Veća učestalost CagA EPIYA-C mjesta fosforilacije u H. pylori sojevi iz prvog stupnja u bolesnika s rakom želuca

Veća učestalost CagA EPIYA-C mjesta fosforilacije u H. pylori pregled sojevi iz prvog stupnja u bolesnika s rakom želuca
apstraktne pregled pozadine
Da bi se procijenila učestalost više zarazan H. pylori pregled genotipovi u rođaka bolesnika s rakom želuca te u bolesnika bez obiteljske povijesti raka želuca.
Metode pregled smo ocijenili prospektivno prevalenciju infekcije za više zarazan H. pylori pregled sojeva u 60 rođaka bolesnika s karcinomom želuca uspoređivanje rezultati s onima dobivenim u 49 bolesnika bez obiteljske povijesti raka želuca. H. pylor pregled i status određuje ureaza test, histologiju i prisutnost H. pylori ure
A. Citotoksin povezan gen (CAG pregled A), CAG pregled A-EPIYA i vakuolirajući citotoksin gena (vac pregled A) su tipizirane pomoću PCR i CAG
A EPIYA tipkanje potvrđena sekvencioniranjem.
Rezultati
želučanih srodnika s rakom bile značajne i samostalno češće kolonizirali H. pylori pregled opterećuje s većim brojem CagA EPIYA-C segmenta (OR = 4,23, 95% CI = 1,53 - 11,69) i najjačih s1m1 vac
genotip (OR = 2,80, 95% CI = 1,04-7,51). Veći brojevi EPIYA-C segmenta su povezane s povećanim upale želuca corpus, foveolar hiperplazije i atrofije. Infekcija koju s1m1 VAC
genotip povezan je s povećanom antralnog i corpus gastritis. Pregled Zaključci pregled smo pokazali da su rođaci bolesnika s rakom želuca se češće kolonizirali najvirulentnijeg H. pylori CAG pregled A i vac
A genotipova, što može doprinijeti povećati rizik od raka želuca. pregled Ključne riječi
Helicobacter pylori pregled rak želuca H. pylori pregled CagA EPIYA H. pylori /vac pregled Pozadina pregled, Helicobacter pylori pregled, gram-negativna bakterija koja inficira želudac od približno polovica svjetske populacije, povezana je sa razvojem gastroduodenalnog bolesti, uključujući želuca i dvanaesnika peptički ulkus, distalni želučanog adenokarcinoma i sluznice povezane limfnog tkiva limfom [1]. Procjenjuje se da je osoba zaraženih s H. pylori pregled više od dva puta veći rizik od razvoja raka želuca u usporedbi s ne-om one [2] Iako japanske studije moglo bi se reći da su gotovo svi karcinom želuca je povezana s Helicobacter
[3]. Zašto je samo 1-5% od H. pylori- pregled zaražene osobe razviju rak želuca ostaje nepoznat, a čini se da ovisi o odnosu između okoliša, domaćina genetike i bakterijskih čimbenika virulencije.
Nekoliko istraživanja su pokazala povećani rizik razvoja raka želuca u rođaka bolesnika s bolešću [2, 4]. Slično, povećana učestalost prekanceroznih lezija želučane je primijećeno u rođaka bolesnika s karcinomom želuca [5]. Međutim, molekularni mehanizmi kojima H. ​​pylori pregled aktivira proces koji vodi do želučanog karcinoma i dalje u velikoj mjeri nepoznanica.
Najviše istraživana H. pylor pregled i virulencije odrednica, The cag- pregled PAI (citotiksin povezan gen patogenost otok), kodira sustav tipa izlučivanje IV (T4SS) koji je odgovoran za pojavu djelatnu proteina, CagA, u domaćina želučanog epitela [6, 7]. Jednom premještena, CagA localizes na unutarnjoj površini membrane plazme, gdje se fosforiliranog na ostacima tirozin fosforilacije motive na karboksi-terminalni varijabilne regije proteina više članova tirozinkinaze src-obitelji. Jednom fosforiliran, CagA oblikuje fizički kompleks s SHP-2 fosfataze i aktivira abnormalne stanične signale, koji povećavaju rizik od oštećenih stanica stjecanja prekancerozne genetske promjene [8, 9].
