Niedrige Helicobacter pylori primäre Resistenz gegen Clarithromycin in Magenbiopsieproben von Patienten mit Dyspepsie einer Stadt im Inneren von São Paulo, Brazil

Low Helicobacter primäre Resistenz gegen Clarithromycin in Magenbiopsieproben von Patienten mit Dyspepsie einer Stadt im Inneren von São Paulo, Brasilien pylori
Abstrakt
Hintergrund
Clarithromycin, Amoxicillin und einer Pumpe Proton-Hemmer sind die am häufigsten verwendeten Medikamente als First-Line-triple-Therapie für H. pylori
Behandlung empfohlen, die Preise in Tilgung der Nähe von 80% ergibt , regional unterschiedlichen, vor allem auf Notfälle und erhöht Clarithromycin-resistenten Stämmen. Nukleotidsubstitutionen an der H. pylori
Domäne V der 23S rRNA-Fraktion sind in der Makrolid-Resistenz beteiligt und die A2142G und A2143G Mutationen sind vorherrschend in der klinischen Isolate, einschließlich weltweit in Brasilien. Als H. pylori
Kultur anspruchsvoll ist, untersuchten wir die primären Vorkommen von H. pylori
A2142G und A2143G rDNA 23S Mutationen ein Molekular Ansatz direkt auf Magen-Biopsien von Patienten mit Dyspepsie nacheinander besucht am Hospital das Clinicas von Marilia verwenden, São Paulo, Brasilien.
Methoden
Biopsie-Proben von 1137 Patienten mit Dyspepsie erhalten, wurden Histopathologie und H. pylori
Diagnose durch Histologie und PCR unterzogen. PCR /RFLP-Assay wurde verwendet, um A2142G und A2143G Punktmutationen an Domäne V der H. pylori
23S rDNA im Zusammenhang mit Resistenz gegenüber Clarithromycin erkennen. Durch die entwickelte Test wird eine 768-bp-PCR-Amplikon entsprechenden to1728 bis 2495 bp des 23S-H. pylori
rDNA mit MboII
für A2142G Detektion von Mutationen beschränkt und mit BsaI
für A2143G Detektion von Mutationen. Auftreten von 23S rDNA A2142G Ergebnisse in zwei DNA-Fragmente (418 und 350 bp) und der 23S rDNA A2143G Ergebnisse in drei DNA-Fragmente (108, 310 und 350pb) aufgrund einer konservierten BsaI
Restriktionsstelle.
Ergebnisse
das PCR-Verfahren zur Diagnose von H. pylori
präsentiert Sensitivität, Spezifität und Genauigkeit von 77,6%, 79,3% und 78,6% bzw. im Vergleich zu Histologie, der Goldstandardmethode für die H. pylori
Diagnose in unserer Routine verwendet. Die Prävalenz von H. pylori
mit Clarithromycin resistenten Genotypen war 2,46%, mit Dominanz der A2143G 23S rDNA Punktmutation.
Schlussfolgerungen
Der PCR /RFLP-Assay war eine schnelle und genaue H.pylori
Diagnose- und Resistenz gegenüber Clarithromycin Bestimmungsverfahren nützlich für die Routinepraxis. Als Prävalenz der primären Resistenz von H. pylori
gegen Clarithromycin durch und A2143G Mutationen A2142G niedrig bleibt in Marilia, die Standard-Clarithromycin-Triple-Therapie enthält noch gültig ist.
Schlüsselwörter Helicobacter pylori
Resistenz gegenüber Clarithromycin Helicobacter pylori
23S rDNA Magenerkrankungen Nukleinsäure-basierten diagnostischen Hintergrund
Es ist allgemein, dass Helicobacter pylori
akzeptiert wird, ein Gram-negative Bakterium microaerophylic wird in mehreren klinischen Verdauungstrakt Erkrankungen wie chronische Gastritis, Magen-Darm-und Zwölffingerdarmgeschwüren beteiligt , Magenkrebs und lymphoproliferative Erkrankungen [1]. Die Behandlung von H. pylori
Infektion führt zu einer Heilung von Geschwüren und zu einer Verringerung des Risikos von Magenkrebs und Lymphom [2, 3].
