Низкая хеликобактерной первичной резистентности к кларитромицину в желудочной биопсии из пациентов с диспепсией города в интерьере Сан-Паулу, Бразилия

Низкая хеликобактерной первичной резистентности к кларитромицину в желудочной биопсии из пациентов с диспепсией города в интерьере Сан-Паулу, Бразилия
Аннотация
Справочная информация
кларитромицин, амоксициллин и ингибитор протонного насоса являются наиболее распространенными препаратами рекомендуется в качестве первой линии тройной терапии для лечения H.pylori
, что приводит к ликвидации ставок, близких к 80%, изменяясь на региональном уровне, в основном из-за чрезвычайных ситуаций и повышения кларитромицина устойчивых штаммов. Нуклеотидных замен в то H. Pylori
домена V фракции 23S рРНК участвуют в макролидам и A2142G и A2143G мутации преобладают в клинических изолятов по всему миру в том числе в Бразилии. Как H. Pylori
культура привередливые, мы исследовали первичное вхождение антихеликобактерной
A2142G и A2143G рДНК 23S мутаций, используя молекулярный подход непосредственно на желудочных биопсий пациентов с диспепсией последовательно участвовали в больнице Дас Clinicas из Марилия, Сан Пауло, Бразилия.
Методы
биоптаты, полученные из 1137 пациентов с диспепсией, были подвергнуты гистопатологией и H. Pylori
диагноз гистологическим и ПЦР. ПЦР /ПДРФ анализ использовали для обнаружения A2142G и точечные мутации в A2143G домена V от хеликобактерной
23S рРНК, связанной с кларитромицином сопротивлением. С помощью разработанного теста, 768 п.о. PCR ампликона соответствующие to1728 до 2495 п.н. 23S хеликобактерной
рДНК ограничено с MboII
для обнаружения мутации A2142G и с BsaI
для обнаружения мутаций A2143G. Встречаемости результатов A2142G 23S рДНК в двух фрагментов ДНК (418 и 350 пар оснований) и результатов A2143G 23S рДНК в трех фрагментов ДНК (108, 310 и 350pb), благодаря законсервированного BsaI
сайта рестрикции.
Результаты
метод ПЦР используется для диагностики H. Pylori
представлены чувствительность, специфичность и точность 77,6%, 79,3% и 78,6%, соответственно, по сравнению с гистологии, стандартным методом золотым хеликобактерной
диагностика используется в нашей жизни. Распространенность H.pylori
с кларитромицин устойчивых генотипов 2,46%, с преобладанием точечной мутации A2143G 23S рДНК.
Выводы
ПЦР /ПДРФ анализа был быстрым и точным H.pylori
диагностики и кларитромицин метод определения сопротивления полезно для рутинной практики. По распространенности первичной резистентности H.pylori к кларитромицину
вследствие A2142G и A2143G мутации остается низким в Марилия, стандартный кларитромицин, содержащий тройную терапию остается в силе.
Ключевые слова
хеликобактер пилори
кларитромицин сопротивления Helicobacter Pylori
заболевания 23S рДНК Желудочный нуклеиновой кислоты на основе диагностики Справочная информация
широко распространено мнение, что хеликобактер пилори
, грам отрицательная бактерия microaerophylic, участвует в нескольких клинических условиях желудочно-кишечного тракта, таких как хронический гастрит, язву желудка и двенадцатиперстной кишки , рак желудка и лимфопролиферативных нарушений [1]. Лечение H. Pylori
Инфекция приводит к заживлению язв и в снижении риска развития рака желудка и лимфомы [2, 3].
После того, как бактерия H. Pylori
обнаруживается в измененном слизистой оболочки желудка, указанное лечение состоит из тройного режима антибиотика включая methronidazol, кларитромицин, амоксициллин, тинидазол, тетрациклин и фторхинолоны, связанных с ингибитором протонного насоса, такие как омепразол, лансопразол или пантопразол [4-6]. H. Pylori
эрадикации с рядом комбинированных препаратов и схем близки к 80% [7-9], варьируется от страны к стране и на региональном уровне, в странах [10]. Несколько факторов способствуют этой низкой скорости H. Pylori
исцеления в том числе неэффективностью проникновения антибиотика в слизистой оболочке желудка, инактивация антибиотика путем кислотной секреции желудка [11], отсутствие соблюдения пациентом [12] и, главным образом, аварийные случаи и рост H. Pylori
резистентные к антибиотикам штаммы [13]. Таким образом, региональные H. Pylori
