Bassa Helicobacter pylori resistenza primaria alla claritromicina nei campioni bioptici gastrici di pazienti dispeptici di una città all'interno di San Paolo, Brasile

Bassa Helicobacter pylori resistenza primaria alla claritromicina nei campioni bioptici gastrici di pazienti dispeptici di una città all'interno di San Paolo, Brasile
Abstract
sfondo
Claritromicina, amoxicillina, e un inibitore della pompa protonica sono i farmaci più comuni raccomandato come prima linea tripla terapia per H. pylori
trattamento, che si traduce in tassi di eradicazione vicino al 80%, che varia a livello regionale, principalmente a causa di casi di emergenza e aumenti di ceppi resistenti claritromicina. sostituzioni nucleotidiche al H. pylori
dominio V della frazione 23S rRNA sono coinvolti nella resistenza ai macrolidi e le A2142G e A2143G mutazioni sono predominanti in isolati clinici di tutto il mondo tra cui in Brasile. Come H. pylori
cultura è fastidioso, abbiamo studiato l'insorgenza primaria di H. pylori
A2142G e A2143G rDNA 23S mutazioni utilizzando un approccio molecolare direttamente su biopsie gastriche di pazienti dispeptici consecutivamente frequentato presso l'ospedale das Clinicas di Marilia, São Paolo, in Brasile.
Metodi
campioni bioptici ottenuti da 1137 pazienti dispeptici, sono stati sottoposti a istopatologia e H. pylori
diagnosi istologica e PCR. saggio /RFLP PCR è stato utilizzato per rilevare A2142G e punto A2143G mutazioni al dominio V del H. pylori
23S rDNA associata con la resistenza claritromicina. Attraverso il test messo a punto, un 768 bp PCR amplicone corrispondente to1728 a 2495 bp del 23S rDNA H. pylori
è limitato con MboII
per il rilevamento A2142G mutazione e con BsaI
per il rilevamento A2143G mutazione. Il verificarsi di 23S rDNA risultati A2142G in due frammenti di DNA (418 e 350 bp) e di 23S rDNA risultati A2143G in tre frammenti di DNA (108, 310 e 350pb), a causa di un BsaI portale di restrizione conservato.
Risultati
il metodo PCR utilizzato per diagnosticare H. pylori
presentato sensibilità, specificità e accuratezza del 77,6%, 79,3% e 78,6%, rispettivamente, rispetto al istologia, il metodo gold standard per H. pylori
diagnostici utilizzati nella nostra routine. La prevalenza di H. pylori
con genotipi resistenti claritromicina era 2,46%, con predominanza di A2143G 23S rDNA mutazione puntiforme.
Conclusioni
Il PCR /RFLP era una rapida e accurata
H.pylori metodo di determinazione della resistenza diagnostico e claritromicina utile per la pratica di routine. Come prevalenza della resistenza primaria di H. pylori
alla claritromicina a causa di A2142G e mutazioni A2143G rimane basso a Marilia, la claritromicina standard contenente tripla terapia è ancora valido.
Parole
Helicobacter pylori
Claritromicina resistenza Helicobacter pylori
malattie 23S rDNA gastrici acidi nucleici basate Sfondo di diagnostica di
è ampiamente accettato che Helicobacter pylori
, un batterio Gram negativo microaerophylic, è coinvolto in una serie di condizioni cliniche del tubo digerente, come la gastrite cronica, ulcere peptiche e duodenali , cancro gastrico e malattie linfoproliferative [1]. Il trattamento di H. pylori
risultati di infezione guarigione dell'ulcera e in una riduzione del rischio di cancro gastrico e linfoma [2, 3].
Una volta che il batterio H. pylori
viene rilevato nella mucosa gastrica alterata, il trattamento indicato è costituito da un regime antibiotico tripla compreso methronidazol, claritromicina, amoxicillina, tinidazolo, tetracicline e fluorochinoloni associati con un inibitore della pompa protonica come omeprazolo, lansoprazolo o pantoprazolo [4-6]. H. pylori
tassi di eradicazione con un certo numero di agenti combinati e regimi sono vicine al 80% [7-9], che varia da paese a paese e regionale, all'interno dei paesi [10]. Diversi fattori contribuiscono a questo basso tasso di H. pylori
guarigione compresa l'inefficienza della penetrazione antibiotico nella mucosa gastrica, inattivazione dell'antibiotico dalla secrezione acida dello stomaco [11], la mancanza della compliance del paziente [12] e soprattutto, i casi di emergenza e crescenti H. pylori
ceppi resistenti agli antibiotici [13]. Così, regionale H. pylori
sorveglianza della resistenza è di grande importanza per le strategie di test e di trattamento.