Das Bakterium H. pylori Sobald
wird in veränderter Magenschleimhaut festgestellt, die angegebene Behandlung besteht aus einer dreifachen antibiotischen Therapie einschließlich methronidazol, Clarithromycin, Amoxicillin, Tinidazol, Tetracyclin und mit einer Pumpe proton Inhibitor assoziiert Fluorchinolone wie Omeprazol, Lansoprazol oder Pantoprazol [4-6]. H. pylori-Eradikation Preise
mit einer Reihe von kombinierten Mitteln und Therapien sind in der Nähe 80% [7-9], variiert von Land zu Land und regional, innerhalb von Ländern [10]. Mehrere Faktoren tragen zu dieser niedrigen Rate von H. pylori
Heilung einschließlich der Ineffizienz des Antibiotikums Penetration in der Magenschleimhaut, die Inaktivierung des Antibiotikums durch die Säuresekretion des Magens [11], der Mangel des Patienten-Compliance [12] und vor allem, Notfallkoffer und zunehmende H. pylori
Antibiotika-resistente Stämme [13]. Somit ist die regionale H. pylori
Widerstand Überwachung von großer Bedeutung für Test- und Behandlungsstrategien.
In Brasilien, einem Land mit kontinentalen Dimensionen, beschäftigen die Mehrheit der praktizierenden Klinikern die klassische Dreifachtherapie bestehend aus Clarithromycin, Amoxicillin und ein Protonenpumpenhemmer für sieben Tage als First-Line-Therapie H. pylori
Infektion zu überwinden [5, 14]. Dieses Regime ist erwiesen sich als ineffizient weltweit zu werden, vor allem als Folge der Entstehung und Zunahme von H. pylori
Stämme resistent gegen Clarithromycin, die das Bakterium Behandlungseffizienz von 55% auf 100% reduziert [15-18]. Unter brasilianischen Ortschaften, stellt H. pylori
Resistenz gegenüber Clarithromycin hohen Prävalenz variiert von 7 bis 16% bei Erwachsenen [19-22] und 27% bei Kindern [23]. Dementsprechend ist die klinische Bedeutung der primären H. pylori
Resistenz gegen Clarithromycin Betrachtung sollte ihre Prävalenz vor der Auswahl Eradikation Schemata in Betracht gezogen werden [24].
Bestimmung von H. pylory in vitro
Anfälligkeit gegenüber Antibiotika kann durchgeführt werden, durch Standardtechniken, wie beispielsweise Agar-Diffusions, Agar-Verdünnungs und broth microdilution Verfahren und der E-Test. Jedoch wegen des langsamen Wachstums und der besonderen Anforderungen der H.pylori
Kultur, ist dieser Ansatz nicht zuverlässig für die Verwendung in den meisten klinischen Routinelaboratorien, vor allem in den Entwicklungsländern. Daher molekulare Tests Targeting H. pylori
-Resistenz-Gen-Mutationen direkt von Magen-Biopsien haben das Potenzial für den Einsatz in großem Maßstab Studien [25-29].
Der molekulare Mechanismus der Clarithromycin-Resistenz beteiligt besteht aus Mutationen in der Sequenz der Domäne V der 23S rRNA Fraktion
H. pylori, die in der peptiltransferase Ribosomenbindungsstelle beteiligt ist, die Ligation des Makrolid an die rRNA verhindert [30]. Die wichtigsten gekennzeichnet Punktmutationen sind von A bis G an den Positionen 2142 und 2143, A bis C bei 2142 [31-33], A bis T bei 2144 [34], T zu C bei 2717 [35] und C zu A bei 2694 [ ,,,0],36]. Die A2142G und A2143G Mutationen sind vorherrschend in klinischen Isolaten weltweit, darunter in Brasilien [21, 37-40]. Somit wird, um eine groß angelegte Untersuchung von Clarithromycin Primärwiderstand direkt von Biopsieproben zur Durchführung von 1137 Patienten im Krankenhaus das Clínicas von Marilia, einer Stadt im Inneren von São Paulo, Brasilien besucht, entwickelten wir eine Polymerase-Kettenreaktion mit Einschränkung verbunden sind Fragmentlängen-Polymorphismus (PCR-RFLP) -Test die A2142G und A2143G Nukleotidsubstitutionen an Domäne V der H. pylori
23S rDNA zu erkennen.