наблюдение сопротивления имеет большое значение для тестирования и лечения стратегий.
В Бразилии, стране континентальных размеров, большинство практикующих врачей используют классическую тройную схему, состоящую из кларитромицин, амоксициллин и а ингибитор протонного насоса в течение семи дней в качестве первой линии терапии для преодоления H. Pylori
инфекции [5, 14]. Эта схема была доказана, чтобы стать неэффективным во всем мире, в основном в результате возникновения и увеличения штаммов H. Pylori
резистентных к кларитромицину, что снижает эффективность лечения бактерии от 55% до 100% [15-18]. Среди бразильских местностей, H. Pylori
кларитромицин сопротивления представляет высокую распространенность, колеблется от 7-16% у взрослых [19-22] и 27% у детей [23]. Таким образом, принимая во внимание клиническую важность первичной резистентности H. Pylori
к кларитромицину, его распространенность следует рассматривать, прежде чем выбрать режимы искоренения [24].
Определение H. pylory в пробирке
восприимчивости к антибиотикам может быть выполнена с помощью стандартных методик, таких как агар, агар диффузии разбавление и отвар микропланшета методами и Е-теста. Тем не менее, из-за медленного роста и конкретных требований H.pylori
культуры, этот подход не является надежным для использования в большинстве обычных клинических лабораториях, главным образом в развивающихся странах. Следовательно, молекулярные тесты, нацеленные на сопротивление ассоциированных H. Pylori
мутации генов непосредственно из образцов желудочной биопсии имеют потенциал для использования в крупномасштабных исследованиях [25-29].
Молекулярный механизм, участвующий в кларитромицин сопротивления состоит из мутаций в последовательность H. Pylori
домена V фракции 23S рРНК, которая участвует в связывании сайта peptiltransferase рибосомы, препятствующего перевязку макролида к рРНК [30]. Основными охарактеризованные точечные мутации от А до G в позициях 2142 и 2143, А-С в 2142 [31-33], от А до Т в 2144 [34], Т к С в 2717 [35] и С к А в 2694 [ ,,,0],36]. В A2142G и A2143G мутации преобладают в клинических изолятов по всему миру в том числе в Бразилии [21, 37-40]. Таким образом, для того, чтобы выполнить крупномасштабный исследование кларитромицина первичного сопротивления непосредственно из биоптатов 1137 пациентов присутствовали в больнице Дас Clinicas из Марилия, город в глубине штата Сан-Паулу, Бразилия, мы разработали полимеразной цепной реакции, связанной с ограничением длины фрагмента полиморфизм (ПЦР-ПДРФ) анализа для выявления A2142G и A2143G нуклеотидных замен в области в в H. Pylori
23S рДНК.
Методы
пациентов
1137 взрослых пациентов жителя в городе Марилия, штата Сан-Паулу в Бразилии, в возрасте от 19 до 91 лет, которые были последовательно прошли необходимую эзофагогастродуоденоскопию (EGD) для верхней боли в животе или симптомы диспепсии в период с февраля 2003 года по декабрь 2006 года в гастроэнтерологии амбулатории из больницы дас Clinicas из Marília медицинской школы, были зачислены в данном исследовании.
эндоскопии и биопсии
EGD была выполнена с помощью fibroendoscope (GIF-XP20, GIF-XQ20) или видео-эндоскопа (GIF-100) как от Olympus, Синдзюку-ку, Токио, Япония. Желудочный или язва двенадцатиперстной кишки диагностическая определялась эндоскопии и были собраны два фрагмента антральном для выполнения быстрого уреазы и гистологической тесты. Биопсия используется для быстрого уреазного теста был дополнительно представлен экстракции ДНК. Протокол, используемый в согласии с Хельсинской декларацией и было одобрено Комитетом по этике в области исследований человека из Marilia медицинской школы, с помощью под номером ссылки 388/01. В Этический комитет одобрил протокол исследования письменное информированное согласие от каждого пациента, включенного в данном исследовании было отменено как все желудочных биоптатов проанализированных были те же биопсии, которая обычно используется для уреазного экспресс-теста в рамках гастроэнтерологии амбулаторной службы больнице Дас Clinicas из Марилия Медицинской школы и, таким образом, никакого конкретного вмешательства пациента не было необходимо для регистрации в этом предлагаемом исследовании. Соответственно, отказ от письменного информированного согласия не отрицательно сказались на права и благополучие субъектов, включенных в исследования, а также конфиденциальность личности пациентов была гарантирована.
