efeito gastroprotetora de alfarroba (alfarrobeira L.) contra o estresse oxidativo induzido por etanol em vigor rat

gastroprotetora de alfarroba (alfarrobeira
L.) contra o estresse oxidativo induzido por etanol em ratos
Abstract
Nosso objetivo no presente estudo, investigar o efeito gastroprotective de alfarroba extrato aquoso (CPAE) contra o estresse oxidativo induzido por etanol em ratos, bem como o mecanismo envolvido.
Métodos
ratos wistar machos adultos foram utilizados e divididos em seis grupos de dez cada: controle, EtOH (80% v /v, 4 g /kg de peso corporal
), EtOH 80% + várias doses de CPAE (500, 1000 e 2000 mg /kg, peso corporal
) e EtOH + Famotidina (10 mg /kg, po) Os animais foram por via perorai (po
) pré-tratados com CPAE durante 15 dias e intoxicado com uma única administração oral de EtOH (4 g /kg de peso corporal
) para dois horas.
Resultado
a análise colorimétrica demonstrou que a CPAE exibiu uma importância in vitro
atividade antioxidante contra radicais ABTS e DPPH. Descobrimos que o pré-tratamento CPAE in vivo
, protegida contra alterações macroscópicas e histológicas induzidas por EtOH induzidas na mucosa do estômago. administração extrato de alfarroba também protegidos contra volume de álcool induzida por suco gástrico diminuição. Mais importante ainda, mostrámos que CPAE contrariado lipoperoxidação gástrica induzida por etanol, inverteu a redução dos grupos sulfidrilo (-SH) de peróxido de hidrogénio (sub <> 2O 2 H) níveis, e impediu a depleção de actividade enzimática de superóxido antioxidante dismutase (SOD), catalase (CAT) e glutationa peroxidase (GPx).
conclusões
Estes resultados sugerem que CPAE exerceu um efeito gastro-protectora potencial contra o estresse oxidativo induzido por etanol em ratos, devido, em parte, à sua propriedades antioxidantes.
Palavras-chave
pods úlcera gástrica alfarroba estresse oxidativo capacidade antioxidante Rat fundo Online em distúrbios gastrointestinais, úlcera é uma doença comum com múltiplas etiologias. Esta doença, caracterizada por lesão da mucosa, é predominantemente causada por Helicobacter pylori
, agentes antiplaquetas, tais como ácido acetilsalicílico [1], drogas anti-inflamatórias não esteróides (NSAIDs), tais como bisfosfonatos orais, cloreto de potássio, os medicamentos imunossupressores [2, 3 ], os inibidores da recaptação da serotonina [4], o tabagismo eo consumo de álcool [5]. A fisiopatologia da úlcera gástrica tem geralmente focados em desequilíbrio entre factores agressivos e de protecção contra o estômago, tal como a secreção de ácido-pepsina, barreira mucosa, a secreção de muco, o fluxo de sangue, a regeneração celular, prostaglandinas e fatores de crescimento epidérmico [6]. lesões gástricas induzidas por etanol está principalmente relacionada a uma intensa infiltração na sub-mucosa que promove a formação de espécies de oxigénio reactivas (ROS), diminuição do muco, o esgotamento dos grupos sulfidrilo e diminuição do fluxo sanguíneo, resultando em dano da mucosa gástrica [7]. ROS especialmente hidroxilo jogo radical o papel importante na causa danos oxidativos das mucosas em todos os tipos de úlceras [8]. Para determinar o possível mecanismo pelo qual as substâncias podem atuar para promover gastroproteção, vários antioxidantes moléculas como a quercetina [9] e curcumina [10] foram previamente investigadas.
Alfarroba (alfarrobeira L.
