Более высокая частота CagA EPIYA-C сайтов фосфорилирования в хеликобактерной штаммы из первой степени родства больных раком желудка

Более высокая частота CagA EPIYA-C сайтов фосфорилирования в H. Pylori
штаммы из первой степени родственников больных раком желудка
Аннотация
Справочная информация
Чтобы оценить распространенность более вирулентными H. Pylori
генотипы у родственников больных раком желудка и у пациентов без семейной истории рака желудка.
Методы
Мы оценили перспективно распространенность инфекции, вызванной штаммами более вирулентных H. Pylori
в 60 родственников больных раком желудка по сравнению результаты с результатами, полученными из 49 пациентов без семейной истории рака желудка. H. pylor
я статус был определен с помощью уреазного теста, гистологии и наличие H. Pylori Юр
А. Цитотоксин связанный ген (CAG
А), КГП
А-EPIYA и вакуолизирующий ген цитотоксин (VAC
А) были набраны с помощью ПЦР и КГП
пишущей EPIYA была подтверждена секвенированием.
Результаты
желудочных родственников рака были значительными и независимо друг от друга чаще колонизирована H. Pylori
штаммы с более высокими номерами сегментов CagA-EPIYA-C (OR = 4,23, 95% ДИ = 1.53-11.69) и с наиболее сильнодействующие s1m1 ВПТ
генотипа (OR = 2,80, 95% ДИ = 1.04-7.51). Большее число сегментов EPIYA-C были связаны с повышенной желудочной мозолистого воспаления, foveolar гиперплазией и атрофией. Заражение s1m1 ВПТ
генотип был связан с увеличением антрального и мозолистого гастрита.
Выводы
Мы показали, что родственники больных раком желудка чаще колонизирована наиболее вирулентных H. Pylori CAG
A и VAC
A генотипов, которые могут способствовать увеличению риска развития рака желудка.
Ключевые слова
хеликобактер пилори
желудочный H. рак пилори
CagA-EPIYA H. Pylori /вак
Предпосылки
хеликобактер пилори
, грамотрицательная бактерия, которая инфицирует желудок примерно половина населения земного шара, связано с развитием гастродуоденальных заболеваний, включая язвы желудка и двенадцатиперстной кишки, пептическая дистальной аденокарциномы желудка и слизистой лимфоидной ткани лимфома [1]. Предполагается, что люди, инфицированные H. Pylori
имеют более чем в два раза увеличить риск развития рака желудка по сравнению с неинфицированных из них [2], хотя японские исследования могли бы предположить, что почти все рак желудка связано с Helicobacter <бр> [3]. Почему только от 1 до 5% от H. pylori-
инфицированных развивается рак желудка остается неизвестным, и это, кажется, зависит от соотношения между экологическими, принимающих генетике и бактериальных факторов вирулентности.
Несколько исследований показали повышенный риск развития рака желудка у родственников пациентов с болезнью [2, 4]. Аналогичным образом, увеличение распространенности предраковых поражений желудка наблюдается у родственников больных раком желудка [5]. Однако молекулярные механизмы, с помощью которых H. Pylori
инициирует процесс, ведущий к карциноме желудка остаются неизвестными.
Наиболее изученным H. pylor
я вирулентности определитель, тем cag-
PAI (Цитотоксин связанный ген патогенность остров), кодирует систему секреции типа IV (T4SS), который отвечает за входом эффекторной белка, CagA, в принимающих эпителиальных клеток желудка [6, 7]. После того, как транслокация, CagA локализуется на внутренней поверхности плазматической мембраны, где она фосфорилируется на tryrosine остатков в пределах фосфорилирования мотивов в карбокси-концевой вариабельной области белка несколькими членами SRC-тирозинкиназ семейства. После того, как фосфорилируется, CagA образует физический комплекс с ШП-2 фосфатазы и вызывает аномальные клеточные сигналы, которые увеличивают риск поврежденных клеток приобретает предраковые генетических изменений [8, 9].
Фосфорилирования мотивы, определяемые как последовательность из пяти аминокислот кислоты (Glu-Pro-Ile-Tyr-Ala), классифицируются как EPIYA-A, EPIYA-B, EPIYA-C и EPIYA-D, в соответствии с аминокислотными последовательностями, фланкирующими мотивы. CagA белки почти всегда обладают EPIYA-A и -B сегменты, которые следуют ни один, один, два или три сегмента C в штаммов, циркулирующих в западных странах, или сегмента D, в штаммах Восточной Азии [10, 11]. Кроме того, было показано, что инфицирование CagA штаммы, имеющие большое число сегментов EPIYA-C придает больший риск предраковых поражений и желудочного рака [12-15].