In Brasile, un paese di dimensioni continentali, la maggior parte dei medici che praticano impiegare il triplo regime classica composta da claritromicina, amoxicillina e un inibitore della pompa protonica per sette giorni come terapia di prima linea per superare H. pylori
infezione [5, 14]. Questo regime è stato dimostrato di diventare inefficiente universalmente, soprattutto a causa della comparsa e l'aumento di H. pylori
ceppi resistenti a claritromicina, che riduce l'efficienza di trattamento batterio dal 55% al ​​100% [15-18]. Tra località brasiliane, H. pylori
resistenza claritromicina presenta elevata prevalenza, variando 7-16% negli adulti [19-22] e il 27% nei bambini [23]. Di conseguenza, considerando l'importanza clinica di primaria H. pylori
resistenza alla claritromicina, la sua prevalenza deve essere considerato prima di scegliere regimi di eradicazione [24]
. Determinazione di H. pylory in vitro
la suscettibilità agli antibiotici può essere eseguita mediante tecniche standard come l'agar, metodi di diluizione e brodo microdiluizione agar e l'e-test. Tuttavia, a causa della crescita lenta e le particolari esigenze di H. pylori
cultura, questo approccio non è affidabile per l'uso nella maggior parte dei laboratori clinici di routine, soprattutto nei paesi in via di sviluppo. Quindi, i test molecolari di targeting H. pylori
resistenza associata mutazioni del gene direttamente da campioni bioptici gastrici hanno il potenziale per l'utilizzo in studi su larga scala [25-29].
Il meccanismo molecolare coinvolto nella resistenza claritromicina è costituito da mutazioni nel sequenza di H. pylori
dominio V della frazione 23S rRNA che è coinvolto nel ribosoma sito peptiltransferase vincolante prevenire la legatura del macrolide per il rRNA [30]. Le principali mutazioni puntiformi caratterizzati sono da A a G a posizioni 2142 e 2143, da A a C a 2142 [31-33], dalla A alla T al 2144 [34], T a C a 2717 [35] e C alla A in 2694 [ ,,,0],36]. Le mutazioni A2142G e A2143G sono predominanti in isolati clinici di tutto il mondo tra cui in Brasile [21, 37-40]. Pertanto, al fine di eseguire una ricerca su larga scala di claritromicina resistenza primaria direttamente da campioni bioptici di 1137 pazienti hanno partecipato presso l'Ospedale Das Clínicas di Marilia, una città all'interno di San Paolo, in Brasile, abbiamo sviluppato una reazione a catena della polimerasi associate a restrizioni frammento di polimorfismo della lunghezza (PCR-RFLP) test per rilevare le sostituzioni A2142G e A2143G nucleotidiche al dominio V del H. pylori
23S rDNA
. Metodi
pazienti
pazienti 1.137 adulti residenti nella città di Marilia, Sao Paulo Stato di Brasile, di età compresa tra 19 e 91 anni, che ha avuto esofagogastroduodenoscopia consecutivamente sottoposti (EGDS) per il dolore addominale superiore o sintomi dispeptici dal febbraio 2003 fino a dicembre 2006 presso la clinica di gastroenterologia ambulatoriale dei Hospital das Clinicas di Marilia Medical School, sono stati arruolati in questo studio
. endoscopia e biopsie
Il EGD è stato realizzato da fibroendoscope (GIF-XP20, GIF-XQ20) o un video-endoscopio (GIF-100) sia da Olympus, Shinjuku-ku, Tokyo, Giappone. ulcera gastrica o duodenale diagnostica è stata definita da endoscopia e due frammenti del antro sono stati raccolti per effettuare la rapida dell'ureasi e test istopatologici. La biopsia utilizzato per la prova dell'ureasi rapida è stata ulteriormente sottoposta ad estrazione del DNA. Il protocollo utilizzato è in accordo con la Dichiarazione di Helsinki ed è stato approvato dal Comitato Etico di umano di ricerca da Marilia Medical School, con il numero di riferimento 388/01. Nel Comitato Etico approvato protocollo di ricerca di un consenso informato scritto da ciascun paziente inclusi in questo studio è stato rinunciato, come tutti i campioni di biopsia gastrica analizzati erano le stesse biopsie utilizzati di routine per ureasi test rapido come parte del servizio di gastroenterologia ambulatoriale dell'ospedale Das Clinicas di Marilia Medical School e, quindi, nessun intervento specifico paziente era necessaria per l'iscrizione in questo studio proposto. Di conseguenza, la rinuncia del consenso informato scritto non ha influenzato negativamente i diritti e il benessere dei soggetti inclusi in questa ricerca, e anche la riservatezza dell'identità pazienti era garantita
. Istologia