) é um de crescimento lento árvore sempre verde cultivado durante anos nos países mediterrânicos. O fruto alfarroba, marrom pod 10-25 cm de comprimento, contêm muitas substâncias bioativas, tais como carboidratos doce, fibra dietética, taninos e polifenóis [11]. Muitos dos efeitos benéficos para a saúde associados ao consumo de alimentos ricos em fenólicos são essencialmente devido às suas atividades antioxidantes [12, 13]. Para extrato de alfarroba, esta propriedade foi previamente relatado em in vivo
e estudos in vitro
[14, 15]. Recentemente, nós e outros descobriram que tunisina extrato de folha de alfarroba apresenta alguns efeitos melhoradores contra álcool ou CCl 4 induzida por dano oxidativo nos tecidos de ratos [16, 17]. Além disso, a fibra de alfarroba exibem elevada capacidade antioxidante determinada pelo teste de eliminação de radicais DPPH, isto é, maior do que muitos outros alimentos ricos em polifenóis, tais como mirtilo, uva ou de vinho vermelho [18, 19].
Por conseguinte, o presente estudo foi desenhado para avaliar o papel gastroprotective putativa do extrato aquoso de alfarroba (CPAE) (15 dias) contra o estresse oxidativo induzido pela exposição ao etanol aguda e o mecanismo envolvido em tal proteção.
Métodos
declaração Ética
as autorizações necessárias para os estudos de campo e coleta de amostras de alfarroba foram obtidos pelo Ministério da Agricultura na Tunísia e identificado pela Sra Mouhiba Ben-Naceur, professor da taxonomia no Superior Instituto de Biotecnologia de Beja, Tunísia. Os espécimes Abono foram depositadas no herbário do Instituto Superior de Biotecnologia de Beja e também no Departamento de Ciências Biológicas da Faculdade de Ciências, Tunísia.
Preparação do extracto de alfarroba
os alfarroba maduras foram coletadas a partir do região de Tabarka (North-West da Tunísia) em outubro de 2013. Resumidamente, o material vegetal foi posteriormente seca em estufa a 50 ° C durante 72 h e em pó em um liquidificador elétrico (Moulinex Ovatio 2, FR). Mistura em pó contendo polpa de alfarroba (90%) e de sementes (10%) foi dissolvida em água bi-destilada e filtrada através de uma peneira (malha de 0,5 mm). Finalmente, o extrato aquoso alfarroba foi imediatamente utilizado para in vitro e in vivo

experimentos.
Atividades radical-eliminação livres na DPPH
A capacidade antioxidante do extrato aquoso de alfarroba foi realizada utilizando (DPPH) actividade eliminadora de radical-1-picrilhidrazil-2,2-difenil como previamente descrito por Grzegorczyk et ai. [20]. Resumidamente, várias concentrações de CPAE (20, 50, 100, 150, e 200 ug /ml) foram adicionados a 1 ml de solução de metanol a 0,1 mM de DPPH e incubou-se a 27 ° C durante 30 min. A densidade óptica da amostra foi quantificada a 517 nm. DPPH actividade eliminadora de radical-(RSA), expressa em percentagem, foi calculada utilizando a seguinte fórmula: $$ \\mathrm{R}\\mathrm{S}\\mathrm{A}\\left(\\%\ ight)=\\frac{{{{}^A}_{\\mathrm{DPPH}}}^{-}\\left({{}^{A_{\\mathrm{sample}}}}^{-{A}_{\\mathrm{control}}}\ ight)}{{}^{A_{\\mathrm{DPPH}}}}\\times 100 ácido ascórbico $$ foi usado como uma molécula de referência, na mesma concentração que o extracto de teste.
Todas as análises foram executadas em triplicado. A concentração eficácia 50 valor (CE 50) foi determinada como a concentração (em ug /ml) do composto necessária para eliminar 50% do radical DPPH.