Другой фактор вирулентности H.pylori,
является белком известный как вакуолизирующий цитотоксин а (вака), что приводит к цитоплазматический вакуолизация в эпителиальных клеток желудка, увеличивая клетки плазмы и проницаемости митохондриальных мембран, ведущую к апоптозу. Производство цитотоксину связано с CAG-PAI, но зависит от ВПТ
генотипа [16-18]. VAC
А представляет собой полиморфный ген с двумя основными область сигнала генотипах s1 и s2, а также два различных аллелей в середине области гена под названием m1 и m2. Заражение штаммов, обладающих s1m1 генотип был связан с предраковыми желудка гипохлоргидрией [17] и карциномы желудка [19]. В
недавнем исследовании, проведенном в Форталезе, Северо-Восточного, Бразилии, в районе с высокой распространенностью рака желудка и H . инфекции пилори
, наша группа показала высокую распространенность либо пангастрит или предраковых поражений у родственников больных раком желудка, инфицированных H. Pylori
[20]. Кроме того, изображения, Argent и др
. (2008) наблюдали связь между ВПТ
A s1m1 генотипе H. Pylori
штаммов и низкой секреции желудочной кислоты в первой степени родства больных раком желудка из Шотландии [21]. В противном случае, авторы не нашли связи между CagA положительным статусом и или количества тирозина фосфорилируется мотивов и желудочных поражений в этой популяции.
Поскольку географические различия наблюдались среди исследований, которые оценивали связь между H. Pylori
факторов вирулентности и заболевания, цель этого поперечного сечения проспективного исследования было оценить мотивы CagA EPIYA штаммов H. Pylori
в первой степени родства больных раком желудка, сравнивающих результаты с результатами, полученными из контрольной группы, состоящей из субъектов с не семейной истории рака желудка. Поскольку s1m1 генотип ВПТ
A H.pylori,
это было видно, чаще наблюдается у штаммов у больных раком желудка, мы также оценивали VAC
A мозаицизма в штаммах.
Методы
исследование было одобрено Комитетом по этике исследований университета Сеара путем, и информированное согласие было получено от каждого субъекта.
пациентов
Шестьдесят H. Pylori
-положительные родственников первой степени [42 женский пол; средний возраст 40,42 ± 11,80; (4 братьев и 13 сестер, средний возраст 56,24 ± 11,80 лет, 14 сыновей и 29 дочерей, средний возраст 34,51 ± 7,66)] на больных раком желудка с амбулаторного наблюдения у Walter Cantídio больницы были приглашены принять участие. Контрольная группа состояла из 49 (32 женщина, средний возраст 43,20 ± 12,59) H. Pylori
-положительных пациентов, которые одновременно подверглись эндоскопии верхних отделов желудочно для исследования диспепсии в той же больнице. У них не было семейной истории рака желудка, и были социальный класс сочетается с исследовательской группой. Пациенты с наличием в анамнезе желудочной хирургии, активного желудочно-кишечного кровотечения, применение стероидов, иммунодепрессантов, НПВС, ингибиторы протонной помпы или которые были обработаны для H. Pylori
эрадикации были исключены из исследования. Родственники и средства управления не были включены, если они были моложе 18 лет или более 81 лет. При эндоскопии из пяти различных участков были получены
биопсию Collection фрагмента
Желудочный фрагменты, как обновленным Сиднейской системы рекомендуется для классификации гастрита [22] , Кроме того, два фрагмента были собраны из антрального слизистой оболочки для быстрого уреазного теста и ДНК, чтобы исследовать наличие хеликобактерной
генов. H. Pylori
инфекция была подтверждена положительными результатами по крайней мере в двух тестах, включая экспресс-тест уреазы, гистологический анализ и наличие Юр
гена хеликобактерной
.
Гистологии
эндоскопической биоптатов слизистой оболочки желудка фиксировали в 10% формалине и заливали в парафин, и 4 мкм срезы окрашивали гематоксилин-эозином для рутинной гистологии. Гастрит была классифицирована в соответствии с обновленной системой Сиднея. Образцы слизистой оболочки желудка также окрашивали Гимза для обнаружения H.pylori.