Un esemplare antrali è stato fissato in soluzione formol al 10% ed inclusi in paraffina. Le sezioni sono state colorate per Giemsa H. pylori
valutazione e sono state colorate con ematossilina e eosina per la valutazione delle alterazioni istopatologiche [41]. Reazione a catena della polimerasi
, restrizione e analisi di sequenziamento
La stessa biopsia utilizzato per la rapida all'ureasi test è stato sottoposto ad estrazione del DNA con l'impiego del kit di estrazione del DNA GFx acquistato da Amersham /Pharmacia Biotech, seguendo le istruzioni del produttore. DNA è stato quantificato in elettroforesi su gel di agarosio utilizzando il Invitrogen, Grand Island, New York, Stati Uniti d'America, scala bassa massa e 50-100ug di DNA totale sono stati utilizzati nelle reazioni PCR con gli oligonucleotidi: Hp23Sr6 senso (5 'CACACAGGTAGATGAGATGAGTA3') e Hp23Sr7 antisenso (CACACAGAACCACCGGATCACTA3 '), che amplificato un frammento di 768pb corrispondente al dominio V di H. pylori
23S rDNA (Figura 1). Per superare i problemi di vasta polimorfismo genetico per il rilevamento preciso PCR di H. pylori
, la costruzione oligonucleotide è stata eseguita dopo una analisi comparativa del 23S rDNA da H. pylori
e organismi affini disponibile presso Genebank sul software MegAlign Lasergene . condizioni PCR era 94 ° C 5 'seguita da 40 cicli di 94 ° C 30 "/60 ° C 30" /72 ° C 30 "ed un ciclo a 72 ° C 7', con un volume totale di 25 microlitri contenenti 1 × tampone PCR, 200 micron dNTP, 2,0 mm MgCl 2, 1 mM di ogni oligonucleotide, 1,25 U Taq DNA polimerasi Platinum Brasile (Invitrogen). In tutte le reazioni di PCR negativo e un controllo positivo sono stati utilizzati corrispondenti, rispettivamente, acqua sterile e H. pylori
PCR biopsie gastriche positivi. I frammenti amplificati sono stati digeriti con MboII
e BsaI
(New England Biolabs). Questi enzimi distinguono mutazioni nel H. pylori
dominio V del 23S rDNA nelle posizioni rispettivamente 2142 e 2143,. In presenza di A2142G mutazione risultanti frammenti di restrizione del DNA sono di 418 bp e 350 bp e in presenza di A2143G mutazione frammenti risultanti sono di 108, 310 e 350 bp. Come controllo di MboII
digestione abbiamo usato una PCR amplificato frammento di DNA di 601 bp corrispondente al gene importante
chitinasi Leishmania che contiene un sito di restrizione per MboII
. Un conservata BsaI portale di restrizione al 768 bp PCR amplicone è un controllo positivo per la digestione con questo enzima producendo frammenti di DNA di 108 bp e 660 in assenza di A2143G mutazione. I prodotti della PCR reazioni e restrizione analisi sono stati risolti in 1,5% gel di agarosio, colorati con bromuro di etidio e fotografati sotto la luce UV. 23S rDNA 768 bp amplificati per PCR da quattro biopsie gastriche (due positive e due negative per H. pylori
test istologico) con MboII sensibili claritromicina
e BsaI
modello di restrizione, e da dieci biopsie gastriche con MboII resistenti clarytromycin
(tre campioni) e BsaI
(sette campioni) modelli di restrizione sono stati sottoposti a sequenziamento con DyeTM Terminator ciclo v3.0 sequenziamento Pronto kit di reazione e una macchina ABI-3100 acquistato da Applied Biosystem, secondo le istruzioni del produttore. determinazione sequenza nucleotidica è stata eseguita in duplice copia e l'analisi comparativa è stata effettuata da allineamento nucleotide BLAST base [42]. Figura 1 Diagnosi molecolare di Helicobacter pylori mediante rilevamento PCR e RLFP del dominio V delle mutazioni 23S rRNA A2142G e A2143G responsabile della resistenza claritromicina. A. Rappresentazione del H. pylori
23S gene che codifica (GenBank: HPU27270), posizione dei primer utilizzati per la PCR e del A2142 e A2143 dalla frazione V del 23S rDNA, la dimensione dei frammenti ottenuti con enzimi di restrizione BsaI e MboII
in frammenti di PCR contenenti le mutazioni A2142G e A2143G e interno BsaI portale di limitazione del amplicone 768 bp, sono indicati. B, C e D. Gel di agarosio colorato con bromuro di etidio contenente un'analisi diagnostica PCR, analisi di restrizione del amplicone 768pb con MboII
e BsaI
, rispettivamente. 1-10 corrispondono a diversi campioni bioptici umani; C-, controllo negativo della PCR, M-100 bp scala acquistato da Invitrogen. Dimensioni dei frammenti di DNA sono indicati a sinistra oa destra di ogni figura gel. Analisi statistica

H. pylori
test diagnostici sono stati valutati calcolando sensibilità, specificità e accuratezza impiegando istologia come il gold standard.