Гистологии
Один антральных образца фиксировали в растворе формальдегида на 10% и погружают в парафин. Срезы окрашивали Гимза для H. оценки пилори
и окрашивали гематоксилином и эозином для оценки гистологических изменений [41].
Полимеразной цепной реакции, ограничение и анализ секвенирования
В тот же биопсии используется для быстрого уреазы тест был представлен экстракции ДНК с занятостью набора для экстракции ДНК GFX, приобретенной у Amersham /Pharmacia Biotech, следуя инструкциям изготовителя. ДНК количественно электрофореза в агарозном геле с использованием Invitrogen, Grand Island, Нью-Йорк, США, низкая масса лестницы и 50-100ug общей ДНК были использованы в реакциях ПЦР с олигонуклеотидами: Hp23Sr6 смысле (5 'CACACAGGTAGATGAGATGAGTA3') и Hp23Sr7 антисмысловым (CACACAGAACCACCGGATCACTA3 '), который усиливается фрагмент 768pb соответствующего домена V от хеликобактерной
23S рДНК (рисунок 1). Для преодоления проблем обширного генетического полиморфизма для точного обнаружения ПЦР H.pylori
, строительство олигонуклеотид проводился после сравнительного анализа 23S рДНК из H.pylori
и родственных организмов доступны на геномами на программном обеспечении MegAlign Lasergene , ПЦР состояние было 94 ° С 5 ', а затем 40 циклов при 94 ° C 30 "/60 ° C 30" /72 ° C 30 "и один цикл при 72 ° С 7', с общим объемом 25 мкл, содержащей 1 × ПЦР-буфер, 200 мкМ дНТФ, 2,0 мМ MgCl <суб> 2, 1 мкМ каждого олигонуклеотида, 1,25 U Taq ДНК-полимеразной Платина Бразилия (Invitrogen). Во всех реакциях ПЦР отрицательный и положительный контроль были использованы, соответствующие, соответственно, стерильная вода и H. пилори
ПЦР положительных желудочных биопсий. Усиленные фрагменты переваривали MboII
и BsaI
(New England Biolabs). Эти ферменты различают мутации в H. Pylori
домена V от 23S рДНК в позициях 2142 и 2143, соответственно. При наличии мутации A2142G полученные фрагменты ДНК рестрикции из 418 пар оснований и 350 пар оснований, и в присутствии мутации A2143G полученных фрагментов 108, 310 E 350 пар оснований. В качестве контроля MboII
переваривания мы использовали ПЦР-амплификации фрагмента ДНК 601 пар оснований, соответствующий основным
гена хитиназы Leishmania, который содержит сайт рестрикции для MboII
. Законсервированным BsaI
сайт рестрикции на 768 п.о. PCR ампликона является положительным контролем для переваривания этот фермент производства фрагментов ДНК 108 и 660 пар оснований в отсутствие мутации A2143G. Продукты реакции и рестрикционного анализа ПЦР были разрешены в 1,5% агарозном геле, окрашивали бромистым этидием и фотографировали в УФ-свете. 23S рДНК 768 п.о. PCR ампликонов из четырех желудочных биопсий (два положительных и два отрицательных для H. Pylori
гистологический тест) с кларитромицин чувствительными MboII
и BsaI
рестрикционной, и из десяти желудочных биопсий с clarytromycin резистентных MboII
(три образца) и BsaI
(семь образцов) модели рестрикции были представлены секвенирования с DyeTM Terminator v3.0 цикла секвенирования Готовый комплект реакции и ABI-3100 машины, приобретенной у фирмы Applied Biosystems в соответствии с инструкциями изготовителя. определение нуклеотидная последовательность была выполнена в двух экземплярах и сравнительный анализ был проведен с помощью основного выравнивания нуклеотидных BLAST [42]. Рисунок 1 Молекулярная диагностика Helicobacter Pylori с помощью ПЦР и RLFP обнаружения домена V мутаций 23S рРНК A2142G и A2143G, ответственного за кларитромицин сопротивления. А. Представление интересов H. Pylori
23S ген, кодирующий (GenBank: HPU27270), положение праймеров, используемых для ПЦР и из A2142 и A2143 от фракции V от 23S рДНК, размер фрагментов, полученных с ферментами рестрикции BsaI и MboII
в ПЦР-фрагментов, содержащих мутации A2142G и A2143G, и внутренняя BsaI
сайт рестрикции ампликона 768 п.н., обозначены. В, С и D. Гель агарозы окрашивали бромистым этидием, содержащим диагностический анализ ПЦР, рестрикционного анализа 768pb ампликона с MboII