Выделение ДНК
антральном ДНК желудка экстрагировали с помощью QIAmp (Qiagen, Hilden, Германия) комплект в соответствии с производителем рекомендации с незначительными изменениями [23]. Концентрацию ДНК определяли спектрофотометрически с использованием NanoDrop 2000 (Thermo Scientific, Уилмингтон, штат Северная Каролина) и хранили при -20 ° С до использования.
Присутствие антихеликобактерной
специфического Юр
Ген оценивали по методологии, о которых сообщают Clayton и др.
, [24].
стандарт Tx30a H. Pylori
штамм использовали в качестве положительного контроля, и кишечной палочки штамма
и дистиллированную воду оба использовали в качестве отрицательных контролей.
Термоциклер GeneAmp PCR System 9700 (Applied Biosystems, Foster City, CA) использовали для всех реакций. Усиленные продукты подвергали электрофорезу в 2% агарозном геле, окрашивали бромистым этидием, и анализировали в ультрафиолетовом диапазоне просвечивания.
VAC
А и CAG
Обнаружение
ПЦР-амплификации вакуумном
Сигнальная последовательность и среднего область проводили с использованием олигонуклеотидных праймеров, описанных Atherton и др
., [15]. Эти штаммы первоначально были классифицированы как тип S1 или S2 и типа m1 или m2. Все Г. пилори
штаммы с S1, далее характеризовали в S1A, s1b или S1C [25, 26].