Methoden
Patienten
1137 erwachsenen Patienten mit Wohnsitz in Marilia Stadt, Bundesstaat Sao Paulo Brasilien, im Alter von 19-91 Jahren, die nacheinander unterzogen Ösophagogastroduodenoskopie (EGD) für Oberbauchschmerzen oder Magenbeschwerden von Februar 2003 bis Dezember 2006 im gastroenterologischen Ambulanz des Krankenhauses das Clínicas von Marília Medical School hatte, wurden eingeschlossen in dieser Studie.
Endoskopie und Biopsien
Die EGD von fibroendoscope (GIF-XP20, GIF-XQ20) erreicht wurde oder Video-Endoskop (GIF-100), die beide von Olympus, Shinjuku-ku, Tokyo, Japan. Magen oder Zwölffingerdarmgeschwür Diagnose wurde durch Endoskopie und zwei Fragmente des Antrums wurden gesammelt definiert, um die schnelle Urease und histopathologische Tests durchzuführen. Die Biopsie für die schnelle Urease-Test verwendet wurde weiter auf die DNA-Extraktion vorgelegt. Das verwendete Protokoll ist in Übereinstimmung mit der Erklärung von Helsinki und wurde von der Ethikkommission in Human Research von Marilia Medical School, unter der Nummer 388/01 genehmigt. In der Ethikkommission Forschungsprotokoll genehmigt eine schriftliche Einverständniserklärung von jedem Patienten in dieser Studie wurde untersucht, wie alle Magen-Biopsie-Proben verzichtet waren die gleichen Biopsien routinemäßig für Urease-Schnelltest im Rahmen der Gastroenterologie Ambulanz des Krankenhauses das Clinicas von Marilia verwendet Medical School und somit keine spezifischen Patienten Intervention war notwendig für die Einschreibung in dieser vorgeschlagenen Studie. Dementsprechend Verzicht auf die Zustimmung schriftlich ihr nicht eine Beeinträchtigung der Rechte beeinträchtigt und das Wohlbefinden der Patienten in dieser Studie eingeschlossen, und auch die Vertraulichkeit der Identität Patienten wurde garantiert.
Histologie
Eine antral Probe fixiert wurde in Formol Lösung bei 10% und in Paraffin eingebettet. Die Schnitte wurden Giemsa für H. pylori
Auswertung gefärbt und wurden mit Hematoxilin und Eosin für die Beurteilung von histopathologischen Veränderungen [41].
Polymerase-Kettenreaktion, Einschränkung und Sequenzanalyse
die gleiche Biopsie für die schnelle Urease verwendet gefärbt Test wurde mit dem Einsatz der GFx DNA-Extraktions-Kits von Amersham /Pharmacia Biotech, nach den Anweisungen des Herstellers erworben DNA-Extraktion vorgelegt. Die DNA wurde in Agarose-Gelelektrophorese unter Verwendung des Invitrogen, Grand Island, New York, USA, geringe Massenleiter und 50-100ug der Gesamt-DNA quantifiziert wurden in den PCR-Reaktionen mit den Oligonukleotiden verwendet: Hp23Sr6 Sinn (5 'CACACAGGTAGATGAGATGAGTA3') und Hp23Sr7 Antisense (CACACAGAACCACCGGATCACTA3 '), die ein Fragment von 768pb entsprechend der Domäne V von H. pylori
23S rDNA (Abbildung 1) amplifiziert. Um die Probleme der umfangreichen genetischen Polymorphismus für präzise PCR-Nachweis von H. pylori