и BsaI
соответственно. 1-10 соответствуют различным образцов человеческой биопсии; C-, отрицательный контроль ПЦР, М-100 б.п. лестницы приобретены у Invitrogen. Размеры фрагментов ДНК, указаны на левой или правой части каждого рисунка геля.
Статистический анализ
H. Pylori
диагностические тесты оценивали путем расчета чувствительности, специфичности и точности гистологию, использующую в качестве золотого стандарта.
Результаты и обсуждение
Это первый бразильский крупномасштабное исследование H. Pylori
диагностика и кларитромицин сопротивления непосредственно из биоптатов 1137 последовательных пациентов, представленных в верхней гастроскопии, в течение четырех лет, в городе интерьер Сан-Паулу, Бразилия.
Желудочный исход болезни всех пациентов, включенных в данном исследовании приняли участие в гастроэнтерологии поликлиники больницы дас Clinicas из Marília был исследован эндоскопии и гистопатологии. Эндоскопические находки язвенной или язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки (PUD) присутствовал в 123 пациентов. Различные степени хронического гастрита (CG) наблюдались гистопатологией в 706 пациентов и нормальной слизистой оболочки желудка, связанный или не гастроэзофагеальной рефлюксной болезни (ГЭРБ) был обнаружен у 290 пациентов. Восемнадцать пациентов был диагностирован аденокарциномы (15) и лимфомы (3) и были исключены из исследования. . Эпидемиологический анализ, клинические исходы и H. пилори
распространенность этих образцов были недавно опубликованы [43]
Обнаружение хеликобактерной
проводили непосредственно из образцов биопсии тремя различными тестами: гистология, домашнее хозяйство быстрое уреазный тест и ПЦР с использованием праймеров Hp23Sr6 /R 7, которые амплификации фрагмента бактерии в 768 п.о. домена V от 23S-рДНК. Гистологии является золотым стандартом h.pylori
диагностический тест используется в нашей повседневной клинической практике, которая вместе с гистопатологического анализа используется для принятия решения для H. Pylori
эрадикационной терапии. Тест бытовой быстрый уреазный показал очень низкое положительное прогностическое значение для H. Pylori
ассоциированных заболеваний желудка и высокое расхождение по сравнению с гистологии; следовательно, эти данные были исключены из исследования (данные не показаны). Метод 23S рДНК ПЦР обнаружена антихеликобактерную
в 488 желудочных биопсий образцов, где гистологии был положительным для 451 биопсий образцов. Сравнительный анализ анализа ПЦР, выполняемой с Hp23Sr6 /r7 с гистологии показали чувствительность, специфичность и точность 77,6%, 79,3% и 78,6%, соответственно (таблица 1). Как были выполнены оба теста на одном и другом биопсии и антихеликобактерную
инфекция представляет собой фокусного характеристику инфекции [44, 45], точность 78,6% является приемлемым для надежного диагностического теста. Это может быть продемонстрировано с помощью консистенция h.pylori
обнаружения с помощью ПЦР и гистологии, используемого в CG (53,1% и 52,7%, соответственно) и ЯБДПК (61,2% и 62,6%, соответственно) пациентов (таблица 1). ПЦР обнаружен H.pylori
в 12,75% у больных с нормальной слизистой оболочки желудка во время гистологии был положительным лишь 0,8% образцов. Эти результаты могут быть объяснены более чувствительной характеристикой метода, основанного нуклеиновой кислоты. Для того чтобы улучшить диагноз H.pylori
некоторые авторы предлагают анализ множественных биопсий [44]. Для того чтобы подтвердить специфичность ПЦР-фрагментов, полученных, ампликонов из двух образцов с гистологическим тестом на H. Pylori
положительных и двух образцов с гистологическим тестом на H. Pylori
отрицательного секвенировали. BLASTN анализ всех четырех биопсий амплифицированных фрагментов ПЦР с 23S рДНК H. Pylori
специфических праймеров [Genbank: KF680642, Genbank: KF680643, Genbank: KF680644 и Генбанку: KF680645] показал идентичность 100% с референтом 23S рДНК к различным штаммы H. пилори
. Таким образом, разработанный ПЦР-анализ является быстрым и точным и может быть использован в качестве практического метода для обнаружения H.pylori
infection.Table 1 Клинический результат и сравнение хеликобактерной методов диагностики