Actividades radical-scavenging livres na ABTS O
capacidades antioxidantes do extracto aquoso alfarroba foram avaliadas usando os 2,2'-azino-bis [ácido 3-etilbenzotiazolina-6-sulfónico] (ABTS) método [21]. Em resumo, 1 mL de extracto diluído foi adicionado a 3 ml de 7 mM de ABTS solução radical (ABTS • +) e foi mantido no escuro e à temperatura ambiente durante 60 min. A absorvância foi medida a 734 nm. A capacidade de eliminação foi calculada como ((1 - AB /A0) × 100%) (Ab e A0 são a absorvância das amostras, bem como o ABTS + • solução a 734 nm
Animais e tratamento adulto saudável ratos machos Wistar (pesando 220-250 g; alojados cinco por gaiola) e os ratos macho adulto Swiss Albino (pesando aproximadamente 25 g; abrigava dez por gaiola) foram adquiridas da Sociedade de Indústrias Farmacêuticas da Tunísia (SIPHAT, Ben-Arours , TN). protocolos experimentais foram aprovados com as orientações do Comitê de Ética da Faculdade de Ciências Tunis, Tunísia. o teste foi realizado em conformidade com a Directiva 2000/32 /CE e da OECD Guideline 474 [22]. Eles foram fornecidas com comida padrão (padrão pelete dieta-Badr Utique-TN) e água ad libitum
e mantidos em casa dos animais com temperatura controlada (22 ± 2 ° C) com um ciclo de luz-escuro de 12 h. Os ratos foram divididos em metade uma dúzia de grupos. O grupo 1 e 2 foram serviram como controlos e tinha água bidestilada (5 mL /kg, de peso corporal
, PO
). Grupos 3, 4 e 5 foram pré-tratados com várias doses de CPAE (500, 1000 e 2000 mg /kg, bwpo
), enquanto que o grupo 6 foi pré-tratadas respectivamente com famotidina (10 mg /kg, bwpo
) durante 15 dias. Os ratos foram mantidos em jejum durante 24 h antes da última administração de CPAE ou moléculas de referência. Após 60 min, cada animal, com excepção do Grupo 1, recebeu EtOH (4 g /kg, de peso corporal
) por administração oral. Duas horas mais tarde, os ratos foram sacrificados.
Estudo de toxicidade aguda O extracto aquoso
vagem de alfarroba na gama de doses de 0,05, 0,1, 0,5, 1, 2, 5, 10 e 200 g /kg foi administrado por via oral a diferentes grupos de ratinhos (n = 10
). Os animais foram examinados a cada 30 minutos durante 4 h e, em seguida, ocasionalmente, por um período adicional de oito horas. 24 h depois, a mortalidade foi registada. Os ratos também foram observados por outros sinais de toxicidade, tais como coordenação motora, reflexo de endireitamento e alterações respiratórias.
Avaliação da lesão da mucosa gástrica
O estômago de cada animal foi removido e aberto ao longo da sua curvatura maior. O tecido foi suavemente lavadas em NaCl a 0,9%. As lesões na mucosa gástrica foram macroscopicamente examinadas e as fotografias de erosões hemorrágicas foram adquiridas com uma câmara digital fotométricos Quantix. índices de úlcera foram determinados como a soma dos comprimentos das lesões gástricas inteiros (em mm 2) [23]. Dois observadores independentes, cegos realizadas as medições de comprimentos de lesão.
Determinação suco gástrico
volume de suco gástrico foi recolhido e centrifugado a 3000 g durante 5 min para remover os materiais insolúveis. O sobrenadante foi depois medida usando tubos de graduação [24]. A análise histopatológica

Imediatamente após o sacrifício, pequenos pedaços de estômago foram colhidas e lavadas com solução salina arrefecida com gelo. Os fragmentos foram depois fixadas em solução de formalina tamponada neutra a 10%, embebidos em parafina e usado para exame histopatológico. 5 mm de espessura foram cortadas, desparafinados, hidratada e corados com hematoxilina e eosina (HE). As secções foram examinadas gástricas em forma cega em todos os tratamentos [25].