Risultati e discussione
Questo è il primo studio su larga scala brasiliano su H. pylori
diagnosi e la resistenza claritromicina direttamente da campioni bioptici di 1137 pazienti consecutivi sottoposti a gastroscopia superiore, nel corso di un periodo di quattro anni, in una città in l'interno di San Paolo, in Brasile.
esito della malattia gastrica di tutti i pazienti arruolati in questo studio hanno partecipato alla clinica ambulatoriale gastroenterologia dell'Ospedale Das Clínicas di Marília è stato studiato mediante endoscopia e istopatologia. reperti endoscopici di ulcera peptica o duodenale (PUD) era presente in 123 pazienti. Diversi gradi di gastrite cronica (CG) sono stati osservati da istopatologia in 706 pazienti e normale mucosa gastrica, associata o meno alla malattia da reflusso gastroesofageo (GERD) è stato trovato in 290 pazienti. Diciotto pazienti sono stati diagnosticati come avendo adenocarcinoma (15) e linfoma MALT (3) e sono stati esclusi dallo studio. . Analisi epidemiologica, risultati clinici e H. pylori
prevalenza di questi campioni sono stati recentemente pubblicati [43]
Rilevamento di H. pylori
è stato eseguito direttamente dai campioni bioptici da tre prove differenti: istologia, una famiglia rapida test di ureasi e PCR con i primer Hp23Sr6 /R7 che amplificano un 768 bp batterio frammento del dominio V del 23S rDNA. Istologia è H. pylori
test diagnostico standard l'oro impiegato nella nostra routine clinica che, insieme con l'analisi istopatologica viene utilizzato per decidere per H. pylori
terapia di eradicazione. Il test delle famiglie rapida dell'ureasi ha mostrato un basso valore predittivo positivo per H. pylori
associato malattie gastriche ed una elevata discrepanza rispetto al istologico; di conseguenza, questi dati sono stati esclusi dallo studio (dati non riportati). Il metodo 23S rDNA PCR rivelò H. pylori
in 488 biopsie gastriche esemplari in cui l'istologia è stato positivo per 451 biopsie campioni. Analisi comparativa della PCR eseguita con il Hp23Sr6 /R7 con esame istologico ha mostrato sensibilità, specificità e accuratezza del 77,6%, 79,3% e 78,6%, rispettivamente (Tabella 1). Mentre entrambi i test sono stati eseguiti su un unico e differente biopsia e H. pylori
infezione presenta una caratteristica focale di infezione [44, 45], la precisione del 78,6% è accettabile per un test diagnostico affidabile. Si può dimostrare per consistenza del H. pylori
rilevazione mediante PCR e istologia impiegato in CG (53,1% e 52,7%, rispettivamente) e PUD (61,2% e 62,6%, rispettivamente) pazienti (Tabella 1). PCR rilevato H. pylori
a 12,75% in pazienti con normale mucosa gastrica, mentre l'istologia è stato positivo solo il 0,8% dei campioni. Questi risultati possono essere spiegati con la caratteristica più sensibile del metodo basato acido nucleico. Al fine di migliorare la diagnosi di H. pylori
alcuni autori suggeriscono l'analisi delle biopsie multiple [44]. Al fine di confermare la specificità dei frammenti di PCR ottenuti, amplificati da due campioni di prova istologica di H. pylori
campioni positivi e due con la prova istologica di H. pylori
negativo sono stati sequenziati. analisi BLASTN di tutti i frammenti di PCR amplificati quattro biopsia con il 23S rDNA H. pylori
primer specifici [GenBank: KF680642, GenBank: KF680643, GenBank: KF680644 e GenBank: KF680645] identità rivelata di 100% con il referente 23S rDNA di diverso ceppi di H. pylori
. Di conseguenza, il saggio PCR sviluppato è rapido e preciso e può essere utilizzata come un metodo pratico per la rilevazione di H. pylori