КГП
Ген амплифицировали с помощью двух описанных ранее набора пар праймеров [27, 28]. Г. пилори
штамма из нашей коллекции (1010-95), известный как VAC
s1m1 и CAG
А-позитивный, использовали в качестве положительного контроля, а s2m2 VAC
генотип, CAG
A-негативный стандарт Tx30a H. Pylori
штамм и дистиллированную воду и использовали в качестве отрицательного контроля. считались CAG
A-положителен пилори
штаммы H., когда по меньшей мере, один из двух реакций был положительным.
Амплификация вариабельной области 3 'CAG
A для
ПЦР-амплификации вариабельной области 3 'КГП
гена (который содержит последовательности EPIYA), от 20 до 100 нг ДНК были добавлены в 1% растворе полимераза Taq ДНК-буфером (KCl, 50 мМ и трис-HCl 10 мМ, рН 8,0), 1,5 мМ MgCl <югу> 2, 100 мкМ каждого дезоксинуклеотид, 1,0 U Платиновый Taq ДНК-полимеразы (Invitrogen, Сан-Паулу, Бразилия), и 10 пмоль каждого праймера, для общего объема раствора 20 мкл. Праймеры, использованные ранее были описаны Ямаоки и др
. [29]. Условия реакции: 95 ° С в течение 5 минут, а затем 35 циклов при 95 ° С в течение 1 минуты, 50 ° С в течение 1 минуты и 72 ° С в течение 1 минуты, оканчивающиеся на 72 ° С в течение 7 минут. Реакцию дали продукты от 500 до 850 б.п. следующим образом: EPIYA-AB: 500 пар оснований; EPIYA-ABC: 640 пар оснований; EPIYA-ABCC: 740 пар оснований и EPIYA-ABCCC: 850 пар оснований (рисунок 1). Рисунок 1 электрофорез типичных образцов с различными моделями CagA EPIYA видели у родственников больных раком желудка и контрольной группы. Колонки 2, 3 е 5: EPIYA-ABCC (740 пар оснований); Колонка 4: EPIYA-ABCCC (850 пар оснований); Колонка 6: EPIYA-ABC (640 пар оснований) и Колонка 7: EPIYA-AB (500 пар оснований). Верх:. Частичное выравнивание аминокислотной последовательности Карбоксиконцевая штаммов CagA и эталонного штамма (H. Pylori
26695)
Мы также использовали метод, описанный Argent и др
. [30] для ПЦР-амплификации 3'-вариабельной области CAG
ген, который содержит последовательности EPIYA с целью повышения точности результатов.
Секвенирование 3 'вариабельной области CAG <бр> а
подмножества выборок случайным образом выбран для секвенирования с целью подтверждения результатов ПЦР. ПЦР-продукты очищали с помощью мастера С. В. Gel и ПЦР Системы очистки (Promega, Madison, MI) в соответствии с рекомендациями завода-изготовителя. Очищенные продукты секвенировали с использованием v3.1 Cycle набора для секвенирования BigDye Terminator в ABI 3130 Genetic Analyzer (Applied Biosystems, Foster City, CA). Полученные последовательности были приведены в соответствие с использованием Программы CAP3 последовательности сборки (можно приобрести: HTTP:... //Pbil Univ-lyon1 FR /cap3 PHP). После выравнивания, нуклеотидные последовательности были преобразованы в аминокислотных последовательностей с помощью программы BLASTX (можно приобрести: HTTP: //взрыв NCBI NLM NIH гов /Blast CGI.....) И по сравнению с последовательностями, депонированных на GenBank (HTTP: //WWW NCBI NLM NIH гов /Genbank /....)
Статистический анализ
Данные были проанализированы с помощью SPSS (Inc. Чикаго, Иллинойс), версия. 17.0. Риск родственников рака желудка, инфицированы более вирулентных штаммов, с увеличением числа мотивов EPIYA-C и s1m1 ВПТ
генотипа, был первоначально оценен в одномерном анализе. Для этого CAG
A штаммы были разделены на те, которые обладают по меньшей мере, один сегмент EPIYA-C, и те, с более чем одним сегментом EPIYA-C и наиболее злокачественной ВПТ
A s1m1 генотипа по сравнению с s1m2 плюс s2m2. Переменные с р
-Value менее чем или равным 0,25, были включены в окончательную модель логистической регрессии, контроль за влиянием возраста и пола. вычисляли отношение шансов (OR) и 95% доверительный интервал (ДИ). Логистическая модель пригодности была оценена с помощью теста Хосмер-Lemeshow [31]. Ассоциация числа сегментов EPIYA-С и при наличии VAC
Вирулентная генотипов со степенью воспаления желудка, атрофии и кишечной метаплазией было сделано двухвостый Манна-Уитни. Уровень значимости был установлен на уровне ар значение
≤0.05.
Результаты
Присутствие хеликобактерной
конкретной Юр
Ген был обнаружен в слизистой оболочке желудка всех 109 изученных предметов.
CAG
статус пациентов
CAG
положительность наблюдалась в желудочном фрагментов из 51 (85,00%) из 60 желудка родственников рака и в тех, с 43 (87,76%) из 49 контрольных , без различия между группами (р = 0,68
; OR = 1,26, 95% ДИ = 0,37 - 4,40)
количество сегментов EPIYA-C
шаблон EPIYA всех CAG
A. -положительные штаммы из обоих родственников больных раком желудка и контроля были успешно напечатаны. Методология Ямаока позволяет детектировать микстинфекцией штамма. Согласованность между методами, используемыми почти 100%. Результаты были подтверждены секвенированием вариабельной области 3 'CAG
А в 30 случайно выбранных продуктов ПЦР были найдены
Четыре модели EPIYA мотивов.: AB, ABC, ЦКА и ABCCC. Не наблюдалось Азии EPIYA-D мотив. Распределение генотипов EPIYA показано в таблице 1.Table 1 Распределение EPIYA генотипов в желудочном родственников рака (п = 51) и управления (п = 43) колонизировали с помощью CAG штаммов A-положительных
EPIYA Генотип

группы управления п (%)

рак желудка родственники

Братья, сестры п (%)

потомство п (%)

EPIYA- AB
03 (7.0) 0

0
EPIYA-ABC
32 (74,4)
09 (60,0) 20
(55,5)
EPIYA-ABCC
07 (16,3) 04
(26,7)
12 (33,2)
EPIYA-ABCCC
01 (2.3)
01 (6.7)
02 (5.6)
EPIYA-ABC + ABCC
0
01 (6.7)
02 (5.6)
Общее
43 (100,0)
15 (100,0)
36 (100,0) <бр> VAC
распределение мозаицизм
распределение ВПТ
А генотипов показано в таблице 2. в 59 случаях (54,13%) ВАХ
генотип был s1m1, в 35 (32.11%) это было s1m2 и 6 (5,50%) s2m2. В трех (2,75%) случаях два ВПТ
Наблюдались генотипы и в шести (5,50%) была обнаружена только последовательность сигналов (S1). ДНК не было достаточно, чтобы генотипу м аллель в четырех среди этих случаев и в двух, м не типизируем. Во всех случаях с s1 штаммов они были генотипированы, как s1b, за исключением одного случая, который был колонизированных S1A и s1b strains.Table 2 Распределение Vac A аллели антихеликобактерной штаммов родственников больных раком желудка (п = 55) и контроль группа (п = 48)
ВПТ
Genotypes1