PUD ( п = 123)


CG (N = 706)


N (N = 290):


Его +

His-


Его +

His-


Его +

His-


T

ПЦР +
63
13
76
286
89
375
1
36
37
488

14 ПЦР
33
47
86
245
331

1 252 253

631
T
77
46
123
372
334
706 страница 2 288 290

1119
CG
хроническом гастрите, Пуд
язвенная болезнь, N
нормальная слизистая оболочка желудка, связанный или не гастроэзофагеальной рефлюксной болезни (ГЭРБ), ПЦР
полимеразной цепной реакции, его
гистологии.
Антибактериальная терапия заболеваний желудка рекомендуется когда H. Pylori
диагностика является положительной, и бактерия классическая эрадикационной терапии состоит из кларитромицин, амоксициллин и ингибитор протонного насоса назначают. Выбранная терапия представляет высокий выход из строя h.pylori
скорости ликвидации в тех районах, где устойчивость к кларитромицину выше, чем 15%, вероятно, в ответ на широкое использование этого антибиотика для инфекций дыхательных путей, особенно у детей [9]. Глобальное первичное сопротивление H. Pylori к кларитромицину
диапазоне от 1 до 29% [46]. В Бразилии несколько исследований сообщили о распространенности кларитромицин сопротивления 7-16% у взрослых [19, 20, 22, 47] и 27% у детей [23]. Таким образом, для того, чтобы улучшить эмпирический выбор h.pylori
сопутствующей болезни терапии, мы исследовали региональную скорость h.pylori
кларитромицин сопротивления путем выявления основных связанных точечных мутаций, A2142G и A2143G в области V из в антихеликобактерную
23S рДНК.
Таким образом, все 488 H.pylori
ПЦР-положительные образцы анализировали с помощью ПДРФ из 768 п.о. PCR-фрагмент, полученный с использованием праймеров Hp23Sr6 /7 с ферментами рестрикции MboII
и BsaI
, с обнаружения мутации A2142G и A2143G в области в в H. Pylori
23S рДНК, соответственно (рис 1). Только 12 пробы (2,46%), показали, мутировавший рестрикционную, три (25%), несущей мутацию A2142G, семь (58,3%) A2143G и один образец (8,7%) показали, как точечные мутации рДНК в ПЦР-23S рДНК фрагмент 768 пар оснований. Один образец показал частичное расщепление с ферментом MboII
(рисунок 1). Точечные мутации A2142G и A2143G ампликонов, полученных из трех [Genbank: KF680646, Genbank: KF680647 и Genbank: KF680647] и семь [Genbank: 680649, Genbank: 680650, Genbank: 680651, Genbank: 680652, Genbank: 680653, Genbank: 680654 и Genbank: 680655] различные образцы биопсии, соответственно, были подтверждены с помощью секвенирования. Там не было никакой ассоциации кларитромицина h.pylori
точечные мутации устойчивости с возраста или пола (данные не показаны) пациентов.
Распространенность хеликобактерной
кларитромицин сопротивления нашли в нашем регионе была близка к найденной в развитых странах, таких как Италия и Германия [7] и в развивающейся стране Южной Америки Парагвай [48]. Эти результаты подтверждают высокую региональную изменчивость h.pylori
устойчивости к антибиотикам и, несмотря на увеличение кларитромицин сопротивления во всем мире, в Марилия, низкий уровень сопротивления сохранялся в течение периода четырех лет. Кроме того, ПЦР /ПДРФ был быстрым и точным методом для обнаружения кларитромицин сопротивления посредством мутации гена непосредственно в образцах желудочного biospsy и могут быть использованы вместе с гистологическим, чтобы решить, для назначения кларитромицина содержащих препаратов терапии.
H. Pylori
23S рРНК домен V A2142G и A2143G точечные мутации являются основными мутации найдены в H. Pylori
Клинические изоляты устойчивы к кларитромицину. Мы обнаружили более высокую распространенность A2143G по сравнению с A2142G мутации в наших образцах, что согласуется с большинством бразильских исследований, включая Штаты Минас-Жерайс, Сан-Паулу и Ресифи [20, 34, 36]. A2143G, но не мутация A2142G точка показывает синергетический эффект кларитромицина и амоксициллина, которые использовались вместе в первой линии антихеликобактерную
режим [49], подкрепляя необходимость исследовать этот кларитромицин 23S рДНК точечная мутация перед лечением. Один образец таил как A2142G и A2143G мутации в области В в антихеликобактерную
23S рДНК, который был также найден в трех H.pylori
изоляты, полученные от пациентов бразильского штата Минас-Жерайс [20]. Эти результаты вместе с возникновением частичного переваривания 768 п.н. 23S рДНК ПЦР-фрагмент (рисунок 1) может свидетельствовать о колонизации желудка нескольких штаммов H.pylori
[50].
В Минас-Жерайс, Бразилия, кларитромицин сопротивление увеличилась с 4,48% в 1996 году до 19,05% в 2000 году [20], вероятно, из-за использования макролидов в лечении других инфекционных заболеваний. Мы не обнаружили каких-либо существенных различий в образцах, резистентных к кларитромицину в зависимости от периода исследования (данные не показаны). Эти данные указывают на то, что в нашем регионе рецепт и использование макролидов не выполняется на высоком уровне. Дополнительные исследования необходимы, чтобы подтвердить эту гипотезу.
Кларитромицин сопротивление снижает клиническую эффективность кларитромицина на основе тройной терапии. Однако, как распространенность первичной резистентности H.pylori к кларитромицину
в связи с A2142G и A2143G нуклеотидных замен рДНК 23S остается низким в Марилия, стандартный кларитромицин, содержащий тройную терапию по-прежнему действует в качестве наиболее эффективной эмпирической первой линии эрадикационной терапии для хеликобактерной
инфекции.
Выводы
разработанная ПЦР адресованный гена 23S рДНК антихеликобактерной
является быстрым и точным и может быть использован в качестве практического метода для обнаружения H .pylori
инфекции непосредственно на желудочных биоптатов. Кроме того, H. Pylori
23S рРНК ПЦР-фрагмент, полученный может быть использован для обнаружения точечных мутаций от 1728 до 2495 п.о. домена V H. Pylori
23S-рДНК, связанного с кларитромицином сопротивления. Распространенность первичной резистентности H.pylori к кларитромицину
вследствие 23S рДНК A2142G и A2143G нуклеотидных замен остается низким в Марилия, таким образом, стандарт кларитромицин, содержащий тройную терапию по-прежнему действует в качестве наиболее эффективной эмпирической первой линии терапии для эрадикации H. Pylori
инфекция
Сокращения
PUD:.
язвенная болезнь