überwinden, das Oligonukleotid Bau wurde nach einer vergleichenden Analyse der 23S rDNA von H. pylori Karten und verwandten Organismen erhältlich bei Genbank auf MegAlign Lasergen Software durchgeführt . PCR-Bedingungen waren 94 ° C 5 ', gefolgt von 40 Zyklen von 94 ° C 30 "/60 ° C 30" /72 ° C 30 "und ein Zyklus bei 72 ° C 7', mit einem Gesamtvolumen von 25 ul, enthaltend 1 × PCR-Puffer, 200 uM dNTPs, 2,0 mM MgCl 2, 1 &mgr; M jedes Oligonukleotid, 1,25 U Taq DNA-Polymerase Platinum Brasilien (Invitrogen). In allen PCR-Reaktionen wurden eine negative und eine positive Kontrolle verwendet, die jeweils entsprechend steriles Wasser und H. pylori
PCR positive Magen-Biopsien. Die amplifizierten Fragmente wurden mit MboII
und BsaI
(New England Biolabs) verdaut. Diese Enzyme unterscheiden Mutationen in der H. pylori
Domäne V der 23S rDNA an den Positionen 2142 und 2143, beziehungsweise. In Gegenwart von A2142G Mutation sind die resultierenden DNA-Restriktionsfragmenten von 418 bp und 350 bp, und in Gegenwart von A2143G Mutation sind die resultierenden Fragmente von 108, 310 e 350 bp. Als Kontrolle von MboII
Verdauung verwendeten wir eine PCR-amplifizierte DNA-Fragment von 601 bp auf die Haupt
Chitinasegens Leishmania entspricht, die eine Restriktionsstelle für MboII
enthält. Eine konservierte BsaI
Restriktionsstelle an dem 768 bp PCR Amplikon ist die positive Kontrolle für die Verdauung mit diesem Enzym DNA-Fragmente von 108 und 660 bp in Abwesenheit von Mutation A2143G erzeugen. Die Produkte der PCR-Reaktionen und Restriktionsanalyse wurden in 1,5% Agarose-Gelen mit Ethidiumbromid gefärbt und fotografiert unter UV-Licht aufgelöst. 23S rDNA 768 bp PCR-Produkte von vier Magen-Biopsien (zwei positive und zwei negative für H. pylori
histologischen Test) mit Clarithromycin empfindliche MboII
und BsaI
Restriktionsmuster und von zehn Magen-Biopsien mit clarytromycin resistent MboII
(drei Proben) und BsaI
(sieben Proben) Restriktionsmuster wurden Sequenzierung mit DyeTM Terminator v3.0 Cycle Sequencing Ready Reaction Kit und einem ABI-3100-Maschine von Applied Biosystem gekauft vorgelegt, nach den Anweisungen des Herstellers. Nucleotid-Sequenzbestimmung wurde doppelt durchgeführt und vergleichende Analyse wurde durch basische Nukleotid BLAST Alignment durchgeführt [42]. Abbildung 1 Molekulare Diagnostik von Helicobacter pylori durch PCR und RLFP Nachweis der Domäne V der 23S-rRNA-Mutationen A2142G und A2143G verantwortlich für Resistenz gegenüber Clarithromycin. A. Darstellung der H. pylori
23S-Gen-kodierenden (Genbank: HPU27270), Position der Primer für die PCR und der A2142 und A2143 von Fraktion V der 23S rDNA verwendet, Größe der mit Restriktionsenzymen erhaltenen Fragmente BsaI und MboII
in PCR-Fragmente die Mutationen enthalten, A2142G und A2143G und interne BsaI
Restriktionsstelle des 768 bp-Amplikon, sind angegeben. B, C und D. Agarose-Gel mit Ethidiumbromid gefärbt eine PCR Diagnoseanalyse, Restriktionsanalyse des 768pb Amplikon mit MboII
und BsaI
enthält, respectively. 1-10 entsprechen verschiedenen menschlichen Biopsieproben; C-, negative Kontrolle von PCR, M-100 bp-Leiter von Invitrogen erworben. Die Größen der DNA-Fragmente werden auf der linken oder rechten Seite der jedes Gel Figur angegeben.
Statistische Analyse
H. pylori
diagnostischen Tests durch die Berechnung Sensitivität, Spezifität und Genauigkeit unter Verwendung der Histologie als Goldstandard bewertet.