Контрольная группа п (%)

Желудочный родственники рака

Братья и сестры п (%)

Потомство п (%)

s1m1
23 (47,92)
10 (66,67)
26 (65.00)
s1m2
21 (43,75)
04 (26,67)
10 (25.00)
s2m2
03 (6,25)
01 (6,67)
02 (5.00)
Mixed2
01 (2,08)
0
02 (5.00)
Общая
48 (100) 15
(100)
40 (100)
1Только ВПТ
s1 генотип был выявлен в 6 случаях ( 1 контроль, 2 братьев и сестер и 3 отпрыски желудка родственников рака); 2Mixed инфекция s1m1 и s2m2 или s1m1 и s1m2 (два случая).
Инфекция наиболее токсигенного ВПТ
генотипа (s1m1) чаще наблюдалось в желудочном родственников рака (65,45%), чем в контрольной группе ( 47,92%). Когда s и м аллели были индивидуально оценены, не наблюдалось никакой разницы в частоте s1 аллеля между группами, но m1 аллель чаще наблюдалось в желудочном родственников рака.
Ассоциация среди числа EPIYA-C мотивы и тому VAC
A s1m1 генотип и семейную историю рака желудка
родственников больных раком желудка были значительно и независимо друг от друга чаще колонизирована H. Pylori
штаммы с увеличенным числом сегментов CagA-EPIYA-C и с наиболее вирулентных s1m1 ВПТ
генотипа даже после корректировки по возрасту и полу (таблица 3) .table 3 Covariables, связанные с раком желудка в первой степени родства больных раком желудка по сравнению с субъектами без семейной истории рака желудка
Переменные