infection.Table risultato 1 clinica e confronto di H. pylori metodi diagnostici
PUD ( n = 123)
CG (n = 706)
n (n = 290)

suo +
historisches
suo +
historisches
suo +
historisches

T
PCR +
63
13
76
286
89
375
1 36 37

488
PCR-
14
33
47
86
245
331
1 252 253

631
T
77
46
123
372
334
706 2
288
290
1119
CG
gastrite cronica, PUD
ulcera peptica, N
normale mucosa gastrica associata o meno alla malattia da reflusso gastroesofageo (GERD), PCR
reazione a catena della polimerasi,
sua istologia. si consiglia il trattamento antibiotico
di malattie gastriche quando H. pylori
diagnosi è positiva e la classica terapia di eradicazione batterio composto da claritromicina, amoxicillina e un inibitore della pompa protonica è prescritto. La terapia scelta presentano un elevato fallimento di H. pylori
tasso di eradicazione nelle zone dove la resistenza alla claritromicina è superiore al 15%, probabilmente in risposta alla diffusione di questo antibiotico per infezioni del tratto respiratorio, soprattutto nei bambini [9]. resistenza primaria globale di H. pylori
a intervalli di claritromicina da 1 a 29% [46]. In Brasile, diversi studi hanno riportato una prevalenza claritromicina resistenza del 7-16% negli adulti [19, 20, 22, 47] e il 27% nei bambini [23]. Pertanto, al fine di migliorare la scelta empirica di H. pylori
terapia malattia associata, abbiamo studiato il tasso regionale di H. pylori
resistenza claritromicina attraverso il rilevamento del punto relative mutazioni importante, A2142G e A2143G al dominio V di H. pylori
23S rDNA.
Così, tutti i 488 H. pylori
campioni positivi di PCR sono stati analizzati mediante RFLP del 768 bp frammento di PCR ottenuti con primer Hp23Sr6 /7 con gli enzimi di restrizione MboII
e BsaI
, con rilevare le mutazioni A2142G e A2143G al dominio V del H. pylori
23S rDNA, rispettivamente (Figura 1). Solo 12 campioni (2,46%) hanno mostrato il modello di restrizione mutato, tre (25%) ospitare A2142G mutazione, sette (58,3%) A2143G e un campione (8,7%) hanno mostrato entrambe le mutazioni puntiformi rDNA 23S nelle PCR rDNA frammento di 768 bp. Un campione mostrava parziale digestione con l'enzima MboII
(Figura 1). Le mutazioni puntiformi A2142G e A2143G degli amplificati ottenuti da tre [GenBank: KF680646, GenBank: KF680647 e GenBank: KF680647] e sette [GenBank: 680.649, GenBank: 680.650, GenBank: 680.651, GenBank: 680.652, GenBank: 680.653, GenBank: 680654 e GenBank: 680655] diverse biopsie campioni, rispettivamente, sono stati confermati mediante sequenziamento. Non c'era alcuna associazione di claritromicina H. pylori
mutazioni puntiformi resistenza con l'età o il sesso (dati non riportati) dei pazienti.
La prevalenza di H. pylori
claritromicina resistenza trovato nella nostra regione è stato simile a quello trovato nei paesi sviluppati come l'Italia e [7] la Germania e nel paese in via di sviluppo del Sud America Paraguay [48]. Questi risultati confermano l'elevata variabilità regionale di H. pylori
resistenza agli antibiotici e nonostante l'aumento di resistenza claritromicina in tutto il mondo, a Marilia, un tasso di bassa resistenza è stata mantenuta per tutto il periodo di quattro anni. Inoltre, PCR /RFLP era un metodo rapido e preciso per la diagnosi della resistenza claritromicina attraverso una mutazione genica direttamente in campioni biospsy gastrici e può essere usato insieme con l'istologia decidere per prescrizione di claritromicina terapia contenente regime.