Ergebnisse und Diskussion
Dies ist der erste brasilianische groß angelegte Studie auf H. pylori
Diagnose und Resistenz gegenüber Clarithromycin direkt von Biopsieproben von 1137 konsekutiven Patienten mit oberen Gastroskopie vorgelegt, die über einen Zeitraum von vier Jahren, in einer Stadt, in das Innere von São Paulo, Brasilien. durch Endoskopie und Histopathologie
wurde untersucht Magenerkrankung Ergebnis aller in dieser Studie an der Gastroenterologie Ambulanz des Krankenhauses das Clínicas von Marília teilnehmenden Patienten besucht. Endoskopische Funde von Magen-Darm-oder Zwölffingerdarmgeschwür Krankheit (PUD) war in 123 Patienten vorhanden. Unterschiedliche Grade der chronischen Gastritis (CG) wurden in 706 Patienten und normalen Magenschleimhaut durch Histopathologie beobachtet, assoziiert oder nicht gastroösophagealen Refluxkrankheit (GERD) wurde in 290 Patienten gefunden. Achtzehn Patienten wurden als mit einem Adenokarzinom (15) und MALT-Lymphom (3) diagnostiziert und wurden von der Studie ausgeschlossen. . Epidemiologische Analyse, klinische Ergebnis und H. pylori
Prävalenz dieser Proben vor kurzem veröffentlicht wurden [43]
Nachweis von H. pylori
wurde aus Biopsieproben von drei verschiedenen Tests direkt ausgeführt: Histologie, einen Haushalt schnelle Urease-Test und PCR mit den Primern Hp23Sr6 /r7, die ein 768 bp Bakterium Fragment der Domäne V der 23S rDNA verstärken. Histologie ist der Goldstandard H.pylori
diagnostischen Test in unserer klinischen Routine eingesetzt werden, die zusammen mit histopathologischen Analyse verwendet wird, für H. pylori-Eradikation
zu entscheiden. Der Haushalt schnelle Urease-Test zeigte einen sehr niedrigen positiven prädiktiven Wert für H. pylori Magenerkrankungen assoziiert Karten und eine hohe Diskrepanz bei der Histologie verglichen; Folglich wurden diese Daten von der Untersuchung ausgeschlossen (Daten nicht gezeigt). Die 23S rDNA-PCR-Methode nachgewiesen H. in 488 Magen-Biopsien pylori
Proben wo Histologie für 451 Biopsien Proben positiv war. Vergleichsanalyse der PCR-Assay durchgeführt mit dem Hp23Sr6 /r7 mit Histologie zeigte Sensitivität, Spezifität und Genauigkeit von 77,6%, 79,3% bzw. 78,6%, bzw. (Tabelle 1). Da beide Tests auf einer einzigen und unterschiedlichen Biopsie durchgeführt wurden und H. pylori-Infektion
eine Brenn Merkmal der Infektion präsentiert [44, 45], die Genauigkeit von 78,6% ist für eine vertrauenswürdige diagnostischen Test akzeptabel. Es kann durch PCR und Histologie in CG (53,1% und 52,7%, respectively) und PUD (61,2% und 62,6%, respectively) eingesetzt durch die Zusammensetzung des Erfassungs
H.pylori nachgewiesen werden Patienten (Tabelle 1). PCR nachgewiesen H.pylori
in 12,75% bei Patienten mit normaler Magenschleimhaut während Histologie für nur 0,8% der Proben positiv war. Diese Ergebnisse können von den empfindlicheren Merkmal der Nukleinsäure basierte Verfahren erläutert. Um die Diagnose von H. pylori zu verbessern
einige Autoren schlagen vor, die Analyse von mehreren Biopsien [44]. Um die Spezifität der PCR-Fragmente erhalten, Amplicons von zwei Proben mit dem histologischen Test für H. pylori
positive und zwei Proben mit dem histologischen Test für H. pylori
negativ wurden sequenziert, um zu bestätigen. BLASTN Analyse aller vier Biopsie amplifizierte PCR-Fragmente mit der 23S rDNA H. pylori
spezifische Primer [Genbank: KF680642, Genbank: KF680643, Genbank: KF680644 und Genbank: KF680645] ergab Identität von 100% mit der 23S rDNA referent auf verschiedene Stämme von H. pylori
. Dementsprechend ist die entwickelte PCR-Assay schnell und genau und kann zum Nachweis von H.pylori
infection.Table 1 Klinische Ergebnisse und den Vergleich von H. pylori-Diagnoseverfahren als praktische Methode verwendet werden
PUD
( n = 123)
CG (n = 706)
N (n = 290)

His +
His-
His +
His-
His +
His-

T
PCR +
63
13
76
286
89
375 seite 1 von 36
37
488
PCR-
14
33
47
86
245
331
1 252
253
631
T
77
46
123
372
334
706
2 288
290
1119
CG
chronische Gastritis, PUD
Ulkuskrankheit, N
normalen Magenschleimhaut oder nicht Reflux-Krankheit (GERD), PCR
Polymerase-Kettenreaktion, His
Histologie.
