma de contacto con un rango de 7 ° C, la disminución de 0,5 ° C /ciclo durante 14 ciclos. Esto fue seguido por un paso de extensión final a 72 ° C durante 10 min, una etapa de desnaturalización final a 95 ° C durante 5 min y una etapa de recocido lento desde 95 ° C a 65 ° C durante 30 min para promover la formación de heterodúplex. La PCR se realizó en un instrumento PCR express (Hybaid) equipado con una tapa calentada para evitar el uso de aceite mineral.
Análisis DHPLC se realizó con un sistema Varian Helix (Varian Inc., Walnut Creek, CA). Los productos de PCR (2-5 μ
l) se inyectaron directamente en un Eclipse ADN (Hewlett Packard) o columna de la hélice (Varian) y se eluyó de la columna utilizando un gradiente creciente de acetonitrilo y una temperatura de horno de columna adecuada para cada exón de hMSH2 hMLH1, y e-cadherina (temperaturas reales disponibles bajo petición). Los heterodúplex formados durante PCR de una muestra de heterocigotos se detectaron como una elución pico adicional antes del pico homodúplex. La detección de heterodúplex se hace más simple con el uso de software de revisión DHPLC suministrada desde Varian. Las temperaturas de fusión prevista de los productos de ADN de doble cadena se obtuvieron usando el programa DHPLC-MELT disponible en http:... //Www inserción Stanford edu /html derretir (para más detalles véase las Tablas 1a y 1b. ).
Para cada segmento de un fragmento de control negativo (amplificado a partir del ADN aislado a partir de un donante sano normal que no tenían historia familiar de enfermedad) se ha ejecutado a través de la columna de la desnaturalización a la temperatura no desnaturalización de 50 ° C. A continuación, la 50 ° C perfil del pico se comparó con el perfil de temperatura de fusión de Stanford del fragmento respectivo, así como tres incrementos de 1 ° C a ambos lados de la temperatura de fusión predicho. Parcialmente se establecieron condiciones desnaturalizadas cuando se hizo un cambio en el tiempo de retención de al menos o igual a 30 segundos a través de una gama C de incremento 1 °. La temperatura de fusión óptima siempre se tomó como la temperatura más alta, en condiciones parcialmente desnaturalizantes que no presentan degradación perfil. Secuenciación de ADN
Todos los heterodúplex fueron objeto de la secuenciación del ADN para determinar el cambio genético preciso en una unidad de secuenciación semiautomatizado ( modelo 310, Perkin-Elmer Applied Biosystems Division, Foster City, CA) utilizando didesoxi. La secuenciación de los productos de la PCR se realizó utilizando la versión 1 BigDye secuenciación didesoxi Ready Rxn kit (Perkin-Elmer, Foster City, CA).
Resultados
La familia representa en la Fig. 1 se ajusta a los criterios de Amsterdam II donde otros tumores malignos epiteliales pueden reemplazar cáncer colorrectal. La presencia de dos tipos de cáncer gástrico es inusual y podría ser sugestiva de cáncer gástrico familiar debido a mutaciones en la E-cadherina.
No había material disponible para las pruebas de inmunohistoquímica o la inestabilidad de microsatélites. Una muestra de ADN estaba disponible desde el probando que se sometió a la mutación análisis. Dado que la familia se adhirió a los criterios de Amsterdam II se llevó a cabo el análisis de mutación inicialmente hMSH2 y hMLH1. No se identificaron mutaciones en la secuencia de codificación de cualquiera de hMSH2 o hMLH1 incluyendo los intrón /exón límites.
Ya que había dos individuos diagnosticados con cáncer gástrico se llevó a cabo una pantalla de mayor mutación en el gen E-cadherina, pero no se identificaron cambios nocivos .
Discusión México la falta de identificación de mutaciones en hMLH1, hMSH2 o E-cadherina sugiere que es probable que haya otros factores genéticos que subyacen a la enfermedad en esta familia. No es, sin embargo, la posibilidad de que una mutación se perdió en uno de estos tres genes desde el análisis de deleción no se llevó a cabo ni tampoco era posible hacerlo ya que no había material genético suficiente para permitir que esto ocurra. Además, dado que los pacientes sucumbieron a sus enfermedades desde hace varias décadas, es poco probable que las pruebas de inmunohistoquímica o la inestabilidad de microsatélites se pudo realizar para evaluar la probabilidad de esta familia que pertenece a la entidad de HNPCC. E-cadherina era un candidato probable en virtud de la presencia de células en anillo de sello dentro de los dos tipos de cáncer de estómago.
Hay permanecen varias posibilidades con respecto a lo que puede haber ocurrido dentro de esta pequeña familia. En primer lugar, sigue siendo posible que esto es de hecho una familia HNPCC no sólo porque puede haber mutaciones en cualquiera de hMLH1 o hMSH2, sino también que no examinó hMSH6 o hPMS2. El gen hPMS2 sigue siendo un candidato probable, ya que se ha asociado con casos de herencia recesiva del síndrome [9] de Turcot. Además, hPMS2 reside en el cromosoma 7 y está rodeado de pseudogenes, algunos de los que se expresan aunque a niveles mucho más bajos que hPMS2 tipo salvaje. Desde un nuevo locus para cordoma también ha sido identificado en el cromosoma 7 queda la posibilidad de que en esta familia estos dos resultados no están relacionados. Por desgracia, nunca sabremos la respuesta a esta ya que no hay material restante insuficiente para estudiar desde el probando y las muestras de tumor tomadas de los otros miembros de la familia ya no están disponibles. Con respecto al padre del probando que no sabemos si la aplasia congénita del muslo izquierdo estaba relacionado con la enfermedad en esta familia.
En resumen, esta familia no sólo representa un desafío en lo que respecta a la identificación de una predisposición genética sino también, si los miembros de la familia estaban vivos hoy en día, para el asesoramiento genético.

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