Medição da peroxidação lipídica
gástrico mucosa peroxidação lipídica foi determinada por medição do MDA de acordo com o método de aquecimento duplo [26]. Resumidamente, a partir de alíquotas de homogenatos de mucosa gástrica foram misturados com ácido tricloroacético BHT-solução (TCA) contendo 1% de BHT (w /v
) dissolvido em TCA a 20% (w /v
) e centrifugada a 1000 × g
, durante 5 min a 4 ° C. O sobrenadante foi misturado com uma solução contendo (HCl 0,5 N, 120 mM TBA tamponada em Tris 26 mM) e depois aquecida a 80 ° C durante 10 min. Após arrefecimento, a absorvância do cromóforo resultante foi determinada a 532 nm. Os níveis de MDA foram determinadas usando um coeficiente de extinção para o complexo MDA-TBA de 1,56 × 10 5 M -1 · cm -1.
medição grupo tiol
A concentração total de tiol grupos (-SH) foi realizada de acordo com o método de Ellman [27]. Resumidamente, a partir de alíquotas de mucosa gástrica foram misturados com 100 ul de SDS a 10% e 800 ul de tampão fosfato 10 mM (pH 8), e a densidade óptica foi medida a 412 nm (A 0). Após a adição de 100 ul de ácido 5,5'-ditiobis- (ácido 2-nitrobenzóico) (DTNB), a mistura de reacção foi incubada a 37 ° C durante 60 min e um novo valor (A 1) foi determinada. A concentração de grupos tiol foi calculado a partir A 1 a A 0 subtração usando um coeficiente de extinção molar de 13,6 × 10 3 M -1 · cm -1. Os resultados foram expressos como nmol de grupos tiol por
mg de proteína. Determinação
H2O2
A mucosa gástrica H 2 nível 2O foi realizada de acordo com Dingeon et al. [28]. Resumidamente, o peróxido de hidrogénio reage com o ácido p-hidroxibenzóico e 4-aminoantipirina em presença de peroxidase, levando à formação de quinoneimina que tem uma cor rosa detectado a 505 nm.
Ensaios de actividade enzima antioxidante
A actividade da SOD foi determinada usando ensaios de epinefrina modificadas [29]. Em pH alcalino, ânion superóxido O 2 - faz com que a auto-oxidação da epinefrina para adenochrome; enquanto competem com esta reação, SOD diminuiu a formação adenochrome. Uma unidade da enzima SOD é definida como a quantidade de extracto que inibe a taxa de formação adenochrome por 50%. extracto de enzima foi adicionada em 2 ml de uma mistura de reacção contendo 10 mL de catalase bovina (0,4 U /ul), 20 ul de epinefrina (5 mg /ml) e carbonato de sódio 62,5 mM /tampão de carbonato, pH 10,2. As alterações na absorvância foram registados a 480 nm.
A actividade de CAT foi avaliada medindo a taxa inicial de H 2O 2 desaparecimento a 240 nm [30]. A mistura de reacção continha mM H 33 2O 2 em 50 mM de tampão fosfato pH 7.0 e a actividade de CAT foi calculada utilizando o coeficiente de extinção de 40 mM -1 cm -1 para H 2O 2.
a actividade da GPx foi quantificada pelo processo de Flohe e Günzler [31]. Em resumo, 1 mL de mistura reaccional contendo 0,2 mL de sobrenadante da mucosa gástrica, 0,2 mL de tampão fosfato 0,1 M pH 7,4, 0,2 mL de GSH (4 mM) e 0,4 mL de H 2O 2 (5 mM) incubou-se a 37 ° C durante 1 min e a reacção foi parada pela adição de 0,5 mL de TCA (5%, w /v). Após centrifugação a 1500 g durante 5 min
, alíquota (0,2 ml) a partir do sobrenadante foi combinado com 0,5 ml de tampão fosfato 0,1 M pH 7,4 e 0,5 ml de DTNB (10 mM) e a absorvância foi lida a 412 nm. A actividade da GPx foi expressa como nmol de GSH consumido /min /mg de proteína. A análise estatística

Os dados foram analisados ​​por análise unidireccional de variância (ANOVA) e foram expressos como média ± erro padrão da média (MEV). Os dados são representativos de 10 experiências independentes. Todos os testes estatísticos foram bicaudais e um valor de p
de 0,05 ou menos foi considerado significativo.