Antibiotika-Behandlung von Magenerkrankungen gastroösophagealen wird empfohlen wenn H. pylori
Diagnose positiv ist und das Bakterium klassische Eradikationstherapie von Clarithromycin zusammengesetzt, Amoxicillin und einer Pumpe Proton-Hemmer vorgeschrieben. Die gewählte Therapie eine hohe Ausfall von H. pylori-Eradikation
in Bereichen präsentieren, wo Widerstand gegen Clarithromycin ist höher als 15%, wahrscheinlich als Reaktion auf die weit verbreitete Verwendung dieses Antibiotikums für Infektionen der Atemwege, besonders bei Kindern [9]. Globale primäre Resistenz von H. pylori
Clarithromycin im Bereich von 1 bis 29% [46]. In Brasilien, berichteten mehrere Studien, die eine Resistenz gegenüber Clarithromycin Prävalenz von 7-16% bei Erwachsenen [19, 20, 22, 47] und 27% bei Kindern [23]. Um also die empirische Wahl von H. pylori
assoziierten Erkrankungen Therapie zu verbessern, untersuchten wir die regionalen Rate von H. pylori
Resistenz gegenüber Clarithromycin durch Erfassung der wichtigsten verwandten Punktmutationen, A2142G und A2143G in Domäne V die H. pylori
23S rDNA.
Somit sind alle 488 H.pylori
PCR positiven Proben durch RFLP des 768 bp-PCR-Fragment mit den Primern Hp23Sr6 /7 mit der Einschränkung erhalten analysiert wurden Enzyme MboII
und BsaI
, mit Mutationen erkennen A2142G und A2143G in Domäne V der H. pylori
23S rDNA, bzw. (Abbildung 1). Nur 12 Proben (2,46%) zeigten die mutierten Restriktionsmuster, drei (25%) A2142G Mutation beherbergt, sieben (58,3%) A2143G und eine Probe (8,7%) zeigten beide rDNA Punktmutationen in den PCR-23S rDNA 768 bp Fragment. Eine Probe zeigte einen partiellen Verdau mit dem Enzym MboII
(Abbildung 1). Die Punktmutationen A2142G und A2143G der erhaltenen Amplicons aus drei [Genbank: KF680646, Genbank: KF680647 und Genbank: KF680647] und sieben [Genbank: 680.649, Genbank: 680.650, Genbank: 680.651, Genbank: 680.652, Genbank: 680.653, Genbank: 680.654 und Genbank: 680.655] verschiedenen Biopsien Proben wurden jeweils durch Sequenzierung bestätigt. Es gab keine Assoziation von Clarithromycin H.pylori
Widerstandspunktmutationen mit Patienten Alter oder Geschlecht (Daten nicht gezeigt).
Die Prävalenz von H. pylori
Resistenz gegenüber Clarithromycin in unserer Region gefunden wurde, ähnlich dem gefunden in den entwickelten Ländern wie Italien und Deutschland [7] und in den südamerikanischen Entwicklungsland Paraguay [48]. Diese Ergebnisse bestätigen die hohe regionale Variabilität von H. pylori
Antibiotikaresistenz und trotz steigender Resistenz gegenüber Clarithromycin weltweit, in Marilia, eine niedrige Resistenzrate wurde über die Dauer von vier Jahren erhalten. Außerdem war PCR /RFLP ein schnelles und genaues Verfahren zum Nachweis von Resistenz gegenüber Clarithromycin durch eine Genmutation direkt in Magen biospsy Proben und kann zusammen mit Histologie verwendet werden für die Verschreibung von Clarithromycin enthaltenden Therapie Therapie entscheiden.