Za fosforilaciju motive, definirana kao niz od pet amino kiseline (Glu-Pro-Ile-Tyr-Ala), klasificirane su kao EPIYA-a EPIYA-B-C i EPIYA EPIYA-D, prema sekvenci aminokiselina ograđuju motive. CagA proteini gotovo uvijek posjeduju EPIYA-a i b segmente, koji su nakon toga niti jedan, jedan, dva ili tri C segmenta u soja koji cirkulira u zapadnim zemljama, ili D segmenta, u sojeva istok Azije [10, 11]. Ona je također pokazala da je infekcija s CagA sojevi koji imaju velik broj EPIYA-C segmenta daje veći rizik od prekanceroznih lezija želuca i raka [12-15].
Još jedan faktor virulencije H. pylori
je protein poznat kao vakuolirajući citotoksin a (Vaca), što uzrokuje citoplazmatske vacuolization u epitelnim stanicama želuca, povećanje stanica plazme te mitohondrijski propusnost stanične membrane što dovodi do apoptoze. Produkcija citotoksinom je povezana s CAG-PAI ali ovisi o vakuumom
genotip [16-18]. Vac pregled A je polimorfni gen s dva glavna signal regiji genotipovi S1 i S2, te dva različita alela u srednjem regiju gena po imenu m1 i m2. Infekcija s sojeva posjeduju s1m1 genotip je povezan s pretkarcinomsku želučane hypochlorhydria [17] i želučanog karcinoma [19].
U nedavnom istraživanju provedenom u Fortaleza, sjeveroistočnom Brazilu, u području visoke prevalencije karcinoma želuca i H . pylori pregled infekcije, naša grupa je pokazala visoku prevalenciju bilo pangastritis ili prekanceroznih lezija u rođaka bolesnika s rakom želuca zaraženih H. pylori
[20].
Nadalje, srebrnom i sur pregled. (2008) uočili povezanost između VAC pregled a s1m1 genotipa H. pylori
naprezanja i niske sekrecije želučane kiseline kod prvog stupnja rođaka bolesnika s rakom želuca iz Škotske [21]. Inače, autori nisu pronašli povezanost između CagA pozitivan status i ili broj tirozin fosforiliranog motiva i oštećenja probavnog sustava u toj populaciji.
Od geografske razlike uočene su među studijama koje ocijenili povezanost između H. pylori pregled čimbenika virulencije i bolesti, cilj ovog presjeka prospektivne studije bio je procijeniti CagA EPIYA motivi H. pylori pregled sojeva u prvog stupnja rođaka bolesnika s rakom želuca, uspoređujući rezultate s onima dobivenim iz kontrolne skupine koja se sastoji od ispitanika bez obiteljska anamneza raka želuca. Budući da je s1m1 genotip od Vac
A H. pylori pregled smatra se kako je češća kod sojeva oboljelih od raka želuca, također procjenjivali vac
A mozaicizmom u sojevima.
Metode pregled studija je odobren od strane Etičkog povjerenstva za istraživanja Sveučilišta Ceará i informirani pristanak dobiven je od svakog subjekta.