H. pylori
23S rRNA dominio V A2142G e A2143G mutazioni puntiformi sono le principali mutazioni trovate in H. pylori
isolati clinici resistenti alla claritromicina. Abbiamo trovato una maggiore prevalenza di A2143G rispetto al A2142G mutazione nei nostri campioni, che è in accordo con la maggior parte degli studi brasiliani, tra cui gli Stati di Minas Gerais, São Paulo e Recife [20, 34, 36]. A2143G ma non mutazione puntiforme A2142G mostra un effetto sinergico di claritromicina e amoxicillina, che sono stati utilizzati insieme in prima linea H. pylori
regime [49], rafforzando la necessità di indagare su questa claritromicina 23S rDNA mutazione puntiforme prima del trattamento. Un campione nutriva entrambe le mutazioni A2142G e A2143G a dominio V del H. pylori
23S rDNA che è stato trovato anche in tre H. pylori
isolati ottenuti da pazienti dello Stato brasiliano di Minas Gerais [20]. Questi risultati insieme con il verificarsi di digestione parziale di un 768 bp 23S rDNA PCR frammento (Figura 1) può essere indicativo della colonizzazione dello stomaco di più ceppi di H. pylori
[50].
In Minas Gerais, Brasile, resistenza claritromicina è aumentata dal 4,48% del 1996 al 19,05% nel 2000 [20], probabilmente a causa dell'uso dei macrolidi nel trattamento di altre malattie infettive. Non abbiamo trovato alcuna differenza significativa nei campioni resistenti alla claritromicina secondo il periodo dello studio (dati non mostrati). Questi dati indicano che nella nostra regione prescrizione ed utilizzazione macrolidi non viene eseguita su scala alto. Ulteriori studi sono necessari per confermare questa ipotesi.
Resistenza Claritromicina riduce l'efficacia clinica della terapia tripla claritromicina-based. Tuttavia, come la prevalenza della resistenza primaria di H. pylori
alla claritromicina a causa delle rDNA 23S A2142G e A2143G nucleotide sostituzioni rimane bassa a Marilia, la claritromicina standard contenente tripla terapia è ancora valido come la terapia di eradicazione di prima linea empirica più efficace per H. pylori
infezione.
Conclusioni
la PCR sviluppato mirato al gene 23S rDNA di H. pylori
è rapido e preciso e può essere utilizzata come un metodo pratico per la rilevazione di H .pylori
infezione direttamente su campioni bioptici gastrici. Inoltre, la H. pylori
frammento 23S rDNA PCR ottenuto può essere utilizzato per identificare mutazioni puntiformi 1728-2495 bp del dominio V H. pylori
23S rDNA associata alla resistenza claritromicina. La prevalenza di resistenza primaria di H. pylori
alla claritromicina a causa di 23S rDNA A2142G e A2143G nucleotide sostituzioni rimane bassa a Marilia, così la claritromicina standard contenente tripla terapia è ancora valido come il più efficace terapia di eradicazione di prima linea empirica per H. pylori
infezione
Abbreviazioni
PUD:.
ulcera peptica
CG:
gastrite cronica

GERD:
malattia da reflusso gastroesofageo
PCR:
reazione a catena della polimerasi
RFLP:
rflp.
Dichiarazioni
Ringraziamenti
Siamo grati al Dr. Adriana Augusta Pimenta de Barros per la sua cura per tutti i pazienti inclusi nello studio e ad Alex Gusmão da Silva per il suo contributo nello svolgimento l'analisi statistica. Questo lavoro è stato sostenuto dalla Fundação de Amparo un Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP), assegni di ricerca 03 /01223-0, 08 /01.394-4; Borse Rabl 2008 /01.395-0, GACL 2005 /02.482-6, THH 2003 /03.675-7.
Autori 'iniziale ha presentato i file per le immagini
Di seguito sono riportati i link ai file degli autori originali inviati per le immagini. 12876_2013_1025_MOESM1_ESM.pdf Autori file originale per la figura 1 interessi in competizione
Gli autori dichiarano di non avere alcun interesse in competizione.
Autori contributi
RBS effettuato il trattamento dei campioni, studi molecolari, l'interpretazione dei dati e ha partecipato al progetto del manoscritto. Rabl, GACL e THH effettuati gli studi molecolari e hanno contribuito alla acquisizione e l'interpretazione dei dati molecolari; MAS progettato gli esperimenti, ha contribuito all'analisi dei dati e ha redatto il manoscritto. Tutti gli autori hanno letto e approvato il manoscritto finale.

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