CG:
Хронический гастрит


ГЭРБ:
Гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь


ПЦР:
полимеразной цепной реакции


ПДРФ:
Ограничение длины фрагмента полиморфизм.


декларациях
подтверждениях
Мы благодарны доктору Adriana Augusta Pimenta де Баррос для ее ухода на всех пациентов, включенных в исследование, и Алекс Gusmão да Сильва за его вклад в проведении статистического анализа. Эта работа была поддержана Fundação де Ампаро Pesquisa сделать Estado-де-Сан-Паулу (FAPESP), Научно-исследовательские гранты 03 /01223-0, 08 /01394-4; Стипендии RABL 2008 /01395-0, GACL 2005 /02482-6, THH 2003 /03675-7.
Авторы 'оригинальные представлены файлы для изображений изображения Ниже приведены ссылки на авторов оригинала, представленных файлов для изображений. 12876_2013_1025_MOESM1_ESM.pdf авторов исходного файла для фигурного 1 конкурирующими интересами
Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.
Авторского взносы
RBS проводившего обработку образцов, молекулярных исследований, интерпретации данных и участвовал в проекте рукописи. RABL, GACL и THH проводят молекулярные исследования и способствовали приобретению и интерпретации молекулярных данных; MAS разработаны эксперименты, способствовали анализу данных и подготовил рукопись. Все авторы читали и одобрили окончательный вариант рукописи.

• Недифференцированный тип аденокарциномы желудка: прогностическое влияние трех гистологических типов
• Безопасность и предварительные результаты интраоперационной химиотерапии и гипертермии внутрибрюшинного х…