Resultados da toxicidade oral aguda da CPAE
No estudo de toxicidade oral aguda, nem comportamento anormal nem de mortalidade foi detectados durante o período de observação. Assim, o valor DL50 foi superior a 20 g /kg de p.c. para o extrato aquoso de alfarroba.
In vitro DPPH e ABTS atividades de eliminação de radicais
Várias concentrações que variam de 0-200 ug /ml do CPAE foram testadas por suas atividades antioxidantes em diferentes in vitro
modelos. Verificou-se que a actividade de limpeza de radical-CPAE contra DPPH e os radicais ABTS aumentou significativamente de uma forma dependente da dose. A CE 50 valores calculados a partir do gráfico demonstrou que a RSA de CPAE (CE 50 = 228,22 ± 5,27 g /mL e 184,41 ± 3,95 g /mL, respectivamente, para DPPH ea atividade radical-scavenging ABTS) parece ser similar à que de ácido ascórbico (CE 50 = 190,47 ± 1,2 e 0,9 ± 174,13 pg /mL) numa molécula de referência, tal como bem conhecido (Tabela 1) .table 1 valores de EC50 de DPPH e ABTS radical-scavenging vagens de alfarroba actividade extracto aquoso (CPAE ). EC50: concentração eficaz de amostra que pode diminuir DPPH ou concentração de ABTS por 50%
EC50 da actividade de radicais DPPH (ug /ml)
EC50 da actividade eliminadora de radical ABTS (ug /ml)
CPAE
228,22 ± 5,27
184,41 ± 3,95
ácido ascórbico
190,47 ± 1,2
174,13 ± 0,9
Efeito da CPAE em EtOH-induzida aguda lesão gástrica macroscópica e variação de volume
O exame macroscópico da mucosa gástrica é mostrado na Fig. 1. Como esperado, a administração EtOH exibiu lesões, incluindo hemorragia e hiperemia. CPAE e famotidina tratamento mostrou uma diminuição dependente da dose em todos os sinais macroscópicos tóxicos em comparação com o grupo tratado com EtOH. Além disso, a análise quantitativa mostrou que o extracto de alfarroba ou molécula de referência pré-tratamento de forma significativa e dependente da dose, reduziu o índice de úlcera, protegidas contra o suco gástrico diminuição do volume, e melhorada a protecção percentual de lesão induzida pela administração de EtOH (Tabela 2). FIG. Um efeito subagudo de vagens CAOB extracto aquoso (CPAE) e famotidina (FAM) sobre alterações macroscópicas induzidas por etanol (EtOH), em ratos. Os animais foram pré-tratados com várias doses de CPAE (500, 1000 e 2000 mg /kg, de peso corporal, PO
), FAM (10 mg /kg, de peso corporal, PO
) ou água destilada-bi, desafiados com uma única administração oral de EtOH (4 g /kg, de peso corporal, PO
) ou NaCl a 9 ‰ durante duas horas. um: controle; b: EtOH; C: EtOH + CPAE-500; d: EtOH + CPAE-1000; E: muco úlcera: EtOH + CPAE-2000 e F: EtOH + FAM)
efeito subagudo Tabela 2 de alfarroba extrato aquoso (CPAE), famotidina (FAM) e ácido ascórbico (AA) sobre mudanças quantitativas macroscópicas induzidas por etanol em ratos volume, área da úlcera e protecção percentual. Os animais foram pré-tratados com várias doses de CPAE (500, 1000 e 2000 mg /kg, de peso corporal, PO