анализа однофакторном

Многофакторный анализ

р на
OR

95% ДИ

р


Пол
0,27
-
-
-
Возраст
0,30
-
-
-
> 1 EPIYA-C мотив
0.01
4,23
1.53 - 11.69
0,006
s1m1 ВПТ
аллель
0,17
2,80
1,04 - 7,51
0.04
испытание Хосмер-Lemeshow впору (8 степеней свободы, р > 0,20, с 10 шагов)
Никаких различий не наблюдалось между братьями и сестрами и потомством в отношении к инфекции штаммов, содержащих повышенное количество EPIYA. -С мотивы (р
= 0,98; OR = 1,20, 95% ДИ = 0,30 - 4,86) и ВПТ
а генотипов s1m1 против s1m2 и s2m2 (р
= 0,84; OR = 0,92, 95 % ДИ = 0,22 - 3,97), как показано в таблицах 1 и 2.
ассоциаций между числом сегментов EPIYA-C и ВПТ
A генотипов и желудочных гистологических изменений
степеней мозолистого гастрита (р <бр> = 0,04), Антрум активность (р = 0,01
) и активность Corpus были значительно выше у родственника больных раком желудка, чем в контрольной группе.
Большее количество сегментов EPIYA-C был связан с желудка Corpus воспаление (р
= 0,04), желудочный корпус foveolar гиперплазия (р = 0,05
) и желудка корпус атрофии (р = 0,05
) у родственников больных раком желудка.
Заражение наиболее вирулентных ВПТ
A s1m1 генотип был связан с более выраженной антраля (р = 0,03
) и тела (р = 0,05
) гастрит, когда обе группы были оценены вместе.
Обсуждение
H. Pylori
инфекция признана наиболее важным фактором риска для дистального рака желудка. Кроме того, повышенные показатели заболевания у родственников желудка точек рака провести генетику и /или доли наиболее H. Pylori
вирулентных штаммов, как факторы риска.
В этом исследовании мы показали, что родственники рака желудка пациенты чаще колонизирована H. Pylori
штаммов с наиболее вирулентных ВПТ
генотипа, s1m1, и CagA-позитивных штаммов, обладающих большее количество сегментов EPIYA-C, чем пилори
штаммов H. пациентов без семейной истории болезни.
Хотя ни предыдущее исследование не показало, что желудочные родственники рака чаще колонизирована более вирулентных H. Pylori
штаммов, инфицированием ВПТ
s1m1 был связан с секрецию желудочной кислоты низкой, предраковое состояние, в первой степени родства шотландских больных раком желудка [21]. В противном случае, не было обнаружено никакой связи между секреции желудочной кислоты и количество сегментов CagA EPIYA-С авторами [21].
CagA является первым бактериальный онкобелок идентифицировать [32]. Белок поступает в желудочную эпителиальной клетки через бактериальный T4SS и локализует к внутренней стороне клеточной мембраны, где он фосфорилируется клетки-хозяина киназ. После фосфорилирования, сегмент EPIYA-C взаимодействует с ШП-2 фосфатазы, добросовестной онкогена, который связан с серией злокачественных опухолей человека. Чем больше число сегментов EPIYA-C, тем выше сродство к SHP-2, который необходим для полной активации ERK /MAPK пути.
Инфицирование CagA штаммы, обладающие более высокое число сегментов EPIYA-C был связан с предраковых поражений и желудка рак желудка в Кавказском [11-13, 30] и бразильского населения [15].
хорошо установлено, что H. пилори
инфекция преимущественно приобрела в детстве и что инфекция часто сохраняется в течение жизни если не лечить. Эпидемиологические данные и генетический анализ штаммов H. Pylori
продемонстрировали, что штаммы обычно приобретается в семье. На самом деле, инфицированной матери и инфицированные братья и сестры являются основными факторами риска приобретения инфекции [33, 34] и генетические методы отпечатка пальца продемонстрировали генетическую однородность в H. Pylori
штаммов в семьях. Основываясь на этих выводах, и результаты настоящего исследования, мы можем предположить, что родственников первой степени больных раком желудка может делиться более вирулентных H. Pylori
штаммов, которые могут увеличить риск развития рака желудка.
Как было отмечено выше, первой степени родственники больных раком желудка также одни и те же или аналогичный генетический фон, что может увеличить риск развития рака желудка. Полиморфизм генов, кодирующих провоспалительные цитокины, такие как интерлейкин 1 бета (IL-1 β), интерлейкин-1, антагонист рецептора (IL1Ra) и фактор некроза опухоли альфа (TNF-alpha) принимаются как факторы риска развития рака желудка, в зависимости от географический регион [35-39]. Кроме того, было продемонстрировано, что наличие большего числа провоспалительных генотипов [36, 37], а также сопутствующей инфекции, вызванной более вирулентных H. Pylori
штаммов постепенно увеличивает риск желудочных предраковых поражений и рака [39].
Выводы
в заключение, мы показали, что родственники больных раком желудка чаще колонизирована наиболее вирулентных H. Pylori CAG
A и ВПТ
A генотипов, которые могут, в дополнение к человеку генетический предрасположенности, дополнительно повышают риск развития рака желудка, обеспечивая тем самым дополнительные причины, чтобы лучше понять эти инфекции и, возможно, их целевого лечения радикальный.
декларациях
Благодарности
Эта работа была поддержана Instituto Nacional де Ciencias электронной Tecnologia эм биомедицина сделать Semiárido Brasileiro (INCT) и CNPq, Бразилия. Мы благодарны профессору Барри Дж Маршалла за критическое прочтение рукописи.
Результаты исследования были представлены как абстрактные в Пищеварительную Недели заболеваний, DDW 2011, Чикаго США.
Авторы 'оригинальные файлы представлены для изображений, изображения Ниже приведены ссылки на оригинальные файлы представленных авторов для изображений. 12876_2012_780_MOESM1_ESM.jpeg авторов исходного файла для рисунка 1 Конкурирующие интересы
Авторы заявляют не-confllict представляющей интерес.
Авторского вклады
DMMQ контролируемые лабораторные работы и проанализировали данные критического письма и анализа рукописи., SAB проводили ДНК экстракции, ПЦР и секвенирования и статистический анализ, ГАР и AMCR, участвовал в проведении исследования и написал рукопись, CISMS и MHB проводили экстракцию ДНК, ПЦР и управления базами данных, MBN, ABF и АНМ участвовали в проведении исследования , сбор данных, управление базами данных и статистический анализ. RLG и AAML проводили критическую Проанализировав данных и рецензирование рукописи. LLBCB участвовал в концепции, проектирования, реализации, координации исследования и способствовали рукописи написания критического письма и анализа. Все авторы прочитали и одобрили окончательный вариант рукописи.

• Геномный анализ профиля диффузного типа желудочной cancers
• Факторы, влияющие на лапароскопической при содействии гастрэктомии и открытой резекции желудка по сыворотке…