H. pylori
23S rRNA Domäne V A2142G und A2143G Punktmutationen sind die wichtigsten gefundenen Mutationen in H. pylori
klinischen gegen Clarithromycin resistent isoliert. Wir fanden eine höhere Prävalenz von A2143G im Vergleich zu A2142G Mutation in unseren Proben, die mit der Mehrheit der brasilianischen Studien einschließlich der Bundesstaaten Minas Gerais, São Paulo und Recife im Einvernehmen ist [20, 34, 36]. A2143G aber nicht A2142G Punktmutation zeigt eine synergistische Wirkung von Clarithromycin und Amoxicillin, die zusammen in der First-line verwendet wurden H. pylori
Regime [49], die Notwendigkeit verstärken, bevor die Behandlung dieses Clarithromycin 23S rDNA Punktmutation zu untersuchen. Eine Probe beherbergte beide A2142G und A2143G Mutationen in Domäne V der H. pylori
23S rDNA, die auch in drei H. pylori gefunden wurde
von Patienten des brasilianischen Bundesstaat Minas Gerais erhaltenen Isolate [20]. Diese Ergebnisse zusammen mit dem Auftreten von partiellen Verdau einer 768 bp 23S rDNA PCR-Fragment (Figur 1) kann der Magenkolonisations mehrerer Stämme von H.pylori
indikativ sein [50].
Minas Gerais, Brasilien, Clarithromycin Widerstand wurde von 4,48% 1996 auf 19,05% im Jahr 2000 [20] erhöht, wahrscheinlich aufgrund der Verwendung von Makroliden in der Behandlung anderer Infektionskrankheiten. Wir fanden keine signifikanten Unterschiede in den Proben resistent gegen Clarithromycin nach der Periode der Studie fanden (Daten nicht gezeigt). Diese Daten zeigen, dass in unserer Region die Verschreibung und die Verwendung von Makroliden ist nicht auf einem hohen Maßstab durchgeführt. Weitere Studien sind notwendig, um diese Hypothese zu bestätigen.
Resistenz gegenüber Clarithromycin die klinische Wirksamkeit von Clarithromycin-basierte Triple-Therapie reduziert. Doch wie Prävalenz der primären Resistenz von H. pylori
gegen Clarithromycin aufgrund der rDNA 23S A2142G und A2143G Nukleotidsubstitutionen niedrig bleibt in Marilia, die Standard-Clarithromycin-Triple-Therapie enthält noch gültig ist als die effektivste empirischen Erstlinientherapie Eradikationstherapie für H. pylori
Infektion.
Schlussfolgerungen
der entwickelten PCR-Assays an den 23S-rDNA-Gens von H. pylori gezielte
ist schnell und genau und kann als ein praktisches Verfahren zum Nachweis von H verwendet werden, .pylori
Infektion direkt auf die Magen-Biopsie-Proben. Darüber hinaus kann die H. pylori
23S rDNA-PCR-Fragment erhalten wird, verwendet werden, um Punktmutationen 1728-2495 bp des H. pylori
23S rDNA Domäne V zugeordnet Resistenz gegenüber Clarithromycin erkennen. Die Prävalenz der primären Resistenz von H. pylori
gegen Clarithromycin wegen 23S rDNA A2142G und A2143G Nukleotidsubstitutionen niedrig bleibt in Marilia, damit die Standard-Clarithromycin-Triple-Therapie enthält noch gültig ist als die effektivste empirischen Erstlinientherapie Eradikationstherapie für H. pylori
Infektion
Abkürzungen
PUD.
Ulkuskrankheit
CG:
Chronische Gastritis

GERD:
Refluxösophagitis
PCR: Polymerase-Kettenreaktion

RFLP:
RFLP.
Erklärungen
Acknowledgments kaufen Wir danken Herrn Dr. Adriana Augusta Pimenta de Barros für ihre Versorgung zu allen Patienten in die Studie aufgenommen und an Alex Gusmão da Silva für seinen Beitrag in die statistische Analyse durchgeführt wird. Diese Arbeit wurde von der Fundação de Amparo ein Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP), Forschungsförderung 03 /01223-0, unterstützt 08 /01394-4; Stipendien RABL 2008 /01395-0, GACL 2005 /02482-6, THH 2003 /03675-7.
Autoren Original vorgelegt Dateien für Bilder
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Die Autoren erklären, dass sie keine Interesse haben.
Beiträge der Autoren
RBS die Verarbeitung der Proben durchgeführt, molekulare Studien, Interpretation der Daten und nahmen des Manuskripts zu dem Entwurf. RABL, GACL und THH durch die molekularen Studien aus und trug zur Erfassung und Auswertung von molekularen Daten; MAS entwickelt, um die Experimente, trugen zur Datenanalyse und das Manuskript verfasst. Alle Autoren gelesen und genehmigt haben das endgültige Manuskript.

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