), FAM (10 mg /kg, de peso corporal, PO
) ou água destilada-bi, desafiados com uma única administração oral de EtOH (4 g /kg, peso corporal, po
) ou NaCl 9 ‰ por duas horas
volume de Grupo
muco (ml)
Úlcera índice ( mm2) porcentagem
Protection (%)
Controle
4.3 ± 0.20
---- ----

EtOH
1,9 ± 0,3 *
86,2 ± 2,6 *
00
EtOH + CPAE-500
2,9 ± 0
67,0 ± 3,6 #
23,4
EtOH + CPAE-1000
3,4 ± 0,2 #
16,6 ± 1,4 #
79,8
EtOH + CPAE-2000
3,9 ± 0,3 #
06.4 ± 0,9 #
92,2
EtOH + FAM
3,8 ± 0,2 #
26,2 ± 3,3 #
68,1
*: p Art < 0,05 comparado com o grupo e # controlar: p Art < 0,05 comparado com o grupo de EtOH
Efeito de CPAE na lesão microscópica gástrica induzida EtOH
Examinámos também o efeito de EtOH e CPAE na histologia da mucosa gástrica e os resultados são mostrados na Fig. 2. EtOH 80% induzida uma lesão erosiva marcado no tecido gástrico. CPAE ou famotidina pré-tratamento reduziu significativamente as alterações histopatológicas induzidas pela intoxicação alcoólica aguda. FIG. 2 subaguda efeito de vagens CAOB extracto aquoso (CPAE) e famotidina (FAM) nas alterações histológicas induzidas por etanol (EtOH), em ratos. Os animais foram pré-tratados com várias doses de CPAE (500, 1000 e 2000 mg /kg, de peso corporal, PO
), FAM (10 mg /kg, de peso corporal, PO
) ou água destilada-bi, desafiados com uma única administração oral de EtOH (4 g /kg, de peso corporal, PO
) ou NaCl a 9 ‰ durante duas horas. um: controle; b: EtOH; C: EtOH + CPAE-500; d: EtOH + CPAE-1000; e: EtOH + CPAE-2000 e f: EtOH + FAM)
Efeito da CPAE sobre a lipoperoxidação gástrica induzida por etanol e aumento de peróxido de hidrogênio
rolamento sobre o efeito do etanol e CPAE na condição de estresse oxidativo, temos primeiro estudou a lipoperoxidação gástrica e conteúdo de peróxido de hidrogênio (Fig. 3a). EtOH intoxicação aumentou drasticamente o gástrica MDA e H 2O 2 níveis (Fig. 3b). CPAE de pré-tratamento de forma significativa e dose-dependente revertida aumento lipoperoxidação e peróxido de hidrogênio induzida por etanol intoxicação. FIG. 3 efeito subagudo de vagens CAOB extrato aquoso (CPAE) e etanol famotidina (FAM) (EtOH) mudanças induzidas na mucosa do estômago MDA um e níveis de H2O2 b em ratos. em ratos. Os animais foram pré-tratados com várias doses de CPAE (500, 1000 e 2000 mg /kg, de peso corporal, PO
), FAM (10 mg /kg, de peso corporal, PO
) ou água destilada-bi, desafiados com uma única administração oral de EtOH (4 g /kg, de peso corporal, PO
) ou NaCl a 9 ‰ durante duas horas. *: P Art < 0,05 comparado com o grupo e # controlar: p Art < 0,05 comparado com o grupo de EtOH
Efeito de CPAE de grupos -SH na gástricas induzidas por EtOH diminuir
Também mostrou que o nível de grupos tiol foi significativamente reduzida na mucosa gástrica de ratos tratados com álcool. No entanto CPAE (500, 1000 e 2000 mg /kg, de peso corporal p.o.
) ou famotidina (10 mg /kg, de peso corporal p.o.