pacijenata
Šezdeset H. pylori pregled pozitivnih prvog stupnja [42 žena; prosječne dobi 40.42 ± 11.80; (4 braća i 13 sestara, prosječne dobi 56.24 ± 11.80 godina, 14 sinova i 29 kćeri; srednja dob 34,51 ± 7,66)] pacijenata s rakom želuca iz ambulantnog praćenja na Walter Cantídio bolnice su pozvani da sudjeluju. Kontrolna skupina je sastavljena od 49 (32 ženskih, srednja dob 43.20 ± 12,59) H. pylori
pozitivnih pacijenata koji istodobno su podvrgnuti gornjeg gastrointestinalnog endoskopiju za istraživanje dispepsija u istoj bolnici. Oni nisu imali obiteljsku povijest raka želuca, a bili su društveni sloj se podudaraju s studijske grupe. Bolesnici s poviješću želuca operacije, aktivno gastrointestinalno krvarenje, korištenje steroida, imunosupresivnih lijekova, NSAID, inhibitora protonske pumpe ili koji su bili tretirani H. pylori
iskorjenjivanje su isključeni iz studije. Rođaci i kontrole nisu uključeni ako su mlađi od 18 godina ili iznad 81 godina starosti. Pregled biopsije skup fragment pregled Želučani fragmenti dobiveni su tijekom endoskopije iz pet različitih mjesta kao što je preporučeno od strane Obnovljeno Sydney sustav za klasifikaciju gastritis [22] , Osim toga, dva fragmenta su skupljeni iz antralnog sluznice za brzo ispitivanje ureaze i DNA istražiti prisutnost H.pylori pregled gena. H. pylori pregled infekcija potvrđena je pozitivnim rezultatima u najmanje dva testa, uključujući brzi ureaza testom, histološku analizu i prisutnosti ure
gena od H. pylori
. Pregled Histologija
endoskopska uzorci biopsije od želučane sluznice se fiksiraju u 10% formalinu i uklopljene u parafin, te 4-um do sekcije su obojene hematoksilin-eozinom za rutinsku histologiju. Gastritis je klasificirati prema Obnovljeno Sydney sustava. Uzorci želučane sluznice također su bojene sa Giemsa bojom za detekciju H. pylori.
Ekstrakcija DNA
antralnog želuca DNA je ekstrahirana pomoću QIAmp (QIAGEN, Hilden, Njemačka) kit prema proizvođačeve preporuke s manjim izmjenama [23]. Koncentracija DNA određena je spektrofotometrijski pomoću NanoDrop 2000 (Thermo Scientific, Wilmington, NC) i pohranjena na -20 ° C do upotrebe.
Prisutnost H. pylori
specifične ure pregled gena procijenjena je u skladu metodologiji izvijestila Clayton et al. Netlogu, [24].
standardna Tx30a H. pylori pregled soj bio korišten kao pozitivna kontrola, a Escherichia coli pregled soju i destiliranu vodu bili su korišteni kao negativna kontrola.
Thermocycler GeneAmp PCR sustava 9700 (Applied Biosystems, Foster City, CA) se koristi za sve reakcije. Amplificirani produkti su podvrgnuti elektroforezi na 2% -tnom agaroznom gelu, obojani s etidij bromidom, i analiziraju u ultraljubičastih transilluminator. Pregled vak pregled A i cag pregled Detekcija pregled PCR amplifikacije vakuuma
signalni slijed i srednje područje izvedeno je pomoću oligonukleotidnih klica koje su opisali Atherton et al pregled., [15]. Rodovi su u početku klasificirana kao tipa S1 ili S2 i tipa M1 ili m2. H. pylori pregled opterećuje s s1 su dalje karakterizirani u s1a, s1b ili s1c [25, 26].