) pré-tratamento significativamente protegidos contra esta redução em relação ao grupo de EtOH (Fig. 4). FIG. 4 efeito subagudo de vagens CAOB extrato aquoso (CPAE) e etanol famotidina (FAM) (EtOH) induzida por mudanças nos grupos SH- mucosa do estômago nível em ratos. em ratos. Os animais foram pré-tratados com várias doses de CPAE (500, 1000 e 2000 mg /kg, de peso corporal, PO
), FAM (10 mg /kg, de peso corporal, PO
) ou água destilada-bi, desafiados com uma única administração oral de EtOH (4 g /kg, de peso corporal, PO
) ou NaCl a 9 ‰ durante duas horas. *: P Art < 0,05 comparado com o grupo e # controlar: p Art < 0,05 em relação ao grupo EtOH
Efeito da CPAE em antioxidante esgotamento actividades enzimáticas induzida por etanol
Nós ainda olhou para o efeito de EtOH e CPAE na atividade de enzimas antioxidantes na mucosa gástrica (Fig. 5). EtOH 80% actividades das enzimas antioxidantes significativamente aumentada da mucosa do estômago como SOD (A) e CAT (B) mas diminuiu significativamente a actividade da GPx (C). No entanto, pré-tratamento sub-agudo com extracto de alfarroba ou famotidina reduziu significativamente o aumento induzido por EtOH e uma diminuição na actividade de enzimas antioxidantes para níveis próximos de controlo com a dose mais elevada. FIG. 5 efeito subagudo de vagens CAOB extrato aquoso (CPAE) e famotidina (FAM) etanol (EtOH) mudanças induzidas na atividade das enzimas antioxidantes mucosa do estômago: SOD um, Cat B e GPx c em ratos .. em ratos. Os animais foram pré-tratados com várias doses de CPAE (500, 1000 e 2000 mg /kg, de peso corporal, PO), FAM (10 mg /kg, de peso corporal, po) ou água destilada bi, desafiados com uma única administração oral de EtOH (4 g /kg, de peso corporal, PO
) ou NaCl a 9 ‰ durante duas horas. *: P Art < 0,05 comparado com o grupo e # controlar: p Art < 0,05 em relação ao grupo EtOH
Discussão
O estômago é um órgão digestivo sensível principalmente expostas a agentes patogénicos exógenos da dieta. Em resposta a estes agentes patogénicos, do tecido do estômago produz ROS, tal como um radical anião superóxido hidroxilo, o qual pode estar relacionada com o desenvolvimento de desordens orgânicas gástricas como gastrite, úlceras gástricas e cancro gástrico, bem como distúrbios funcionais tais como dispepsia funcional [ ,,,0],32]. O etanol é considerado um dos agentes que induzem úlceras gástricas. Os efeitos do etanol na mucosa gástrica são complicados e multifacetada que pode ser associada com uma perturbação no equilíbrio entre os factores agressivos e de protecção da mucosa gástrica [33]. Etanol provoca fere nas células endoteliais vasculares da mucosa gástrica e induz perturbações da microcirculação e hipoxia, que liga a uma superprodução de radicais de oxigénio [34]. ROS são produzidos dentro do trato gastrointestinal, mas seu papel na fisiopatologia e patogênese da doença não foram bem estudados.
Muitas plantas medicinais mostrar em suas químicas constituição, flavonóides, triterpenóides e taninos, que protegem a mucosa do estômago através da indução da gastroprotective mecanismos ou agindo como antioxidantes naturais [35-37]. Os flavonóides e taninos são o principal grupo de compostos fenólicos que actuam como antioxidantes primários ou sequestrantes de radicais livres [38].
O nosso estudo fitoquímicos, por um lado, revelou que a sua riqueza polifenóis, flavonóides totais no total, e taninos condensados ​​[14]. Por outro lado, usando o ensaio de DPPH e radical-scavenging ABTS, descobrimos que CPAE apresenta uma elevada capacidade de limpeza, embora menor do que o ácido ascórbico, que foi utilizado como uma molécula de referência. A capacidade antioxidante de alfarroba está relacionado principalmente ao maior nível de compouds fenólicos nesta fracção [14]. No entanto, estas moléculas são a principal fonte de sua capacidade de eliminação de radicais livres, tais como ânion superóxido (O 2 .) E radical hidroxila (OH .) [39].
In vivo,
temos primeiro mostrou que a administração de álcool provocou uma clara lesões macroscópicas, incluindo hemorragia e hiperemia, bem como alterações histopatológicas tais como lesões erosivas. CPAE pré-tratamento inverteu significativamente lesões macroscópico e microscópico da mucosa gástrica induzida por EtOH em uma maneira dependente da dose. No entanto, a mucosa gástrica foi mostrado anteriormente para desempenhar um papel crítico na protecção de barreiras gástricas [40]. Esta é a primeira linha de defesa contra o ácido e adere em conjunto com bicarbonato secretado pelo epitélio para servir como uma barreira contra a auto-digestão [41]. Além disso, a mucosa gástrica é um factor importante para a protecção da mucosa gástrica e é capaz de actuar como um agente antioxidante e reduzindo os danos na mucosa mediada por ROS [42]. Taninos podia evitar o desenvolvimento de úlceras, quer através de efeitos vasoconstritores, ou devido às suas proteínas-precipitantes em que promove a precipitação do microproteínas no local ulceração, formando uma camada impermeável sobre o revestimento que impeça secreções do intestino e protege a mucosa subjacente de irritantes [43]. Além disso, os flavonóides têm propriedades anti-úlcera e propriedades gastroprotectoras [44]. No entanto, ulceração gástrica induzida por etanol foi anteriormente mostrado para ser atenuada por muitas plantas extrai Aqeratum conyzoides
[45], e Bacopa monniera Azadirachta indica
[46], Hippocratea sobressai
[47] e Azadirachta indica
[48]. No entanto, tanto quanto sabemos, o nosso relatório é o primeiro a lidar com extrato da fruta da alfarrobeira
(alfarroba) efeito protetor sobre a ulceração induzida por etanol aguda na mucosa gástrica de ratos.
Nós também mostrou no presente estudar que EtOH intoxicação induzida peroxidação lipídica, redução de grupos tiol nível, aumento do teor de peróxido de hidrogênio, bem como depleção de antioxidantes actividades enzimáticas, tais como SOD, CAT e GPx. o estresse oxidativo induzido pelo álcool aguda foi amplamente documentado na mucosa gástrica [49], fígado [50], rim [51], coração [52] e do cérebro [53]. administração de etanol provocou desequilíbrio oxidativo através de um número de vias, incluindo a geração de espécies de oxigénio reactivas [54]. nível de peroxidação lipídica é um indicador da geração de ROS no tecido. No entanto, a SOD converte o reactivo radical superóxido a H 2O 2, o qual foi aumentado na mucosa gástrica e, se não eliminado por CAT, que pode por si só, causar a peroxidação lipídica pela geração de radical hidroxilo [55].
Mais importante, que mostrou que o extracto de alfarroba pré-tratamento aboliu o stress oxidativo induzido por EtOH aguda na mucosa gástrica. Estes dados corroboram totalmente todos os anteriormente relatados in vivo
[17] e in vitro
[15] propriedades antioxidantes e anti-inflamatórios de alfarroba. Também demonstramos em nosso relatório anterior do Sebai et al. [14] que o extrato aquoso de alfarroba contém uma boa quantidade de polifenóis totais, flavonóides totais e taninos condensados. Estas moléculas são a fonte primária da capacidade antioxidante da planta, por eliminação de radicais livres tal como radical hidroxilo (OH •), que é a principal causa de peroxidação lipídica [56]. Além disso, é bem sabido que os sulfidrilos são parcialmente envolvido em citoprotecção gástrica [57] e também no de manter a integridade da barreira mucosa e eliminar os radicais livres formados devido à acção de agentes nocivos [58].
Conclusão
em conclusão, nossos dados demonstram claramente que CPAE exerce efeitos protetores contra a ulceração induzida por etanol aguda na mucosa gástrica de ratos, em parte graças a suas propriedades antioxidantes
abreviações
CPAE:. vagens
alfarroba extrato aquoso
Carob500:
alfarroba 500 mg /kg
Carob1000:
alfarroba 1000 mg /kg

Carob2000:
alfarroba 2000 mg /kg
CAT:
catalase
GPx:
glutationa peroxidase
H2O2:
peróxido de hidrogénio
MDA:
Malondialdeído
Prot:
Proeins
SHs:
grupos Sulfidrila
SOD:
superóxido dismutase

Declarações
Agradecimentos
apoio financeiro do Ministério da "Enseignement Supérieur et Recherche Scientifique" tunisina é appreciatively reconhecido.
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concorrentes. Todos os autores leram e aprovaram o manuscrito final.

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