CAG
gen je pojačan pomoću dva ranije opisano skup parova početnica [27, 28]. H. pylori
pritisak iz naše kolekcije (1010-95), koje je poznato da vac pregled s1m1 i CAG pregled A-pozitivan, korišten je kao pozitivna kontrola, a s2m2 vac pregled genotip, CAG pregled a-negativan standardni Tx30a H. pylori pregled, soja i destiliranu vodu bili su korišteni kao negativna kontrola. smatra se H. pylori
sojevi se CAG pregled A-pozitivni kada je najmanje jedan od dva reakcija bila je pozitivna. pregled Pojačanje 3 'varijabilne regije CAG
A
za PCR amplifikacija 3 'varijabilne regije CAG
a gena (koji sadrži EPIYA sekvence), 20 do 100 ng DNA doda se 1% Taq DNA polimeraza puferske otopine (50 mM KCl i Tris-HCl 10 mM, pH 8,0), 1,5 mM MgClz 2, 100 uM od svakog deoxynucleotide, 1,0 u Platinum Taq DNA polimeraze (Invitrogen, Sao Paulo, Brazil) i 10 pmol svakog primera, u ukupnom volumenu otopine 20 uL. Primeri korišteni su prethodno opisali Yamaoka sur pregled. [29]. Reakcijski uvjeti bili su 95 ° C kroz 5 minuta, zatim je slijedilo 35 ciklusa od 95 ° C tijekom 1 minute, 50 ° C tijekom 1 minute i 72 ° C tijekom 1 minute, a završava sa 72 ° C tijekom 7 minuta. Reakcija dala proizvodi od 500 do 850 baznih bodova na sljedeći način: EPIYA-AB: 500 bp; EPIYA-ABC: 640 bp; EPIYA-ABCC: 740 bp i EPIYA-ABCCC: 850 bp (slika 1). Slika 1 Elektroforeza reprezentativnih uzoraka s različitim CagA EPIYA obrazaca viđenih u rođaka bolesnika s karcinomom želuca i kontrole. Kolone 2, 3 E 5: EPIYA-ABCC (740 bp); Stupac 4: EPIYA-ABCCC (850 bp); Stupac 6: EPIYA-ABC (640 bp) i Stupac 7: EPIYA-AB (500 bp). Gornji. Djelomični usklađivanje aminokiselinskog slijeda od karboksi-terminalnog soja CAGA i referentne soja (H. pylori
26695) pregled Također se koristi metodu opisanu u srebrnom sur pregled. [30] na PCR amplifikaciju 3 'varijabilne regije CAG
gen koji sadrži EPIYA sekvence kako bi se poboljšala točnost rezultata.
Sekvenciranje 3' varijabilne regije cag
A pregled podskupa uzoraka slučajno izabran za sekvenciranje kako bi potvrdili rezultate PCR. PCR produkti su pročišćeni s Wizard SV Gel i PCR sustav čist-gore (Promega, Madison, MI) prema preporukama proizvođača. Pročišćeni proizvodi su sekvencionirani upotrebom BigDye Terminator v3.1 ciklus sekvencioniranja kit u ABI 3130 Genetic Analyzer (Applied Biosystems, Foster City, CA). Sekvence dobiveni su usklađeni pomoću niza programa skupštine CAP3 (dostupno u: http:... //Pbil Univ-lyon1 fr /CAP3 php). Nakon usklađivanja, nukleotidnih sljedova su pretvoreni u sekvencama aminokiselina koje koriste BLASTX programa (dostupno od: http: //Eksplozija NCBI NLM NIH gov /Blast CGI.....), Te u odnosu na sekvencama odlaganje na GenBank (http: //www NCBI NLM NIH gov /Genbank /....) pregled, Statistička analiza pregled Podaci su analizirani SPSS (Inc Chicago, IL), verzija. 17.0. Rizik od rođaka želučanog karcinoma da se zaraženo više virulentnih sojeva, s povećanim brojem EPIYA-C motiva i s1m1 VAC
genotip, u početku je bio procijenjen u univarijantne analize. Za to CAG
A sojevi su poredani u onima koji posjeduju najmanje jednu EPIYA-C segmenta, te oni s više od jednog EPIYA-C segmenta i najvirulentnijeg Vac
A s1m1 genotip je u usporedbi s s1m2 plus s2m2. Varijable s p-vrijednost pregled manje od ili jednak 0,25 bili uključeni u konačni model logističke regresije, kontrola za utjecaj životne dobi i spolu. Omjer vjerojatnosti (OR) i 95% intervali pouzdanosti (CI) izračunate su. Logistička Model fitness ocijenjena s Hosmer-Lemeshow test [31]. Udruženje broja EPIYA-C segmenta i prisutnost Vac
zaraznog genotipova sa stupnjem želučane upale, atrofije i intestinalne metaplazije je učinio s dva repa Mann-Whitney test. Razina značajnosti postavljena je na ap
vrijednosti ≤0.05.

• Genomska Profil Analiza difuzni tipa želučane cancers
• Utjecaji laparoskopske uz pomoć gastrektomije i otvorenim gastrektomije na interleukin-6 u serumu kod bolesnika s rakom želuca među azijskim populacijama: sustavna review